茉莉花葉甲醇提取物體外抗氧化活性研究

馬忠麗，黃挺章，李遠(yuǎn)輝，黃 瑩，郭圣齊，盧善善，黃鎖義

(右江民族醫(yī)學(xué)院1.臨床學(xué)院；2. 護(hù)理學(xué)院；3. 藥學(xué)院，廣西 百色 533000)

茉莉花葉甲醇提取物體外抗氧化活性研究

馬忠麗1，黃挺章1，李遠(yuǎn)輝1，黃 瑩1，郭圣齊1，盧善善2，黃鎖義3*

(右江民族醫(yī)學(xué)院1.臨床學(xué)院；2. 護(hù)理學(xué)院；3. 藥學(xué)院，廣西 百色 533000)

茉莉花葉；甲醇提取物；抗氧化活性

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥

茉莉花葉采自廣西南寧市橫縣，由右江民族醫(yī)學(xué)院覃道光副教授鑒定為木犀科素馨屬灌木茉莉花[Jasminumsambac(L.) Ait.]的葉；試藥甲醇、鹽酸、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鄰苯三酚、無水乙醇、磷酸鹽緩沖液、鐵氰化鉀、三氯乙酸(TCA)和三氯化鐵等試劑均為分析純；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)(美國Sigma公司)

1.1.2 儀器

回流裝置；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；DHG-9070A電熱恒溫旋風(fēng)干燥箱(上海精密設(shè)備有限公司)；GN2085電子天平(上海民橋精密科學(xué)有限公司)；755B紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；722N可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；TDL80-2B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠制造)；HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)。所用儀器均經(jīng)自來水清洗后蒸餾水潤洗晾干備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 茉莉花葉甲醇提取液的制備

稱取茉莉花葉干燥粉末80 g與800 mL甲醇(1 ∶10，w/v)水浴回流提取2 h,抽濾得到濾液。濾渣在相同條件下再提取1次，合并2次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑制備成浸膏[10]，稱重，用甲醇溶解配成不同濃度的溶液備用，用前搖勻。

取濃度為0.05 mol·L-1的Tris-HCl(pH值8.2)緩沖液4 mL于試管中，放人25 ℃水浴鍋中水浴20 min，取出后分別加入在25 ℃恒溫水浴預(yù)熱20 min的濃度為0.5，1.0，1.0，2.0，2.5 mg·mL-1的樣品1.0 mL和2.5 mmol·L-1的鄰苯三酚鹽酸溶液0.3 mL，充分混勻，精確反應(yīng)4 min (加入鄰苯三酚時(shí)開始計(jì)時(shí))后，用兩滴濃度為10 mol·L-1的HCl終止反應(yīng)，在波長321 nm處測定吸光度, 平行測定3 次。按下式計(jì)算超氧自由基的清除率：清除率(%)= [1-(A1-A2)/A0]×100%(式中：A0：為加鄰苯三酚但不加樣品時(shí)的吸光度；A1：為加樣品和鄰苯三酚時(shí)的吸光度；A2：為加樣品但不加鄰苯三酚時(shí)的吸光度)

1.2.3 清除DPPH·能力[10]

取0.5 mL濃度為6×10-4mol·L-1的DPPH溶液，分別加入濃度為0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mg·mL-1的樣品溶液，混勻后用無水乙醇定容至5 mL，室溫避光反應(yīng)30 min，在波長517 nm (最大吸收波長)處測定其吸光度，平行測定3次，取平均值后根據(jù)以下公式計(jì)算清除率：清除率(%)=[(A1-A2)/A1]×100% (式中：A1：空白吸光度(t=0 min)；A2:反應(yīng)30 min后吸光度)

1.2.4 還原Fe3+能力[11]

在系列10 mL具塞比色管中依次加入2.5 mL濃度為0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mg·mL-1的樣品溶液，2.5 mL 0.2 mol·L-1、pH 6.6的磷酸鹽緩沖液和2.5 mL 1%鐵氰化鉀，混勻后置于50 ℃水浴中反應(yīng)20 min，然后加入10%三氯乙酸2.5 mL，混勻，如溶液渾濁離心(3 000 r·min-1)10 min,取上清液2.5 mL,加入蒸餾水2.5 mL和0.1%的三氯化鐵溶液0.5 mL,混勻，以試劑空白作參比，在700 nm處測定吸光度，平行測定3次，吸光度值增加表明還原力增強(qiáng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 清除超氧自由基能力

圖1 茉莉花葉甲醇提取物對(duì)·的清除率

2.2 清除DPPH自由基能力

DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基，與氧化劑發(fā)生反應(yīng)，提供H被還原，顏色發(fā)生變化，由深紫色變?yōu)榈S色，可用紫外分光光度法測定。以高濃度逐漸稀釋的方式檢測不同樣品溶液對(duì)自由基的清除率，以自由基清除率為50%時(shí)樣品的濃度(IC50)來衡量樣品對(duì)自由基的清除能力。IC50越小，表明樣品清除自由基的能力越強(qiáng)，結(jié)果見圖2。從圖2中看出，隨著提取液濃度的增加，對(duì)DPPH·的清除率呈上升趨勢(shì)，當(dāng)DPPH·清除率接近50%時(shí)樣品的濃度(IC50)僅為1 mg·mL-1，濃度很小，表明茉莉花葉甲醇提取物清除DPPH·的能力比較強(qiáng)。

圖2 茉莉花葉甲醇提取物對(duì)DPPH·的清除率

2.3 還原Fe3+能力

還原力的測定是檢驗(yàn)樣品是否是良好的電子供體的方法，還原力強(qiáng)的樣品應(yīng)該是良好的電子供體者，它供應(yīng)的電子不僅能使Fe3+還原為Fe2+，也可以與自由基反應(yīng)。還原力的測定是用來評(píng)價(jià)抗氧化劑活性的常用方法，所以吸光度越高則說明該物質(zhì)的抗氧化能力越強(qiáng)。采用普魯士蘭法測定樣品還原Fe3+能力，由表1可以看出，隨著茉莉花葉甲醇提取物濃度的增加，其吸光度值也增加，對(duì)還原Fe3+能力增強(qiáng)。

表1 還原Fe3+能力吸光度值

3 討 論

隨著社會(huì)的發(fā)展和生活水平的進(jìn)一步提高，人們對(duì)天然抗氧化物質(zhì)的需求量逐年增加，對(duì)天然藥物的抗氧化活性研究也逐漸增加。我國茉莉花資源非常豐富，而廣西是茉莉花之鄉(xiāng)，因此，探究茉莉花甲醇提取物的體外抗氧化性不僅為茉莉花在臨床藥物應(yīng)用上提供依據(jù)，而且也符合人們對(duì)天然抗氧化物質(zhì)的需求，其有望作為天然抗氧化劑和功能性產(chǎn)品而得到開發(fā)利用，具有良好的開發(fā)價(jià)值和利用前景。

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Study on Antioxidant Activityinvitroof Methanol Extract ofJasminumsambacLeaves

Ma Zhongli1, Huang Tingzhang1, Li Yuanhui1,Huang Ying1,Guo Shengqi1,Lu Shanshan2,Huang Suoyi3*

(1.College of Clinical Medicine; 2.College of Nursing; 3.College of Pharmacy, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000, China)

the leaves ofJasminumsambac；the methanol extract；antioxidant activity

2014-11-23

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160347)；廣西壯族自治區(qū)百色市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃第一批項(xiàng)目(百科計(jì)1001013)；右江民族醫(yī)學(xué)院2014年校級(jí)“大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃”立項(xiàng)項(xiàng)目(Xjcxb201441)。

馬忠麗(1993—)，女，本科在讀。研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、食品衛(wèi)生。E-mail：18677806045@163.com

*通訊作者：黃鎖義，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)食品衛(wèi)生、中草藥與植物化學(xué)。 E-mail：huangsuoyi@163.com

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.03.005

R285.5

A

1006-9690(2015)03-0020-03