綿羊AA-NAT基因mRNA表達(dá)與常年發(fā)情相關(guān)性研究

盧璐璐，孫曉笛，儲明星*，王永娟，黃冬維，王金玉，狄 冉，潘章源，劉秋月

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部畜禽遺傳資源與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.揚(yáng)州大學(xué) 動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009)

綿羊AA-NAT基因mRNA表達(dá)與常年發(fā)情相關(guān)性研究

盧璐璐1，孫曉笛2，儲明星1*，王永娟2，黃冬維1，王金玉2，狄 冉1，潘章源1，劉秋月1

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部畜禽遺傳資源與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.揚(yáng)州大學(xué) 動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009)

為了探討AA-NAT基因表達(dá)與綿羊常年發(fā)情之間的關(guān)聯(lián)性，本研究以常年發(fā)情小尾寒羊和季節(jié)性發(fā)情灘羊各9只為研究對象，利用real-time PCR技術(shù)檢測AA-NAT基因在這2種綿羊不同發(fā)情階段下丘腦、垂體、松果體、卵巢、子宮體和腎上腺6種組織中的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果顯示，AA-NAT基因在不同情期的兩個綿羊品種的6個組織中表達(dá)有明顯差異，在發(fā)情期綿羊的卵巢、子宮體、松果體中高水平表達(dá)。春秋季發(fā)情期小尾寒羊與秋季發(fā)情期灘羊相比，其卵巢和子宮體中AA-NAT基因表達(dá)量極顯著偏低(P<0.01)，而松果體中表達(dá)量極顯著偏高(P<0.01)。本研究結(jié)果初步表明，卵巢、子宮體和松果體中AA-NAT基因表達(dá)上調(diào)可能與小尾寒羊常年發(fā)情相關(guān)。

綿羊；常年發(fā)情；AA-NAT基因；real-time PCR；基因表達(dá)

芳基烷基胺-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(Arylalkylamine-N-acetyltransferase，AA-NAT)是褪黑激素(Melatonin，MLT)合成分泌的關(guān)鍵節(jié)律酶，是分子量約23 ku的可溶性胞液蛋白[1]。有報(bào)道顯示，動物的季節(jié)性繁殖活動與褪黑激素的調(diào)控有關(guān)[2-4]。MLT主要調(diào)控包括晝夜節(jié)律在內(nèi)的生物鐘節(jié)律以及動物的繁殖活動[5]。研究顯示，正常兒童的血清MLT水平明顯高于相應(yīng)年齡的性早熟患兒[6]。青春期延遲伴隨性功能減退者的血清MLT水平明顯高于正常人，青春期會隨著MLT水平的自發(fā)性下降而到來[7]。埋植MLT可以使母馬鹿的配種季節(jié)與產(chǎn)仔日期提前，使公馬鹿的睪丸發(fā)育提前[8-10]，由此可見，MLT通過調(diào)控動物青春期的啟動來影響動物的繁殖活動。季節(jié)性發(fā)情與常年發(fā)情的綿羊品種 MLT 的季節(jié)性變化規(guī)律存在顯著差異[11]。大多數(shù)哺乳動物體內(nèi)MLT有節(jié)律的合成與分泌一般通過AA-NAT酶活性的晝夜節(jié)律來控制，并通過AA-NAT基因mRNA的自動轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)修飾來實(shí)現(xiàn)[12-13]。AA-NAT酶的活性與MLT的合成分泌節(jié)律保持一致，AA-NAT基因的突變會影響MLT的合成，并與MLT節(jié)律水平相關(guān)[14-15]。綿羊的季節(jié)性繁殖活動受下丘腦-垂體-性腺軸系統(tǒng)的調(diào)控。有研究表明，發(fā)情時(shí)小尾寒羊和灘羊血液中MLT水平明顯升高[11]。MLT是由松果體分泌的一種重要的內(nèi)分泌激素，它的合成與晝夜節(jié)律以及季節(jié)轉(zhuǎn)換同步[16-17]。MLT調(diào)節(jié)雌激素抑制垂體分泌促性腺激素[18]，從而調(diào)控綿羊的季節(jié)性發(fā)情[19]，而AA-NAT是MLT合成的關(guān)鍵調(diào)控酶，AA-NAT基因的表達(dá)水平直接影響MLT的合成，進(jìn)而影響動物的發(fā)情節(jié)奏。另外，D.C.Klein等研究發(fā)現(xiàn)，AA-NAT酶的分泌對綿羊血液MLT分泌有重要影響，可能是導(dǎo)致綿羊季節(jié)發(fā)情或常年發(fā)情的原因之一[20]。MLT分泌的季節(jié)性變化調(diào)控動物的季節(jié)性繁殖，AA-NAT基因影響動物季節(jié)性繁殖是通過影響MLT的合成分泌來實(shí)現(xiàn)的，AA-NAT基因的表達(dá)間接地影響了動物的季節(jié)性繁殖。大多數(shù)綿羊季節(jié)性發(fā)情，僅少數(shù)常年發(fā)情，這嚴(yán)重制約了綿羊產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因此研究AA-NAT基因的表達(dá)與常年發(fā)情性狀的關(guān)聯(lián)性，對進(jìn)一步了解綿羊常年發(fā)情和季節(jié)性發(fā)情的調(diào)控機(jī)制具有重要意義。

小尾寒羊是典型的常年發(fā)情綿羊，灘羊是典型的季節(jié)性發(fā)情綿羊。小尾寒羊和灘羊體型和體重相近、遺傳距離較近[21-22]，同時(shí)季節(jié)性發(fā)情綿羊中灘羊地理位置與小尾寒羊產(chǎn)區(qū)相對較近，因此本試驗(yàn)選取小尾寒羊和灘羊?yàn)檠芯繉ο?，利用real-time PCR技術(shù)檢測AA-NAT基因在不同發(fā)情階段小尾寒羊和灘羊松果體、下丘腦、垂體、卵巢、子宮體、腎上腺6個組織中的表達(dá)情況，希望為從遺傳上調(diào)控綿羊的常年發(fā)情提供科學(xué)依據(jù)，為通過遺傳選擇等手段誘發(fā)綿羊常年發(fā)情、提高繁殖性能奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

選擇發(fā)育良好、健康的小尾寒羊和灘羊各9只。其中處于春季發(fā)情期、春季間情期和秋季發(fā)情期的2.5歲小尾寒羊母羊各3只；處于春季乏情期、秋季發(fā)情期和秋季間情期的2.5歲灘羊母羊各3只。

來自山東省嘉祥縣保種基地的9只小尾寒羊和來自寧夏鹽池灘羊選育場的9只灘羊都飼養(yǎng)在寧夏農(nóng)科院畜牧所種羊場。飼養(yǎng)管理?xiàng)l件完全一致。母羊屠宰后30 min內(nèi)，完成其下丘腦、垂體、松果體、卵巢、子宮體、腎上腺6種新鮮組織樣的采集，并立即放于裝有RNAfixer液體的無RNase離心管中，同時(shí)剪成小塊(至少一側(cè)厚度小于0.5 cm)，用放有冰塊的保溫箱帶回實(shí)驗(yàn)室，-20 ℃保存。

1.2 RNA提取

使用高純總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)提取組織總RNA。提取過程中使用RNase-free DNase I去除基因組DNA。利用NANODROP 2000檢測總RNA濃度和純度，并用1%的瓊脂糖凝膠對RNA進(jìn)行電泳檢測，無明顯降解且A260 nm/A280 nm為1.8～2.1的RNA置于-80 ℃冷凍備用。

1.3 cDNA第一鏈的合成

以1 μL總RNA為模板，使用Quantscript RT Kit反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，反轉(zhuǎn)錄體系為20 μL：10× RT mix 2 μL， dNTPs (2.5 mmol·L-1) 2 μL，Oligo-dT15 2 μL，Quant Reverse Transcriptase 1 μL，最后用無RNA酶H2O補(bǔ)充使總體積達(dá)20 μL。反應(yīng)條件：37 ℃孵育 60 min。

1.4 目的基因擴(kuò)增與克隆測序

根據(jù)NCBI上公布的綿羊AA-NAT基因CDS區(qū)序列(Gene ID：443531)，并結(jié)合筆者克隆得到的部分DNA序列設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)的AA-NAT基因引物序列信息：上游引物F：CCGAGCGTCCACTGCCTGAAAC，下游引物R：GATGGAAGCCAAACCTCTGGTAAAA；引物方向?yàn)?′→3′；產(chǎn)物大小為514 bp；退火溫度為55 ℃。

目的基因擴(kuò)增時(shí)PCR體系：小尾寒羊cDNA模板 2 μL，2×GC Buffer(含Mg2+)15 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各 0.75 μL，2.5 mmol·L-1dNTP Mix 3 μL，rTaq酶 0.3 μL，超純水 8.2 μL，總體積共30 μL。PCR擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，35個循環(huán)；然后延伸72 ℃ 10 min，4 ℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，用DNA回收試劑盒回收目的基因，連接pMD19-T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10感受態(tài)細(xì)胞，每個片段挑選3個陽性克隆質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并送至北京六合華大基因股份有限公司進(jìn)行雙向測序。

1.5 熒光定量PCR

根據(jù)本研究克隆測序獲得的小尾寒羊AA-NAT基因CDS區(qū)序列設(shè)計(jì)real-time PCR引物(表1)，以GAPDH為內(nèi)參基因進(jìn)行real-time PCR分析。

表1 熒光定量PCR引物序列信息

Table 1 Information of primer sequences for real-time PCR

名稱Name引物序列(5'→3')Primersequence產(chǎn)物大小/bpProductsize退火溫度/℃AnnealingtemperatureAA-NATF:CCCCCTGAATCTGGACGAGR:CACAGGGAGCCGATGATGAAGG10960GAPDHF:GAGAAACCTGCCAAGTATGAR:CGAAGGTAGAAGAGTGAGTG13960

熒光定量PCR擴(kuò)增體系：2×PCR Mix 15 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各0.75 μL，20×EVA Green 1.5 μL，ddH2O 7.0 μL，模板 5 μL，總體積30 μL。擴(kuò)增條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，共40個循環(huán)；72 ℃ 2 min(收集熒光)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：取3只小尾寒羊卵巢cDNA 部分混合，然后進(jìn)行5 倍等比稀釋制備成5 個濃度梯度(1、1/5、(1/5)2、(1/5)3、(1/5)4)的cDNA樣品。以這些cDNA 為模板進(jìn)行熒光定量PCR，以獲得的Ct 值為縱坐標(biāo)，以濃度梯度的對數(shù)值(10為底)為橫坐標(biāo)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。

熒光定量：建立標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光定量時(shí)均設(shè)置陰性對照(模板為H2O)，每個樣品均設(shè)置3次平行樣，熒光定量PCR全部在ABI7900熒光定量PCR儀器上進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

熒光定量PCR結(jié)果分析采用2-△△Ct法計(jì)算相對表達(dá)量，所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié) 果

2.1 RNA提取

提取的綿羊各組織的總RNA，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果如圖1，28S rRNA和18S rRNA條帶清晰可見，且灰度值約為2︰1，而5S rRNA帶幾乎沒有，說明提取的總RNA無明顯降解。用NANODROP 2000檢測各組織RNA提取的效果，發(fā)現(xiàn)濃度均在100 mg·μL-1以上，A260 nm/A280 nm均為1.8～2.1，表明提取的RNA可用于后續(xù)熒光定量PCR。

圖1 總RNA電泳圖Fig.1 Gel electrophoresis of total RNA

2.2 PCR擴(kuò)增目的基因AA-NAT

目的基因PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖2：AA-NAT基因擴(kuò)增片段長為514 bp，其中泳道1和2為AA-NAT基因的PCR產(chǎn)物，泳道3為陰性對照。所得條帶單一，特異性好，能滿足后續(xù)測序要求。

圖2 綿羊AA-NAT基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2 PCR amplification products of sheep AA-NAT gene

2.3 綿羊AA-NAT基因在各組織中的表達(dá)水平

本試驗(yàn)以灘羊間情期子宮體△Ct平均值為對照組，小尾寒羊3個情期以及灘羊發(fā)情期和乏情期各組織△Ct平均值為試驗(yàn)組，計(jì)算出各樣本AA-NAT基因的相對表達(dá)量(表2)。結(jié)果表明，該基因在不同情期小尾寒羊和灘羊6個組織中均表達(dá)，不同組織間表達(dá)量有明顯差異，在發(fā)情期綿羊的卵巢、子宮體、松果體中高水平表達(dá)。

2.3.1 兩品種綿羊相同組織不同情期AA-NAT基因表達(dá)量變化 由表2可見，卵巢中小尾寒羊發(fā)情期AA-NAT基因的表達(dá)量極顯著高于間情期(P<0.01)；灘羊3個情期間差異都極顯著(P<0.01)，發(fā)情期表達(dá)量最高，間情期次之，乏情期最低。子宮體中兩品種綿羊秋季發(fā)情期AA-NAT基因的表達(dá)量極顯著高于其他情期(P<0.01)。松果體中小尾寒羊各情期之間AA-NAT基因表達(dá)量差異都極顯著(P<0.01)，而灘羊秋季發(fā)情期極顯著高于其他情期(P<0.01)。腎上腺中小尾寒羊AA-NAT基因在各個情期的表達(dá)量差異均不顯著(P>0.05)，而灘羊秋季發(fā)情期極顯著高于其他情期(P<0.01)。下丘腦中小尾寒羊春季發(fā)情期AA-NAT基因的表達(dá)量極顯著高于其他情期(P<0.01)，而灘羊秋季發(fā)情期極顯著高于其他情期(P<0.01)。垂體中兩品種綿羊AA-NAT基因各個情期的表達(dá)量差異均不顯著(P>0.05)。結(jié)果提示卵巢和子宮體中AA-NAT基因的表達(dá)差異可能與綿羊常年發(fā)情有關(guān)。

2.3.2 同一情期相同組織兩品種綿羊間AA-NAT基因表達(dá)量變化 由表2可見，卵巢和子宮體中秋季發(fā)情期灘羊AA-NAT基因的表達(dá)量極顯著高于小尾寒羊(P<0.01)。松果體中小尾寒羊各個情期AA-NAT基因的表達(dá)量均極顯著高于灘羊(P<0.01)，秋季發(fā)情期表達(dá)量最高，提示小尾寒羊松果體中AA-NAT基因表達(dá)的機(jī)制可能不同于灘羊。腎上腺中灘羊各個情期AA-NAT基因的表達(dá)量均極顯著高于小尾寒羊(P<0.01)，秋季發(fā)情期表達(dá)量最高。下丘腦中秋季發(fā)情期灘羊AA-NAT基因的表達(dá)量極顯著高于小尾寒羊(P<0.01)，而乏情期和間情期的小尾寒羊和灘羊之間AA-NAT基因的表達(dá)量都無顯著差異(P>0.05)。垂體中小尾寒羊和灘羊之間AA-NAT基因表達(dá)量差異均不顯著(P>0.05)。

表2 小尾寒羊與灘羊各組織中AA-NAT基因mRNA相對表達(dá)量

Table 2 The expression level ofAA-NATmRNA in different tissues of Small Tail Han and Tan sheep

品種Breed情期Estrouscycle垂體Pituitarygland下丘腦Hypothalamus卵巢Ovary子宮體Uterusbody腎上腺Adrenalgland松果體Pinealgland小尾寒羊SmallTailHansheep春季發(fā)情期Springestrus0.48±0.133.38±0.12B22.68±6.79B3.08±0.18C0.16±0.01D9.77±0.98B春季間情期Springdiestrus0.51±0.320.53±0.12C0.11±0.04D2.36±0.34C0.06±0.02D6.01±0.29C秋季發(fā)情期Fallestrus0.73±0.270.69±0.01C15.29±7.66B56.60±1.84B0.10±0.03D11.52±1.29A灘羊Tansheep春季乏情期Springanestrus1.10±0.370.96±0.16C0.12±0.02D1.07±0.14C1.86±0.14B0.24±0.11E秋季發(fā)情期Fallestrus1.08±0.264.87±0.15A87.47±10.30A77.81±4.94A12.24±0.74A3.95±1.83D秋季間情期Falldiestrus1.18±0.500.94±0.27C3.59±1.34C1.00±0.06C1.24±0.13BC0.30±0.05E

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)具有相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，字母不同表示差異極顯著(P<0.01)

Means in the same column with a same letter superscript indicate no significant difference(P>0.05)，with different superscripts differ significantly(P<0.01)

3 討 論

AA-NAT是合成MLT的關(guān)鍵調(diào)控酶[23-24]，它通過MLT對青春期啟動的調(diào)控來影響動物的繁殖活動。前人研究發(fā)現(xiàn)，AA-NAT基因在松果體和視網(wǎng)膜有較高水平的表達(dá)，在不同的神經(jīng)組織(如腦垂體遠(yuǎn)側(cè)部﹑視交叉上核﹑海馬)和外周組織(主要包括睪丸和卵巢)有極低水平的表達(dá)[20，25-28]。E.Isorna等研究了AA-NAT基因在松果體中表達(dá)對比目魚發(fā)育的影響，發(fā)現(xiàn)AA-NAT基因與甲狀腺激素作用相關(guān)[29-30]。AA-NAT基因還表達(dá)于綠蛙視網(wǎng)膜、間腦、室管膜細(xì)胞層及卵巢中[31]。T.Uz等應(yīng)用RT-PCR及原位雜交RT-PCR技術(shù)對AA-NAT基因在大鼠大腦中的表達(dá)分布進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)AA-NAT基因在海馬、小腦及脊索中均表達(dá)[32]。對濟(jì)寧青山羊繁殖季節(jié)性的研究表明，AA-NAT基因表達(dá)具有明顯的組織特異性，主要表達(dá)于松果體組織[33]。本研究表明，AA-NAT基因在常年發(fā)情小尾寒羊和季節(jié)性發(fā)情灘羊下丘腦、垂體、松果體、卵巢、子宮體和腎上腺中都表達(dá)，但在不同組織中的表達(dá)量有明顯差異，主要在發(fā)情期綿羊卵巢、松果體、子宮體中高水平表達(dá)?？梢夾A-NAT基因表達(dá)具有組織特異性，影響動物發(fā)育及繁殖活動。

常年發(fā)情和季節(jié)性發(fā)情顯然影響羊的繁殖能力。有研究表明，AA-NAT基因的突變可能對山羊的繁殖活動起到關(guān)鍵作用[34-35]，也有研究表明，綿羊的季節(jié)性繁殖和非季節(jié)性繁殖活動與AA-NAT基因的多態(tài)性有密切關(guān)聯(lián)[36-37]。藏黃牛和牦牛是典型的季節(jié)性繁殖動物，普通黃牛繁殖季節(jié)性不明顯。陳朝堅(jiān)等發(fā)現(xiàn)，藏黃牛AA-NAT基因的表達(dá)序列和編碼氨基酸與親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的牦牛一致，而與親緣關(guān)系較近的普通黃牛卻有一定差異，這種差異可能與繁殖的季節(jié)性有關(guān)[13]。P.Wongchitrat等研究了不同日齡大鼠松果體中AA-NATmRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，4日齡大鼠在夜間具有較高的表達(dá)，且表達(dá)水平隨著日齡的增長而增加，到初情期時(shí)達(dá)到最高，8周齡AA-NATmRNA表達(dá)水平降低；AA-NAT基因的表達(dá)與大鼠發(fā)育程度有密切關(guān)聯(lián)[38]。本研究中，AA-NAT基因在發(fā)情期小尾寒羊和灘羊卵巢和子宮體中的表達(dá)量顯著高于其他組織，提示卵巢和子宮體中AA-NAT基因的高水平表達(dá)對綿羊發(fā)情有一定影響。本研究還發(fā)現(xiàn)，灘羊發(fā)情期松果體中AA-NAT基因的表達(dá)量極顯著高于其它情期(P<0.01)，表明，AA-NAT基因mRNA表達(dá)的高低對綿羊發(fā)情啟動具有重要作用，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。因此，本研究結(jié)果初步表明，卵巢、子宮體和松果體中AA-NAT基因表達(dá)上調(diào)可能與小尾寒羊常年發(fā)情相關(guān)。

4 結(jié) 論

本研究采用real-time PCR方法檢測了AA-NAT基因在小尾寒羊和灘羊不同情期6個組織中的相對表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AA-NAT基因在6個組織中的表達(dá)量具有明顯差異，卵巢、子宮體和松果體中AA-NAT基因表達(dá)上調(diào)可能與小尾寒羊常年發(fā)情相關(guān)。

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(編輯 郭云雁)

Association betweenAA-NATmRNA Expression and Year-round Estrus in Sheep

LU Lu-lu1，SUN Xiao-di2，CHU Ming-xing1*，WANG Yong-juan2，HUANG Dong-wei1，WANG Jin-yu2，DI Ran1，PAN Zhang-yuan1，LIU Qiu-yue1

(1.KeyLaboratoryofFarmAnimalGeneticResourcesandGermplasmInnovationofMinistryofAgriculture，InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China；2.CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China)

In order to study the association ofAA-NATgene and year-round estrus in sheep，year-round estrous Small Tail Han ewes and seasonal estrous Tan ewes were selected as tested subjects.Real-time PCR method was used to detectAA-NATmRNA expression in hypothalamus，pituitary gland，pineal gland，ovary，uterus body and adrenal gland at different estrus stages.The results showed that the expression ofAA-NATgene in all 6 tissues at different estrous stages of the 2 breeds was significantly different.The expression ofAA-NATgene was at high level in ovary，uterus body and pineal gland in sheep at estrus.In ovary and uterus body，AA-NATgene expression was significantly lower (P<0.01) in Small Tail Han sheep at spring and fall estrus stage than that in Tan sheep at fall estrus stage，but in pineal gland it was significantly higher (P<0.01).The results preminarily indicated that the up-regulated expression ofAA-NATgene in ovary，uterus body and pineal gland was associated with year-round estrus in Small Tail Han sheep.

sheep；year-round estrus；AA-NATgene；real-time PCR；gene expression

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.005

2014-05-05

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31101687)；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS13)；國家肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)(CARS-39)；中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(2011cj-7；2013ywf-zd-1)

盧璐璐(1990-)，女，安徽宿州人，碩士生，主要從事動物分子遺傳學(xué)研究，E-mail：lulululu2012@sina.cn

*通信作者：儲明星，研究員，E-mail：mxchu@263.net

S826；S814.8

A

0366-6964(2015)04-0542-07