煙草白絹病病原鑒定及生物學特性

過賦文，張紹升

(1.福建出入境檢驗檢疫局武夷山辦事處，福建武夷山 354300；2.福建農(nóng)林大學生物農(nóng)藥與化學生物學教育部重點實驗室，福建福州 350008)

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煙草白絹病病原鑒定及生物學特性

過賦文1，張紹升2*

(1.福建出入境檢驗檢疫局武夷山辦事處，福建武夷山 354300；2.福建農(nóng)林大學生物農(nóng)藥與化學生物學教育部重點實驗室，福建福州 350008)

[目的]明確煙草白絹病病原并了解其生物學特性。[方法]在實驗室條件下研究煙草白絹病菌的形態(tài)特征和生物學特性。[結(jié)果]引起煙草白絹病的病原菌為齊整小核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)；該菌的生長溫度范圍為10～38 ℃，最適溫度為34 ℃；生長的pH范圍為4～11，最適pH為8；該菌在NaNO2培養(yǎng)基上不能生長；紫外光照對白絹菌絲生長有一定的抑制作用，隨著紫外光照時間的延長，白絹菌形成的菌核數(shù)量減少。[結(jié)論]試驗結(jié)果為煙草白絹病的防治提供了參考。

煙草白絹??；齊整小核菌；生物學特性

煙草白絹病又稱白腐病、南方疫病[1-2]，Rolfs在1892年首次報道了番茄上的白絹病，屬于煙草次要病害，但高溫高濕條件下會造成該病害的暴發(fā)。因此，了解并防治白絹病十分必要。為此，筆者在實驗室條件下研究了煙草白絹病菌的形態(tài)特征和生物學特性，以期為煙草白絹病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌。供試菌株是從福建松溪采集的病株上分離得到。

1.1.2

供試培養(yǎng)基。PSA培養(yǎng)基：馬鈴薯50 g，蔗糖30 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；煙草葉片汁：煙草葉片50 g，蔗糖50 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；蔗糖培養(yǎng)基：蔗糖30 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；葡萄糖培養(yǎng)基：葡萄糖30 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；酒石酸鈉培養(yǎng)基：酒石酸鈉30 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；NaNO3培養(yǎng)基：NaNO32 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；NaNO2培養(yǎng)基：NaNO22 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml；NH3H2PO4培養(yǎng)基：NH3H2PO42 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 000 ml。上述培養(yǎng)基在滅菌前調(diào)至pH 7.0，121 ℃滅菌20 min。

1.2 方法

1.2.1 病原菌形態(tài)及培養(yǎng)性狀。 將分離的菌株用直徑為5 mm的滅菌打孔器在菌落邊緣打取菌餅，接于直徑為9 cm的含15 ml PSA的培養(yǎng)皿中央，放入24 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，每天觀察記錄其培養(yǎng)性狀。

1.2.2 致病性測定。在PSA平板上打取直徑為5 mm的菌絲塊，選取20株長勢一致的健康煙草植株，用75%乙醇對莖部表面消毒后，用無菌水沖洗干凈，然后將菌碟接種在莖部，用不接菌的菌碟接種另外20株作為對照。將上述處理置于光照培養(yǎng)室25 ℃下培養(yǎng)，每天適當澆水，保證其發(fā)病條件。接種后第3天開始觀察發(fā)病情況。

1.2.3 煙草白絹病菌的生物學特性測定。

1.2.3.1 溫度對煙草白絹病菌生長的影響。處理溫度為8～40 ℃，梯度為2 ℃。煙草白絹病菌在PSA 平板上培養(yǎng)3 d，用直徑為5 mm的滅菌打孔器在菌落邊緣打取菌餅，接于直徑為9 cm含15 ml PSA的培養(yǎng)皿中央，放入恒溫箱中培養(yǎng)3 d，測量菌落直徑，每處理3次重復。

1.2.3.2 pH對煙草白絹病菌生長的影響。用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl 將滅菌的PSA培養(yǎng)基分別調(diào)配成以下8個不同的pH：3、4、5、6、7、8、9、10，取15 ml倒入培養(yǎng)皿中，用直徑為5 mm的滅菌打孔器在菌落邊緣打取菌餅，將菌餅移植到不同pH的PSA平板上，置于24 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，測量菌落直徑，每處理3次重復。

1.2.3.3 培養(yǎng)基對煙草白絹病菌生長的影響。采用“1.1.2”8種培養(yǎng)基，用直徑為5 mm的滅菌打孔器在菌落邊緣打取菌餅，將菌餅移植到不同培養(yǎng)基平板上，置于24 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 3 d，十字交叉法測量菌落直徑，每處理3次重復。

1.2.3.4 紫外光照對白絹菌絲生長的影響。挑取大小一致的菌核接種在PSA平板上，每個平板接種1粒菌核，用紫外燈光對菌核分別照射5、10、15 min，距離50 cm，將其和未經(jīng)紫外燈照的對照組置于28 ℃恒溫下培養(yǎng)，每處理3次重復。

1.2.3.5 不同碳氮比對白絹菌絲生長的影響。分別以葡萄糖和NaNO3作為碳、氮源，設C/N為1∶1、5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、60∶1，再加入不含碳氮源基礎培養(yǎng)基(Czapek培養(yǎng)基)；以單純的基礎培養(yǎng)基作為對照，每培養(yǎng)皿放入15 ml上述培養(yǎng)基，中央接直徑為5 mm的白絹菌餅，28 ℃下培養(yǎng)3 d，每處理3次重復。

1.2.3.6 紫外光照對病原菌生長的影響。將菌碟接種在PSA平板上，在距離紫外燈(20 W)30 cm處分別照射5、10、15 min，以不經(jīng)紫外照射的菌碟作為對照，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)，觀察紫外線對菌絲的殺傷作用。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用DPS2000軟件進行處理，用Microsoft Excel 進行統(tǒng)計分析，利用Duncan’s新復極差法進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 白絹病病原菌形態(tài)及培養(yǎng)性狀

菌落初期為白色，圓形或近圓形；菌絲無色透明，有隔膜，呈放射狀生長，較稀疏，有分枝，在分枝的基部有明顯縊縮，菌絲為雙核菌絲，并且有鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，直徑；菌核開始為小白點，后逐漸變大，顏色先變?yōu)榈S色，最后逐漸轉(zhuǎn)為茶褐色，如油菜籽狀，菌核間偶爾會聚合，多為2個連接，菌核球形、近球形或不規(guī)則形，直徑為0.75～2.00 mm，平均為0.98 mm(圖1)。

2.2 白絹病菌致病性

病部初現(xiàn)褐色病斑，接著在病部長出大量白色絹絲狀菌絲體包裹莖基部，后病部產(chǎn)生許多油菜籽狀小菌核，初為白色，后逐漸變?yōu)椴韬稚?。病株隨后萎蔫，嚴重的迅速黃化枯死(圖2)。取病組織分離培養(yǎng)，鏡檢病原菌，其形態(tài)特征和田間病株上的病原菌一致。對照煙株均未發(fā)病。結(jié)果表明，引起煙草白絹病的病原菌為齊整小核菌(SclerotiunmrolfsiiSacc.)[3]。

2.3 白絹病菌的生物學特性2.3.1

溫度對白絹病菌絲生長的影響。結(jié)果表明(圖3)，白絹菌菌絲生長溫度范圍為8～38 ℃，最適宜溫度為34 ℃，40 ℃以上菌絲停止生長。

2.3.2 pH對煙草白絹病菌生長的影響。結(jié)果表明(圖4)，煙草白絹菌在pH 4.0～11.0時均能生長，pH 7.0時生長最快，說明其菌絲生長對環(huán)境的酸堿度要求不高，對堿性環(huán)境有較強的適應性。

2.3.3 不同培養(yǎng)基對煙草白絹病菌生長的影響。由表1可知，PSA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落直徑最大，產(chǎn)生的菌核數(shù)量最多，而在NaNO2培養(yǎng)基上不能生長。

2.3.4 紫外光照對白絹菌核生長的影響。由表2可知，紫外光照對白絹菌核抑制作用不明顯，但是隨著紫外光照時間

表1 培養(yǎng)基對白絹病菌菌絲生長的影響

注：菌落直徑為平均值±標準偏差；菌絲疏密中“+++”表示密，“++”表示較密，“+”表示稀疏；菌核數(shù)中“+++”表示產(chǎn)生20個菌核以上，“++”表示產(chǎn)生10～20個菌核，“+”表示產(chǎn)生1～10個菌核，“0”表示沒有產(chǎn)生菌核；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

表2 紫外光照對白絹病菌菌絲生長的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

的增加，形成的菌核數(shù)量減少。

2.3.5 不同碳氮比對白絹菌絲生長的影響。由表3可知，不同C/N對白絹病菌菌絲生長影響差異顯著。在C/N為20∶1時白絹菌生長最快，并且菌絲較粗，產(chǎn)生的菌核數(shù)也更多，其次為10∶1、5∶1、60∶1、1∶1和基礎培養(yǎng)基上生長較差，并且5∶1、1∶1和基礎培養(yǎng)基上未形成菌核。

表3 不同碳氮比(C/N)對白絹菌菌絲生長的影響

注：菌落直徑為平均值±標準偏差；菌絲疏密中“+++”表示密，“++”表示較密，“+”表示稀疏；菌核數(shù)中“+++”表示產(chǎn)生20個菌核以上，“++”表示產(chǎn)生10～20個菌核，“+”表示產(chǎn)生1～10個菌核，“0”表示沒有產(chǎn)生菌核；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.3.6 光照對病原菌生長的影響。由表4可知，黑暗條件下有利于白絹菌菌絲的生長，但是不利于白絹菌核的形成，而光照對其菌絲生長的影響不明顯，但是有利于菌核的形成。

表4 光照對白絹病菌菌絲生長的影響

注：菌落直徑為平均值±標準偏差；“+++”表示產(chǎn)生20個菌核以上，“++”表示產(chǎn)生10～20個菌核，“+”表示產(chǎn)生1～10個菌核；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

3 結(jié)論與討論

該研究表明，煙草白絹病最適宜的發(fā)病溫度為30～36 ℃，隨著溫度的降低其發(fā)生的強度也降低，這與在田間高溫時發(fā)病嚴重的情況相符；白絹菌在pH4.00～11.00的范圍內(nèi)都能生長，這與前人報道的病菌只能在pH4.05～8.97范圍內(nèi)生長有差異[4]，說明其菌絲生長對環(huán)境pH條件要求不高，對堿性環(huán)境有較強的適應性；煙草白絹病菌菌絲在適宜的環(huán)境條件下生長很快，并且會形成抗逆性很強的菌核，難以防治，在生產(chǎn)上應以預防為主，可在整地前噴施36%甲醛200倍稀釋液，后期用退菌特對其進行防治[5]。

[1] 朱賢朝．中國煙草病害[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001．

[2] 談文，吳元華．煙草病理學[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003．

[3] 魏景超．真菌鑒定手冊[M]．上海：上?？茖W技術出版社，1979．

[4] 史應武，陳勇，董新平，等．新疆葡萄白絹病病原菌的分離鑒定[J]．中國果樹，2004(5)：32-33．

[5] 李陽，金薇，黃俊斌．草莓白絹病的病原鑒定及生物學特性[J]．華中農(nóng)業(yè)大學學報，2005，24(3)：250-253．

Identification and Biological Characters of Tobacco Southern Stem

GUO Fu-wen1, ZHANG Shao-sheng2*

(1. Wuyishan Office of Fujian Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau of P.R.C, Wuyishan, Fujian 354300; 2. Education Ministry Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350008)

[Objective] The aim was to clear pathogen of tobacco southern stem and its biological characteristics. [Method] We studied morphological characteristics and biological characteristics of tobacco southern stem under laboratory conditions. [Result] The pathogen of tobacco southern stem wasSclerotiumrolfsiiSacc.. Biological characteristic results ofSclerotiumrolfsiiSacc. showed that: 10-38 ℃ was fit for the mycelia growth, but the optimum temperature was 34 ℃; pH4-11 was fit for the growth ofSclerotiumrolfsiiSacc., and the optimum pH was 8; theSclerotiumrolfsiiSacc. Couldn’t grow on NaNO2medium; the UV irradiation had certain inhibitory effect on the mycelial growth ofSclerotiumrolfsiiSacc., increasing the time of UV irradiation could reduce the formation of sclerotium ofSclerotiumrolfsiiSacc. [Conclusion] The results provide reference for the control of tobacco southern stem.

Tobacco southern stem;SclerotiumrolfsiiSacc.; Biological characters

過賦文(1986-)，男，江西鉛山人，農(nóng)藝師，碩士，從事植物真菌病害研究。*通訊作者，教授，博士生導師，從事植物線蟲病害研究。

2015-11-11

S 432.4+4

A

0517-6611(2015)35-184-03