北細(xì)辛原粉及其不同提取物抗炎作用初探

魏新智，王清華，付勇強(qiáng)，王 琿，王 英，尤春來，孫科峰

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中心，遼寧 沈陽 110032)

北細(xì)辛原粉及其不同提取物抗炎作用初探

魏新智，王清華，付勇強(qiáng)，王 琿，王 英，尤春來，孫科峰

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中心，遼寧 沈陽 110032)

目的 初步探討北細(xì)辛原粉及其不同提取物的抗急性炎癥作用。方法采用巴豆油引起的小鼠耳腫脹法和角叉菜膠引起的大鼠足爪腫脹法，觀察北細(xì)辛原粉及其不同提取物的抗急性炎癥作用。結(jié)果北細(xì)辛原粉低、中、高劑量組及北細(xì)辛揮發(fā)油低、中、高劑量組均有抑制小鼠耳腫脹作用；揮發(fā)油高劑量組還具有抑制及大鼠足趾腫的作用。結(jié)論北細(xì)辛原粉及北細(xì)辛揮發(fā)油有抗急性炎癥作用。

北細(xì)辛；急性炎癥；小鼠；大鼠

北細(xì)辛為馬兜鈴科植物北細(xì)辛[Asarum heletotropoides Fr.SehmidI var.mandshurieum(Maxim.)Kitag.]的干燥根及根莖，具有祛風(fēng)散寒，通竅止痛，溫肺化飲等功效，主要用于風(fēng)寒感冒、頭痛牙痛、鼻塞流涕、鼻鼽鼻淵、風(fēng)濕痹痛、痰飲喘咳[1]。進(jìn)年來隨著對細(xì)辛的臨床及實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)細(xì)辛及其提取物具有抗炎作用[2-10]，但對于同一品種細(xì)辛的藥材及其提取物的系統(tǒng)的抗急性炎癥研究少見。北細(xì)辛為遼寧的道地藥材，相較于其他產(chǎn)地細(xì)辛具有高效低毒[5，11]、資源豐富等特點(diǎn)，為目前臨床應(yīng)用的主要品種，因而對北細(xì)辛的深入詳細(xì)研究十分必要。本實(shí)驗(yàn)就北細(xì)辛藥材及其提取物抗炎作用方面做一初步研究，為臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 KM品種SPF級小鼠，雄性，18~22 g，北京華阜康生物科技有限公司，許可證編號：SCXK(京)2009-0004；SPF級Wistar大鼠，體重130~150 g，雄性，北京華阜康生物科技有限公司，許可證編號：SCXK(京)2009-0004。

1.2 試驗(yàn)藥物 北細(xì)辛藥材購自遼寧本溪，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室翟延君教授鑒定為藥典所載品種的根及根莖。

1.2.1 北細(xì)辛原粉 北細(xì)辛500 g，粉碎成細(xì)粉后過100目篩，得灰白色粉末420 g。

1.2.2 北細(xì)辛水煎液 北細(xì)辛1 000 g，第1次加水10倍量，煎煮2 h，第2次加水8倍量，煎煮1.5 h，合并兩次煎煮液，濃縮至500 ml深棕色藥液，濃度為2 g/ml。

1.2.3 北細(xì)辛揮發(fā)油 北細(xì)辛3 kg，加10倍量水，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油40 ml。

1.2.4 陽性對照藥 醋酸潑尼松片，天津太平洋制藥有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號：100106，實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配成相應(yīng)濃度。

1.3 試劑 巴豆油：日本和光株式會社產(chǎn)品，批號 DCCL7737；乙醇：沈陽第一試劑廠，批號2001110801；吡啶：天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號20040514；無水乙醚：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20070416；角叉菜膠：sigma公司。

1.4 主要儀器 打孔器：YLS-25A濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司；足趾容積測量儀：YLS-7B濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司。

1.5 方法

1.5.1 小鼠耳腫脹法[12](1)巴豆油混合液：V巴豆油：V乙醇：V吡啶：V乙醚=1：10：20：69。(2)操作步驟：小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)分為生理鹽水組、大豆油組，醋酸潑尼松組，北細(xì)辛原粉低、中、高劑量組，北細(xì)辛水煎液低、中、高劑量組，北細(xì)辛揮發(fā)油低、中、高劑量，各組按表1劑量給藥，每日兩次，分別給藥3 d，第4天早給藥1次，30 min后將巴豆油混合液涂在小鼠右耳的前后面上，每只0.01 ml。左耳不做任何處理，1 h后，將動物處死，剪下雙耳用打孔器分別在同一部位打下圓耳片，分析天平稱重，觀察耳腫脹度(鼠右耳重量-左耳重量)。

1.5.2 大鼠足爪腫脹法[12](1)致炎劑配制方法：角叉菜膠，蒸餾水配成1%濃度的溶液。(2)操作步驟：大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)分為生理鹽水組、大豆油組，醋酸潑尼松組，北細(xì)辛原粉低、中、高劑量組，北細(xì)辛水煎液低、中、高劑量組，北細(xì)辛揮發(fā)油低、中、高劑量，各組按表2劑量給藥，每日兩次，分別給藥3 d，第4天早給藥1次，30 min后將動物右后肢拉直，用注射器先自足趾中部皮下向上注入一部分角叉菜膠，然后向下掉轉(zhuǎn)針頭向下注完，每只0.1 ml，分別于注入后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h，用足容積檢測儀測定各組每只大鼠右后足趾容積，每只大鼠致炎前先測右后足趾容積，觀察不同時(shí)間點(diǎn)足腫脹度(右足致炎后體積-右足致炎前體積)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠耳腫脹法 北細(xì)辛原粉低、中、高、劑量組有抑制小鼠耳腫脹的作用，與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.576，P＜0.05；t=2.538，P＜0.05；t=8.125，P＜0.01)；北細(xì)辛揮發(fā)油低、中、高劑量組有抑制小鼠耳腫脹的作用，與對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.234、t=7.082、t=7.929，P＜0.01)，而水煎液無明顯抑制小鼠耳腫脹的作用，見表1。

表1 北細(xì)辛原粉及不同提取物抗急性炎癥實(shí)驗(yàn)—耳腫脹法統(tǒng)計(jì)結(jié)果(±s)

表1 北細(xì)辛原粉及不同提取物抗急性炎癥實(shí)驗(yàn)—耳腫脹法統(tǒng)計(jì)結(jié)果(±s)

注：a表示醋酸潑尼松組與生理鹽水組比較t=8.310，P＜0.01；b表示北細(xì)辛散劑低、中劑量組與生理鹽水組比較分別為t=2.576，P＜0.05；t= 2.538，P＜0.05；c表示北細(xì)辛散劑高劑量組與生理鹽水組比較t= 8.125，P＜0.01；d表示北細(xì)辛揮發(fā)油低、中、高劑量組與大豆油組比較分別為t=5.234、t=7.082、t=7.929，P值均＜0.01。

組別生理鹽水組醋酸潑尼松組北細(xì)辛散劑低劑量組北細(xì)辛散劑中劑量組北細(xì)辛散劑高劑量組北細(xì)辛水煎液低劑量組北細(xì)辛水煎液中劑量組北細(xì)辛水煎液高劑量組大豆油對照組北細(xì)辛揮發(fā)油低劑量組北細(xì)辛揮發(fā)油中劑量組北細(xì)辛揮發(fā)油高劑量組動物只數(shù)12 11 12 12 12 11 12 11 12 12 12 12藥物劑量-0.01 g·kg-1·d-10.3 g·kg-1·d-11.0 g·kg-1·d-13.0 g·kg-1·d-10.3 g·kg-1·d-11.0 g·kg-1·d-150.0 g·kg-1·d-1-0.02 ml·kg-1·d-10.06 ml·kg-1·d-10.20 ml·kg-1·d-1耳腫脹度(mg) 5.4±1.0 1.9±0.6a3.8±0.9b3.5±1.1b2.0±0.5c3.8±1.1 4.6±1.4 4.2±0.8 5.0±1.1 2.5±0.8d1.9±0.5d1.7±0.4ab

2.2 大鼠足爪腫脹法 北細(xì)辛揮發(fā)油高劑量組有抑制大鼠足趾腫脹作用(4 h、6 h)，與大豆油組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.982、t=5.515，P＜0.01)，而原粉、水煎劑及揮發(fā)油低、中劑量組無明顯抑制大鼠足趾腫脹作用，見表2。

表2 北細(xì)辛原粉及不同提取物抗急性炎癥—足腫脹法實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s)

表2 北細(xì)辛原粉及不同提取物抗急性炎癥—足腫脹法實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s)

注：a表示潑尼松組(2 h，6 h)與生理鹽水組比較分別為t=2.634、t=2.519，P均＜0.05；b表示潑尼松組(1 h，4 h)與生理鹽水組比較分別為t=9.824、t=12.758，P＜0.01；c表示北細(xì)辛揮發(fā)油高劑量組(4 h，6 h)與大豆油組比較分別為t=3.982、t=5.515，P均＜0.01。

組別 動物數(shù) 藥物劑量 不同時(shí)間點(diǎn)(右足致炎后體積-右足致炎前體積)容積(ml)生理鹽水組醋酸潑尼松組北細(xì)辛散劑組北細(xì)辛散劑組北細(xì)辛散劑組北細(xì)辛水煎液組北細(xì)辛水煎液組北細(xì)辛水煎液組大豆油組北細(xì)辛揮發(fā)油北細(xì)辛揮發(fā)油北細(xì)辛揮發(fā)油991 0 -10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.01 g·kg-1·d-10.2 g·kg-1·d-10.6 g·kg-1·d-11.8 g·kg-1·d-10.2 g·kg-1·d-10.6 g·kg-1·d-135.0 g·kg-1·d-1-0.015 ml·kg-1·d-10.050 ml·kg-1·d-10.150 ml·kg-1·d-130 min 0.32±0.09 0.19±0.09 0.42±0.08 0.40±0.09 0.32±0.07 0.25±0.04 0.28±0.07 0.29±0.09 0.33±0.08 0.30±0.09 0.29±0.09 0.31±0.06 1 h 0.55±0.08 0.23±0.06b0.68±0.14 0.75±0.17 0.46±0.10 0.37±0.09 0.35±0.07 0.48±0.07 0.43±0.15 0.38±0.10 0.35±0.11 0.34±0.04 2 h 0.59±0.06 0.37±0.07a0.62±0.07 0.84±0.22 0.53±0.13 0.44±0.07 0.48±0.13 0.50±0.14 0.53±0.13 0.56±0.12 0.44±0.10 0.45±0.07 4 h 0.71±0.10 0.27±0.02b0.72±0.11 0.90±0.19 0.59±0.11 0.60±0.13 0.56±0.15 0.62±0.20 0.55±0.17 0.57±0.19 0.47±0.13 0.30±0.08c6 h 0.59±0.07 0.32±0.07a0.49±0.10 0.61±0.18 0.42±0.09 0.65±0.10 0.59±0.16 0.61±0.19 0.60±0.11 0.49±0.13 0.46±0.12 0.35±0.09c

3 討 論

細(xì)辛，以氣為治也。凡藥香者，皆能疏散風(fēng)邪，細(xì)辛氣盛而味烈，其疏散之力更大。且風(fēng)必挾寒以來，而又本熱而標(biāo)寒，細(xì)辛性溫，又能驅(qū)逐寒氣，故其疏散上下之風(fēng)邪，能無微不入，無處不到也，具有祛風(fēng)散寒、通竅止痛、溫肺化飲等功效。而現(xiàn)代藥理學(xué)研究細(xì)辛及其提取物具有廣泛的藥理作用，包括：中樞抑制、解熱鎮(zhèn)痛作用，抗炎、免疫抑、強(qiáng)心、擴(kuò)血管、降血脂、解痙平喘、祛痰鎮(zhèn)咳、抗菌、抗病毒作、抗氧化、抗衰老作用[13]。同時(shí)，細(xì)辛為小毒中藥材，古有“細(xì)辛，若單用末，不可過半錢匕，多即氣悶塞，不通者死”之說，即使是2010版《中華人民共和國藥典》規(guī)定細(xì)辛用量為1~3 g，散劑為0.5~1 g，但是現(xiàn)代臨床上湯劑里細(xì)辛用量達(dá)到80 g[14]。本實(shí)驗(yàn)用劑量是根據(jù)臨床常用劑量及前期毒性試驗(yàn)劑量而設(shè)計(jì)，且不同組別的高劑量組均為安全且可灌胃給藥的最大劑量。

炎癥是臨床常見的癥狀，是機(jī)體對于刺激的一種防御反應(yīng)，急性炎癥以發(fā)紅、腫脹、疼痛等為主要征候，即局部血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加所致。而小鼠耳腫脹和大鼠足趾腫脹法，具有方法簡便、見效快、用藥量少、復(fù)制成功率高、差異性小、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，是目前比較常見的抗炎藥物篩選模型。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兩種急性炎癥動物模型——小鼠耳腫脹法和大鼠足爪腫脹法，雙重評價(jià)北細(xì)辛原粉及不同提取物的抗急性炎癥作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)北細(xì)辛原粉及揮發(fā)油在兩種動物模型中均有明顯的抗炎作用，而水煎液無明顯抗炎作用，另外我們還對北細(xì)辛脂溶性成分(高劑量組)進(jìn)行了研究，未發(fā)現(xiàn)有抗炎作用，這與文獻(xiàn)報(bào)道[2，5]不一致，可能是由于實(shí)驗(yàn)用藥處理方法不同所致。

綜上，可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)條件及實(shí)驗(yàn)劑量下?lián)]發(fā)油在北細(xì)辛抗炎作用中起主要作用，但是抗炎的具體成分及機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究，而揮發(fā)油也是細(xì)辛的主要毒性物質(zhì)，提示臨床應(yīng)用散劑時(shí)應(yīng)注意劑量。

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Anti-inflammatory roles of Asarum original powder and different extracts in experimental research.

WEI Xin-zhi,WANG Qing-hua,FU Yong-qiang,WANG Hui,WANG Ying,YOU Chun-lai,SUN Ke-feng.Experiment Center of Traditional Chinese Medicine,the Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110032,Liaoning,CHINA

ObjectiveTo explore the roles of Asarum original powder and different extracts against acute inflammation.MethodsThe anti-inflammatory roles of of Asarum original powder and extracts were observed by investigating their effect against croton oil-induced mouse ear swelling and carrageenan-induced rat paw swelling.ResultsThe Asarum original powder of low,medium and high dose and volatile oils of low,medium and high dose all can inhibit mouse ear swelling.Volatile oil of high dose can also inhibit rats paw swelling.ConclusionThe Asarum original powder and volatile oil have anti-inflammatory effect.

Asarum;Acute inflammation;Mice;Rats

R-332

A

1003—6350（2015）09—1253—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.09.0451

2014-10-28)

孫科峰。E-mail：kefengsun_lnzy@hotmail.com