清亮飲對兔眼玻璃體積血的療效及其作用機(jī)制研究

回世洋張 焱朱寧云

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧沈陽110032；2.沈陽炮兵學(xué)院門診部，遼寧沈陽110162）

清亮飲對兔眼玻璃體積血的療效及其作用機(jī)制研究

回世洋1張 焱2朱寧云1

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧沈陽110032；2.沈陽炮兵學(xué)院門診部，遼寧沈陽110162）

目的：觀察清亮飲治療兔眼玻璃體積血的療效，并初步探索其作用機(jī)制。方法：40只日本大耳白兔隨機(jī)抽取10只為空白對照組，其余30只自體取血制作眼玻璃體積血模型，造模成功后隨機(jī)分成模型組、中藥組（灌胃清亮飲）和西藥組（肌肉注射安妥碘），每組10只，藥物干預(yù)8周。分別于治療4周、8周時(shí)檢眼鏡檢查眼底可見度，治療8周后檢測視網(wǎng)膜組織中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性。結(jié)果：中藥組白兔MDA含量明顯低于模型組和西藥組，SOD活性明顯高于模型組和西藥組。治療4周、8周時(shí)中藥組白兔眼底可見度較模型組明顯好轉(zhuǎn)。結(jié)論：清亮飲對治療兔眼玻璃體積血有顯著療效，抗氧化作用為其可能的作用機(jī)制。

清亮飲 玻璃體積血 兔 丙二醛 超氧化物歧化酶 眼底可見度 實(shí)驗(yàn)研究

眼玻璃體積血（vitreoushemorrhage）是最常見的玻璃體病變，多由眼內(nèi)附近組織疾患或外傷血管破裂出血進(jìn)入玻璃體內(nèi)引起。玻璃體本身沒有血管，一旦發(fā)生大量玻璃體積血，則吸收困難。玻璃體積血如果長期不吸收，可引起纖維增殖、機(jī)化，進(jìn)而繼發(fā)增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜脫離等并發(fā)癥，嚴(yán)重?fù)p害視功能，甚至失明。目前西醫(yī)治療玻璃體積血主要采用止血、抗凝、激光、玻璃體切割等方法，療效均不理想。筆者在臨床中采用中藥清亮飲治療眼玻璃體積血取得了較為滿意的療效。本研究制作白兔眼玻璃體積血模型，予清亮飲灌胃，觀察療效并對其治療機(jī)理進(jìn)行初步探索。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康純種日本大耳白兔40只，2～3月，體重1.5～2kg，雌雄不拘，合格證編號:SCXK（遼）2014-0002，由沈陽藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 藥品與試劑 清亮飲，藥物組成:熟地15g，山藥15g，玄參10g，天花粉10g，黨參15g，黃芪20g，茺蔚子10g，白茅根10g。藥物由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑科經(jīng)水煮醇沉濃縮為1.0g/mL，冷藏備用。動物給藥量根據(jù)動物和人的體表面積折算法，以人80g/60kg給藥量折算兔的用量約為4.0g/kg。氯霉素滴眼液，20mg/8mL，邯鄲康業(yè)制藥有限公司，產(chǎn)品批號:140312。普羅碘銨注射液（安妥碘），0.4g/2mL，江蘇吳中醫(yī)藥集團(tuán)有限公司蘇州制藥廠，產(chǎn)品批號: 1307312。復(fù)方托吡卡胺滴眼液（美多麗），10mL/支，參天制藥（中國）有限公司，產(chǎn)品批號:M365611。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物分組與造模 40只兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，室內(nèi)溫度保持在25℃左右，濕度55%～75%，保持通風(fēng)，動物分籠開架，自由攝食飲水。經(jīng)裂隙燈顯微鏡、眼底檢眼鏡檢查眼前段及眼底均無明顯異常。將40只兔編號，隨機(jī)抽取10只兔為空白對照組，其余30只造模。造模前給予氯霉素滴眼液點(diǎn)眼以預(yù)防感染，2滴/次，3次/d，連滴3d。造模時(shí)0.9%氯化鈉注射液清潔結(jié)膜囊，美多麗滴眼液點(diǎn)眼充分散瞳，1%丁卡因滴眼行結(jié)膜表面麻醉，酒精消毒后用1mL一次性注射器從兔耳緣靜脈取血0.5mL備用，迅速于距角鞏膜緣3mm處，瞳孔直視下用帶7號針頭的1mL一次性注射器向著球心垂直刺入玻璃體腔，抽取玻璃體0.2mL，然后注入自體血0.2mL，立即拔出針頭，輕壓針孔1min，點(diǎn)氯霉素滴眼液2滴。造模后3d繼續(xù)每天以氯霉素滴眼液滴眼，3次/d；美多麗滴眼液滴眼，1次/d。造模24h后觀察眼底，確認(rèn)30只白兔全部造模成功，隨機(jī)分為模型組、中藥組和西藥組，每組10只。

2.2 給藥 空白對照組與模型組不給藥。中藥組和西藥組于造模24h后開始給藥。中藥組根據(jù)施新猷[1]介紹的以人的常用量推算兔的用藥量，予清亮飲6mL/kg灌胃 （相當(dāng)于成人等效大劑量），每日2次；西藥組予安妥碘肌肉注射，每次0.125g，每日1次。中藥、西藥組均治療8周。

2.3 檢測指標(biāo)

2.3.1 檢眼鏡觀察眼底可見度 治療4周、8周時(shí)各觀察1次，先以美多麗滴眼液滴眼散瞳，然后用檢眼鏡檢查并按Forrester五級分類法記錄積血變化。Ⅰ級:玻璃體完全不透明，無紅光反射；Ⅱ級:有輕微紅光反射，但眼底觀察不清；Ⅲ級:經(jīng)玻璃體間隙可見部分眼底；Ⅳ級:玻璃體中央透明，周圍見少量不透明物，大部分眼底清楚；Ⅴ級:清晰玻璃體，眼底清晰可見。[2]

2.3.2 視網(wǎng)膜組織中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測 給藥結(jié)束后，氣栓法處死家兔，迅速摘除眼球，于角鞏緣后切開，去除眼前節(jié)，翻轉(zhuǎn)眼球套在臺柱上，去除玻璃體，用5mL注射器吸取生理鹽水，由切口邊緣向中心沖洗，視網(wǎng)膜即可完整脫落懸在視神經(jīng)乳頭上，用眼科鑷夾取視網(wǎng)膜，立即貯存于-20℃待測。按照試劑盒的說明，采用ELISA法檢測視網(wǎng)膜組織中MDA（丙二醛）含量、SOD（超氧化物歧化酶）活性。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)均用單因素方差分析（One-way ANOVA）進(jìn)行處理，組間兩兩比較用最小顯著差（LSD）法。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 眼底可見度觀察 見表1、表2。給藥第4周，中藥組眼底可見度明顯優(yōu)于模型組（P＜0.05）；給藥第8周，中藥組、西藥組眼底可見度均明顯優(yōu)于模型組（P＜0.05）。

表1 給藥4周時(shí)各組白兔眼底可見度分級比較

表2 給藥8周時(shí)各組白兔眼底可見度分級比較

3.2 各組兔視網(wǎng)膜組織中MDA含量、SOD活性比較 見表3。

表3 各組兔視網(wǎng)膜組織中MDA含量、SOD活性比較（±s）

表3 各組兔視網(wǎng)膜組織中MDA含量、SOD活性比較（±s）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與西藥組比較，△P＜0.05。

組別空白對照組眼數(shù)（只） MDA（nmol/mL）模型組 12.902±2.628**SOD（U·mg-1·pro-1）10 2.689±0.66424.561±5.558 10 4.658±0.762**中藥組 10 3.334±0.547*＃?！?0.796±2.974*＃＃△西藥組 10 3.978±0.768**＃16.659±3.825**＃

4 討論

眼玻璃體積血在《審視瑤函》中被稱之為“云霧移睛”，歸屬瞳神疾病。玻璃體（神膏）由血及津液之水所化，而血、津液以及由血、津液化生的生理之水，中醫(yī)學(xué)將其歸屬為陰的范疇。陰對眼的視功能發(fā)揮著重要作用，尤其是肝腎之陰。按五輪辨證，玻璃體積血之病位當(dāng)屬水輪腎，腎與肝又為相互滋生的母子關(guān)系。“肝開竅于目，肝藏血，目得血而能視，腎藏精，五臟六腑之精皆上注于目?！薄秾徱暚幒氛f:“血化為水，在臟腑而為津液，生于目而為膏汁”；“血養(yǎng)水，水養(yǎng)膏，膏護(hù)瞳神”。當(dāng)玻璃體（神膏）積血后，神膏受損，就會對瞳神失去養(yǎng)護(hù)作用?！对瓩C(jī)啟微》指出:“血，陰類，類地之水泉，性本靜，行，勢也。”因血與津液之水同屬陰類，因此要行、要養(yǎng)，才能恢復(fù)神膏的透明之性，同時(shí)達(dá)到保護(hù)視衣的作用。歷代醫(yī)家認(rèn)為“離經(jīng)之血即為瘀血”，“凡離經(jīng)之血，急宜用藥消除，勿使留則無余邪為患”?！堆C論》曰:“凡治血者必先以祛瘀為要”，“活血是本，止血是標(biāo)，出血后的瘀血，離經(jīng)之血便是瘀，而化瘀常有止血作用”[3]。但活血不可太過，以免引起反復(fù)出血，不可妄用活血化瘀藥，以免虛虛實(shí)實(shí)之誤[4]。中醫(yī)理論認(rèn)為，氣血之間的關(guān)系極為密切，“氣為血帥，血為氣母”，氣能推動血行，促進(jìn)瘀血吸收；氣能攝血防止新的出血。本病病因復(fù)雜，臨床中多認(rèn)為其發(fā)病與火熱、氣虛、外傷損及脈絡(luò)，或脈道不利，血澀而不行，終致血不循經(jīng)，溢于脈外，蓄于神膏。在多年的臨床中，我們發(fā)現(xiàn)本病病機(jī)多因氣陰兩虛、虛熱瘀血所致，故以“益氣養(yǎng)陰、涼血活血”為法進(jìn)行處方用藥，獲得了較好的療效。清亮飲方中黨參、黃芪補(bǔ)氣攝血；白茅根涼血止血；玄參、天花粉清熱涼血，養(yǎng)陰生津；以入肝、腎經(jīng)之熟地養(yǎng)血滋陰，補(bǔ)精益髓；以山藥益氣養(yǎng)陰，補(bǔ)脾肺腎；茺蔚子養(yǎng)陰并有活血作用，《本草綱目》指出“此物能活血補(bǔ)陰”。諸藥共奏益氣養(yǎng)陰、涼血活血之效。本研究眼底檢眼鏡觀察結(jié)果表明，清亮飲促進(jìn)玻璃體積血的吸收較不用藥的模型組及安妥碘組快。

玻璃體積血時(shí)血塊破裂，紅細(xì)胞溶解，血紅蛋白釋放出鐵離子，大量鐵離子超過鐵結(jié)合蛋白的能力時(shí)，鐵離子通過Haber-weiss反應(yīng)產(chǎn)生大量自由基[5-6]。視網(wǎng)膜損傷與自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化有關(guān)。視網(wǎng)膜細(xì)胞，尤其是視網(wǎng)膜外核層視桿外節(jié)盤膜生物膜磷脂中富含高濃度多聚不飽和脂肪酸（PUFA），易受自由基攻擊引發(fā)脂質(zhì)過氧化，而MDA為脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的病理產(chǎn)物，對玻璃體及視網(wǎng)膜細(xì)胞有很強(qiáng)的破壞作用[7]。正常情況下，機(jī)體內(nèi)同時(shí)存在著對抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的保護(hù)系統(tǒng)[8]，其中酶系包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶等，還有抗氧化劑如維生素C、E、谷胱甘肽等，從而使自由基形成和清除處于動態(tài)平衡。其中SOD是非常有效而重要的物質(zhì)，SOD把超氧化物陰離子 （O2-）變?yōu)槎拘暂^小的H2O2，即歧化反應(yīng)，是一種自身氧化還原反應(yīng)，然后再被過氧化氫酶 （CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）分解，從而使自由基形成和清除處于動態(tài)平衡。如果這些防御機(jī)制功能出現(xiàn)障礙，如過多的鐵離子可以明顯抑制SOD的活性，會使細(xì)胞受到脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的損害。SOD活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，故通過SOD活性、MDA含量的測定，可間接反映自由基的產(chǎn)生情況及脂質(zhì)過氧化的程度，從而判斷眼組織的破壞程度[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在實(shí)驗(yàn)性玻璃體積血時(shí)，視網(wǎng)膜組織中SOD活性顯著降低，MDA含量顯著增加，證實(shí)了玻璃體積血對視網(wǎng)膜有毒性作用。而中藥清亮飲及西藥安妥碘均能提高SOD活性，降低MDA含量，且中藥清亮飲治療組改善作用更為明顯。表明中藥清亮飲可以減少玻璃體積血過程中自由基的生成，阻斷自由連鎖反應(yīng)，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的程度，減輕眼組織的損傷，且其作用優(yōu)于安妥碘，這也為臨床應(yīng)用清亮飲治療玻璃體積血提供了科學(xué)依據(jù)。下一步我們將對清亮飲抑制PVR（增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變）的作用機(jī)理進(jìn)行研究。

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編輯：吳 寧

R776.405

A

1672-397X（2015）06-0077-03

回世洋（1975—），男，醫(yī)學(xué)碩士，副教授，副主任醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥治療眼科疾病。hsy-750318@163.com

2015-04-24