常規(guī)病理制片中問(wèn)題的探討及體會(huì)

高金來(lái) 朱凱 賴世平

(湖州市婦幼保健院 浙江 湖州 313000)

常規(guī)病理制片中問(wèn)題的探討及體會(huì)

高金來(lái) 朱凱 賴世平

(湖州市婦幼保健院 浙江 湖州 313000)

常規(guī);病理制片;探討

病理制片技術(shù)是病理工作中的重要環(huán)節(jié)，切片質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響臨床病理的診斷。在制片中我們通常會(huì)遇到許多問(wèn)題，如果處理不當(dāng)，就會(huì)影響制片質(zhì)量，進(jìn)而影響病理診斷［1］。提供一張高質(zhì)量的切片并非一日之力，需要我們?cè)谌粘５墓ぷ髦胁粩喾e累熟練的技巧和實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)，下面我們探討一下常規(guī)病理制片中經(jīng)常出現(xiàn)的問(wèn)題及一些個(gè)人體會(huì)。

1.固定和取材

送檢標(biāo)本應(yīng)及時(shí)固定，沒(méi)有及時(shí)固定或固定不充分的標(biāo)本，組織會(huì)出現(xiàn)自溶現(xiàn)象，細(xì)胞核不清晰。不同的組織有不同的固定方法，對(duì)于淋巴組織一般需要切開(kāi)固定，因?yàn)榱馨徒M織的包膜比較堅(jiān)韌，會(huì)影響固定液的滲入，收到這類標(biāo)本后需要及時(shí)切開(kāi)。固定液的量也是很重要的一般為組織體積的3-5倍。固定時(shí)間大標(biāo)本一般24小時(shí)，小標(biāo)本一般4-6小時(shí)就可以了。

取材時(shí)要注意的幾點(diǎn)①取材的標(biāo)本大小要適度，常規(guī)標(biāo)本厚度一般為0.2～0.3cm，太厚組織固定不好，組織結(jié)構(gòu)不佳，過(guò)薄則組織切片張數(shù)有限，由于讀片的時(shí)候難以滿足需要。對(duì)于冷凍切片取材略厚，可達(dá)0.3～0.4cm;②取材時(shí)要注意包埋的方向，如有皮膚組織，包埋面必須與表面垂直，這樣才能保證皮膚的各層結(jié)構(gòu)都能被觀察。

2.脫水

現(xiàn)在病理科基本上都采用自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水，效果較好。常見(jiàn)的問(wèn)題是脫水試劑使用一段時(shí)間后，試劑會(huì)揮發(fā)引起濃度降低影響組織的固定、脫水、透明、浸蠟的徹底，從而影響制片質(zhì)量。所以脫水機(jī)的試劑要定期更換，最好用酒精比重計(jì)測(cè)量酒精，這樣更換試劑更科學(xué)，更精確些。

3.包埋

包埋石蠟的選擇也直接影響切片的質(zhì)量。石蠟熔點(diǎn)偏低難以切出較薄的切片;石蠟熔點(diǎn)過(guò)高造成切片困難。另外在包埋的過(guò)程中，注意浸蠟的溫度與包埋蠟的溫度及包埋用的鑷子、組織塊溫度要保持一致，否則會(huì)引起組織與周圍脫裂現(xiàn)象，切片時(shí)容易出現(xiàn)空洞。包埋時(shí)還應(yīng)該注意包埋組織的方向，如為囊壁則倒立起包埋;如有皮膚組織包埋面必須與表面垂直，這樣才能保證皮膚的各層結(jié)構(gòu)都被觀察到。

4.切片

切片環(huán)節(jié)是病理制片中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，直接影響組織的鏡下觀察。切片中容易出現(xiàn)以下情況。

4.1 切片不完整 原因∶是組織包埋時(shí)，組織塊平面與包埋盒底面呈一定角度。處理∶切片時(shí)調(diào)節(jié)組織塊夾頭的角度，深切即可解決或者重新包埋組織，將組織面壓平，再次切片。

4.2 切片厚薄不均 原因∶切片機(jī)使用過(guò)程中發(fā)生磨損或故障，組織塊夾頭或刀架的固定螺絲未擰緊，導(dǎo)致切片刀和組織塊未固定。處理∶查明原因后進(jìn)行修理，切片前檢查切片機(jī)的各種螺絲是否擰緊，檢查切片刀和組織塊，石蠟和包埋盒是否固定良好。

4.3 切片中壓縮引起皺褶 原因∶切片刀不鋒利，切片易壓縮皺褶;切片時(shí)切片刀角度過(guò)大使切片蜷縮;展片時(shí)不易展平造成皺褶。處理∶更換鋒利的刀片，調(diào)整刀的角度，切片時(shí)同時(shí)用毛筆卷片，由于外力牽引皺褶改善，展片時(shí)水溫在40-50度，必要時(shí)可在水中加適量乙醇，有助于組織展開(kāi)，減少皺褶。

4.4 切片脫落 原因∶組織內(nèi)含過(guò)多的壞死成分，組織細(xì)胞壞死崩解后局部的滲透壓升高吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分逸出，壞死組織失去支撐作用;切片太厚;染色時(shí)水流過(guò)急，沖壞組織完整性甚至脫落。處理∶避免組織內(nèi)帶有壞死組織;選擇最佳的固定液，另外，及時(shí)將盛有固定液的瓶蓋蓋好，防止固定液的揮發(fā)而降低其濃度，定期更換固定液;保持載玻片干凈;切片的厚度不要太厚，盡量薄一些。

4.5 切片污染 原因∶撈片的時(shí)候水面不夠干凈產(chǎn)生;或者是取材的時(shí)候取材板不夠干凈;包埋的時(shí)候鑷子不干凈所致。處理∶在病理制片的每一個(gè)環(huán)節(jié)都要防止污染，切片撈片時(shí)及時(shí)清除水面上的污物，取材時(shí)每切一例標(biāo)本都要注意刀、剪、鑷子和取材板的清潔。

4.6 切片細(xì)胞擠壓 鏡下細(xì)胞核呈狹長(zhǎng)細(xì)絲狀，深染，細(xì)胞漿不明顯，細(xì)胞無(wú)完整結(jié)構(gòu)，這種情況多見(jiàn)于細(xì)小的活檢組織、多次切片后仍如此。原因∶醫(yī)師取材的時(shí)候，組織受鑷子等器械的機(jī)械性擠壓造成的。處理∶病理醫(yī)師在取材時(shí)對(duì)于細(xì)小組織切忌擠壓，對(duì)于大塊組織應(yīng)使用鋒利刀具，下刀輕快，一次切成，不可拉鋸樣取材和強(qiáng)力擠壓，避免使用有齒鑷。

4.7 組織破碎松散 原因∶展片溫度過(guò)高;二甲苯透明的組織容易發(fā)脆發(fā)硬，對(duì)于含膠原豐富的組織脆硬較明顯，切片時(shí)組織容易出現(xiàn)破碎松散;脂肪組織及含脂肪豐富的組織因脫脂不干凈，浸蠟困難，切片時(shí)常產(chǎn)生破碎;含手術(shù)絲線等異物的組織也會(huì)出現(xiàn)切片時(shí)組織分散、破碎的現(xiàn)象。處理∶展片時(shí)應(yīng)調(diào)整溫度，不可過(guò)高，避免彌散;對(duì)于脂肪組織及含脂肪豐富的組織可適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)脫水及透明時(shí)間;取材時(shí)盡量除去線頭等異物，以利于切片。

5.染色

染色首先需要良好的試劑，我們現(xiàn)在用的是改良的蘇木精染色液，效果較好，關(guān)鍵是時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，更不能太短，發(fā)現(xiàn)著色不深時(shí)可考慮更換試劑［2］。冬季溫度過(guò)低;二甲苯使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng);脫蠟試劑呈飽和狀態(tài);試劑有水分都會(huì)造成脫蠟不徹底，染色后無(wú)水乙醇及透明試劑使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或混入水分形成脫水透明不徹底，組織切片呈白色云霧狀區(qū)域等，造成染色不徹底。這時(shí)我們應(yīng)該更換脫蠟劑、脫水劑和透明劑。

6.封片

切片封固使用的樹(shù)膠稠稀要適當(dāng)，過(guò)稀過(guò)多容易發(fā)生溢膠;過(guò)稠過(guò)少容易出現(xiàn)封片不全或氣泡。封片不及時(shí)易引起組織干涸，出現(xiàn)組織收縮和裂痕，即龜裂現(xiàn)象。或者因吸收空氣中的水分使部分細(xì)胞核透明不良而出現(xiàn)黑核現(xiàn)象。

總之，做好病理切片工作，需要病理技術(shù)人員在平時(shí)的工作實(shí)踐中不斷總結(jié)，不斷進(jìn)步，注意標(biāo)本固定、脫水、包埋、染色、封片等多個(gè)環(huán)節(jié)的規(guī)范操作，精益求精，才能作出更優(yōu)質(zhì)的病理切片。

［1］王伯壇.病理學(xué)技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：6.

［2］趙鵑，潘志芹，李志燕.影響病理切片質(zhì)量的因素及糾正方法［J］.診斷病理學(xué)雜志，2008，15(1)：82.

R446.8

B

1009-6019(2015)10-0049-02