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    桑葚果醋發(fā)酵條件的優(yōu)化

    2015-04-12 09:36:30佳,高
    中國(guó)釀造 2015年8期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)酸量糖度酒精度

    徐 佳,高 萌

    (江西中醫(yī)藥大學(xué),江西 南昌 330004)

    桑葚(Fructus mori)是??粕僦参锍墒旃氲慕y(tǒng)稱(又名桑果),營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高,既可食用又可入藥,且汁濃似蜜,香甜可口,被譽(yù)為“民間圣果”[1]。桑葚果實(shí)中含有1.17%的蛋白質(zhì)、2.15%的脂肪、4.4%的糖類、6.6%的可溶性固形物、0.47%的礦物質(zhì)、0.56%的有機(jī)酸。此外,還富含維生素(如VC、VB1、VB2)及胡蘿卜素等[2]。我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為,桑葚能補(bǔ)益肝腎、黑發(fā)明目、養(yǎng)血生津[3]。鑒于桑葚的諸多營(yíng)養(yǎng)保健功能,被衛(wèi)生部正式列為首批“既是食品又是藥品”的名單[1]。

    與糧食醋相比,果醋富含有機(jī)酸和維生素,其營(yíng)養(yǎng)保健功能和口感更佳。桑葚果醋以新鮮壓榨的桑葚果汁為主要原料,經(jīng)微生物發(fā)酵而成,不僅包含一般食醋的保健功能,而且具有桑葚的生理功能,如解除疲勞,消除肌肉疼痛,降低血壓,分解血膽固醇,預(yù)防動(dòng)脈硬化和心血管病的發(fā)生,增加食欲,促進(jìn)消化,保護(hù)皮膚等作用[4]。隨著我國(guó)消費(fèi)者營(yíng)養(yǎng)保健意識(shí)的日益增強(qiáng),對(duì)營(yíng)養(yǎng)保健品的需求也越來(lái)越高,桑葚加工成的食品目前卻未很好地被開(kāi)發(fā)利用[5],然而它所具有較高的醫(yī)療保健功能,必定能在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上受到廣大消費(fèi)者的青睞[6]。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 原料

    桑葚:市購(gòu)。

    1.1.2 菌種

    醋酸菌A32:江西農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)基地;安琪釀酒高活性干酵母:安琪酵母股份有限公司。

    1.1.3 培養(yǎng)基

    酒精發(fā)酵基本培養(yǎng)基:將處理好的桑葚汁用蔗糖調(diào)整至所需糖度,用0.1 mol/L檸檬酸調(diào)其pH值至4,于250 mL三角瓶分裝100 mL,80 ℃滅菌10 min[7]。

    醋酸發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基:1%葡萄糖,1%酵母膏,調(diào)pH值至5.5,121 ℃滅菌15 min冷卻至70 ℃后移加4%vol的無(wú)水乙醇[8]。

    1.2 儀器與設(shè)備

    YXQ-SG46-280S全自動(dòng)高壓滅菌鍋:上海博迅實(shí)業(yè)有限公司;XHZ-30臺(tái)式恒溫?fù)u床:上??蚌蝺x器設(shè)備有限公司;LRH-70生化培養(yǎng)箱:上海合恒儀器設(shè)備有限公司;WW163附溫糖度計(jì):深圳博大精科實(shí)業(yè)有限公司;LWGY酒精濃度計(jì):廣州銘睿電子科技有限公司;HH-6雙浴六孔恒溫水浴鍋:上海喬躍電子有限公司;CPA6202S電子天平:德國(guó)塞多利斯公司。

    1.3 方法

    1.3.1 桑葚果醋加工工藝流程[9]

    1.3.2 酒精發(fā)酵試驗(yàn)

    在酒精發(fā)酵基本培養(yǎng)基中加入酵母菌,參照文獻(xiàn)[10-11],研究酵母接種量(5%、10%、15%、20%、25%)、發(fā)酵溫度(26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃)、糖度(8%、10%、12%、14%、16%)對(duì)酒精發(fā)酵的影響。并在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn),正交試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。

    表1 桑葚果醋酒精發(fā)酵正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Factors and levels of orthogonal tests for mulberry alcoholic fermentation conditions optimization

    1.3.3 醋酸發(fā)酵試驗(yàn)

    將活化的醋酸菌A35接入醋酸菌液體種子培養(yǎng)基中,于30 ℃、150 r/min的條件下?lián)u床培養(yǎng)2 d,得到醋酸菌種子液,分別研究初始酒精度(2%vol、4%vol、6%vol、8%vol、10%vol)、醋酸菌接種量(4%、8%、12%、16%、20%)、發(fā)酵溫度(26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃、34 ℃)3個(gè)因素對(duì)桑葚果醋發(fā)酵的影響,并在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上確定以下正交因素與水平,見(jiàn)表2。

    表2 桑葚果醋醋酸發(fā)酵正交試驗(yàn)因素與水平Table 2 Factors and levels of orthogonal tests for mulberry acetic acid fermentation conditions optimization

    1.3.4 測(cè)定方法

    酒精度測(cè)定[12]:蒸餾法;糖度測(cè)定:糖度計(jì)法[12];產(chǎn)酸量(以醋酸計(jì))測(cè)定[13]:酸堿滴定法。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 桑葚果汁酒精發(fā)酵試驗(yàn)

    2.1.1 酵母接種量對(duì)酒精發(fā)酵的影響

    在酒精發(fā)酵基本培養(yǎng)基中加入蔗糖調(diào)節(jié)糖度至10%,分別接種5%、10%、15%、20%、25%的酵母液,每個(gè)接種量設(shè)3個(gè)平行試驗(yàn),于30 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵4 d后取樣測(cè)定酒精度,結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 酵母菌接種量對(duì)酒精度的影響Table 3 Effect of yeast inoculum on alcohol content

    由表3可知,酒精度隨著酵母接種量的增加呈增長(zhǎng)趨勢(shì),當(dāng)酵母接種量為15%時(shí)酒精度最高,為6.1%vol。隨著接種量的進(jìn)一步增加,酒精度反而降低,因此,過(guò)高的酵母接種量可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)的大量消耗而影響酒精發(fā)酵。因此,酵母接種量15%為宜。

    2.1.2 發(fā)酵溫度對(duì)酒精發(fā)酵的影響

    在酒精發(fā)酵基本培養(yǎng)基中加入蔗糖調(diào)節(jié)糖度至10%,接種15%的酵母液,分別置于26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵,每個(gè)溫度設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn),培養(yǎng)4 d后取樣測(cè)定酒精度,結(jié)果見(jiàn)表4。

    表4 發(fā)酵溫度對(duì)酒精度的影響Table 4 Effect of fermentation temperature on alcohol content

    由表4可知,溫度達(dá)30 ℃時(shí)酒精度最高,為5.8%vol,因此,溫度為30 ℃桑葚果汁酒精發(fā)酵最佳。

    2.1.3 糖度對(duì)桑葚果汁酒精發(fā)酵的影響

    在酒精發(fā)酵基本培養(yǎng)基中接入15%的酵母液,用蔗糖分別調(diào)整糖度為8%、10%、12%、14%、16%,每個(gè)糖度設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn),于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵,培養(yǎng)4 d后取樣測(cè)定酒精度,結(jié)果見(jiàn)表5。

    表5 糖度對(duì)酒精發(fā)酵的影響Table 5 Effect of different sugar content on alcohol content

    由表5可知,酒精度隨著糖度的增加呈增長(zhǎng)趨勢(shì),當(dāng)糖度達(dá)到14%時(shí)酒精度最高為6.5%vol。隨著糖度的進(jìn)一步增加,酒精度反而降低,糖濃度過(guò)高反而會(huì)對(duì)酒精發(fā)酵產(chǎn)生抑制作用。因此,糖度14%為宜。

    2.1.4 桑葚果汁酒精發(fā)酵的正交試驗(yàn)

    為了確定桑葚果汁酒精發(fā)酵的最佳工藝條件,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用L9(33)正交試驗(yàn),考察酵母接種量、發(fā)酵溫度、糖度3個(gè)因素對(duì)酒精度的影響,正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6,方差分析見(jiàn)表7。

    由表6可知,各因素對(duì)酒精度的影響次序?yàn)锳(酵母接種量)>C(糖度)>B(溫度);酒精發(fā)酵的理論最佳組合為A2B2C3,即酵母接種量15%,溫度30 ℃,糖度16%,在此條件下酒精度為6.3%vol。由表7可知,酵母接種量對(duì)試驗(yàn)有顯著影響(P<0.05)。

    表6 桑葚果醋酒精發(fā)酵正交試驗(yàn)結(jié)果與分析Table 6 Results and analysis of orthogonal tests for mulberry alcoholic fermentation conditions optimization

    表7 桑葚果醋酒精發(fā)酵正交試驗(yàn)的方差分析Table 7 Variance analysis of orthogonal tests for mulberry alcoholic fermentation conditions optimization

    2.2 桑葚果醋發(fā)酵試驗(yàn)

    2.2.1 初始酒精度對(duì)桑葚果醋發(fā)酵的影響

    在醋酸發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入95%無(wú)水乙醇用以調(diào)整酒精度至2%vol、4%vol、6%vol、8%vol、10%vol和6%種子液,分別于120 r/min、30 ℃恒溫?fù)u床培養(yǎng),每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn)。每隔1 d取樣測(cè)定酸度,計(jì)算產(chǎn)酸量,結(jié)果見(jiàn)圖1。

    圖1 初始酒精度對(duì)產(chǎn)酸量的影響Fig.1 Effect of initial alcohol concentration on acid production

    從圖1可以看出,初始酒精度為4%vol~8%vol時(shí),醋酸菌種發(fā)酵旺盛,醋酸產(chǎn)量高,在第5天達(dá)到最大值;隨著酒精含量升高,產(chǎn)酸量反而降低。由此可以確定醋酸發(fā)酵的最適酒精度為4%vol~8%vol。

    2.2.2 醋酸菌接種量對(duì)桑葚果醋發(fā)酵的影響

    在醋酸發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別接入4%、8%、12%、16%、20%的醋酸菌種子液,用95%vol乙醇調(diào)節(jié)酒精度至8%vol,分別于120 r/min、30 ℃恒溫?fù)u床培養(yǎng),每個(gè)接種量設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn)。每隔1 d取樣測(cè)定酸度,計(jì)算產(chǎn)酸量,結(jié)果見(jiàn)圖2。

    圖2 接種量對(duì)產(chǎn)酸量的影響Fig.2 Effect of acetic acid bacteria inoculum on acid production

    從圖2可以看出,接種量為16%時(shí),產(chǎn)酸量在第5天達(dá)到最高值。

    2.2.3 不同溫度對(duì)桑葚果醋發(fā)酵的影響

    在醋酸發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中接入16%的醋酸菌種子液,用95%vol乙醇調(diào)節(jié)酒精度至6%vol,分別放置溫度26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃、34 ℃,120 r/min的恒溫?fù)u床上培養(yǎng),每個(gè)溫度設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn)。每隔1 d取樣測(cè)定酸度,計(jì)算產(chǎn)酸量,結(jié)果見(jiàn)圖3。

    圖3 溫度對(duì)產(chǎn)酸量的影響Fig.3 Effect of temperature on acid production

    從圖3可以看出,發(fā)酵溫度為30~34 ℃時(shí),醋酸菌種發(fā)酵旺盛,醋酸產(chǎn)量高,在第5天達(dá)到最大值;由此可以確定發(fā)酵醪的最適溫度為30~34 ℃。

    2.2.4 桑葚果醋發(fā)酵的正交試驗(yàn)

    為了確定桑葚果醋發(fā)酵的最佳工藝條件,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用正交試驗(yàn)L9(34),考察醋酸菌接種量、發(fā)酵溫度、初始酒精濃度3個(gè)因素對(duì)醋酸發(fā)酵的影響,正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8,方差分析結(jié)果見(jiàn)表9。

    表8 桑葚果醋醋酸發(fā)酵正交試驗(yàn)結(jié)果與分析Table 8 Results and analysis of orthogonal tests for mulberry acetic acid fermentation conditions optimization

    表9 桑葚果醋酸發(fā)酵正交試驗(yàn)的方差分析Table 9 Variance analysis of orthogonal tests for mulberry acetic acid fermentation conditions optimization

    由表8可知,各因素對(duì)醋酸發(fā)酵的影響次序?yàn)锳(酵母菌接種量)>B(溫度)>C(初始酒精度),醋酸發(fā)酵的最佳組合為A3B2C3:醋酸菌接種量20%,初始酒精度8%vol,發(fā)酵溫度32 ℃。在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),產(chǎn)酸量達(dá)為51.34 g/L。由表9可知,3個(gè)因素均對(duì)試驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著影響。

    2.3 成品質(zhì)量指標(biāo)

    根據(jù)以上試驗(yàn)確定的醋酸發(fā)酵的最佳組合,在醋酸發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中接入20%的醋酸菌種子液,用95%vol乙醇調(diào)節(jié)酒精度至8%vol,120 r/min,32 ℃恒溫?fù)u床上培養(yǎng),5 d后,測(cè)定其產(chǎn)酸量達(dá)51.34 g/L,并觀察其感官指標(biāo),測(cè)定其理化及微生物指標(biāo)。

    2.3.1 感官指標(biāo)

    色澤:紫紅色,有光澤。香氣:具有醋香和桑葚特有的果香。滋味:無(wú)不良異味,酸中微甜。體態(tài):基本澄清,無(wú)沉淀。

    2.3.2 理化指標(biāo)

    可溶性無(wú)鹽固形物≥0.50 g/100 mL;酸(以醋酸計(jì))≥3.5 g/100 mL;砷(以As 計(jì))≤0.5 mg/kg;鉛(以Pb 計(jì))≤1.0 mg/kg;銅(以Cu 計(jì))≤10.0 mg/kg;氨基酸態(tài)氮(甲醛法):0.18 g/100 mL[14]。

    2.3.3 微生物指標(biāo)

    細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)/mL;大腸桿菌≤3 MPN/100 mL;致病菌:不得檢出[15]。

    3 結(jié)論

    本試驗(yàn)采用搖瓶液態(tài)發(fā)酵法,通過(guò)桑葚汁的酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵兩個(gè)階段的研究,確定了桑葚果醋發(fā)酵的最優(yōu)條件。結(jié)果表明,桑葚果汁酒精發(fā)酵的最佳工藝參數(shù)為溫度30 ℃、糖度16%、酵母菌接種量20%,發(fā)酵周期4 d,在此條件下酒精度為6.3%vol;桑葚果醋發(fā)酵最佳工藝參數(shù)為溫度32 ℃、酒精度8%vol、醋酸接種量20%,在此條件下產(chǎn)酸量達(dá)為5.13 g/L。

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