吡格列酮對HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究

伍仕敏，艾洪武，熊 焰，韓曉群，周 虹，章 敏，楊華芬，殷繼東，劉永學(xué)

(1.武漢市醫(yī)療救治中心檢驗(yàn)科，湖北武漢 430032;2.武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430016;3.北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射研究所藥理毒理室，北京 100850)

吡格列酮(pioglitazone)屬于噻唑烷二酮(thiazolidinedione，TZD)類胰島素增敏劑，在臨床上主要用于治療Ⅱ型糖尿病。Takeda等1975年首先發(fā)現(xiàn)TZD類藥物的前體，該前體經(jīng)過修飾改構(gòu)后1982年吡格列酮首次被合成，隨后羅格列酮(rosiglitazone)、曲格列酮(troglitazone)等TZD類藥物亦相繼得以合成［1］。盡管當(dāng)時TZD類藥物已用于Ⅱ型糖尿病的治療，但其靶點(diǎn)并不明確。直到20世紀(jì)90年代中期過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)被發(fā)現(xiàn)之后，才確定其靶點(diǎn)為PPARs。繼而發(fā)現(xiàn)其主要作用于PPARs的γ亞型，并被確認(rèn)為 PPARγ的特異性外源配基［2］。

PPARγ屬于核受體超家族成員，與其配基結(jié)合后被激活，然后與9-順式維甲酸類受體(retinoid X receptor，RXR)形成異源二聚體，特異性結(jié)合于靶基因的啟動子上游的過氧化物酶體增殖物反應(yīng)元件(peroxisome proliferators response element，PPRE)，從而調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)［3－4］，這是經(jīng)典的 PPARγ依賴途徑的作用方式。PPARs也可以通過蛋白－蛋白間相互作用、競爭性結(jié)合輔因子等方式影響某些基因調(diào)控分子如核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)、激活蛋白-1(activating protein-1，AP-1)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(signal transducer and activator of transcription，STAT)、CAAT 盒/增 強(qiáng)子 結(jié)合 蛋 白(CAAT box/enhancer binding protein，C/EBP)等的信號傳導(dǎo)途徑實(shí)現(xiàn)其調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的作用［5－7］。近來，許多研究亦表明 PPARγ配基還可以通過PPARγ 非 依 賴 途 徑 發(fā) 揮 其 生 物 學(xué) 作 用［8－11］。PPARγ主要表達(dá)于脂肪組織，其它如心臟、骨骼肌、肝臟及腎臟等組織中亦有低水平表達(dá)［12］。早年的研究發(fā)現(xiàn)［13］，PPARγ在糖代謝、脂代謝及能量調(diào)節(jié)中有重要作用。隨著研究的深入和拓展，已有證據(jù)表明［8－11，14－16］PPARγ 還介入了多種炎癥、心血管以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展，甚至與腫瘤也難脫干系。因此，PPARγ作為探討相關(guān)疾病機(jī)制的重要分子備受關(guān)注。

在多種腫瘤的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中，TZD類化合物作用后表現(xiàn)出細(xì)胞增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)［5－7］，具有潛在的抗瘤作用。但是，亦有相反的報道［17－18］。從目前的研究來看，作為PPARγ高親和力的配基，吡格列酮對人肝癌細(xì)胞的作用尚有爭議［19－23］，是否經(jīng)由PPARγ依賴途徑發(fā)揮作用未見報道。因此，研究吡格列酮對人肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響以及其是否通過PPARγ依賴途徑來發(fā)揮作用，是深入認(rèn)識其藥理作用的重要方面。

1 材料與方法

1.1藥物與試劑吡格列酮(二甲基亞砜溶解)、GW9662以及pSG5-PPARγ真核表達(dá)質(zhì)粒由劉永學(xué)研究員惠贈;RPMI 1640培養(yǎng)液購自Hyclone公司;新生小牛血清、胰蛋白酶購自 Gibco公司;針對PPARγ編碼基因(NM 005037，GI:116284367)CDS區(qū)的shRNA(pGCsi-PPARγ)由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司設(shè)計、合成并篩選(陰性對照con siRNA也由其提供);RT-PCR試劑盒、DNA Marker DL2000購自TaKaRa公司;總RNA提取試劑TRIzol、LipofectamineTM2 000(1 g·L－1)購自 Invitrogen公司;3H-TdR購自北京原子高科技術(shù)應(yīng)用股份有限公司;噻唑藍(lán)購自Amersham LIFE SCIENCE;G418 Sulfate購自Amresco公司;羊抗PPARγ多抗、羊抗actin多抗、ECL檢測試劑盒購自Santa Cruz公司;AnnexinⅤ-FITC Kit、Coulter?DNA PrepTMReagents Kit以及IntraPrepTMPermeabilization Reagent購自 Backman Coulter公司。

1.2主要儀器高速冷凍離心機(jī)(Heraeus Labofuge 400);PCR擴(kuò)增儀(GeneAmp?PCR-2400);酶標(biāo)儀(Thermo Labsystems Multiskan Ascent V1.24);凝膠成像分析系統(tǒng)(Tanon Gis-2009 system);DYY-Ⅲ2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一儀器廠);垂直電泳系統(tǒng)和電轉(zhuǎn)系統(tǒng)(Bio-Rad公司);DU?-640核酸蛋白分析儀、LS-6500液體閃爍計數(shù)儀和EPICS-XL流式細(xì)胞儀(Beckman Coulter公司)。

1.3細(xì)胞培養(yǎng)及處理人HepG2細(xì)胞株用含10%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液于37℃ 、5%CO2培養(yǎng)箱生長2～3 d，至60% ～70%融合狀態(tài)，PBS洗3次，更換無血清培養(yǎng)液，24 h后加入吡格列酮至不同終濃度(0、10、20、50 μmol·L－1)，繼續(xù)培養(yǎng) 48 h后收集細(xì)胞。若要觀察GW9662的作用，在加入吡格列酮前1 h先加入GW9662至所需濃度(終濃度30 μmol·L－1)。

1.4瞬時轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期 HepG2細(xì)胞，用0.2%的胰酶消化細(xì)胞，以1×108cells·L－1接種于24孔板，培養(yǎng)至90%融合，LipofectamineTM2 000介導(dǎo)法進(jìn)行轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)方法按照說明書進(jìn)行，轉(zhuǎn)染6 h后更換新鮮無血清培養(yǎng)液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5穩(wěn)定轉(zhuǎn)染取HepG2細(xì)胞，用0.2%的胰酶消化細(xì)胞，以1×109cells·L－1接種于6孔板，培養(yǎng)至90%融合，LipofectamineTM2 000介導(dǎo)法進(jìn)行轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)方法按照說明書進(jìn)行，轉(zhuǎn)染48 h后，加入G418(100 mg·L－1)，待單克隆長成后，鏡下挑取單克隆細(xì)胞于96孔板培養(yǎng)，熒光顯微鏡下挑取細(xì)胞克隆，移至24孔板、6孔板，最后于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。流式細(xì)胞儀檢測GFP熒光率，保留熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞株用于后續(xù)研究。

1.6噻唑藍(lán)(MTT)比色實(shí)驗(yàn)HepG2細(xì)胞以1×108cells·L－1接種于96 孔板，200 μl/孔。以下處理同“1.3”，培養(yǎng)24 h后，加入吡格列酮至所需濃度，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔加入噻唑藍(lán)溶液(5 g·L－1)20 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后，吸棄上清液，每孔加入150 μl二甲基亞砜，輕輕振蕩10 min，用酶聯(lián)免疫分析儀測定492 nm處吸光度，以反映HepG2細(xì)胞的增殖情況。

1.73H-TdR的參入測定HepG2細(xì)胞以1×108cells·L－1接種于 96 孔板，200 μl/孔。以下處理同“1.3”，在加入吡格列酮工作液30 min后，每孔加入18.5 kBq3H-胸腺嘧啶(3H-Thymidine，3H-TdR)，48 h后用預(yù)冷的PBS洗滌兩遍，加入10%三氯醋酸(trichloroacetic acid，TCA)1 ml，4℃放置60 min 以沉淀蛋白。收集沉淀物，體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇洗滌3遍，加入 0.15 mol·L－1NaOH 20 μl重懸后收集到玻璃纖維濾膜上。烘干濾膜，放入閃爍瓶中，加入閃爍液3 ml，用LS-6500液體閃爍計數(shù)儀進(jìn)行參入量的測定。結(jié)果以cpm值表示，參入量反映了HepG2細(xì)胞DNA合成速率。

1.8細(xì)胞凋亡檢測收集對照及經(jīng)處理后的HepG2細(xì)胞，用冰PBS洗滌細(xì)胞2次，并用1×結(jié)合緩沖液調(diào)細(xì)胞濃度至1×108cells·L－1。嚴(yán)格按照AnnexinⅤ-FITC Kit說明書操作，具體步驟為:取100 μl上述細(xì)胞至 5 ml試管中，加 5 μl AnnexinⅤ-FITC 和 2.5 μl碘化丙碇(propidium iodide，PI)，置室溫閉光孵育15 min后，每管加入400 μl 1×結(jié)合緩沖液。于30 min內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測。同時制備3個質(zhì)控樣本來設(shè)定流式細(xì)胞儀的熒光補(bǔ)償和設(shè)置十字門的范圍:①沒有染色的細(xì)胞;② 僅用熒光標(biāo)記的Annexin V染色的細(xì)胞;③僅用PI染色的細(xì)胞。結(jié)果以Listmode文件保存和systemⅡ軟件分析。

1.9RT-PCR擴(kuò)增目的基因以TRIzol試劑一步法提取細(xì)胞總RNA。經(jīng)DU-640核酸分析儀檢測純度及濃度后，嚴(yán)格按照RT-PCR試劑盒說明書操作，分別以各自的引物擴(kuò)增PPARγ和內(nèi)參照GAPDH。各引物序列如下:GAPDH:上游，5'-ACG GAT TTG GTC GTA TTG GG-3';下游，5'-TGA TTT TGG AGG GAT CTC GC-3'，擴(kuò)增片段為 230 bp;PPARγ:上游，5'-GCA TTC TGG CCC ACC AAC-3';下游，5'-CTG AAA CCG ACA GTA CTG-3'，擴(kuò)增片段為 484 bp。PCR擴(kuò)增條件為:95℃預(yù)變性5 min;95℃ 45 s、48℃1 min、72℃ 1 min，28 次循環(huán);72℃延伸 8 min。取RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳(含溴化乙錠0.5 mg·L－1)，紫外凝膠成像系統(tǒng)分析光密度值，以待測基因與相應(yīng)內(nèi)參照光密度比值作為mRNA相對表達(dá)量。

1.10Western blot檢測PPARγ蛋白表達(dá)收集對照及經(jīng)處理后的HepG2細(xì)胞，加入50 μl預(yù)冷的細(xì)胞裂解液提取細(xì)胞內(nèi)蛋白，Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，用5%SDS-聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離，轉(zhuǎn)PVDF膜。封閉液室溫封閉4 h，將膜轉(zhuǎn)入含一抗(羊抗PPARγ 1∶100稀釋)的TTBS中，室溫孵育2 h;TTBS洗膜3次，將膜轉(zhuǎn)入含二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記的馬抗羊二抗1∶2 000稀釋)的TTBS中，室溫孵育40 min;TTBS洗膜3次，用ECL顯色并曝光于X線。KODAK凝膠成像分析系統(tǒng)分析結(jié)果，PPARγ蛋白相對表達(dá)量以其特異性結(jié)合條帶與βactin結(jié)合條帶的光密度比值表示。

1.11細(xì)胞周期檢測收集對照及經(jīng)處理后的HepG2細(xì)胞，用冰PBS洗滌細(xì)胞2次，并用PBS調(diào)細(xì)胞濃度至1×108cells·L－1。嚴(yán)格按照 Coulter?DNA PrepTMReagents Kit說明書操作，具體步驟為:取 100 μl上述細(xì)胞至 5 ml試管中，1 500 r·min－1離心5 min，棄上清，加入 100 μl DNA Prep LPR，溫和混勻后室溫靜置10 s，再加入1 ml DNA Prep Stain室溫避光15 min后上機(jī)分析。

1.12統(tǒng)計處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示。用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，以O(shè)ne-way ANOVA分析各組別之間的差異，兩組間的比較采用LSD檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1吡格列酮對HepG2細(xì)胞增殖作用的影響如Tab 1所示，MTT比色實(shí)驗(yàn)表明，吡格列酮對HepG2細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，并且隨著吡格列酮濃度的增高，其抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈一定的劑量依賴關(guān)系。

2.2吡格列酮對HepG2細(xì)胞DNA合成速率的影響如Tab 1所示，3H-TdR的參入實(shí)驗(yàn)表明，吡格列酮對HepG2細(xì)胞3H-TdR參入有抑制作用，表明其DNA合成速率明顯降低。并且，隨著吡格列酮濃度的增高，其抑制作用逐漸增強(qiáng)，也呈一定的劑量依賴關(guān)系。由于吡格列酮具有抑制HepG2細(xì)胞的增殖效應(yīng)，因此它抑制HepG2細(xì)胞3H-TdR的參入也主要是通過抑制細(xì)胞數(shù)量得以實(shí)現(xiàn)。

Tab 1 Effects of pioglitazone on cell growth，3H-TdR uptake and cell apoptosis index in human HepG2 cell lines(±s，n=3)

Tab 1 Effects of pioglitazone on cell growth，3H-TdR uptake and cell apoptosis index in human HepG2 cell lines(±s，n=3)

*P＜0.05，＊＊ P＜0.01 vs Con

Concentration/mol·L －1 MTT assay/OD· well－1values 3H-TdR uptake/cpm·well－1 Cell apoptosis index/%(D4 quadrant)0(Con)0.148 ±0.008 2342 ±162 9.10 ±0.46 10 0.121 ±0.006* 1826 ±131＊＊ 13.23 ±0.70＊＊20 0.109±0.004＊＊ 1411±112＊＊ 16.57±0.91＊＊50 0.082±0.003＊＊ 824±88＊＊ 30.20±1.18＊＊

2.3吡格列酮對HepG2細(xì)胞凋亡的影響如Fig 1和Tab 1所示，Annexin V-FITC流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，吡格列酮能夠誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，并且隨著吡格列酮濃度的增高，其誘導(dǎo)作用逐漸增強(qiáng)，呈一定的劑量依賴關(guān)系。

2.4吡格列酮對PPARγmRNA和蛋白表達(dá)的影響結(jié)果如Tab 2和Fig 2所示，RT-PCR和Western blot分析表明，不同濃度的吡格列酮處理對HepG2細(xì)胞PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)無影響。

2.5吡格列酮對HepG2細(xì)胞周期的影響如Fig 3和Tab 2所示，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，吡格列酮作用HepG2細(xì)胞48 h后可干擾細(xì)胞周期。與對照組相比，不同濃度吡格列酮可導(dǎo)致G0/G1期細(xì)胞大量增加，S期細(xì)胞大量減少，且呈一定的劑量依賴性，G2/M期細(xì)胞無變化。

2.6PPARγ依賴途徑參與吡格列酮對HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用如Fig 4所示，GW9662在30 μmol·L－1時明顯拮抗了吡格列酮(20 μmol·L－1濃度時)對HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用，但拮抗作用并不完全，pSG5-PPARγ表達(dá)質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染可以逆轉(zhuǎn)GW9662的上述作用。單獨(dú)GW9662作用或pSG5-PPARγ表達(dá)質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染對HepG2細(xì)胞的增殖作用無影響。這些結(jié)果初步表明，吡格列酮抑制HepG2細(xì)胞的增殖作用部分經(jīng)由PPARγ依賴途徑，因GW9662不能完全拮抗吡格列酮的作用，提示也可能存在PPARγ非依賴途徑。

2.7PPARγ非依賴途徑參與吡格列酮對HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用為證實(shí)PPARγ非依賴途徑的存在，我們將PPARγ小干擾RNA(pGCsi-PPARγ)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2 細(xì)胞，PPARγ 沉默后20 μmol·L－1的吡格列酮作用后細(xì)胞的增殖抑制作用較非轉(zhuǎn)染組相同濃度的吡格列酮處理組(20 μmol·L－1)明顯減弱，但與對照組(Con)相比仍有明顯抑制作用。而單獨(dú)Con siRNA或pGCsi-PPARγ轉(zhuǎn)染對HepG2細(xì)胞增殖作用無影響。此結(jié)果證實(shí)，吡格列酮體外對HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用不依賴PPARγ的表達(dá)，確實(shí)存在PPARγ非依賴途徑。

3 討論

Fig 1 Representative AnnexinⅤ-FITC analysis in experiment of Tab 1

Tab 2 Effects of pioglitazone on PPARγ mRNA，PPARγ protein，and cell cycle phases(±s，n=3)

Tab 2 Effects of pioglitazone on PPARγ mRNA，PPARγ protein，and cell cycle phases(±s，n=3)

*P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01 vs Con.The relative expression of PPARγ mRNA and protein was calculated by the densitometry value of PPARγ/GAPDH and PPARγ/β-actin.

Concentration/μmol·L－1 PPARγ mRNA PPARγ protein Cell cycle phases/%G0/G1phase S phase G2/M phase 0(Con)0.479 ±0.054 0.155 ±0.018 48.57 ±0.35 41.43 ±1 7.23 ±0.85.58 10.19 ±1.10 10 0.489 ±0.082 0.150 ±0.068 55.53 ±0.64＊＊ 35.60 ±1.13* 9.83 ±1.46 20 0.495 ±0.095 0.156 ±0.064 61.53 ±0.47＊＊ 30.17 ±2.46＊＊ 8.29 ±2.10 50 0.486 ±0.086 0.155 ±0.090 65.63 ±1.22＊＊ 27.17 ±0.84＊＊

近年來研究發(fā)現(xiàn)，TZD類藥物能夠明顯降低細(xì)胞生長速率或(和)誘導(dǎo)細(xì)胞的終末分化，表現(xiàn)出一定的抗瘤效應(yīng)［19－23］。然而，在某些條件下，例如在結(jié)腸癌模型中，PPARγ的激活可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生［17］。亦有報道PPARγ的激活在體內(nèi)能夠調(diào)控肝細(xì)胞生長因子的產(chǎn)生，后者能夠促進(jìn)腫瘤的生長［18］。最近，Kim 等［24］在人 HCC 細(xì)胞株中的研究表明PPARγ拮抗劑而不是激活劑具有抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用，并認(rèn)為PPARγ拮抗劑在降低細(xì)胞數(shù)量方面比曲格列酮和羅格列酮要強(qiáng)得多。因此，TZD類藥物對人肝癌細(xì)胞的作用尚需進(jìn)一步的研究予以證實(shí)。此外，從目前的研究進(jìn)展來看，前述在人肝癌細(xì)胞中的研究均沒有闡明其增殖抑制和(或)凋亡誘導(dǎo)作用是否經(jīng)由PPARγ依賴途徑，這對深入認(rèn)識吡格列酮等TZD類化合物新的藥理機(jī)制來說是至關(guān)重要的。

Fig 2A Representative RT-PCR in experiment of Tab 2

Fig 2B Representative Western blot in experiment of Tab 2

Fig 3 Representative flow cytometry analysis detecting cell cycle phases in experiment of Tab 2

Fig 4 Effects of pioglitazone on cell growth mediated through PPARγ signals.

Fig 5 Effects of pioglitazone on cell growth not mediated by PPARγ signals.

本研究證實(shí)，吡格列酮能夠明顯抑制HepG2細(xì)胞的增殖、降低DNA合成速率并且誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，表明吡格列酮在人肝癌細(xì)胞株中具有抗瘤作用，與Shim等［23］在HBV相關(guān)肝癌細(xì)胞株中最新的研究結(jié)果一致。本研究還顯示，在上述作用中，PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)并無明顯變化，但吡格列酮能夠明顯干擾細(xì)胞周期，引起G0/G1期細(xì)胞大量增加，S期細(xì)胞減少，而G2/M期細(xì)胞無明顯變化。G0/G1期阻滯是處于分化過程中的細(xì)胞所具有的共同特征，吡格列酮作用后HepG2細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，表明其明顯抑制了細(xì)胞的DNA合成和有絲分裂，與前述研究者利用曲格列酮的結(jié)果一致。而細(xì)胞周期狀態(tài)和凋亡密切相關(guān)，細(xì)胞不能進(jìn)展到分裂期，唯一的選擇就是凋亡。因而，本研究中吡格列酮的增殖抑制作用可能與凋亡誘導(dǎo)作用相關(guān)。在腎細(xì)胞癌中的研究亦證實(shí)，除了細(xì)胞周期停滯的因素外，吡格列酮誘導(dǎo)的生長抑制亦是凋亡細(xì)胞增加的結(jié)果［25］。

在本研究中，吡格列酮并沒有導(dǎo)致HepG2細(xì)胞PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)增加，推測其并非通過改變受體數(shù)量實(shí)現(xiàn)上述作用，而可能通過后兩種作用方式——即通過受體活化后引發(fā)的信號傳導(dǎo)途徑或通過PPARγ非依賴途徑來完成。為探討吡格列酮通過何種 PPARγ途徑發(fā)揮上述作用，我們利用PPARγ特異性拮抗劑 GW9662、PPARγ-pSG5表達(dá)質(zhì)粒以及PPARγ小干擾RNA進(jìn)行了相關(guān)研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GW9662可以部分拮抗吡格列酮對HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用，而在轉(zhuǎn)染了PPARγ-pSG5表達(dá)質(zhì)粒的HepG2細(xì)胞中，吡格列酮又恢復(fù)了上述作用，這一結(jié)果初步表明，吡格列酮抑制HepG2細(xì)胞的增殖作用部分經(jīng)由 PPARγ依賴途徑，但因GW9662不能完全拮抗吡格列酮的作用，提示也可能存在PPARγ非依賴途徑。為證實(shí)PPARγ非依賴途徑的存在，我們將pGCsi-PPARγ穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)吡格列酮對PPARγ沉默的HepG2細(xì)胞仍表現(xiàn)出細(xì)胞增殖抑制作用。上述結(jié)果表明，吡格列酮的細(xì)胞增殖抑制作用是通過PPARγ依賴和非依賴途徑實(shí)現(xiàn)的。

迄今，從TZD類藥物作用機(jī)制的有關(guān)文獻(xiàn)來看，同種TZD類藥物對不同的癌細(xì)胞株作用可以不一致，而不同的TZD類化合物對相同的癌細(xì)胞株作用亦不同，其中涉及不同TZD類藥物復(fù)雜的藥理學(xué)機(jī)制。本研究表明，吡格列酮能夠抑制HepG2細(xì)胞的增殖和并誘導(dǎo)凋亡，具有潛在的抗瘤作用，這種作用與其誘導(dǎo)細(xì)胞G0/G1期的停滯有關(guān)，涉及PPARγ依賴途徑和非依賴途徑。但是，因PPARγ也表達(dá)于正常肝細(xì)胞，所以吡格列酮能否在體內(nèi)發(fā)揮相同的作用以及PPARγ非依賴途徑涉及的詳細(xì)機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。此外，研究不同TZD類藥物的作用機(jī)制的異同之處對于其在抗癌方面的藥理作用也具有重要意義。

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