肝細(xì)胞抗原在Barrett食管、反流性食管炎和食管腺癌中的表達(dá)和意義*

許 紅， 張永宏

(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附院 消化內(nèi)科， 貴州 貴陽(yáng) 550004)

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肝細(xì)胞抗原在Barrett食管、反流性食管炎和食管腺癌中的表達(dá)和意義*

許 紅， 張永宏*

(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附院 消化內(nèi)科， 貴州 貴陽(yáng) 550004)

目的： 觀察肝細(xì)胞抗原(Hep)在Barrett食管(BE)、反流性食管炎和食管腺癌中的表達(dá)，探討其臨床意義。方法： 采用免疫組化EnVision法，檢測(cè)Hep在正常食管黏膜組織(10例)、反流性食管炎(12例)、BE(28例)、食管腺癌(5例)中的表達(dá)，同時(shí)觀察Hep在輕度、中度、重度腸化生型BE中的陽(yáng)性率。結(jié)果： Hep在正常食管黏膜組織中的陽(yáng)性率為20.0%，在反流性食管炎中的陽(yáng)性率為16.7%， 在Barrett食管中的陽(yáng)性率為39.2%，其中輕、中、重度腸化Barrett食管Hep陽(yáng)性率分別為25%， 60%， 100%，伴有異型增生Barrett食管3例為陰性表達(dá)，在食管腺癌中陽(yáng)性率為60%。結(jié)論： 隨著B(niǎo)arrett食管腸化生程度的加重，Hep陽(yáng)性表達(dá)率增高，Hep有望成為BE上皮化生的生物學(xué)標(biāo)志物。

Barrett食管；腸化生；反流性食管炎；食管; 腺癌；肝細(xì)胞抗原

Pera等[1]報(bào)道食管原發(fā)性腺癌約50%源自Barrett食管(BE)，食管下段腺癌起源于腸上皮化生的腺上皮，從組織學(xué)上已明確了Barrett食管-不典型增生-腺癌的發(fā)展順序[2]。確診后的食管腺癌預(yù)后較差，早期診斷則5年生存率可達(dá)83%～90%，而晚期生存率則只能達(dá)到10%～15%[3]。肝細(xì)胞抗原(hepatocyte antigen, Hep)是肝細(xì)胞線粒體膜的一種成分,由于其在腫瘤性肝組織中高表達(dá),因而曾被認(rèn)為是診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌以及鑒別診斷肝內(nèi)轉(zhuǎn)移性癌的一個(gè)重要的指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，Hep不僅在肝細(xì)胞癌及肝內(nèi)轉(zhuǎn)移性癌中表達(dá)，在膽管癌、宮頸癌、乳腺癌、結(jié)腸癌及胃癌等其他類(lèi)型的腫瘤中也有表達(dá)，且表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。Hep在Barrett食管中的表達(dá)水平如何，是否具有潛在標(biāo)志物的價(jià)值，成為此次研究的主要目的。

1 對(duì)象與方法

1.1 病例與標(biāo)本

所有組織切片均取自2009年-2013年行胃鏡檢查的病例，經(jīng)病理活檢明確診斷。BE 28例、反流性食管炎12例及食管腺癌5例，正常食管黏膜10例作為對(duì)照組。28例BE中，男性16例，女性12例，平均54歲；反流性食管炎12例，男性10例，女性2例，平均50歲；食管腺癌5例，男性3例，女性2例，平均68歲；正常食管黏膜組織10例中，男性,5例，女性5例，平均年齡59歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

BE定義為食管下段的復(fù)層鱗狀上皮被化生的單層柱狀上皮所替代的一種病理現(xiàn)象，可伴有或不伴有腸化。伴有腸上皮化生者屬于食管腺癌的癌前病變[4]。反流性食管炎定義為由于胃和(或)十二指腸內(nèi)容物反流至食管而引起的食管黏膜組織損害[5]。

1.3 病理學(xué)檢查

采用免疫組化EnVision法，將制好的病理組織切片后, 經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇(依次為100%、95%、85%、75%的乙醇)水化后行免疫組化染色。切片微波抗原修復(fù)，余步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。經(jīng)DAB(3′3-二氨基聯(lián)苯胺)顯色, 蘇木素復(fù)染, 梯度乙醇脫水(依次為70%、80%、90%、100%的乙醇)、中性樹(shù)膠封固,。在顯微鏡下觀察，以原發(fā)性肝細(xì)胞癌為陽(yáng)性對(duì)照組, 以PBS (磷酸鹽緩沖液)代替一抗作為陰性對(duì)照組。試驗(yàn)所用鼠抗人單克隆抗體 Hep (OCH1E)和免疫組化試劑盒均購(gòu)于上?；蚬?。

1.4 結(jié)果判定

Hep陽(yáng)性表達(dá)是上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著。當(dāng)著色細(xì)胞比例>5%時(shí)判斷為Hep的陽(yáng)性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，陽(yáng)性率以百分比(%)表示，各組間陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Hep在正常食管黏膜組織、反流性食管炎、BE、食管腺癌中的表達(dá)見(jiàn)表1，在不同類(lèi)型BE中的表達(dá)見(jiàn)表2、圖1。 不同程度的腸化生BE中均有肝細(xì)胞抗原表達(dá)，其陽(yáng)性率隨腸化生程度的加重而增高；Hep在BE各型腸化組中均有表達(dá)，重度腸化組中表達(dá)陽(yáng)性率為100%。而在伴輕度異型增生型BE中Hep為陰性。(表2、圖1)。

表1 Hep在4類(lèi)食管疾病中的表達(dá)Tab.1 Expression of Hep in the 4 kinds of esophagus diseases

表2 Hep在不同類(lèi)型BE中的表達(dá)Tab.2 Expression of Hep in different intestinal-metaplasia-type BE

3 討論

BE之所以引起廣大學(xué)者較多的關(guān)注，是因?yàn)樵摬∨c胃食管反流性疾病以及食管腺癌的關(guān)系密切。近年來(lái)BE及食管腺癌的發(fā)病率逐年升高。隨著消化內(nèi)鏡使用的普及，逐步認(rèn)識(shí)到食管下段的腸上皮化生是一種癌前病變，同食管腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。國(guó)外研究報(bào)道BE癌變率較一般人群高出30～125倍，而腸化型BE患者食管腺癌的發(fā)生率較一般人群的高40～100倍，約80%的食管腺癌產(chǎn)生于BE[6-7]。目前診斷腸上皮化生(IM)的金標(biāo)準(zhǔn)仍是HE染色，IM上皮包括吸收細(xì)胞、特征性杯狀細(xì)胞及潘氏細(xì)胞,但HE下IM的檢出率仍然較低，分析原因在于：(1)杯狀細(xì)胞有時(shí)不明顯；(2)紋狀緣的IM上皮很難與胃柱狀上皮相鑒別；(3)活檢標(biāo)本少，常常受擠壓變形，鑒別困難。因此，提高BE的診斷率對(duì)于預(yù)防和治療早期食管腺癌具有重要意義。如何特異性診斷腸化生型BE，成為近年來(lái)較多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。

A:輕度腸上皮化生,B:中度腸上皮化生,C:重度腸上皮化生

Hep是Wennerberg等[8]于1993年從1例肝臟移植失敗患者的肝組織中分離提取的抗原，通過(guò)免疫小鼠獲得的一種單克隆抗體, 該抗體識(shí)別的抗原決定簇是肝細(xì)胞線粒體膜的一種成分, 在正常組織中不表達(dá)。Wennerberg等[8]最早應(yīng)用免疫組化方法研究了Hep在肝細(xì)胞癌、非肝細(xì)胞癌中的表達(dá),后續(xù)研究還發(fā)現(xiàn)由于食管、胃腸、肝有共同的胚胎分化，因此，Hep表達(dá)自這些器官的細(xì)胞是可以理解和接受的。Chu等[9-10]收集了13例合并柱狀上皮化生及胃腺癌的病例和33例BE病例，并發(fā)現(xiàn)其柱狀上皮化生組織中Hep對(duì)于診斷化生型BE的特異性、敏感性均較高，具有成為潛在BE診斷標(biāo)志物的價(jià)值。鄭麗端等[11]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)Hep在BE的腸化上皮、BE腺癌及慢性萎縮性胃炎的腸化上皮中均見(jiàn)很強(qiáng)的棕黃色顆粒，提示Hep能特異、敏感地標(biāo)記化生的腸上皮。黃文斌等[12]研究發(fā)現(xiàn)34例胃黏膜中，20例伴有腸上皮化生的胃黏膜Hep均呈陽(yáng)性表達(dá)，而正?；虿话橛心c上皮化生的胃黏膜為陰性。

本研究表明，Hep在正常食管黏膜組織、反流性食管炎、BE、食管腺癌中均有表達(dá)，但在正常食管黏膜組織、反流性食管炎陽(yáng)性率較低，在BE、食管腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率較高，提示隨著疾病的進(jìn)展Hep表達(dá)逐漸增強(qiáng)；在28例BE中，腸化生型BE 25例，中、重度型化生陽(yáng)性率較高，重度化生Hep表達(dá)陽(yáng)性率可達(dá)100%，伴有輕度異型增生BE無(wú)陽(yáng)性表達(dá)；但Hep在25例化生型BE中總體表達(dá)率僅為44%，與一些研究發(fā)現(xiàn)Hep在腸化生型BE的表達(dá)率可達(dá)100%，在腸型胃癌中Hep陽(yáng)性率也為100%不太相符，分析原因在于：(1)本次實(shí)驗(yàn)將腸化型BE標(biāo)本分為輕、中、重度，而文獻(xiàn)報(bào)道中均未詳細(xì)分型，本次實(shí)驗(yàn)中重度腸化BE陽(yáng)性率也可達(dá)100%；(2)病理組織取材較少，導(dǎo)致陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少；(3)病例標(biāo)本量少。從本研究提示隨著腸化生程度的加重，Hep表達(dá)的陽(yáng)性率也隨之升高；且Hep在反流性食管炎中陽(yáng)性率較低，在伴有異型增生的BE中不表達(dá)。Hep在診斷BE、反流性食管炎及食管腺癌中的靈敏性及特異性仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述，Hep在腸上皮化生型BE中表達(dá)隨著化生程度的加重，陽(yáng)性率增高。Hep有望成為BE上皮化生的生物學(xué)標(biāo)志物。對(duì)BE的診斷、防治及預(yù)后判斷有一定的臨床價(jià)值。

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(2015-01-30收稿，2015-03-20修回)

中文編輯： 潘 婭；英文編輯： 劉 華

Expression of Hepatocyte Antigen in Barrett Esophageal, Reflux Esophagitis and Esophageal Adenocarcinoma and Its Clinical Significance

XU Hong, ZHANG Yonghong

(1.DepartmentofGastroenterology,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,China)

Objective: To study expression of hepatocyte antigen in Barrett esophageal, reflux esophagitis and esophageal adenocarcinoma and its clinical significance. Methods: The study consisted of 10 cases of healthy volunteers, 12 cases of reflux esophagitis, 28 cases of Barrett's esophagus and 5 cases of esophageal adenocarcinoma. The esophageal mucosa among all enrolled cases were examined by immunohistochemical EnVision technique to detect the expression of hepatocyte antigen. Meanwhile, the positive rate of hepatocyte antigen in the Barrett esophagus with mild, moderate, severe intestinal-metaplasia-type were detected respectively. Results: The positive rate of hepatocyte antigen in healthy volunteers, reflux esophagitis and Barrett esophageal was 20%, 16.7%, 39.2%, respectively. Among the Barrett esophagus cases, the positive rate of hepatocyte antigen was 25% in 16 cases of mild intestinal metaplasia, 60% in 5 cases of moderate intestinal metaplasia, 100% in 4 cases of severe intestinal metaplasia and negative expression in 3 cases of dysplasia, respectively. The positive rate was 60% in 5 cases of esophageal adenocarcinoma. Conclusions: With aggravation of intestinal metaplasia, the positive rate of hepatocyte antigen increases. Therefore, hepatocyte antigen may be expected to be a biological mark of the BE intestinal metaplasia and helpful for clinical diagnosis, treatment and prognosis of BE.

Barrett esophagus; intestinal metaplasia; reflux esophagiti; esophagus; adenocarcinoma; hepatocyte antigen

時(shí)間：2015-05-21

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150521.1258.021.html

R571

A

1000-2707(2015)05-0517-03

*通信作者 E-mail:zyh20103026@163.com