沙棘果對高脂膳食大鼠肝臟保護作用研究

宋春梅，杜鵑，葛紅娟，李善姬

（吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林吉林132013）

沙棘果對高脂膳食大鼠肝臟保護作用研究

宋春梅，杜鵑，葛紅娟，李善姬

（吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林吉林132013）

探討沙棘對高脂膳食大鼠的肝臟保護作用。以雄性Wistar大鼠60只為研究對象，隨機分為對照組、高脂模型組和沙棘低、中和高劑量組。除對照組外，其余4組給予高脂飼料。對照組和高脂模型組灌胃蒸餾水；低、中和高劑量沙棘組分別灌胃不同劑量沙棘汁。喂養(yǎng)28 d后，腹主動脈取血，分離血清，測超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氧基轉(zhuǎn)移酶（AST）的含量，觀察肝細胞超微結(jié)構(gòu)變化。沙棘各劑量組與高脂模型組比較SOD活性均升高，MDA含量均降低，有顯著性差異（P＜0.05）；高脂模型組與沙棘各劑量組比較，ALT和AST活性均降低，AST活性有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。肝臟超微結(jié)構(gòu)表明，沙棘能改善對高脂飲食所致的大鼠肝細胞超微結(jié)構(gòu)的損傷。沙棘對高脂膳食大鼠肝細胞具有保護作用。

沙棘；大鼠；抗氧化；超微結(jié)構(gòu)；高脂膳食

沙棘屬衛(wèi)生部公布的既是食品又是藥品類[1]，含有豐富的營養(yǎng)素和多種生物活性物質(zhì)，具有較高的食用和藥用價值，是我國古代藏醫(yī)、蒙醫(yī)常用藥材[2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，沙棘中黃酮物質(zhì)及提取物具有抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老、增強機體免疫力和預(yù)防血栓形成等作用[3-8]。關(guān)于沙棘果的營養(yǎng)保健作用研究報道較少。本文通過對高脂膳食大鼠實驗研究，探討沙棘對高脂膳食大鼠抗氧化能力及肝細胞超微結(jié)構(gòu)的影響，為沙棘果做為天然保健食品提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料

沙棘鮮果：沙棘果來源于內(nèi)蒙，勻漿機制成勻漿，紗布過濾。

高脂飼料制備：79%基礎(chǔ)飼料，1%膽固醇，10%豬油，10%蛋黃粉組成。

基礎(chǔ)飼料：玉米粉35%、大豆粉30%、面粉25%、麩皮10%，另加多種維生素和無機鹽。

1.1.2 實驗動物

健康清潔級wistar雄性大鼠，體重190 g～210 g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進行實驗。分籠飼養(yǎng)，每籠5只，大鼠自由進食和飲水，自然光照，室溫22℃～25℃。

1.1.3 主要儀器

全自動生化分析儀：Selectra-XL；荷蘭威圖科學(xué)公司；透射電鏡：日立公司Hitachi-7650；TD-5A離心機：湖南凱達科學(xué)儀器有限公司；722可見分光光度計：上海新儀器有限公司。

1.1.4 主要試劑

ALT和AST試劑盒：3V生物工程集團有限公司。SOD和MDA試劑盒：南京建成試劑公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組

將大鼠按體重隨機分成5組，即對照組、模型組、低劑量沙棘組、中劑量沙棘組和高劑量沙棘組，每組12只。實驗開始后對照組給予基礎(chǔ)飼料，其余各組給予高脂飼料喂養(yǎng)。對照組和高脂組灌胃蒸餾水，低劑量、中劑量和高劑量沙棘組分別按照標準人劑量50 g/60 kg的1倍、5倍和10倍的沙棘量進行灌胃，每只大鼠4mL，連續(xù)灌胃28 d，每周稱體重一次，記錄大鼠的體重，調(diào)整沙棘灌胃劑量。

1.2.2 實驗方法

實驗結(jié)束后，大鼠禁食12h，以10%烏拉坦7mL/kg腹腔麻醉后，打開腹腔，腹主動脈取血，3 000 r/min離心15min，分離血清，測定ALT、AST、SOD和MDA，測試方法嚴格按照試劑盒內(nèi)說明書進行檢測。

1.2.3 肝臟電鏡標本制備

各組隨機取大鼠3只，將大鼠麻醉，固定在解剖臺上，開腹暴露肝臟，取同一部位肝組織，用冰生理鹽水漂洗，將其切成1×1×1mm3組織塊，置于4℃2.5%戊二醛4%多聚甲醛固定液中，1%鋨酸后固定，梯度丙酮脫水，Epon812包埋，徠卡UC7超薄切片機切片，透射電子顯微鏡Hitachi-7650進行觀察照相。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 沙棘對大鼠血清中SOD活性及MDA含量的影響

沙棘對大鼠血清中SOD活性及MDA含量的影響見表1。

表1 沙棘對大鼠血清中SOD活性及MDA含量的影響（）Table1 The effect of seabuckthorn on the level of serum SOD and MDA in rats

注：*表示與正常對照組差異有顯著性，P＜0.05；#表示與高脂模型組差異有顯著性P＜0.05。

組別 SOD活性/（U/L） MDA含量/（nmol/L）正常對照組 59.50±2.59 0.63±0.13高脂模型組 46.54±3.44* 1.02±0.35*沙棘低劑量組 51.71±1.76# 0.47±0.11#沙棘中劑量組 66.28±5.30# 0.69±0.17#沙棘高劑量組 74.85±9.93# 0.63±0.19#

由表1可見，對照組和沙棘各劑量組大鼠SOD活性均高于高脂模型組，高脂模型組與對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；沙棘各劑量組與高脂模型組比較，沙棘各劑量組均有顯著差異（P＜0.05）。MDA含量高脂模型組最高，高脂模型組與對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；沙棘各劑量組與高脂模型組比較，均有顯著差異（P＜0.05）。

2.2 沙棘對大鼠血清中ALT和AST活性的影響

沙棘對大鼠血清中ALT和AST活性的影響見表2。

表2 沙棘對高脂膳食大鼠血清中ALT和AST活性的影響（）Table2 The effect of seabuckthorn on the activity of serum ALT and AST in rats

注：*表示與正常對照組差異有顯著性，P＜0.05；#表示與高脂模型組差異有顯著性P＜0.05。

組別 ALT活性/（U/L） AST活性/（U/L）正常對照組 47.30±6.03 157.73±29.73高脂模型組 65.13±9.13* 197.23±26.98*沙棘低劑量組 61.70±10.04* 159.76±28.30#沙棘中劑量組 61.41±13.50* 169.75±25.25#沙棘高劑量組 56.43±11.03* 157.71±22.43#

表2結(jié)果表明，高脂模型組ALT和AST活性均升高，高脂模型組與正常對照組比較，ALT和AST活性均有顯著性差異（P＜0.05）；高脂模型組與沙棘各劑量組比較，ALT和AST活性均降低，AST活性有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 電鏡觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)

正常組：肝細胞變小，細胞核1個～2個，呈圓形，核仁明顯，核內(nèi)常染色質(zhì)多，胞質(zhì)內(nèi)線粒體數(shù)量多，嵴清晰可見，有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和糖原顆粒?？梢娚倭康娜苊阁w顆粒（見圖1和2）。

高脂模型組：肝細胞的界限不清，核呈圓形，1個～2個，基質(zhì)輕度空化，核內(nèi)異染色質(zhì)略增多，胞質(zhì)基質(zhì)致密，線粒體致密狀，嵴不易分清，可見大小不一的圓形脂滴和少量吞噬體，其內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列緊密，膜增厚，竇周隙內(nèi)可見貯脂細胞和較多的膠原纖維（見圖3和4）。

沙棘組：肝細胞緊密排列，細胞較大，核1個～2個，大而圓形，核仁明顯，核內(nèi)常染色質(zhì)多。個別肝細胞局部胞質(zhì)略空化，胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，線粒體數(shù)目比模型組明顯增多，變性程度較輕，嵴顯示較清晰，脂滴顆粒明顯減少，偶見單個小脂滴，糖原顆粒增多（見圖5和6）。

3 討論

隨著人民生活水平的提高，膳食結(jié)構(gòu)的改變，高能和高脂膳食引起血脂水平升高，使機體內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，引起脂質(zhì)過氧化增強，影響肝臟的正常功能。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，食物中的植物化學(xué)預(yù)防和治療高血脂和保護肝臟起著重要的作用[9-11]。SOD是機體內(nèi)細胞中主要抗氧化酶，它通過歧化反應(yīng)清除體內(nèi)生成的氧自由基，阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)。MDA是脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物，其含量反映了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度的強弱和機體細胞受自由基攻擊的程度。正常情況下，ALT和AST主要來源于肝臟，血清中含量很低。肝功能受損時，肝功能的異常的變化可通過血清中的ALT和AST表現(xiàn)出來[12-13]。本研究通過喂食大鼠高脂飼料進行造模，同時給予沙棘進行干預(yù)，實驗結(jié)果顯示，高脂模型組，血清SOD活性降低，MDA含量升高，表明高脂模型組因為高脂的作用，其脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，氧自由基增多，引起肝細胞受損，出現(xiàn)血清MDA水平升高。沙棘各劑量組，血清SOD活性升高，MDA含量降低，均有顯著性差異。沙棘能降低高脂膳食大鼠血清ALT和AST活性。從肝臟超微結(jié)構(gòu)變化來看，沙棘能明顯減輕肝細胞脂肪變性，改善肝臟病理損害。這表明沙棘能增強肝臟調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的能力，防治高脂血癥及抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護肝細胞。這主要是沙棘含有豐富的黃酮類化合物、VC、VE和沙棘油等成分有關(guān)。

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Hepatoprotective Effects of Seabuckthorn in High-fat Diet Rats

SONG Chun-mei，DU Juan，GE Hong-juan，LI Shan-ji
（Jilin Medical College，School of Public Health，Jilin 132013，Jilin，China）

The purpose of this study was to examine the hepatoprotective effect of seabuckthorn in high-fat dietrats.Sixty male Wistar rats were randomly divided into five groups：the control group， the high-fat model group，the low-dose seabuckthorn group， the middle-dose seabuckthorn group and the high-dose seabuckthorn group.Rats were treated with high-fat diet besides the control group. Then rats in both control group and high fat modelgroup was given distilled water and those in low， medium and high treated group were received different doses ofseabuckthorn juice. After 28 days treatment， the blood on abdominal aorta was collected and the levels of serumsuperoxide dismutase （SOD）， malondialdelyde （MDA）， alanine aminotransferase （ALT）， aspartic acid oxotransferase （AST） were measured. And also the liver cell ultrastructure changes were observed. The eachseabuckthorn dose group compared with high -fat model group， the SOD activity were increased， the MDAcontent were lower， and there was significant difference between two groups（P＜0.05）. The high-fat model groupcompared with each seabuckthorn dose group ALT and AST activity were reduced， the activity of AST wassignificantly difference between two groups（P＜0.05）. Liver ultrastructure showed that seabuckthorn can improvefat diet-induced liver cell damage in rats. In conclusion， seabuckthorn can play protective effects in high fatdiet rat hepatocytes.

seabuckthorn；rat；antioxidant；ultrastructure；high-fat diet

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.07.007

2015-01-18

吉林省科技廳項目（編號201105089）

宋春梅（1964—），女（漢），教授，碩士，從事營養(yǎng)與食品研究研發(fā)。