腫瘤的切片制作及組織學(xué)觀察

圖爾洪·亞森 新疆阿克蘇溫宿縣佳木鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 843100

阿卜杜熱合曼·麥麥提 新疆巴州輪臺縣塔爾拉克鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站 841600

本文主要對病料進行了組織學(xué)切片制作和病理學(xué)的觀察。本次試驗觀察了13 列切片，其中良性腫瘤3 列、惡性腫瘤7 列、炎癥3 列。腫瘤是動物機體在各種始動和促進因素長期作用下，器官和組織的細胞在基因水平上失去對其生長的正常調(diào)控，導(dǎo)致克隆性異常增生或凋亡不足而形成的病理性新生物。應(yīng)該指出，這種病理性新生物與受累組織的生理需要無關(guān)，即使在致瘤因素停止作用后，該新生物仍能保持持續(xù)性生長，具有相對的自主性。

1 材料與方法

（1）病料來源。農(nóng)一師醫(yī)院。

（2）主要儀器。旋轉(zhuǎn)式切片機（浙江金華無線電廠）、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DGG-9140A，上海森信實驗儀器有限公司）、電熱恒溫水浴鍋（HH.SY.21，北京長鳳儀器有限公司）、電子調(diào)溫萬用爐（1KW×4、龍口市先科儀器有限公司）、光學(xué)顯微鏡（CKX41,OLYMPUS）等。

（3）主要試劑。甲醛溶液、伊紅、酒精、二甲苯、切片石蠟、中性樹膠、蒸餾水、蘇木素、甘油。

（4）實驗方法。臨床檢查。腫瘤的外觀形態(tài)：腫瘤的肉眼外觀形態(tài)多種多樣，在一定程度上可反映出腫瘤是良性的還是惡性的；腫瘤的數(shù)目和大?。耗[瘤的大小不一，數(shù)目不等，通常為一個，有時可為多個。小的腫瘤甚至在顯微鏡下才能發(fā)現(xiàn)，大的腫瘤可重達數(shù)千克乃至數(shù)十千克；腫瘤的形狀：腫瘤的形狀有乳頭狀、菜花狀、絨毛狀、結(jié)節(jié)狀、分葉狀、潰瘍裝和囊狀；腫瘤的顏色：腫瘤的切面多呈灰白或灰紅色，但可因其有無變形、壞死、出血以及是否含有色素等呈現(xiàn)不同顏色；腫瘤的硬度：腫瘤的硬度與其種類、瘤實質(zhì)與間質(zhì)的比例以及有無變性壞死等有關(guān)。

取材與固定。以0.5×0.5×0.2cm 的大小切取腫瘤組織、腫瘤周圍組織、腫瘤與健康組織交界處組織，不可擠壓以免損傷內(nèi)部結(jié)構(gòu)。將組織樣品放入4%甲醛溶液固定24 小時以上。

修塊與洗滌。將固定好的組織修切至約1mm 厚度，自來水浸泡、洗滌3～4 天，每隔12 小時換水1 次。

脫水。在不同濃度的酒精中進行脫水：7%酒精4小時、85%酒精4 小時、95%酒精Ⅰ2 小時、95 酒精Ⅱ2小時、無水酒精Ⅰ1 個小時、無水酒精Ⅱ1 個小時。

透明。為了減少組織收縮，應(yīng)經(jīng)過酒精與二甲苯混合液后再浸入二甲苯。即用無水酒精與二甲苯以1∶1的比例透明15 分鐘，然后再以二甲苯透明15 分鐘。

2 制備

（1）浸蠟。準備好蠟杯，石蠟融化放入溫箱內(nèi)，保溫箱保持約62℃左右。將透明好的組織塊依次放入不同熔點的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ杯石蠟中，每杯石蠟中各放1 小時。

（2）包埋。將熔好的蠟倒入標有標記的紙盒中，然后將組織塊放入紙盒中，并調(diào)整好組織塊的方向，自然冷卻凝固。

（3）切片與粘片。把包埋的每塊組織周圍過多的石蠟修去，組織塊周圍預(yù)留3～4mm 石蠟，切面修平整呈長方形或正方形。用酒精燈將蠟塊粘在木托上。待蠟塊與木塊粘緊后，將木塊與石蠟固定在切片機上進行連續(xù)切片。調(diào)整好切片機，使切片厚度4～7um 左右。

用毛筆將切片放在40℃電熱恒溫水浴鍋中展開，用涂有薄層蛋白甘油的載玻片撈片，每個組織選取1～2 張最好的切片。玻片做好標記，50～60℃烘干。

（4）染色與封存。采用HE 染色法。步驟如下：二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ各10 分鐘，無水酒精Ⅰ和無水酒精Ⅱ各5 分鐘，95%酒精Ⅰ和95 酒精Ⅱ各3 分鐘，80%酒精、70%酒精和自來水各2 分鐘，蘇木精5 分鐘。自來水洗去浮色，1.5%鹽酸溶液2～3 秒，自來水2 分鐘，自來水藍化30 秒，自來水、70%酒精、80%酒精和伊紅各2 分鐘，95%酒精Ⅰ、95%酒精Ⅱ、無水酒精Ⅰ、無水酒精Ⅱ和二甲苯Ⅰ各5 分鐘，二甲苯Ⅱ10 分鐘。

染色結(jié)束后，待二甲苯未干時封片。將適量中性樹膠滴在組織切片上，在固封劑上覆蓋蓋玻片，使組織片位于載玻片與蓋玻片的中間。

（5）顯微鏡觀察及照片。應(yīng)用Olympus 顯微鏡對制作好的組織切片進行觀察，及時做好記錄。選擇較好的切片使用顯微相機進行拍照。

3 結(jié)果

本文主要對病料進行了組織學(xué)切片制作和病理學(xué)的觀察。這次試驗我們專門觀察了13 列切片，其中良性腫瘤3 列、惡性腫瘤7 列、炎癥3 列。

腫瘤的現(xiàn)代定義。惡性腫瘤是生物體在各種致瘤因素長期作用下，某一正常組織細胞發(fā)生異常分化和過度無限增生的結(jié)果，這種現(xiàn)象一旦形成，具有向周圍組織乃至全身侵蝕和轉(zhuǎn)移的特性，其生長快慢與腫瘤新生血管生成密度及人體免疫功能有關(guān)。所以，治療腫瘤不但要消滅腫瘤細胞，同時要阻斷腫瘤新生血管。目前最好的腫瘤治療方法是“腫瘤血管阻斷療法”。

癌癥也叫惡性腫瘤，癌癥病變的基本單位是癌細胞。人體細胞老化死亡后會有新生細胞取代它，以維持機體功能。可見，人體絕大部分細胞都可以增生，但這種增生是有限度的，而癌細胞的增生則是無止境的，這使患者體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗。同時，癌細胞還能釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀。如果發(fā)現(xiàn)和治療不及時，它還可轉(zhuǎn)移到全身各處生長繁殖，最后導(dǎo)致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱及臟器功能受損等。