腫瘤壞死因子-308G/A多態(tài)性與慢性乙型肝炎的相關(guān)性分析

曾莉蓉，魏新素(恩施土家族苗族自治州民族醫(yī)院，湖北恩施445099；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團第一師醫(yī)院)

?

腫瘤壞死因子-308G/A多態(tài)性與慢性乙型肝炎的相關(guān)性分析

曾莉蓉1，魏新素2(1恩施土家族苗族自治州民族醫(yī)院，湖北恩施445099；2新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團第一師醫(yī)院)

摘要：目的探討中國人群腫瘤壞死因子-α(TNF-α)啟動子區(qū)域-308G/A多態(tài)性與慢性乙型肝炎(CHB)發(fā)生的關(guān)系。方法 以腫瘤壞死因子、多態(tài)性、乙型肝炎、慢性乙型感染等為主題詞，計算機檢索檢索萬方、維普、中國知網(wǎng)、VIP、MEDILINE、Cochrance Library、Spinger、Embase等數(shù)據(jù)庫，時間自建庫以來至2013年3月15日，收集中國人群TNF-α啟動區(qū)-308G/A位點多態(tài)性與CHB相關(guān)的病例對照研究。評價納入研究文獻的質(zhì)量后提取有效數(shù)據(jù)，采用RevMan軟件進行Meta分析，采用Statas 10軟件進行漏斗圖和Egger′s檢驗。結(jié)果 共納入研究6項，CHB組632例，健康對照組443例。Meta分析結(jié)果顯示具有G等位基因的人群CHB危險與具有A等位基因的人群相比有顯著差異(OR=1.54,95%CI為1.18～2.01，P=0.001)?；蛐虶G與(GA+AA)無顯著性差異(OR=1.72，95%CI為0.80～3.67，P=0.16)。結(jié)論 TNF-α啟動子區(qū)域-308G/A多態(tài)性與CHB發(fā)生存在相關(guān)性，TNF-α啟動子-308位點A等位基因可以保護健康者不受HBV感染。

關(guān)鍵詞：病毒感染；乙型肝炎；腫瘤壞死因子；Meta分析

腫瘤壞死因子(TNF)由巨噬細胞、單核細胞、中性粒細胞、T細胞和NK細胞刺激后產(chǎn)生。同時TNF可刺激細胞因子的分泌，增加黏附分子的表達，刺激中性粒細胞，具有介導(dǎo)多向性炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫等生物學(xué)作用[1]。TNF-α位于人類主要組織相容性復(fù)合體III類基因區(qū)，研究[2]發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因啟動子區(qū)某些位點的單個核苷酸多態(tài)性可從轉(zhuǎn)錄水平影響TNF的產(chǎn)生。關(guān)于TNF-α位點SNP與慢性乙型肝炎(CHB)易感性方面是研究的熱點，但TNF-α基因的SNP在不同種族、不同地區(qū)間分布差異較大，研究的結(jié)果不一致甚至相反。本研究對中國人群TNF-α啟動子區(qū)域-308位點G/A多態(tài)性與CHB的病例對照研究進行Meta分析，評價我國人群中TNF-α基因遺傳突變與CHB易感性是否相關(guān)，為今后的研究提供參考。

1資料與方法

1.1文獻檢索方法以腫瘤壞死因子、多態(tài)性、乙型肝炎、慢性乙型感染等為主題詞，計算機檢索萬方數(shù)據(jù)庫、維普、中國知網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、VIP、中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫和中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫。以tumor necrosis factor/TNF, polymorphism, HBV/chronic hepatitis B為主題詞，檢索MEDILINE、Cochrance Library、Spinger、Embase等英文數(shù)據(jù)庫以中國人群為研究對象的文獻。收集國內(nèi)外公開發(fā)表的關(guān)于人群腫瘤壞死因子-308G/A基因多態(tài)性與慢性乙型肝炎關(guān)系的文獻。對納入文獻中的參考文獻進行手工檢索，檢索時間從建庫至2013年3月。由兩名研究者采用統(tǒng)一的數(shù)據(jù)提取表，對納入的文獻進行文獻篩選和資料提取，在數(shù)據(jù)提取中如有不一致的情況，與第三位研究者一起參照原文討論后協(xié)助解決。而后交叉核對，必要時聯(lián)系原文獻作者，確定實驗的具體實施過程。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)收集有關(guān)中國人群TNF-α-308G/A多態(tài)性與CHB關(guān)系的病例對照研究資料，以CHB為研究病例，以正常健康人為對照(control)，通過分子生物學(xué)方法檢測TNF-α-308G/A位點基因型的分布和等位基因頻率，分析TNF-α-308G/A多態(tài)性與CHB的關(guān)系的文獻。納入標(biāo)準(zhǔn)：①公開發(fā)表的TNF-α基因-308位點G/A多態(tài)性與中國人群慢性乙型肝炎相關(guān)性的病例-對照研究。語種限于中/英文。②研究對象為中國人，包括港澳臺地區(qū)，民族不限。③ 研究數(shù)據(jù)齊全，有基因型在病例組和對照組分布頻數(shù)，研究方法相似，統(tǒng)計方法應(yīng)用恰當(dāng)，數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠。④獨立的研究，同一組資料重復(fù)報道者，取資料最完整、樣本量較大的文獻。⑤對照組基因型分布符合遺傳平衡定律(Hrdy-Weinberg, H-W-E)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①研究內(nèi)容不包括TNF-α-308G/A位點的研究。②統(tǒng)計方法不當(dāng)，數(shù)量少、質(zhì)量差、未提供充足原始數(shù)據(jù)的文獻。③其他不符合Cohrance系統(tǒng)評價標(biāo)準(zhǔn)的文獻。

1.3數(shù)據(jù)提取由兩名研究者采用統(tǒng)一的數(shù)據(jù)提取表，對納入的文獻進行文獻篩選和資料提取，在數(shù)據(jù)提取中如有不一致的情況，與第三位研究者一起參照原文討論后協(xié)助解決。而后交叉核對，必要時聯(lián)系原文獻作者，確定實驗的具體實施過程。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用RevMan5.0軟件進行Meta分析。對基因型分布行H-W-E遺傳平衡檢驗。使用χ2檢驗對研究的結(jié)果進行異質(zhì)性檢驗，根據(jù)異質(zhì)性檢驗結(jié)果，若研究間無統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性采用固定效應(yīng)模型(Peto Mntel-Haenszel，M-H)進行合并分析；反之，則采用校正后的(Dersimonian-Laird，D-L)隨機效應(yīng)模型進行數(shù)據(jù)分析。計算OR值及95%CI，采用雙側(cè)檢驗。采用 Stata10.1軟件進行發(fā)表偏倚檢測。P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1納入研究的基線特征通過中英文數(shù)據(jù)庫檢索到文獻36篇，排除綜述、研究位點不包括-308、研究對象不符、中英文重復(fù)發(fā)表及數(shù)據(jù)不全的文獻，篩選出7篇符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻。經(jīng)遺傳平衡檢驗，1篇文獻研究對象不符合H-W-E分布，最終納入6篇研究文獻[3～8]。CHB的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中以2005年 5月中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會關(guān)于慢性乙型肝炎防治指南標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行的有1篇，以2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)4篇，以第5次全國傳染病與寄生蟲病學(xué)術(shù)會討論修訂的“病毒性肝炎防治方案”試行標(biāo)準(zhǔn)1篇。以體檢者乙肝標(biāo)記物均陰性為對照組2篇[3, 8]，以健康者或體檢者乙肝標(biāo)記物未說明的文獻3篇[4,5,7]，體檢者乙肝標(biāo)記物HBsAb(+)、HBcAb(+)或HBcAb(+)為健康對照組的文獻1篇。3篇文獻基因多態(tài)性的檢測方法采用限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)、2篇文獻采用序列特異性引物PCR(PCR-SSP或AS-PCR)，1篇文獻采用斑點雜交。納入的6組病例對照研究中累積CHB病例632例，對照組443例。

2.2Meta分析結(jié)果各研究結(jié)果之間無顯著異質(zhì)性(χ2=10.14，P=0.07)，故采用固定效應(yīng)模型分析。以G等位基因為非暴露因素，A等位基因為暴露因素，Meta分析結(jié)果顯示，具有G等位基因的人群慢性乙型肝炎的危險與具有A等位基因的人群相比有差異(OR=1.54，95%CI為1.18～2.01，P=0.001)，AA純合子基因型發(fā)現(xiàn)較少，故將(GA+AA)合并，異質(zhì)性檢驗結(jié)果表明，各研究結(jié)果之間有顯著異質(zhì)性(χ2=18.97，P=0.002)，故采用隨機效應(yīng)模型進行分析。基因型GG與GA+AA(OR=1.72，95%CI為0.80～3.67，P=0.16)無顯著性差異。

2.3發(fā)表偏倚評價和敏感性分析以各合并OR值除以標(biāo)準(zhǔn)誤，與標(biāo)準(zhǔn)誤倒數(shù)(精確度)做Egger′s回歸分析，結(jié)果等位基因G與A、基因型GG 與GA+AA間無顯著性差異(P>0.05)，但漏斗圖顯示為非對稱的，說明各個研究結(jié)果之間有發(fā)表偏倚。采用逐一排除法對各個研究進行敏感性分析，排除1篇文獻[7]后，消除發(fā)表偏倚。合并的OR未見明顯改變，說明此次Meta分析結(jié)果較可靠。

3討論

人的TNF-α基因位于染色體 6p21.3，屬于TNF超家族，能編碼多種功能的促炎細胞因子，主要由巨噬細胞分泌，參與調(diào)節(jié)機體的多種生物學(xué)過程，如細胞增殖、分化、凋亡、脂質(zhì)代謝等。TNF-α表達水平除與機體本身免疫系統(tǒng)的活化水平有關(guān)外，其啟動子區(qū)基因多態(tài)性也可能影響轉(zhuǎn)錄活性而使表達水平出現(xiàn)差異[2]。研究[9, 10]表明，TNF-α-308位點G/A的多態(tài)性與多種疾病有關(guān)。

TNF-α的多態(tài)性與HBV感染一直是近年來研究的熱點。本研究共納入6個病例對照研究，累積CHB病例 632例，對照組 443例。此次Meta分析結(jié)果表明，TNF-α-308位點G/A多態(tài)性與CHB感染明顯相關(guān)。

關(guān)于TNF-α-308位點G/A多態(tài)性與CHB易感相關(guān)性的研究，國外內(nèi)學(xué)者得出的結(jié)論不盡相同[11, 12]。產(chǎn)生差異的原因可能是多方面的：種族人群之間疾病的異質(zhì)性、樣本量的大小、研究對象的選擇和遺傳模型、年齡性別構(gòu)成、設(shè)計方案、是否具有HBV感染家族史等。納入文獻的研究方法上，均采用了合適的分子生物學(xué)方法對基因型進行分析，但個體研究存在差異性，采用PCR-RFLP的大部分個體研究中也存在是否對產(chǎn)物進行測序進行驗證的差異。在對Meta分析的總體結(jié)果進行分析時，這些混雜因素也是需要考慮的。從本研究納入文獻分析結(jié)果看，未發(fā)現(xiàn)明顯可以分層分析的因素，且納入研究不多，所以未進一步進行亞組分析。本研究在文獻收集、整理和分析過程中制定并實施了嚴格的標(biāo)準(zhǔn)，Egger′s回歸分析提示不存在一定的發(fā)表偏倚，可漏斗圖顯示不對稱性，采用逐一排除法進行敏感性分析，結(jié)果顯示不影響本研究所得出的結(jié)論。

目前TNF-α的多態(tài)性與HBV感染的Meta分析研究較多。如Zheng等[13]對健康者(包括自發(fā)性清除)和CHB進行Meta分析發(fā)現(xiàn)，-308A等位基因是CHB感染的保護因素，特別是內(nèi)蒙古人。Xia等[14]將研究對象限定為CHB和自發(fā)性清除者，對其進行Meta分析，發(fā)現(xiàn)TNF-α-308A具有抗病毒機制。我們將研究對象限定為中國人群CHB和健康體檢者，雖然研究樣本量小，但具有更高的特異性，會使結(jié)果更可靠。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNF-α-308位點A可以保護健康者不受HBV 感染。TNF-α-308A等位基因?qū)Σ《镜那宄δ芎芸赡芎吞岣逿NF-α轉(zhuǎn)錄激活和產(chǎn)生有關(guān)。

總之，本研究通過對中國人群TNF-α-308位點與CHB易感性進行Meta分析，結(jié)果表明TNF-α-308位點多態(tài)性與CHB易感性明顯相關(guān)。由于納入研究的例數(shù)有限，結(jié)果尚需在中國人群中進行嚴格設(shè)計、最大程度控制混雜因素、大樣本、同質(zhì)性的病例對照或前瞻性研究加以驗證，同時也要充分考慮基因與基因、基因與環(huán)境等相互作用的影響，以便更好地闡明TNF-α多態(tài)性與CHB的關(guān)系。

參考文獻：

[1] Tokushige K, Yamaguchi N, Ikeda I, et al. Significance of soluble TNF receptor-I in acute-type fulminant hepatitis [J]. Am J Gastroenterol, 2000,95(8):2040-2046.

[2] Kamali-Sarvestani E, Merat A, Talei AR. Polymorphism in the genes of alpha and beta tumor necrosis factors (TNF-alpha and TNF-beta) and gamma interferon (IFN-gamma) among Iranian women with breast cancer [J]. Cancer Lett, 2005,223(1):113-119.

[3] 周越塑,王福生,劉明旭,等.腫瘤壞死因子-α基因啟動子區(qū)點突變與乙型肝炎相關(guān)[J].世界華人消化雜志,2005,13(2):57-60.

[4] 黎環(huán),潘晨.腫瘤壞死因子α基因-308位點多態(tài)性與乙型肝炎病毒慢性感染的關(guān)系[J].中華實驗和臨床感染病雜志(電子版),2010,4(1):6-10.

[5] 叢美,劉寧,劉沛.乙型肝炎患者腫瘤壞死因子基因多態(tài)性[J].中國公共衛(wèi)生,2005,21(11):76-77.

[6] 陳立.細胞因子基因多態(tài)性與慢性HBV感染結(jié)局的相關(guān)性[C].福建醫(yī)科大學(xué)，2006.

[7] 毛小榮,陳紅,岳偉.TNF-α-308基因多態(tài)性與甘肅地區(qū)乙肝病毒感染的相關(guān)性研究[J].臨床消化病雜志,2005,17(6):289-292.

[8] 張平安,吳健民,李艷,等.腫瘤壞死因子-α基因啟動子多態(tài)性與慢性乙型肝炎易感性的關(guān)系[J].微循環(huán)學(xué)雜志,2005,15(4):94-97.

[9] Boechat AL, Boechat Nde O, Ogusku MM, et al. The influence of a TNF gene polymorphism on the severity of rheumatoid arthritis in the Brazilian Amazon[J]. Cytokine, 2013,61(2):406-412.

[10] Kothari N, Bogra J, Abbas H, et al. Tumor necrosis factor gene polymorphism results in high TNF level in sepsis and septic shock [J]. Cytokine, 2013,61(2):676-681.

[11] Hohler T, Kruger A, Gerken G, et al. A tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) promoter polymorphism is associated with chronic hepatitis B infection [J]. Clin Exp Immunol, 1998,111(3):579-582.

[12] Miyazoe S, Hamasaki K, Nakata K, et al. Influence of interleukin-10 gene promoter polymorphisms on disease progression in patients chronically infected with hepatitis B virus [J]. Am J Gastroenterol, 2002,97(8):2086-2092.

[13] Zheng MH, Qiu LX, Xin YN, et al. Tumor necrosis factor-alpha-308A allele may have a protective effect for chronic hepatitis B virus infection in Mongoloid populations [J]. Int J Infect Dis, 2010,14(7):e580-585.

[14] Xia Q, Zhou L, Liu D, et al. Relationship between TNF- gene promoter polymorphisms and outcomes of hepatitis B virus infections: a meta-analysis [J]. PLoS One, 2011,6(5):e19606.

(收稿日期：2014-09-11)

中圖分類號：R512.62

文獻標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)03-0055-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.03.021