UV-Vis結(jié)合HPLC FP對不同采收期傣藥燈臺葉的鑒別及品質(zhì)研究

楊妮娜、張 霽、趙艷麗、王元忠*、趙應(yīng)紅

1. 西雙版納傣族自治州傣醫(yī)醫(yī)院、云南 西雙版納 666100 2. 云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院、云南 昆明 650500 3. 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所、云南 昆明 650200

UV-Vis結(jié)合HPLC FP對不同采收期傣藥燈臺葉的鑒別及品質(zhì)研究

楊妮娜1,2、張 霽3、趙艷麗3、王元忠3*、趙應(yīng)紅1*

1. 西雙版納傣族自治州傣醫(yī)醫(yī)院、云南 西雙版納 666100 2. 云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院、云南 昆明 650500 3. 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所、云南 昆明 650200

建立不同采收期燈臺葉紫外-可見光譜指紋圖譜及HPLC指紋圖譜、結(jié)合主成分分析、聚類分析對不同采收期燈臺葉進(jìn)行快速鑒別和品質(zhì)評價、確定最佳采收期、推動傣藥現(xiàn)代化發(fā)展進(jìn)程。通過單因素實驗確定燈臺葉紫外-可見光譜的最佳提取條件、采集12個月份燈臺葉紫外光譜數(shù)據(jù)、平行3次、扣除背景8點平滑后倒入SIMCA-P+11.5進(jìn)行主成分分析、以前三個主成分三維得分圖快速鑒別不同采收期。Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18(250×4.6 mm,5 μm)色譜柱、以乙腈(B)-0.1%甲酸水(A)為流動相、梯度洗脫(0～5 min、5% B； 5～35 min、5% B→26% B； 35～40 min、26% B→56% B)、流速1 mL·min-1、進(jìn)樣量7 μL、柱溫30 ℃、檢測波長287 nm。不同采收期燈臺葉紫外-可見光譜根據(jù)吸收峰位置及變化的幅度可以將光譜分為三段、第一段為235～400 nm、第二段為400～500 nm、第三段為500～800 nm。第一段中吸收峰數(shù)目最多、主要集中在270、287和325 nm、吸光度及其變化幅度最大、體現(xiàn)出不同月份光譜圖的指紋特征。第二段吸收峰較少主要分布在410 nm和464 nm附近、吸光度及其變化較第一段減小。第三段圖譜在665 nm處均有一個較大吸收峰、吸光度無明顯差異。將UV-Vis光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析、不同月份樣品在主成分得分圖中離散分布、同一月份樣品相對集中、可以將不同月份樣品鑒別開。HPLC指紋圖譜結(jié)合聚類分析可將不同采收期樣品分為Ⅲ類、第Ⅰ類為3、4、5和7月份、第Ⅱ類為6、8和9月份、第Ⅲ類為10、11、12、1及2月。結(jié)合共有峰面積可以看出同一類樣品化學(xué)成分含量相近、不同類之間差異較明顯、第Ⅲ類樣品化學(xué)成分含量最高。UV-Vis FP、HPLC FP結(jié)合主成分分析和聚類分析能快速鑒別不同采收期燈臺葉并對其進(jìn)行品質(zhì)評價。燈臺葉最佳采收期為10月至次年2月、即傣歷中的冷季。

紫外-可見光譜； HPLC指紋圖譜； 傣藥； 燈臺葉； 采收期； 鑒別； 質(zhì)量評價

引 言

民族的就是世界的[1]。2007年國家11個部委聯(lián)合制定的48號文件《關(guān)于切實加強(qiáng)民族醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展的指導(dǎo)意見》充分肯定了民族醫(yī)藥在人類衛(wèi)生事業(yè)中的突出貢獻(xiàn)。傣醫(yī)藥作為“四大民族醫(yī)藥”(藏、蒙、維、傣)之一、越來越受到人們的關(guān)注。據(jù)《貝葉經(jīng)》、《逸周書王會解》記載、早在2500多年前“當(dāng)補臘薩哈”(橄攬時期)傣族人民就有了自己的醫(yī)藥文化[2-3]。傣族將一年分為臘魯鬧(冷季)、臘魯皇(熱季)、臘魯芬(雨季)三個季節(jié)、不同季節(jié)藥物有效成份存在于植物的不同部位、故傣醫(yī)非常注重采藥季節(jié)和周日時辰[4]。

隨著傣藥材消耗日益增長、野生資源逐步枯竭、不同采收期藥材混用現(xiàn)象愈加嚴(yán)重、給傣藥臨床療效帶來了巨大隱患。因此、結(jié)合現(xiàn)代研究技術(shù)鑒別和確定藥材最佳采收期保證藥物療效顯得尤為重要。由于傣藥研究相對滯后、缺乏相應(yīng)對照品、因此構(gòu)建一種從整體角度鑒別和評價傣藥的方法迫在眉睫。指紋圖譜技術(shù)憑借其整體性、模糊性特點、在民族藥研究中已廣泛應(yīng)用[5-7]。獲取指紋圖譜的方法有紫外-可見光譜、紅外光譜、液相色譜、氣相色譜、毛細(xì)管電泳及其相關(guān)聯(lián)用技術(shù)等[8-9]。紫外-可見光譜是有機(jī)化合物中價電子吸收一定光子能量從基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)的結(jié)果、是共軛結(jié)構(gòu)的特有屬性、色譜峰高低代表價電子吸收光子能量的大小[10]。紫外-可見分光光度法操作簡便、測定快速、應(yīng)用范圍廣、能將微觀的價電子躍遷過程轉(zhuǎn)化成宏觀的光譜圖但專屬性較差、存在光譜重疊、數(shù)據(jù)量大等問題[11-13]。高效液相色譜圖是不同極性化合物在固定相和流動相中分配系數(shù)不同而形成的、每一個色譜峰代表一個或一類化合物、其分離效率高、靈敏度好、專屬性強(qiáng)、操作自動化但所需時間較長[10,14]。同時采用UV-Vis指紋圖譜和HPLC指紋圖譜、結(jié)合化學(xué)計量學(xué)方法探討傣藥采收期及品質(zhì)評價的研究未見報道。

燈臺葉是夾竹桃科雞骨常山屬糖膠樹(Alstoniascholaris(L.) R. Br.)的干燥樹葉、寒、苦、微澀、入火、水塔、有清火解毒、止咳化痰、消腫止痛等功效、被廣泛地用于治療攏答兒(頜下淋巴結(jié)腫大)、攏達(dá)兒(腮腺腫大)、乃多皇賣唉列習(xí)特來(肺熱咳嗽、痰多)、習(xí)火(哮喘)、農(nóng)桿農(nóng)暖(乳腺炎)、“攏匹勒”(月子病)、攏夢曼(蕁麻疹)、“攏匹把母”(癲癇病)和攏梅接路多火檔(風(fēng)濕肢體關(guān)節(jié)疼痛)[15-16]?，F(xiàn)代研究表明燈臺葉富含生物堿、黃酮、三萜等活性成分、具有止咳平喘、抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的藥理活性[17-21]。

研究以燈臺葉為材料、建立其UV-VisFP和HPLC FP、結(jié)合聚類分析和主成分分析對不同采收期燈臺葉藥材進(jìn)行鑒別和品質(zhì)評價、研究結(jié)果以期為燈臺葉藥材最佳采收期的確定提供科學(xué)依據(jù)、確保臨床用藥的有效性、推動傣藥現(xiàn)代化發(fā)展進(jìn)程。

1 實驗部分

1.1 儀器

UV-2550雙通道紫外-可見分光光度計(日本島津)、電子分析天平(美國奧豪斯公司)、超聲波清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)、FW-100型高速萬能粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)、LC-10 ATvp型高效液相色譜儀(日本島津、包括二極管陣列檢測器、二元泵、手動進(jìn)樣器、CLASS-VP工作站)、Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18色譜柱(250×4.6 mm,5 μm)。

1.2 試劑

甲醇、無水乙醇(分析純、四川西隴化工有限公司)、乙酸乙酯(分析純、汕頭市西隴化工有限公司)、石油醚、甲酸(分析純、天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)、乙腈(色譜純、美國fisher)、超純水(Millipore純水系統(tǒng)、美國Millipore公司)。

1.3 樣品

12批燈臺葉樣品分別于2014年4月至2015年3月采自云南省西雙版納傣族自治州傣醫(yī)醫(yī)院、每批樣品量均為5株。樣品采集后曬干、粉碎、過2號篩、自封袋密封、避光、陰涼干燥處保存。所有樣品經(jīng)傣藥主任藥師趙應(yīng)紅鑒定為夾竹桃科雞骨常山屬糖膠樹葉。

1.4 UV-Vis指紋圖譜建立

1.4.1 UV-Vis供試品溶液制備

精密稱取燈臺葉粉末0.025 0 g于25 mL具塞試管中、加無水乙醇10 mL、稱定重量、室溫下超聲提取40 min、取出、靜置、再次稱定、無水乙醇補足損失重量、過濾、濾液作為供試品溶液。

1.4.2 燈臺葉紫外-可見光譜測定

根據(jù)“1.4.1”項下方法制得供試品溶液、以無水乙醇為參比液、設(shè)定掃描波長235～800 nm、狹縫寬度1.0 nm、采樣間隔0.2 nm、掃描紫外-可見光譜圖、每份樣品平行測定3次、取平均光譜。

1.4.3 UV-Vis數(shù)據(jù)處理

將12批36個原始光譜圖進(jìn)行扣背景8點平滑處理、以消除基線漂移和光譜噪音干擾。波長和吸光度數(shù)據(jù)通過轉(zhuǎn)置、導(dǎo)入SIMCA-P+11.5軟件進(jìn)行主成分分析。

1.5 HPLC指紋圖譜建立

1.5.1 色譜條件

Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18色譜柱(250×4.6 mm,5 μm)； 流動相為乙腈(B)-0.1%甲酸水(A)、洗脫梯度； 流速1.0 mL·min-1； 柱溫30 ℃； 檢測波長287 nm； 進(jìn)樣量7 μL。梯度洗脫程序：0～5 min、5% B； 5～35 min、5% B→26% B； 35～40 min、26% B→56% B。

1.5.2 樣品測定

分別取12批燈臺葉粉末各0.500 0 g、精密稱定、置潔凈具塞試管中、加水10 mL、超聲提取(53 Hz)40 min、取出、干燥玻璃濾器過濾、濾液用0.22 μm微孔濾膜過濾、精密吸取續(xù)濾液7 μL、注入高效液相色譜儀、按“1.5.1”項下色譜條件進(jìn)行測定、記錄色譜圖。

1.6 方法

1.6.1 UV-Vis光譜精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗

取6月份供試品溶液、根據(jù)“1.4.2”項光譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次、以吸光度計、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD小于0.6%、表明儀器精密度良好。

平行稱取6月份樣品6份、依照“1.4.1”項下方法制備供試品溶液、在“1.4.2”項光譜條件下進(jìn)行測定、以吸光度計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.8%、結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

取6月份樣品、按“1.4.1”項方法制備UV-Vis供試品溶液、分別于0、2、4、8、12、24 h掃描光譜圖、以吸光度計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD小于1.7%、供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.6.2 HPLC精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗

取6月份燈臺葉樣品、按“1.5.2”項下方法獲得供試品溶液、按“1.5.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次、考察各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結(jié)果相對保留時間RSD%<0.39%、相對峰面積RSD%<3.78%、表明儀器精密度良好。

取6月份燈臺葉樣品6份、按“1.5.2”項下方法獲得供試品溶液、各取7 μL、依次進(jìn)樣、考察各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結(jié)果相對保留時間RSD%<0.25%、相對峰面積RSD%<4.97%、表明方法重復(fù)性良好。

取6月份燈臺葉樣品、采用“1.5.2”項下方法得到供試品溶液、分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析、記錄色譜圖、考察各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結(jié)果相對保留時間RSD%<0.64%、相對峰面積RSD%<2.88%、表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑優(yōu)化

精密稱取6月份燈臺葉粉末4份、每份0.025 0 g、分別加入10 mL甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯、石油醚、超聲提取40 min、過濾、續(xù)濾液按“1.4.2”項下條件測定、結(jié)果見圖1(a)。圖中可以看出甲醇、乙酸乙酯為溶劑所得光譜色譜峰數(shù)目較少且吸光度過大、石油醚提取物光譜色譜峰數(shù)目少吸光度最低、無水乙醇提取物所獲得光譜色譜峰數(shù)目最多吸光度適中、因此選擇無水乙醇為提取溶劑。

圖1 優(yōu)化提取方法的紫外-可見光譜指紋圖譜

(a)：不同提取溶劑的紫外-可見光譜指紋圖譜； (b)、(c)：不同超聲時間和不同料液比的紫外-可見光譜指紋圖譜

Fig.1 UV-Vis fingerprint of optimization of method for extraction

(a): UV-Vis fingerprint of different solvents extracts; (b),(c): UV-Vis fingerprint of different ultrasonic time and material liquid ratio

2.2 超聲時間優(yōu)化

以6月份樣品為考察對象、精密稱定樣品0.025 g、加無水乙醇10 mL、分別超聲20、30、40、50、60 min、過濾、按“1.4.2”項下條件進(jìn)行光譜測定、結(jié)果見圖2(b)。圖中可以看出超聲20,30,40,50 min對燈臺葉提取效率影響較小、60 min影響最大。其中超聲30 min到40 min提取率升高幅度大于40～50 min、同時考慮到長時間超聲會對藥材中物質(zhì)成分和結(jié)構(gòu)造成影響、故選擇40 min為最佳提取時間。

2.3 料液比優(yōu)化

精密稱取6月份樣品0.025、0.05、0.1 g于3支試管中、加入10 mL無水乙醇、按“1.4.1”項方法制備供試品溶液、“1.4.2”項中光譜條件進(jìn)行測定、結(jié)果見圖1(c)。結(jié)果表明、不同料液比光譜圖差異較大。0.0025 g·mL-1的料液比光譜圖峰數(shù)目與吸光度均適中、因此選擇0.002 5 g·mL-1為最佳料液比。

2.4 不同采收期燈臺葉UV-Vis指紋圖譜

不同月份樣品UV-Vis指紋圖譜見圖2。圖中可以看出、燈臺葉UV-Vis光譜峰數(shù)目較多、涵蓋信息量較大。根據(jù)吸收峰位置及變化的幅度可以將光譜分為三段、第一段為235～400 nm、第二段為400～500 nm、第三段為500～800 nm。第一段中吸收峰數(shù)目最多、主要集中在270、287和325 nm、可能是醛酮n→π*躍遷產(chǎn)生的R帶或芳香環(huán)精細(xì)解構(gòu)B帶在助色團(tuán)影響下紅移的結(jié)果、推測可能與燈臺葉中生物堿和黃酮類成分有關(guān)。同時第一段中吸光度及其變化幅度最大、體現(xiàn)出不同月份光譜圖的指紋特征。第二段吸收峰較少主要分布在410和464 nm附近、吸光度及其變化較第一段減小。第三段圖譜中不同月份樣品吸光度及變化無明顯差異、但在665 nm處均有一個較大吸收峰、可能是葉綠素的吸收峰[22-24]。

圖2 不同采收期燈臺葉紫外-可見光譜指紋圖譜

2.5 不同采收期燈臺葉主成分分析

采用SIMCA-P+11.5軟件對不同采收期燈臺葉進(jìn)行主成分分析、特征根大于1的3個主成分累積貢獻(xiàn)率高達(dá)97.221%(表1)、表明該3個主成分能夠表達(dá)樣品全部化學(xué)信息的97.221%、以其來評價采收期藥材的質(zhì)量變化具有可行性。因此以PC1,PC2和PC3為坐標(biāo)、做主成分分析的三維投影圖(圖3)。圖中相同顏色的為同一個月份樣品、聚集一起為整體質(zhì)量接近的樣品?？梢钥闯鱿嗤路莸臉悠吩谥鞒煞值梅謭D中較集中、不同月份燈臺葉樣品在主成分分析圖中產(chǎn)生一定離散現(xiàn)象。其中、10,11,12,1和2月聚為一類、3,5,6和7月聚為一類、4,8和9月聚為一類。結(jié)果表明UV-Vis光譜結(jié)合主成分分析能夠反應(yīng)出不同采收期燈臺葉樣品的整體差異、可用于燈臺葉采收期的鑒別。

表1 三種主成分的特征值和貢獻(xiàn)率

2.6 不同采收期燈臺葉HPLC指紋圖譜建立

不同采收期樣品HPLC指紋圖譜見圖4、確定了16個共有峰、共有峰總面積見表2。采用SPSS16.0對全譜峰面積進(jìn)行聚類分析、見圖5。從指紋圖譜和共有峰總面積可以看出不同采收期燈臺葉化學(xué)成分基本相似、但含量差異較明顯。聚類分析結(jié)果可以看出不同采收期樣品分為Ⅲ類、第Ⅰ類為3、4、5和7月份、第Ⅱ類為6、8和9月份、第Ⅲ類為10、11、12、1及2月。同一類樣品化學(xué)成分含量相似、不同類之間含量差異較明顯、結(jié)合共有峰面積可以看出第Ⅲ類樣品化學(xué)成分含量最高、建議燈臺葉在10月至次年2月(傣族冷季)之間采摘較好。因此HPLC指紋圖譜技術(shù)結(jié)合化學(xué)計量學(xué)方法可對不同采收期燈臺葉品質(zhì)進(jìn)行評價。該結(jié)果與UV-Vis光譜結(jié)果高度吻合、二者的結(jié)果相互印證、表明UV-Vis結(jié)合HPLC指紋圖譜技術(shù)在燈臺葉采收期評價中應(yīng)用的可行性。

圖3 不同采收期燈臺葉主成分分析三維圖

Fig.3 PCA three-dimensional diagram of different harvest time ofAlstoniascholaris(L.) R. Br.

圖4 不同采收期燈臺葉HPLC指紋圖譜

2.7 UV-Vis與HPLC指紋聯(lián)用技術(shù)

UV-Vis光譜指紋圖譜與HPLC色譜指紋圖譜、均具有“整體性”和“模糊性”的特點、都能從整體上反應(yīng)不同藥材的質(zhì)量變化情況、但所反應(yīng)的信息又有區(qū)別。UV-Vis光譜操作簡便、測定快速、是不飽和基團(tuán)或共軛基團(tuán)的特征圖譜、反應(yīng)不同電子躍遷能力的大小、對于化學(xué)成分鑒別專屬性差。HPLC法靈敏度高、選擇性好、從化學(xué)成分角度反應(yīng)藥材質(zhì)量的整體差異、但耗時較長、費用昂貴。本研究采用UV-Vis與HPLC指紋圖譜聯(lián)合技術(shù)、憑借其優(yōu)勢互補特點、探討不同采收期燈臺葉質(zhì)量變化情況、研究表明二者結(jié)果高度吻合、相互驗證、能夠較好地對不同采收期燈臺葉進(jìn)行鑒別和品質(zhì)評價。

表2 不同采收期燈臺葉共有峰總面積

圖5 不同采收期燈臺葉聚類分析圖

2.8 不同采收期燈臺葉質(zhì)量差異性分析

燈臺葉傳統(tǒng)藥用產(chǎn)地為云南西雙版納傣族自治州一帶、該地區(qū)屬熱帶雨林氣候、全年僅有冷季(11～次年2月)、熱季(3～6月)、雨季(7月～10月)之分、光照、溫度、降雨量差異較大。相關(guān)研究表明藥用植物有效成分種類和含量的積累隨采收期、季節(jié)的變化而有所不同、這種差異與外界非生物環(huán)境因子密切相關(guān)、如光照、溫度、降雨量等等[25-31]。燈臺樹在不同光照、溫度刺激下、體內(nèi)抗氧化酶、生物總量變化較大、進(jìn)而對其質(zhì)量產(chǎn)生影響[32]。

2.9 燈臺葉最佳采收期的確定

《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2005年版第七部規(guī)定燈臺葉采收期為全年可采、但從UV-Vis與HPLC指紋圖譜中可以看出、不同生長階段燈臺葉中物質(zhì)積累有較大差異。UV-Vis光譜中235～500 nm差異較大、表現(xiàn)出明顯的指紋性、其中10、11、12、1、2月份吸光度相對較高。HPLC指紋圖結(jié)合聚類分析可以看出10、11、12、1、2月份品質(zhì)接近被聚為一類、且共有成分含量最高、因此建議燈臺葉最佳采收期為10月至來年2月、即傣歷中的冷季。

3 結(jié) 論

建立了不同采收期燈臺葉UV-Vis光譜指紋圖譜和HPLC色譜指紋圖譜、結(jié)合主成分分析、相似度評價及聚類分析、表明不同采收期燈臺葉質(zhì)量差異明顯、其中10、11、12、1和2月份樣品光譜圖中吸光度較大、峰數(shù)目較多、色譜圖中共有化學(xué)成分含量最高、因此建議燈臺葉最佳采收期為10月至來年2月、即傣歷中的冷季。該結(jié)果與《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2005年版第七部中規(guī)定燈臺葉全年可采相矛盾、有待進(jìn)一步研究。

采收期是影響藥材質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一、僅以一個或幾個化學(xué)成分的含量變化來評價不同采收期藥材質(zhì)量、不能完全反應(yīng)藥材整體質(zhì)量變化。在缺少大量化學(xué)對照品和療效組分不明確的情況下、本研究建立了脂溶性和水溶性成分UV-Vis和HPLC指紋圖譜、結(jié)合化學(xué)計量學(xué)研究、即能對不同采收期燈臺葉進(jìn)行快速鑒別又能品質(zhì)評價、反映不同采收期對燈臺葉質(zhì)量的影響、為確定藥材最佳采收期提供了一種新的思路。

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*Corresponding authors

Distinguish and Quality Estimation of the Leaves ofAlstoniascholaris(L.) R. Br. from Different Harvest Time Based on the UV-Vis·FP and HPLC·FP

YANG Ni-na1,2,ZHANG Ji3,ZHAO Yan-li3,WANG Yuan-zhong3*、ZHAO Ying-hong1*

1. Dai Hospital of Xishuangbanna Dai Autonomous Prefecture,Xishuangbanna 666100,China 2. College of TCM,Yunnan University of TCM,Kunming 650500,China 3. Institute of Medicinal Plants,Yunnan Academy of Agricultural Sciences,Kuming 650200,China

UV-Vis and HPLC fingerprint of different harvest time of the leaves ofAlstoniascholaris(L.) R. Br. were establish the for identification and quality evaluation to promote the development of Dai Medicine modernization. The optimal extraction condition was used to obtain UV - vis data of different harvest time which were deducted background and eight spot smooth,were collected to make the principal component analysis in SIMCA-P+11.5,identifying the samples quickly with the first three principal component three-dimensional diagram. The HPLC fingerprint were obtained with Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18 (250×4.6 mm,5 μm) chromatographic column with the mobile phase of acetonitrile (B) - water (contain 0.1% formic acid) (A) for gradient elution (0～5 min,5% B; 5～35 min,5% B→26% B; 35～40 min,26% B→56% B). The wavelength was set at 287 nm and the column temperature was maintained at 30 ℃. The flow rate was 1.0 mL·min-1and the injection volume was 7 μL. The HPLC fingerprint of different harvest time of the leaves ofAlstoniascholaris(L.) R. Br. was analysised by cluster analysis to quality evaluation. Research findings showing: (1) The UV-Vis spectrogram of different harvest time of the leaves ofAlstoniascholaris(L.) R. Br. were divided into three parts according to the absorption peak position and amplitude of variation. The first was 235 to 400 nm,the second was 400 to 500 nm,and the third was 500 to 800 nm. In the first part,absorption peak were focused on 270,287 and 325 nm,which can reflect the fingerprint character for the high absorbance and amplitude of variation. Absorption peak were distributed in 410 and 464 nm in the second part,absorbance and amplitude of variation were lower than the first part. There was a bigger absorption peak at 665 nm in the third part,but the absorbance had no difference. The UV-Vis data of different harvest time were gathered to make the principal component analysis,the result was that the samples of same month were concentrated distribution,but different month samples were dispersed distribution. (2) HPLC fingerprint were divided into three categories through hierarchical cluster analysis,3,4,5 and 7 month were the first category,6,8,9 month samples were second category,the others were third category. Chemical composition and content of the same category samples were similar,but the different category samples had a obvious difference,more important is that the third category samples content was the highest. Combining UV-Vis FP and HPLC FP can identify and evaluate quickly the samples of different harvest time of the leaves ofAlstoniascholaris(L.) R. Br. The optimal harvest time ofAlstoniascholaris(L.) R. Br. was from October to next February,which was the coldest season in the Dai calendar.

UV-Vis; HPLC fingerprint; Dai medicine;Alstoniascholaris(L.) R. Br.; Harvest time; Distinguish; Quality estimation

May 19,2015; accepted Oct. 2,2015)

2015-05-19、

2015-10-02

國家自然科學(xué)基金項目(81260608)和云南省自然科學(xué)基金重大項目(2013FC006)資助

楊妮娜、女、1988年生、云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院研究生 e-mail：yangnina-2008@163.com *通訊聯(lián)系人 e-mail: yzwang1981@126.com; 15887797260@163.com

O657.3

A

10.3964/j.issn.1000-0593(2016)12-4021-07