骨骼肌微損傷自體修復中超微結構變化與蛋白質組學研究

李可峰 王玉站 王趙靜 呂晨曦 鄭淑倩 劉洋 葛新發(fā) 潘衛(wèi)東 李姍姍 董貴俊

1 山東體育學院（山東濟南250063）

2 中國科學院電工研究所生物醫(yī)學工程部

3 泰山護理職業(yè)學院公共教學部 4 濰坊護理職業(yè)學院基礎部

離心運動誘發(fā)的骨骼肌損傷是骨骼肌微損傷中的常見類型，通常伴有骨骼肌肌力下降、酸痛、收縮范圍減小，是影響運動員大強度訓練的關鍵因素之一[1]。 骨骼肌微損傷的癥狀可以自行緩解并消除， 通常稱為自體修復[2]。大強度離心運動導致肌節(jié)重塑過程中，自體修復速率與肌細胞細胞器重塑存在一定相關性[3，4]，且線粒體的恢復速度先于肌節(jié)重建[5，6]，并伴隨著蛋白質代謝過程、 肌細胞外的炎癥過程和工作肌的疼痛過程。 其中，蛋白質代謝在自體修復中起關鍵作用，降解Z帶撕裂產(chǎn)生損傷蛋白，以防止蛋白質合成受到抑制，而其合成過程并未被充分闡明[7]。 重建蛋白質表達時間、種類及強度等需要進一步研究， 以確定骨骼肌微損傷重建修復過程中蛋白質重建過程[8]。在離心運動肌肉收縮過程中，肌細胞能量代謝紊亂，特別是線粒體損傷造成的能量供給減少，是造成骨骼肌微損傷的重要原因[9]。 因此， 探討微損傷修復過程中損傷組織超微結構變化與蛋白質代謝過程， 對于深入了解微損傷修復機制具有重要意義。本研究采用Wistar大鼠進行一次大強度離心運動， 觀察運動后1周內(nèi)骨骼肌損傷后自體修復過程，通過股四頭肌超微結構及蛋白質組代謝動力學變化同步研究， 分析在骨骼肌微損傷修復的不同階段參與微損傷自體修復的蛋白質類型、表達強度和時間特異性，探討骨骼肌微損傷自體修復中蛋白質組變異的機制，從而進一步了解微損傷修復過程中蛋白質代謝的差異。

1 材料與方法

1.1 實驗分組、運動方案

5 周 齡 雄 性Wistar 大 鼠 [許 可 證 號：SCXK （魯）20090001]，由山東大學實驗動物中心提供，在山東體育學院運動人體科學重點實驗室動物房飼養(yǎng)， 隨機分為安靜對照組（D組）、運動后即刻組（0 h組）、運動后24 h組（24 h組）、運動后48 h組（48 h組）、運動后72 h組（72 h組）及運動后168 h組（168 h組），每組6只，共計36只。 D組不進行針對性大強度離心運動， 其余組大鼠一次大強度離心運動方案參照葛新發(fā)方法進行[10]，跑臺下坡跑，坡度-16度，速度18 m/min，運動持續(xù)60 min。0 h組、24 h組、48 h組、72 h組、168 h組分別在運動后即刻以及相應時間斷頭處死，D組與0 h組同時處死。。

1.2 電鏡標本制備

取處死大鼠股四頭肌并切為直徑1 mm左右塊狀樣品， 于3.5%戊二醛中固定過夜， 用0.1 M磷酸緩沖液（pH=7.2）間隔20 min沖洗，共沖洗5次，隨后經(jīng)1%鋨酸固定4 h， 再次重復上述沖洗步驟， 乙醇脫水。 采用Epon812樹脂對樣品進行浸透、包埋、聚合并切片（LKB超薄切片機），3%醋酸鈾-檸檬酸鉛對樣本進行染色。JEM—1200EX透射電子顯微鏡及成像系統(tǒng)（JEOL，Japan）觀察并拍照片，分析不同組別骨骼肌的超微結構[11]。

1.3 蛋白樣品制備、電泳

取股四頭肌樣品200 mg，經(jīng)蛋白質提取、真空干燥后用Bradford法定量[12]，分裝，并于-80℃冰箱保存。測定時，樣品水化12 h后，在Bio-RAD蛋白質分離系統(tǒng)進行蛋白質電泳分離，膠條為非線性ph4-7膠條，上樣量為4 mg蛋白質。 等電聚焦電泳程序步驟：300 V 1 h，600 V 2 h，1000 V 1 h，8000 V 1 h（梯度），8000 V，4 h，500 V，20 h，累計51900 Vh。 SDS-PAGE程序設置：U = 800 V，I = 25 mA per gel，P = 200 W，T = 4：00。 固定40 min，考馬斯亮藍染色50 min，脫色1.5 h。

1.4 雙向電泳蛋白質圖像分析

采用GS-710光密度儀256色灰度和600 DPI分辨率對考馬斯亮藍染色后的電泳凝膠進行透射掃描。 掃描后利用Imagemaster2D platinumV5.0軟件對蛋白質表達譜進行點檢測、背景消減，建立平均凝膠后進行匹配、量化獲取斑點的相關信息處理。 以D組電泳圖譜作參考， 進行特異蛋白質表達量分析并對表達受到激活或者抑制的蛋白質進行進一步質譜鑒定。

1.5 特異蛋白質質譜鑒定及生物信息學分析

利用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術對表達量具有顯著性差異的蛋白質進行分析， 通過Mascot搜索引擎進行查詢相關質譜數(shù)據(jù)與已有蛋白質匹配情況， 蛋白質信息經(jīng)NCBI Protein數(shù)據(jù)庫進行查詢。 查詢參數(shù)主要包括：物種來源鼠；胰蛋白質酶水解；酶解片段不完全選擇為1；肽片段相對分子質量最大允許誤差控制在±0.1Da。

1.6 統(tǒng)計學分析

用ImageMaster 2D Platinum V5.0分析軟件檢驗差異蛋白點相對含量的差別是否有統(tǒng)計學意義。

2 研究結果

2.1 骨骼肌微損傷修復過程中超微結構變化

圖1 微損傷后大鼠股四頭肌超微結構變化（×5000）

對照組在無運動刺激情況下，肌細胞核、肌節(jié)、肌纖維、線粒體、內(nèi)質網(wǎng)清晰（見圖1a）。 運動后即刻，大鼠股四頭肌肌細胞核及肌節(jié)清晰可見， 無明顯變化，Z線清晰，基本未發(fā)現(xiàn)肌絲溶解；線粒體基本正常，未發(fā)現(xiàn)明顯腫脹（見圖1b）。 運動后24 h，部分肌節(jié)紊亂甚至消失，Z線斷裂，肌絲溶解；線粒體遭到嚴重破壞，出現(xiàn)高度水腫，嵴開始溶解，出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象，外膜不完整；內(nèi)質網(wǎng)模糊；細胞膜出現(xiàn)局部溶解現(xiàn)象（見圖1c）。 運動后48 h，肌節(jié)明顯萎縮；線粒體有受損跡象，但其結構逐漸清晰，外膜和嵴已顯現(xiàn)（見圖1d）。 運動后72 h，I帶出現(xiàn)過度收縮現(xiàn)象，肌節(jié)清晰，Z線逐漸清晰；線粒體數(shù)量基本恢復，但外膜未完全修復（見圖1e）。 運動后168 h，細胞核恢復，Z線清晰可見，明暗帶分明，肌節(jié)清晰；線粒體數(shù)量進一步恢復， 線粒體空泡化基本消失 （見圖1f）。

2.2 一次大強度離心運動后蛋白質組差異情況

2.2.1 一次大強度離心運動后0 h組蛋白質組差異情況

圖2 0 h組大鼠股四頭肌雙向凝膠電泳圖譜

經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)一次大強度離心運動后即刻， 大鼠股四頭肌蛋白質組表達譜中49種蛋白質出現(xiàn)顯著性差異（圖2）。 其中，44種蛋白質表達量上調，表觀等電點為pH 4.3～6.2，表觀分子量為25～64kDa；5種蛋白質表達量下調，表觀等電點為pH 4.9～6.0，表觀分子量為23～66 kDa。

經(jīng)質譜鑒定得到22種特異蛋白質信息中 （表1），I類蛋白質4種，其中血色素結合蛋白（hemopexin）、3-巰基丙酮酸硫基轉移酶（3-mercaptopyruvate sulfurtransferase） 及6-磷酸葡糖酸內(nèi)酯酶 （6-phosphogluconolactonase）3種蛋白質表達上調2.9～24.7倍；3-羥基異丁酸脫氫酶（3-hydroxyisobutyrate dehydrogenase）表達量下調至對照組的0.53倍。 II類蛋白質13種（占特異蛋白質總數(shù)的58.3%）， 其中維生素D結合蛋白（vitamin Dbinding protein）、膜聯(lián)蛋白A5（Annexin A5）、α1抗胰蛋白 酶 前 體 （alpha-1-antitrypsin precursor）、DJ-1 蛋 白（Protein DJ-1）、 熱 休 克 蛋 白β1 （heat shock protein beta-1）、 著絲粒關聯(lián)蛋白E （Centromere-associatedprotein E）、α2-HS-糖蛋白（alpha-2-HS-glycoprotein）、乙酰水解酶 （Platelet-activating factor acetylhydrolase IB）及免疫球蛋白λ輕鏈蛋白質（immunoglobulin lambda light chain） 表達量上調2.0～12.0倍之間；III類蛋白質6種，其中，膜聯(lián)蛋白A5和Trim 72蛋白（Tripartite motifcontaining protein 72）表達量分別上調2.6倍和4.1倍，核糖體蛋白（39S ribosomal protein）表達量下調至0.32倍；IV類蛋白質2種，包括角蛋白9（keratin 9）。

表1 0 h組與D組特異表達蛋白質信息比較

2.2.2 一次大強度離心運動后24 h組蛋白質組差異情況

一次大強度離心運動后24 h， 大鼠股四頭肌蛋白質組表達譜中64種蛋白質出現(xiàn)顯著性差異（圖3）。其中，39種蛋白質表達量上調， 表觀等電點在pH 4.2～6.5，表觀分子量在25～110 kDa；25種蛋白質表達量下調，表觀等電點在pH4.1～6.8，表觀分子量在21～86 kDa。

圖3 24 h組大鼠股四頭肌雙向凝膠電泳圖譜

表2 24 h組與D組特異表達蛋白質信息比較

經(jīng)質譜鑒定得到25種特異蛋白質信息中（表2），I類蛋白質11種，其中輔酶Q9（Coq9 protein）、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶（NADH dehydrogenase）、乙?；D移酶 （acetyltransferase）、 異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase）、 磷 酸 甘 油-3 脫 氫 酶 （glycerol-3-phosphate dehydrogenase [NAD（+）]）、血色素結合蛋白表達上調2.3～3.9倍， 磷酸丙糖異構酶（Triosephosphate isomerase）、 腺 苷 酸 激 酶 同 工 酶1 （Adenylate kinase isoenzyme 1）、Tpi1蛋白（Tpi1 protein，partial）、磷酸乙醇酸磷酸酶（phosphoglycolate phosphatase）表達量下調至對照組0.32～0.56倍；II類蛋白質10種， 其中蛋白酶體（26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 6）、免疫球蛋白λ 輕鏈、 胞內(nèi)氯離子通道蛋白1（Chloride intracellular channel protein 1）、 葡 萄 糖 調 節(jié) 蛋 白（glucose-regulated protein） 及 磷 酸 酶2C 蛋 白（Ppm2c protein）表達量上調1.9～4.7倍，過氧化物酶體雙功能酶（peroxisomal bifunctional enzyme）、 磷酸乙醇酸磷酸酶和乙基丙二酸腦病蛋白 （protein ETHE1）3種蛋白質表達量下調至0.30～0.56倍；III類蛋白質5種，其中，胞內(nèi)氯離子通道蛋白1表達量上調1.9倍，核糖體蛋白和過氧化物酶體雙功能酶表達量下調分別至0.37和0.30倍；IV類蛋白質4種，包括蛋白FAM195B。

2.2.3 一次大強度離心運動后48 h組蛋白質組差異情況

圖4 48 h組大鼠股四頭肌雙向凝膠電泳圖譜

一次大強度離心運動后48 h， 大鼠股四頭肌蛋白質組表達譜中41種蛋白質出現(xiàn)顯著性差異（圖4）。其中，33種蛋白質表達量上調，表觀等電點在pH4.6～6.8，表觀分子量在22～69 kDa；8種蛋白質表達量下調，表觀等電點在pH4.9～6.8，表觀分子量在20.1～55 kDa。

經(jīng)質譜鑒定得到16種特異蛋白質信息中（表3），I類蛋白質6種，其中異檸檬酸脫氫酶、血色素結合蛋白、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶、 葡萄糖調節(jié)蛋白及乙?；D移酶共5種蛋白質表達上調2.1～3.4倍，腺苷酸激酶同工酶1表達量下調至對照組0.26倍；II類蛋白質7種，其中蛋白酶體β6、 已異戊二烯二羥安息香酸甲基轉移酶 （hexaprenyldihydroxybenzoate methyltransferase）、維生素D結合蛋白、 磷酸酶2C蛋白及結合珠蛋白前體（haptoglobin precursor）共5種蛋白質表達量上調2.0～4.9倍，熱休克蛋白β-2（heat shock protein beta-2）和熱休克蛋白β-1共2種蛋白質表達量下調至0.56倍和0.37倍；III類蛋白質4種，Trim72蛋白（Tripartite motif-containing protein 72）、Ⅱ型細胞骨架1角蛋白（Keratin）、維生素D結合蛋白表達量上調3.4～5.6倍， 核糖體蛋白表達量下降至0.63倍。

表3 48 h組與D組特異表達蛋白質信息比較

2.2.4 一次大強度離心運動后72 h組蛋白質組差異情況

一次大強度離心運動后72 h， 大鼠股四頭肌蛋白質組表達譜中36種蛋白質出現(xiàn)顯著性差異（圖5）。其中，32種蛋白質表達量上調， 表觀等電點在pH 4.3～6.2，表觀分子量在27～59 kDa；4種蛋白質表達量下調，表觀等電點在pH4.6～6.2，表觀分子量在20.1～29 kDa。

圖5 72 h組大鼠股四頭肌雙向凝膠電泳圖譜

經(jīng)質譜鑒定得到18種特異蛋白質信息中（表4），I類蛋白質6種，其中異檸檬酸脫氫酶、乙?；D移酶、血色素結合蛋白、 輔酶Q9和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶共5種蛋白質表達上調2.4～4.0倍，磷酸丙糖異構酶表達量下調至對照組的0.30倍；II類蛋白質5種，其中維生素D結合蛋白、3-巰基丙酮酸硫基轉移酶、磷酸酶2C蛋白及鳥嘌呤脫氨酶（guanine deaminase）表達量上調2.8～6.9倍；III類蛋白質7種，胎球蛋白A、核糖體蛋白、維生素D結合蛋白、肌球蛋白1/3輕鏈（myosin light chain）、載 脂 蛋 白A -I 前 蛋 白 原 （apolipoprotein A -I preproprotein）、 鳥嘌呤脫氨酶及內(nèi)質網(wǎng)駐地蛋白29（endoplasmic reticulum resident protein 29）表達量上調1.8～4.1倍。

表4 72 h組與D組特異表達蛋白質信息比較

2.2.5 一次大強度離心運動后168 h組蛋白質組差異情況

一次大強度離心運動后168 h，大鼠股四頭肌蛋白質組表達譜中16種蛋白質出現(xiàn)顯著性差異（圖6）。其中，11種蛋白質表達量上調， 表觀等電點在pH 4.1～6.5，表觀分子量在25～57 kDa；5種蛋白質表達量下調，表觀等電點在pH 4.6～6.2，表觀分子量在22～38 kDa。

經(jīng)質譜鑒定得到7種特異蛋白質信息中（表5），I類蛋白質中異檸檬酸脫氫酶和輔酶Q9蛋白質表達分別上調2.3和3.3倍， 腺苷酸激酶同工酶1表達量下調至對照組0.33倍；II類蛋白質3種， 其中肌鈣腔蛋白、3-巰基丙酮酸硫基轉移酶及鳥嘌呤脫氨酶表達量上調2.5～3.8倍；III類蛋白質和IV類蛋白質中分別有鳥嘌呤脫氨酶和14-3-3ε蛋白表達量分別上調3.8倍和2.3倍。

圖6 168 h組大鼠股四頭肌雙向凝膠電泳圖譜

表5 168 h組與D組特異表達蛋白質信息比較

2.2.6 一次大強度離心運動后特異蛋白質表達情況匯總

一次大強度離心運動后即刻至1周之內(nèi)，蛋白質表達主要以上調為主，蛋白質表達下調主要在運動后24～48 h之間（圖7）。 從蛋白質表達種類分析，I類蛋白質差異性表達上調次數(shù)為25次，下調表達次數(shù)8次，特別是運動后24～48 h之間上調表達次數(shù)為13次，占上調表達次數(shù)的56.5%；II類蛋白質在運動后即刻表達上調為主，表達上調蛋白數(shù)量為14種，未出現(xiàn)下調表達的蛋白質，隨后上調表達蛋白數(shù)量逐漸下降，而在24 h時出現(xiàn)4個下調蛋白；III類蛋白質表達主要體現(xiàn)在48 h組和72 h組，上調蛋白質數(shù)量分別為4種和7種，下調表達蛋白質數(shù)量分別為1種和0種。

圖7 一次大強度離心運動后大鼠股四頭肌特異蛋白質分類表達情況

對特異表達蛋白質變化頻次分析發(fā)現(xiàn) （表6）， I類蛋白質中分別有異檸檬酸脫氫酶、血色素結合蛋白、輔酶Q9、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶、乙?；D移酶在微損傷后24～72 h之間表達活躍并以表達量上調為主，腺苷酸激酶同工酶1表達以下調為主；II類蛋白質中磷酸酶2C蛋白、熱休克蛋白β-1、免疫球蛋白λ輕鏈、結合珠蛋白前體、維生素D結合蛋白、鳥嘌呤脫氨酶表達頻次較高，其中熱休克蛋白β-1在0 h表達量上調，至48 h表達量下降至正常水平的0.37倍，其余蛋白表達量在0h時均有顯著上升，在24～72 h之間各蛋白表達規(guī)律不盡相同，主要以表達上調為主；III類蛋白質中核糖體蛋白在0～48 h之間表達量出現(xiàn)顯著下降，在72 h時表達量上調至對照組的2.8倍。

表6 特異性蛋白質表達頻次及表達時間對應表

3 討論

大強度下坡跑可誘導蛋白質表達水平變化， 這種變化與骨骼肌損傷修復過程中炎癥消除、 肌纖維重建過程密切關聯(lián)， 說明機體對大強度離心運動造成的微損傷能通過機體自身調節(jié)進行補償[7，8，13]。 離心運動造成微損傷修復過程中，骨骼肌中鈣蛋白酶（Calpain）和泛素蛋白（Ubiquitin）的動態(tài)變化幾乎與骨骼肌超微結構的動態(tài)變化相一致， 揭示著蛋白質代謝水平的變化可能與結構恢復存在關聯(lián)[14]。 本研究借助蛋白質組學手段， 對一次大強度離心運動引發(fā)的骨骼肌微損傷后自體修復過程中蛋白質組變異進行研究， 通過對特異表達蛋白質進行功能劃分， 結合微損傷恢復過程中骨骼肌超微結構的變化， 試圖發(fā)現(xiàn)骨骼肌微損傷自體修復過程中結構修復和不同類型蛋白質的關聯(lián)性， 揭示骨骼肌微損傷自體修復過程中不同功能蛋白質組的動力學變化。

大鼠骨骼肌超微結構在運動后即刻組中未見有明顯變化，說明運動后即刻微損傷尚未完全顯現(xiàn)[15]。 但在運動后即刻，參與細胞損傷修復的蛋白質（II類）占特異蛋白質總數(shù)的58.3%，其中膜聯(lián)蛋白A5、維生素D結合蛋白、α1抗胰蛋白酶前體、DJ-1蛋白、乙酰水解酶、免疫球蛋白λ輕鏈、磷酸酶2C蛋白、熱休克蛋白β-1、著絲粒關聯(lián)蛋白E、鋅指蛋白、α2-HS-糖蛋白、結合珠蛋白前體表達量上調。 膜聯(lián)蛋白A5參與調控炎性反應及細胞分化過程、調節(jié)細胞骨架蛋白間相互作用；維生素D結合蛋白可增強中性粒細胞的趨化活性， 并且激活巨噬細胞；DJ-1蛋白由PARK7基因編碼， 屬肽酶C56的蛋白質家族，功能目前尚不完全清楚，可作為一個積極的雄激素受體介導的轉錄調節(jié)因子， 也可用作氧化還原敏感的分子伴侶，氧化應激傳感器，保護神經(jīng)元免于氧化應激和細胞死亡； 乙酰水解酶通過降解血小板活化因子（PAF）從而避免PAF與靶細胞膜上的PAF受體結合引起的血小板聚集，中性粒細胞聚集和釋放，產(chǎn)生大量活性氧。 本實驗中發(fā)現(xiàn)運動后24 h，II類特異蛋白質表達數(shù)量較0 h組出現(xiàn)下降， 而24 h組超微結構變化較對照組出現(xiàn)顯著變化， 表現(xiàn)為部分肌節(jié)紊亂甚至消失，Z線斷裂，肌絲溶解，線粒體遭到嚴重破壞，出現(xiàn)高度水腫，嵴開始溶解，出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象，外膜不完整；內(nèi)質網(wǎng)模糊，細胞膜出現(xiàn)局部溶解現(xiàn)象，說明II類蛋白質表達與超微結構變化不完全同步，II類蛋白質表達先于超微結構變化。

運動后24～72 h， 骨骼肌中線粒體遭到嚴重破壞，出現(xiàn)高度水腫，嵴開始溶解，出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象，外膜不完整現(xiàn)象逐漸恢復至線粒體嵴逐漸清晰， 外膜基本完整， 說明這個階段是損傷骨骼肌亞細胞恢復的主要時期[16]。 與此同時，損傷修復過程中能量代謝相關蛋白質（I類）表達在此階段較為活躍。 特別是24 h時，I類蛋白質表達量顯著上調的蛋白質主要屬于有氧代謝系統(tǒng)的主要酶類，如輔酶Q9、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶、乙?；D移酶、異檸檬酸脫氫酶、磷酸甘油-3脫氫酶。其中，輔酶Q在體內(nèi)呼吸鏈中質子移位及電子傳遞中起重要作用，是細胞呼吸和代謝的激活劑，也是重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強劑； 血色素結合蛋白存在于人血清中的高豐度β1糖蛋白，對血紅素有高親和力，因此對人體利用氧的能力起關鍵作用； 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶通過對NADH 作用進行脫氫生成NAD+，從而在呼吸鏈中使黃素、醌、細胞色素逐步被還原，最后氧被還原成水；乙酰基轉移酶是丙酮酸脫氫酶多酶復合體的主要酶，PDC催化丙酮酸生成乙酰輔酶A的反應是線粒體代謝與生長的調控樞紐； 異檸檬酸脫氫酶在胞液中以NADP+為輔酶， 在線粒體內(nèi)膜中以NAD+為輔酶；磷酸甘油-3脫氫酶主要參與脂肪有氧氧化。 相反，在運動后24 h，磷酸原供能系統(tǒng)酶和參與糖酵解的酶系中，腺苷酸激酶同工酶1、磷酸丙糖異構酶及磷酸乙醇酸磷酸酶表達受到顯著抑制。 在運動后48 h和72 h，異檸檬酸脫氫酶有氧代謝系統(tǒng)酶類表達仍表現(xiàn)出顯著上調， 無氧代謝系統(tǒng)酶系統(tǒng)中腺苷酸激酶同工酶1表達仍受到顯著抑制。 由此可見， 在運動后24～72 h之內(nèi)（特別是運動后24 h）有氧代謝酶系統(tǒng)表達受到顯著激活，線粒體超微結構在此期間也逐漸恢復，說明有氧代謝酶系統(tǒng)功能恢復可能促進了線粒體自身修復進而加快肌纖維再生速度[17]。

與對照組比較，III類蛋白質的表達主要集中在運動后48 h和72 h組內(nèi)。 其中，Trim 72蛋白、Ⅱ型細胞骨架1角蛋白、維生素D結合蛋白、胎球蛋白A、核糖體蛋白、肌球蛋白、載脂蛋白A-I前蛋白原、鳥嘌呤脫氨酶及內(nèi)質網(wǎng)駐地蛋白29在48～72 h之間表達均出現(xiàn)顯著上升。Trim 72作為一個氧化傳感器在骨骼肌中特定表達，在細胞膜修復中的作用很重要； 肌球蛋白是肌原纖維粗絲的組成單位，在肌肉運動中起重要作用；載脂蛋白是構成血漿脂蛋白的蛋白質組分， 運載脂類物質及穩(wěn)定脂蛋白的結構。 從結構變化來看，運動48 h后肌節(jié)仍出現(xiàn)明顯萎縮， 線粒體結構逐漸清晰， 外膜和嵴已顯現(xiàn)；運動72 h后切片發(fā)現(xiàn)I帶出現(xiàn)過度收縮現(xiàn)象，肌節(jié)已經(jīng)清晰，Z線逐漸恢復，線粒體數(shù)量基本恢復[18]。 因此，III類蛋白質表達與超微結構恢復具有一定的相關性，與金其貫[14]研究結果類似。

綜上所述， 一次大強度離心運動后的自體修復過程中， 大鼠骨骼肌蛋白質組和超微結構均出現(xiàn)顯著變化， 蛋白質組及其功能對應的超微結構的變化規(guī)律依據(jù)蛋白質功能不同而呈現(xiàn)不同的同步性規(guī)律。 細胞損傷修復蛋白質（II類）在運動后0～48 h之內(nèi)受到激活，而超微結構變化主要發(fā)生在48～168 h之間。 線粒體酶系統(tǒng)及能量代謝相關蛋白質（I類）在運動后0～24 h內(nèi)受到顯著激活，而此時線粒體超微結構的修復尚未發(fā)現(xiàn)；至48～72 h之間，I類蛋白表達仍然活躍，線粒體外膜、線粒體嵴基本恢復， 說明有氧代謝酶系統(tǒng)功能恢復可能促進了線粒體自身修復，進而加快肌纖維再生速度。骨骼肌結構蛋白質（III類）在運動后24～48 h之內(nèi)表達活躍，同時超微結構恢復速率較快， 說明結構蛋白的表達有助于超微結構的恢復。

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