昆蟲蛋白的價(jià)值、應(yīng)用及提取工藝

趙國(guó)玉，曹 莉，陳鏡華，韓日疇

(廣東省昆蟲研究所，廣東省野生動(dòng)物保護(hù)與利用公共實(shí)驗(yàn)室，廣東省農(nóng)業(yè)害蟲綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510260)

隨著21 世紀(jì)世界經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展、社會(huì)人口激增和人民生活水平提高，人們對(duì)優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)的需求量也愈來(lái)愈大，蛋白質(zhì)資源不足是當(dāng)今世界存在的四大危機(jī)之一。據(jù)報(bào)道，世界上缺乏蛋白質(zhì)的人口約占總?cè)丝诘?/5，尤其是缺乏動(dòng)物性蛋白質(zhì)，尋求新的蛋白質(zhì)資源已是擺在我們面前的一項(xiàng)迫切任務(wù) (胡榮學(xué)，2009;Makkar et al.，2014)。

昆蟲是地球上最大的生物類群，全世界現(xiàn)存昆蟲可能超過(guò)1000 萬(wàn)種，目前已定名的昆蟲約100 萬(wàn)種，遍布所有的生態(tài)系統(tǒng)，具有種類多、周期短、繁殖快、易于飼養(yǎng)且可利用廢棄物進(jìn)行大規(guī)模飼養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)(ˇCiˇcková et al.，2012)，其蛋白質(zhì)含量高，可達(dá)干重的50%-82% (Schabel，2010)，是一類巨大的生物資源，被認(rèn)為是目前最大且最具開發(fā)應(yīng)用潛力的動(dòng)物蛋白源，將成為21 世紀(jì)人類蛋白質(zhì)的主要來(lái)源之一 (Makkar et al.，2014)。

1 昆蟲蛋白的價(jià)值

1.1 昆蟲蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值

昆蟲蛋白是一種高質(zhì)量的動(dòng)物蛋白質(zhì)資源，富含各種氨基酸 (李奕冉等，2010;祝海娟，2013;Barroso et al.，2014)，氨基酸種類和含量比例符合聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)提出的氨基酸模式(馮穎，2005)。

昆蟲中蛋白質(zhì)含量?jī)?yōu)于豬肉、大豆以及風(fēng)干牛肉，可與魚粉相媲美(Ran and Zhao，2014)。常見(jiàn)干物質(zhì)基礎(chǔ)昆蟲如黑水虻幼蟲粗蛋白含量達(dá)40%-44% (Newton et al.，1977;安新城和呂欣，2007;St-Hilaire et al.，2007 a，2007 b;Sealey et al.，2011)，黃粉蟲粗蛋白質(zhì)含量達(dá)47.70%-64.70% (謝保令，1994)，蝗蟲蛋白質(zhì)含量達(dá)50.00%-60.00%，其中7種必需氨基酸含量與氨基酸總量的比值在35%左右，水溶性蛋白的比例超過(guò)40% (段玉峰，2005);蠶蛹中蛋白質(zhì)含量占60% 左右，18種氨基酸的含量均占1.5% 以上，其中必需氨基酸占總氨基酸量42.20%-60.00% (王偉等，2006);家蠅幼蟲(蠅蛆)風(fēng)干物中粗蛋白質(zhì)含量為40.00%-65.00% (Adesina et al.，2011;Odesanya et al.，2011;Okah and Onwujiariri，2012)，賴氨酸、蛋氨酸和必需氨基酸總量分別是魚粉的2.6、2.7 倍和2.3 倍，氨基酸質(zhì)量接近魚粉(白鋼和張翼翔，2010)。

另外，昆蟲氨基酸的消化利用率非常高，可達(dá)70.00%-98.93%，接近或超過(guò)肉、魚的消化率(Newton et al.，1977;Hwangbo et al.，2009;Pretorius，2011)，高于植物性蛋白的消化利用率(Finke，2008)。因此，將昆蟲蛋白粉加入到主食品中混合食用，可以相互補(bǔ)充，為機(jī)體提供合理、全面、豐富的蛋白質(zhì)。

1.2 昆蟲蛋白的保健價(jià)值

昆蟲蛋白具免疫增強(qiáng)作用，可通過(guò)促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，刺激抗體分泌，調(diào)節(jié)特異性免疫應(yīng)答或促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，調(diào)節(jié)非特異性免疫，提高機(jī)體對(duì)外界的抵御能力。

研究表明，蠶蛹氨基酸能提高免疫功能低下小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫功能(尹武英和彭力，1998)。黃粉蟲具有一定的促進(jìn)生長(zhǎng)、益智、抗疲勞和抗組織缺氧作用，不僅能降低血脂及促進(jìn)膽固醇代謝，還能提高小鼠外周淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和降低骨髓微核率(楊兆芬等，1999)，提高飼料利用率，增加小鼠主要免疫器官的臟器系數(shù)，提高機(jī)體免疫力(李漢臣等，2007)。蠅蛆蛋白粉可顯著提高正常小鼠半數(shù)溶血值(HC50)，增強(qiáng)其體液免疫功能，對(duì)免疫功能低下小鼠HC50 無(wú)影響，但可顯著提高其吞噬指數(shù)(a)值，并使體液免疫功能恢復(fù)至正常水平(覃容貴等，2007)。蠶蛹蛋白能顯著提高小鼠生成抗體脾細(xì)胞數(shù)，同時(shí)，明顯增加IL-2 分泌，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖(昌友權(quán)等，2007)。蠶蛹蛋白多肽可增強(qiáng)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能(楊安樹等，2008)，顯著增加小鼠胸腺指數(shù)、小鼠足跖腫脹度、小鼠抗體細(xì)胞生成數(shù)量以及單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力(戚穎欣等，2009)，具明顯的免疫調(diào)節(jié)作用。

1.3 昆蟲蛋白的藥用價(jià)值

昆蟲作為傳統(tǒng)的中藥材資源在我國(guó)已有2000多年歷史(李奕冉等，2010)，昆蟲蛋白具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤作用，是篩選藥物、制備疫苗等的天然資源寶庫(kù)。

研究表明，栗蠶蛹經(jīng)大腸埃希菌誘導(dǎo)后體液中產(chǎn)生的新蛋白對(duì)大腸埃希菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球茵及柞蠶鏈球菌均表現(xiàn)出一定的抑菌作用(李亞潔等，2009)。黃粉蟲防御性分泌蛋白物對(duì)不同菌的抑制強(qiáng)度為桔青霉 ＞大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌 ＞ 白色假絲酵母 ＞ 黑曲霉(強(qiáng)承魁等，2006)。源于蠅蛆體內(nèi)的抗菌肽對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽胞桿菌、肺炎克氏菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等細(xì)菌均有抑制作用 (郭海萍等，2006)。

蜂毒素和天蠶素在亞毒性濃度下可抑制艾滋病病毒HIV-1 基因的表達(dá)，降低其增殖(Wachinger et al.，1998)。宮霞等(2004)從蠅蛆經(jīng)沸水熱變性過(guò)程中分離純化得到一種抗菌肽MDL-1，不僅具有抗熱性，還有很強(qiáng)的抗病毒活性。煙蚜夜蛾幼蟲的血液淋巴細(xì)胞對(duì)多種DNA、RNA 病毒具有明顯的抑制作用，可使病毒的感染力降低(楊瑞麗等，2003)。

研究還發(fā)現(xiàn)，柞蠶蛹抗菌肽可明顯降低小鼠大腸癌發(fā)生率，對(duì)大腸癌細(xì)胞的抑制率達(dá)46%(李奕冉等，2010);在蠶蛹中含有少量干擾素，也具備一定的抑制腫瘤的作用，尤其是對(duì)肺癌效果明顯(李琴韻和胡蓓莉，1996)。蠅蛆抗菌肽能有效抑制人胃癌細(xì)胞MGC80-3 和BGC-823、人肺癌細(xì)胞SPC-A-1、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、黑色素瘤A375 細(xì)胞、肝癌SMMC-7721 細(xì)胞以及白血病細(xì)胞K562 的體外增殖(邱曉燕等，2003;文彩虹等，2004;曹小紅等，2006;賀莉芳等，2006)，工程蠅蛆體內(nèi)分離的凝集素在體外對(duì)K562細(xì)胞也具有抑制生長(zhǎng)作用(曹小紅等，2009)，這表明可通過(guò)生物工程技術(shù)大量表達(dá)并提取某種昆蟲蛋白以用于臨床試驗(yàn)研究。

2 昆蟲蛋白的開發(fā)應(yīng)用

2.1 昆蟲蛋白食品

將昆蟲作為美味食品，在世界上許多國(guó)家和地區(qū)早已開始了，并且各自具有獨(dú)特的食用種類、方法和習(xí)俗(Bodenheimer and Junk，1951)。昆蟲食品加工效益很高，生產(chǎn)全過(guò)程不用化學(xué)藥物、添加劑等，屬于綠色食品(尹凱，2008)。我國(guó)食用昆蟲資源的調(diào)查結(jié)果顯示，目前已報(bào)道的283種及亞種的昆蟲，涉及13 個(gè)目、71 個(gè)科(Hu and Zha，2009)。為人們所接受的已商業(yè)化的可食用昆蟲主要有蟬、蠅蛆、蝗蟲、螞蟻、黃粉蟲、蠶蛹等，這些昆蟲除可直接烹制食用外，也已被加工成各種休閑零食如罐頭或以原料的形式添加入各種食品如餅干、蛋糕中商業(yè)化應(yīng)用(趙大軍，2000;潘怡歐，2005;崔葉潔，2009;祝海娟，2013)。

然而，并不是所有昆蟲都可以直接食用，例如劇毒昆蟲如斑蝥、豆蕪脊、青胺蟲等不能直接食用，微毒昆蟲則需適當(dāng)處理后方可食用。由此可見(jiàn)，選擇食用昆蟲時(shí)要慎重、準(zhǔn)確，一方面可以參考民間傳統(tǒng)文化，另一方可以通過(guò)大量試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證研究。

由于昆蟲蛋白含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，具有某些特殊功效，經(jīng)加工提取后的昆蟲蛋白作為功能食品備受關(guān)注。日本從蠶蛹制取優(yōu)質(zhì)蛋白，生產(chǎn)氨基酸系列產(chǎn)品已獲多項(xiàng)專利(羅贊，2009)，德國(guó)、美國(guó)、法國(guó)及澳大利亞等國(guó)家的昆蟲加工公司也在蓬勃發(fā)展。在我國(guó)，以蠅蛆血淋巴為原料研制出了“力諾健之素”，以及以蠅蛆幾丁糖為原料的“力諾活力素”(潘怡歐，2005)。膜翅目、蟻科的鼎突多翅蟻因具有抗炎、抗風(fēng)濕、抗癌等多種藥效已被精加工為口服液、飲料、沖劑等保健食品(崔葉潔，2009)。以黃粉蟲為主要原料制作成的黃粉蟲酒、黃粉蟲蛋白功能飲料、氨基酸口服液等產(chǎn)品也已推向市場(chǎng)(趙大軍，2000)。

2.2 昆蟲蛋白飼料

昆蟲蛋白富含天然抗菌肽等有益物質(zhì)，是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)飼料來(lái)源，作為飼料添加劑用于動(dòng)物飼養(yǎng)，可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高各種動(dòng)物的抗病能力、減少抗生素的使用、降低飼料成本，提高養(yǎng)殖效益。目前，在畜禽及水產(chǎn)動(dòng)物等養(yǎng)殖中應(yīng)用較多的主要是蠶蛹粉、黃粉蟲、蠅蛆粉等。

研究表明，利用蠶蛹粉喂豬后，豬平均日增重比不加蠶蛹粉的要高23.6%，且可縮短育肥期，提高出欄率(張建紅和周恩芳，2002)。用黃粉蟲粉等昆蟲粉代替基礎(chǔ)飼料蛋白原料2.5%、5.0%、7.5%飼喂豬，可使豬平均日增重較對(duì)照組分別提高15.4%、37.2%、40.1%，料肉比分別下降4.8%、9.7%、11.3% (陳曉偉，2012)。在沒(méi)有氨基酸補(bǔ)充的情況下，將50%的黑水虻預(yù)蛹粉代替常規(guī)飼料中的血漿蛋白粉飼喂斷奶小豬，可以顯著提高4%的收益和9%的飼料轉(zhuǎn)化率(Newton et al.，2005)。

用黃粉蟲蛋白飼料飼喂蛋雞較普通飼料產(chǎn)蛋率提高5.06%，蛋重提高12.4%，料蛋比下降低6.9%，凈增效益提高32.12% (鄧青云等，2008)。在飼料中添加蠅蛆粉飼喂肉雞，可顯著提高肉雞飼料轉(zhuǎn)化率、日增重、胸肌和腿肌的重量，提高生長(zhǎng)指標(biāo)和經(jīng)濟(jì)效益 (賈生福和馬彥彪，2007;Hwangbo et al.，2009;Pretorius，2011;Okah and Onwujiariri，2012)，基礎(chǔ)飼料中蠅蛆粉添加的最佳配比為10%-15% (Hwangbo et al.，2009)。用黑水虻蟲粉代替的豆粉飼喂雞可顯著提高飼料轉(zhuǎn)化率，利于雞的生長(zhǎng) (Newton et al.，2005)。

同樣，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中昆蟲蛋白粉的應(yīng)用甚廣。用16%的柞蠶免疫活性蛋白替代魚粉飼喂鮑魚，增長(zhǎng)率可提高31.2%-32.9%，并有望縮短鮑魚的育成時(shí)間(祁芳和李崗生，2001)。將蠅蛆粉添加到凡納濱對(duì)蝦飼料中，可顯著提高對(duì)蝦體長(zhǎng)、體質(zhì)量、特定生長(zhǎng)率和成活率(鄭偉等，2010)，并在一定程度上提高對(duì)蝦抵抗弧菌的能力(陳乃松等，2007);凡納濱對(duì)蝦飼料中添加蠅蛆抗菌肽可促進(jìn)對(duì)蝦生長(zhǎng)，并能提高對(duì)蝦的免疫相關(guān)指標(biāo)(陳冰等，2010)。蠅蛆粉代替魚粉飼喂羅非魚，有利于羅非魚的生長(zhǎng)，且代替34%的魚粉時(shí)，羅非魚的生長(zhǎng)指標(biāo)和存活率最高 (Ogunji et al.，2007);與肉骨粉、豆粉飼喂異鰓胡鯰魚相比，蠅蛆粉能提高其生長(zhǎng)指標(biāo)(Ossey et al.，2012);蠅蛆粉部分取代魚粉能促進(jìn)鯽魚生長(zhǎng)，提高飼料利用效率，增強(qiáng)鯽魚白細(xì)胞吞噬功能和呼吸爆發(fā)能力，并可增強(qiáng)魚體抗氧化能力，從而增強(qiáng)其非特異性免疫功能，且對(duì)魚肉品質(zhì)無(wú)不良影響(李小波，2013)。

用蠶蛹粉飼養(yǎng)水貂，100 g 蠶蛹可代替200-500 g 肉類蛋白質(zhì);100 g 蠶蛹粉的可消化蛋白質(zhì)可代替312 g 淡水魚的可消化蛋白質(zhì)，同時(shí)還可以增強(qiáng)貂皮毛絨的光澤，提高毛絨的品質(zhì)(李靜等，2007)。用黑水虻蛹粉飼喂美洲鱷，結(jié)果證明黑水虻有利于美洲鱷的生長(zhǎng)(Bodri and Cole，2007)。

2.3 昆蟲蛋白藥物

隨著生物技術(shù)及生產(chǎn)工藝的飛速發(fā)展，昆蟲蛋白藥物的研發(fā)已進(jìn)入更深層次。從多種昆蟲體內(nèi)免疫血淋巴中提純的凝集素、免疫蛋白、免疫肽、酚氧化酶、抗菌肽已被用于廣譜性抗細(xì)菌、抗病毒、抗腫瘤細(xì)胞的藥品開發(fā) (Yu and Li，2005;王毅力等，2009)，抗菌肽應(yīng)用研究已進(jìn)入臨床試驗(yàn)(王毅力等，2009)，螞蟻提取物臨床上已用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、治療慢性肝炎，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，起到保肝護(hù)肝作用(沈立榮和任玉翠，1999)。

浙江省中醫(yī)藥研究院以蠶蛹復(fù)合氨基酸為主要原料制成的“復(fù)方營(yíng)養(yǎng)要素”制劑能顯著抑制肝癌、肉瘤S180荷瘤小鼠的瘤體生長(zhǎng)，延長(zhǎng)艾氏腹水瘤小鼠的生存期，該制劑對(duì)包括胃癌、食管癌、大腸癌等120 例惡性腫瘤臨床試驗(yàn)結(jié)果顯效88 例，有效24 例，無(wú)效8 例，總有效率為93.33% (樓錦新，1995)。

昆蟲抗菌肽作為藥物成分的產(chǎn)品已大量上市。蜂毒肽作為一種可應(yīng)用于制備殺滅細(xì)菌和治療膿毒癥的藥物小分子多肽已被申請(qǐng)專利(郭毅斌等，2005)，多種蜂毒制劑如蜂毒素、蜂散痛、蜂特靈和蜂毒注射液等已被廣泛應(yīng)用于臨床(劉紅云和童富淡，2003)。此外昆蟲抗凍蛋白可用于人和動(dòng)物的卵、精子、胚胎、心臟或肝臟等器官的超低溫保存以改善冷凍質(zhì)量(Amir et al.，2004)。昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也已用來(lái)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白如凝集素等用于醫(yī)藥行業(yè)(Hink，1991;曹小紅等，2006;Spiros，2008)。

2.4 其他

利用特定昆蟲蛋白的性質(zhì)，可將昆蟲蛋白基因通過(guò)基因工程技術(shù)轉(zhuǎn)入到目標(biāo)生物中表達(dá)使其發(fā)揮作用，如將抗菌肽MB39 基因轉(zhuǎn)入到蘋果中可得到抗病力增強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因株系 (劉慶忠等，2001)，昆蟲神經(jīng)毒素與桿狀病毒重組后可改善苜蓿夜蛾的殺蟲效果(Jinn et al.，2006)，在轉(zhuǎn)入Bt伴孢晶體蛋白基因等毒素基因的同時(shí)轉(zhuǎn)入增效蛋白基因，既可增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲能力，又能防止昆蟲對(duì)單一有效成分產(chǎn)生抗性 (胡蓉等，2002)。

昆蟲蛋白還可用作化妝品原料如蠶絲素蛋白制成的化妝品，制造高級(jí)醫(yī)用材料，如生物膜、生物反應(yīng)器、人造皮膚、人造血管、免拆除手術(shù)逢合線等(楊金蘭和閻杰，2011)。

3 昆蟲蛋白提取工藝

3.1 前處理

昆蟲蛋白提取時(shí)需進(jìn)行前處理獲得下一步蛋白抽提所需基質(zhì):鮮蟲或去脂干蟲。方法為(ⅰ)鮮蟲，即將鮮蟲清洗干凈，晾干備用;(ⅱ)去脂干蟲，即挑選新鮮無(wú)腐爛的蟲體為原料禁止飼喂24-48 h 自然排空，清洗除雜后在烘箱中50-60℃烘干(潘怡歐，2005;馬林林，2013)，用高速粉碎機(jī)粉碎蟲體后進(jìn)行采用索氏抽提法進(jìn)行脫脂處理(李帥等，2008)，將蟲粉用濾紙包好后置于索氏提取器的提取筒中，倒入有機(jī)溶劑，設(shè)定水浴溫度及抽提時(shí)間，待濾紙包至恒重即抽提結(jié)束，不同昆蟲的最適脫脂溶劑不同，蠶蛹、黃粉蟲、蠅蛆的最適脫脂溶劑分別為正己烷(楊梅琳和成玉粱，2006)、石油醚(王文亮等，2008;竇珍偉，2009)與無(wú)水乙醚(胡榮學(xué)，2009)、無(wú)水乙醚(李帥等，2008)。

昆蟲經(jīng)不同處理方式處理后蛋白提取效果不同。研究發(fā)現(xiàn)原料經(jīng)脫脂后蛋白水解率較未脫脂的蛋白水解率提高了27.43%，可能是因內(nèi)部的蛋白質(zhì)不再受脂肪的包裹，減少了脂肪對(duì)它的束縛因而易被酶解，使蛋白質(zhì)水解率得以提高。而潘怡歐(2005)的研究發(fā)現(xiàn)以鮮蟲作為提取原料效果明顯優(yōu)于使用去脂干蟲提取昆蟲蛋白質(zhì)。目前研究多采用去脂干蟲作為蛋白提取基質(zhì)。

3.2 蛋白提取

蛋白提取主要分為兩大類:發(fā)酵法和抽提法。發(fā)酵法提取蛋白是選用一些合適的菌種對(duì)原料進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，然后用水將其洗到中性，干燥(程倩等，2012)。用發(fā)酵法提取昆蟲蛋白的具體菌種選擇及提取工藝條件未見(jiàn)報(bào)道。

抽提法是目前提取昆蟲蛋白的主要方法。抽提通常是指采用適當(dāng)?shù)娜軇┖头椒ǎ瑥脑现邪延行С煞莘蛛x出來(lái)。依溶劑不同抽提法主要有五種:堿法、鹽法、酶法、有機(jī)溶劑法以及Tris-HCl 法，其中，堿法效率高，能耗和成本較低，但蛋白損失較高，且過(guò)程中易產(chǎn)生苦味物質(zhì)，酶法可更多的保留蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，但成本較高，鹽法介于二者之間，有機(jī)溶劑法適用于提取與脂結(jié)合較緊密或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)，但易造成溶劑殘留 (穆利霞等，2014;楊田，2014)，Tris-HCl 法效率較鹽法高，蛋白品質(zhì)好，但成本較高(仲義等，2009)。

昆蟲蛋白提取的主要影響因素有液固比、提取液pH、離子種類、提取時(shí)間、提取液濃度、溫度等。不同昆蟲提取工藝不同，且因褪色、除臭等問(wèn)題，加上純化過(guò)程繁瑣，昆蟲蛋白并沒(méi)有進(jìn)行廣泛的工廠化生產(chǎn)，目前許多學(xué)者仍致力于對(duì)昆蟲蛋白提取工藝的研究，供試?yán)ハx主要為蠶蛹、黃粉蟲、蠅蛆等，由于研究者所用的材料和處理方法不同，其結(jié)論不盡相同。

3.2.1 蠶蛹蛋白提取工藝

蠶蛹蛋白的提取多采用堿法和酶法。有機(jī)溶劑法制備蠶蛹蛋白得率低，不能廣泛應(yīng)用(陳芳艷等，2003)。邱英華等(2012)采用堿法對(duì)蠶蛹蛋白的提取工藝進(jìn)行研究，得到的最佳工藝條件為:反應(yīng)溫度70℃，NaOH 濃度2%，液固比(V/m)為6∶1，反應(yīng)時(shí)間6 h，蠶蛹蛋白得率為27.6%。穆利霞等(2014)研究超聲處理對(duì)堿法制備蠶蛹蛋白得率的影響發(fā)現(xiàn)，超聲處理可提高堿法制備蠶蛹蛋白得率，優(yōu)化的蠶蛹?jí)A法提取工藝條件為:室溫(16-20℃)，NaOH 濃度0.3%，浸提液固比(V/m)60∶1，超聲功率400 W，超聲時(shí)間20 min，蠶蛹蛋白得率為88.14%，高于醇提法的8.47% (陳芳艷等，2003)和普通堿提法的78.69% (孫雁等，2009)。

趙鵬等(2005)采用中性蛋白酶結(jié)合動(dòng)物蛋白酶雙酶水解的方法對(duì)蠶蛹蛋白的提取工藝做了探索，確定最佳酶解工藝條件為:反應(yīng)溫度50℃，pH7.0，動(dòng)物蛋白加酶量150 U/g (動(dòng)物蛋白酶酶活/中性蛋白酶比為1∶4)，底物濃度1.0%，水解時(shí)間3 h，水解度達(dá)27.36%，酶解液為短鏈的活性多肽。李高揚(yáng)等(2011)以丙酮脫脂后的蠶蛹蛋白為原料，以DPPH 的清除能力作為酶解過(guò)程的分析指標(biāo)，分別用堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶水解脫脂蠶蛹蛋白，結(jié)果表明胃蛋白酶水解蠶蛹蛋白效果最好，并對(duì)胃蛋白酶水解脫脂蠶蛹蛋白的工藝條件做了正交優(yōu)化，得到最優(yōu)水解條件為:反應(yīng)溫度50℃，pH1.5，加酶量8000 U/g，底物濃度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))4%，反應(yīng)時(shí)間6 h，水解度達(dá)25%。馬林林(2013)用木瓜蛋白酶、1398 中性蛋白酶和2709堿性蛋白酶對(duì)脫脂蠶蛹進(jìn)行酶法提取工藝研究，發(fā)現(xiàn)1398 中性蛋白酶的水解效果最佳，通過(guò)對(duì)1398 中性蛋白酶水解脫脂蠶蛹蛋白的各參數(shù)進(jìn)一步研究得出最適參數(shù)為:水解溫度50℃，pH7.0，酶用量2%，底物濃度4%，反應(yīng)時(shí)間4 h，水解度達(dá)20%。

3.2.2 黃粉蟲幼蟲蛋白提取工藝

仲義等(2009)采用堿法、鹽法、胰蛋白酶法和Tris-HCl 法對(duì)黃粉蟲幼蟲蛋白提取方法進(jìn)行篩選，得出最佳提取方法為胰蛋白酶法，堿法和Tris-HCl 法次之，鹽法效果最差。

盧文靜等(2012)采用胰蛋白酶法對(duì)黃粉蟲粉的提取工藝進(jìn)行研究，得到最佳工藝條件為:溫度 46℃，pH8.5，加酶量 1.8%、液固比(V/m)為10∶1，反應(yīng)時(shí)間4 h，水解度為13.22%。

羅贊(2009)采用了堿法和酶法兩種方法提取黃粉蟲幼蟲蛋白，結(jié)果表明，堿法的最佳條件為:反應(yīng)溫度70℃，堿液濃度1.0% mol/L，液固比(V/m)12∶1，反應(yīng)時(shí)間90 min，黃粉蟲蛋白提取率可達(dá)70.11%，純度為91.20%;蛋白酶法提取的最佳工藝為復(fù)合蛋白酶和復(fù)合風(fēng)味蛋白酶雙酶共同進(jìn)行酶法提取:反應(yīng)溫度55℃，pH6.5，加酶量6%、復(fù)合蛋白酶與復(fù)合風(fēng)味蛋白酶加量比1∶3，液固比(V/m)9∶1，反應(yīng)時(shí)間8 h，在該最佳工藝條件下提取黃粉蟲蛋白，提取率可以達(dá)64.83%，純度為92.17%。黃雄偉(2010)采用鹽提法研究了黃粉蟲幼蟲蛋白的提取工藝條件，其最佳工藝為:反應(yīng)溫度70℃，NaCl 濃度0.5%，液固比(V/m)8∶1，反應(yīng)時(shí)間3 h，蛋白質(zhì)沉淀pH 值4.8，蛋白提取率可達(dá)到71.30%，純度為90.20%。

楊田(2014)用Na2HPO4檸檬酸緩沖液作為黃粉蟲幼蟲蛋白的提取液，在工藝條件:反應(yīng)溫度20℃，pH7.0，液固比(V/m)8∶1，反應(yīng)時(shí)間50 min，得到的蛋白提取率為71.02%，蛋白純度為90.34%。

3.2.3 蠅蛆蛋白提取工藝

李玲玲等(2008)采用多種酶混合酶解脫脂蠅蛆粉得到的最佳工藝條件為:反應(yīng)溫度45℃，pH7.5，酶量8000 U/g，風(fēng)味酶∶木瓜酶∶胃蛋白酶∶胰蛋白酶配比為35∶50∶5∶10，反應(yīng)時(shí)間為7 h。鹽析法脫脂蠅蛆干粉的最佳蛋白提取工藝為反應(yīng)溫度4℃、pH4、硫酸銨濃度70%、反應(yīng)時(shí)間7 h，獲得了較高的提取率(李帥等，2008)。將家蠅幼蟲脫脂干粉和含0.18 mol/L NaCI 的檸檬酸-Na2HPO4緩沖溶液，pH7.0，在4℃溫度下預(yù)冷，液固比(V/m)按10∶1，進(jìn)行充分溶解后取上清液用0.01 mol/L HCI 溶液調(diào)節(jié)上清液pH 值至5.8，加入65%硫酸銨進(jìn)行飽和沉淀可提取家蠅幼蟲清蛋白(艾輝，2008)。

雷土青(2014)采用噴霧干燥法制備蠅蛆蛋白，通過(guò)檢測(cè)其得率及抗菌活性，優(yōu)化出了在4℃環(huán)境下的最佳提取工藝條件:提取液為PBS 緩沖溶液，液固比(V/m)4∶1，浸提時(shí)間為0。陸婕等(2007)以蠅蛆干粉為材料，發(fā)現(xiàn)加熱-層析法較海藻酸吸附法快速簡(jiǎn)便，但是得率只有0.26%。黨向利(2008)以家蠅蛹為材料，用酸過(guò)夜提取、熱處理、離心、過(guò)濾、超濾處理等工藝提取分離，并用噴霧干燥法制備出得率近1.3%的產(chǎn)品，具有較高的抗菌活性，產(chǎn)品主要活性成分分子量小于20 kD，且穩(wěn)定性高，利于保存，是一種可行性較高的方法。

另外，有學(xué)者用層析技術(shù)分離出具有較高抗菌活性的蛋白/肽和凝集素等物質(zhì) (Jin et al.，2005;Hou et al.，2007;Tang et al.，2009)，但是工藝復(fù)雜，產(chǎn)品回收率低，不利于規(guī)模化應(yīng)用，且主要用于活性蛋白的鑒定研究。

3.2.4 其他

祝海娟(2013)對(duì)大麥蟲的提取工藝進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，堿法的最佳工藝條件為:反應(yīng)溫度60℃，堿液濃度1.0 g/100 mL、液固比(V/m)10∶1，、反應(yīng)時(shí)間2.0 h，蛋白提取率為81.54%，純度為82.13%;鹽法最佳工藝條件:反應(yīng)溫度50℃，鹽濃度1.0 g/100 mL、液固比(V/m)15∶1，反應(yīng)時(shí)間2.0 h，，蛋白提取率為53.74%，含量為75.01%;通過(guò)對(duì)5種酶制劑的篩選，確定堿性蛋白酶為最佳酶制劑，其最佳工藝條件:反應(yīng)溫度50℃，pH12.0，加酶量(E/S)5.0%，液固比(V/m)20∶1，反應(yīng)時(shí)間為2.5 h，蛋白提取率為86.96%，含量為76.22%。

李淑萍等(2009)對(duì)鋪道蟻蛋白提取工藝進(jìn)行研究，確定堿法最佳條件為:反應(yīng)溫度80℃，堿液濃度1%，液固比(V/m)15∶1，浸提時(shí)間60 min;鹽提最佳條件為:反應(yīng)溫度50℃，鹽液濃度1.5%，液固比 (V/m)15∶1，浸提時(shí)間60 min;Tris-HCl 法最佳條件為:反應(yīng)溫度20℃，pH8.3，液固比(V/m)15∶1，浸提時(shí)間90 min;三種方法中堿提蛋白法的蛋白質(zhì)得率最高，其次為鹽提蛋白法，而Tris-HCl 緩沖液提蛋白法最低。

金會(huì)鑫等(2012)對(duì)蚱蟬若蟲蛋白提取工藝進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，堿法的蛋白質(zhì)得率最高，其次為鹽法，Tris-HCl 法得率最低;堿提蛋白法的主要工藝條件為:反應(yīng)溫度60℃，堿液濃度0.5%、液固比(V/m)為5∶1，浸提時(shí)間60 min時(shí)蛋白質(zhì)得率有最大值;鹽提蛋白法的主要工藝條件為:反應(yīng)溫度40℃，鹽濃度1.5%，液固比(V/m)10∶1，浸提時(shí)間120 min 時(shí)蛋白質(zhì)得率有最大值;Tris-HCl 提蛋白法的主要工藝條件為:反應(yīng)溫度20℃，pH8.1，液固比(V/m)10∶1，浸提時(shí)間30 min 時(shí)蛋白質(zhì)得率有最大值。

4 問(wèn)題及對(duì)策

目前昆蟲蛋白研究方面存在的主要問(wèn)題:一是飼養(yǎng)技術(shù)還處于初級(jí)階段，并未實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，缺乏針對(duì)各個(gè)昆蟲飼養(yǎng)的系統(tǒng)研究;二是昆蟲蛋白產(chǎn)品的開發(fā)利用僅停留低水平層次，工業(yè)化程度不高;三是昆蟲蛋白市場(chǎng)不成熟，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)章制度并未制定，沒(méi)有監(jiān)管，暫時(shí)處于混亂狀態(tài);四是昆蟲蛋白安全性測(cè)定，有人食用昆蟲例如蝗蟲有過(guò)敏現(xiàn)象，甚至造成休克，危害身體健康。

對(duì)策:首先，加大科研投入，各個(gè)學(xué)科相互交叉，研究資源昆蟲飼養(yǎng)技術(shù)的同時(shí)開發(fā)自動(dòng)化養(yǎng)殖技術(shù);其次，加大昆蟲蛋白產(chǎn)品的開發(fā)利用，利用高新技術(shù)生產(chǎn)高價(jià)值昆蟲蛋白例如昆蟲活性多肽篩選藥物、制備疫苗、食品添加劑;再次，通過(guò)權(quán)威機(jī)構(gòu)制定相關(guān)法律法規(guī)，對(duì)昆蟲的生產(chǎn)、加工、銷售進(jìn)行監(jiān)管，提高昆蟲生產(chǎn)者的準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn);最后，建立檢測(cè)鑒定昆蟲蛋白產(chǎn)品安全性的技術(shù)體系。

References)

Adesina MA，Adejinmi OO，Omole AJ，et al.Performance of broilers’finishers fed graded levels of cassava peel-maggot meal-based diet mixtures［J］.Journal of Agriculture Forestry Society Sciences，2011，9，226-231.

Ai H.Studies on Isolation，Purification and Biological Activities of Antiviral Protein from the Larvae of Housefly，Musca domestica［D］.Wuhan:Huangzhong Agricultural University，2008.［艾輝.家蠅幼蟲抗病毒蛋白的分離純化及其生物活性研究［D］.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008］

Amir G，Rubinsky B，Horowitz L，et al.Prolonged 24-hour subzero preservation of heterotopieally transplanted rat hearts using antifreeze proteins derived from arctic fish［J］.Annals of Thoracic Surgery，2004，77 (5):1648-1655.

An XC，Lv X.Biological characteristics and nutritional value of black solder fly［J］.Yangzhi yu Siliao，2007，11:67-68.［安新城，呂欣.黑水虻的生物學(xué)特性及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值［J］.養(yǎng)殖與飼料，2007，11:67-68］

Bai G，Zhang YX.The assay and evaluation of nutrutional ingredients from house fly larvae ［J］.Journal of Baotou Medicine College，2010，26 (1):10-13.［白鋼，張翼翔.蠅蛆營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定與評(píng)價(jià)［J］.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26 (1):10-13］

Barroso FG，Haro CD，Sánchez-Muros M，et al.The potential of various insect species for use as food for fish ［J］.Aquaculture，2014，422:193-201.

Bodenheimer PS，Junk W.Insects as Human Food［M］.London:The Hague Publisher，1951:1-7.

Bodri MS，Cole ER.Black soldier fly (Hermetia illucens Linnaeus)as feed for the American alligator (Alligator mississippiensis Daudin)［J］.Georgia Journal of Science，2007，65 (2):82-87.

Cao XH，Mao DZ，Wang CL，et al.Immunomodulation effect of Musca domestica hemolymph and its extraction ［J］.Chinese Journal of Immunology，2009 (5):801-804.［曹小紅，毛德志，王春玲，等.家蠅蛹血淋巴及其提取物的免疫調(diào)節(jié)作用［J］.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2009 (5):801-804］

Cao XH，Zhou Q，Wang CL.Inhibition of K562 cell growth in vitro by the extract of Musca domestica larvae ［J］.Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology，2006，6 (1):316-319.［曹小紅，周強(qiáng)，王春玲.工程蠅蛆體內(nèi)活性物質(zhì)體外抗腫瘤作用的研究［J］.中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2006，6 (1):316-319］

Chang YQ，Qi YX，Sun XW，et al.Research on effects of protein in silkworm chrysalis on immunological function of mice ［J］.Food Science，2007，28 (9):520-523.［昌友權(quán)，戚穎欣，孫學(xué)偉，等.蠶蛹蛋白對(duì)小鼠免疫作用的研究［J］.食品科學(xué)，2007，28 (9):520-523］

Chen B，Cao JM，Chen PJ.Effects of antibacterial peptides of Musca domestica on growth performance and immune-related indicators in Litopenaeus vannamei ［J］.Fishery Sciences of China，2010，17 (2):258-266.［陳冰，曹俊明，陳平潔，等.家蠅抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能及免疫相關(guān)指標(biāo)的影響［J］.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2010，17 (2):258-266］

Chen FY，Li WC，Ji PX，et al.A new method for the extraction of pupae protein［J］.Guangdong Sericulture，2003，37 (2):34-38［陳芳艷，李文楚，紀(jì)平雄，等.一種提取蛹蛋白的新方法初探［J］.廣東蠶業(yè)，2003，37 (2):34-38］

Chen NS，Wei TT，Liao YZ.Effects of housefly larva meal and β-glucan on growth and immunity of Litpoenaeus vannamei ［J］.Journal of Fisheries of China，2007，31 (6):771-777.［陳乃松，魏濤濤，廖奕招.蠅蛆粉和β-葡聚糖對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和免疫的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2007，31 (6):771-777］

Chen XW.Component Analysis of Four Kinds of Insect Resource and Application of Tenebrio molitor L.in the Production of Piglets［D］.Tai'an:Shandong Agriculture University，2012.［陳曉偉.四種昆蟲資源成分分析及黃粉蟲粉在仔豬生產(chǎn)中的應(yīng)用研究［D］.泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012］

Cheng Q，Wu W，Ji BP.Progress on the extraction of chitin by microbial fermentation［J］.Food Science and Technology，2012，37 (3):40-44.［程倩，吳薇，籍保平.微生物發(fā)酵法提取甲殼素的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展［J］.食品科技，2012，37 (3):40-44］

ˇCiˇcková H，Pastor B，Kozánek M，et al.Biodegradation of pig manure by the housefly，Musca domestica:A viable ecological strategy for pig manure management［J］.PLoS ONE，2012，7 (3):1-9.

Cui YJ.Research and development of ant products ［J］.Food and Nutrition in China，2009，4:18-20［崔葉潔.螞蟻類食品研發(fā)現(xiàn)狀及發(fā)展前景［J］.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2009，4:18-20］

Dang XL.Studies on the Preparation and Purification of Natural Antimicrobial Peptides of Housefly［D］.Guangzhou:Sun Yat-sen University，2008.［黨向利.家蠅蛹天然抗菌肽的制備及其分離純化研究［D］.廣州:中山大學(xué)，2008］

Deng QY，Jiang YQ，Li GY.The laying effect of insect protein on layer［J］.Livestock and Poultry Industry，2008，10 (234):19-20.［鄧青云，姜益泉，李國(guó)元.昆蟲蛋白飼料對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋效果研究［J］.畜禽業(yè)，2008，10 (234):19-20］

Dou ZW.Study on Extracting Technology of Fat and Chitosan from Tenebrio Molitor［D］.Jinan:Shandong University，2009.［竇珍偉.黃粉蟲中油脂和殼聚糖的提取工藝研究［D］.濟(jì)南:山東大學(xué)，2009］

Duan YF.The Study on Nutritional Value and Biological Function of Locust［D］.Xi'an:Shanxi Normal University，2005.［段玉峰.蝗蟲營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與生物學(xué)功能研究［D］.西安:陜西師范大學(xué)，2005］

Feng Y.Studies on the Nutritive and Health Care Value of White Wax Scale (Ericerus pela Chavannes)and Evaluation of its Functional Factors［D］.Beijing:Chinese Academy of Forestry，2005.［馮穎.白蠟蟲營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值的研究及功能因子分析評(píng)價(jià)［D］.北京:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院，2005］

Finke MD.Nutrient Content of Insects.In:Capinera JL.Encyclopedia of Entomology［M］.Netherlands:Springer，2008.

Gong X，Shi YH，Le GW.Purification of antimicrobial peptide MDL-1 from Musca domestica larvae and its effect on Escherichia coli ultrastructure［J］.Acta Entomologica Sinica，2004，1:8-13.［宮霞，施用暉，樂(lè)國(guó)偉.家蠅幼蟲抗菌肽MDL-1 的分離純化及其對(duì)大腸桿菌超微結(jié)構(gòu)的影響［J］.昆蟲學(xué)報(bào)，2004，1:8-13］

Guo HP，Lin Y，Mo XY，et al.Study on the immunological and antibacterial activity of hemolymph from housefly larvae ［J］.Journal of Tropical Medicine，2006，4:385-387.［郭海萍，林媛，莫秀英，等.家蠅免疫血淋巴的抑菌作用及其免疫活性的研究［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2006，4:385-387］

Guo YB.The Study of Mastoparan-1 in Antagonizing Bacteria and Lipopolysaccharide in vivo and in vitro ［D］.Chongqing:Third Military Medical University，2005.［郭毅斌.蜂毒肽MP-1 抗菌/抗內(nèi)毒素作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究［D］.重慶:第三軍醫(yī)大學(xué)，2005］

He LF，Wan QH，Liu H，et al.The exploration of the antibactrial material from the Musca domestica larvae inducing the A375Apoptosis［J］.Chinese Journal of Vector Biology and Control，2006，17 (1):20-22.［賀莉芳，萬(wàn)啟惠，劉暉，等.家蠅幼蟲抗菌蛋白誘導(dǎo)黑色素瘤A375 細(xì)胞凋亡的探討［J］.中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2006，17 (1):20-22］

Hink WF.A serum-free medium for the culture of insect cells and production of recombinant proteins ［J］.In Vitro Cellular ＆Developmental Biology，1991，27 (5):397-401.

Hou LX，Shi YH，Zhai P，et al.Antibacterial activity and in vitro anti-tumor activity of the extract of the larvae of the housefly (Musca domestica) ［J］.Journal of Ethnopharmacology，2007，111 (2):227-23l.

Hu P，Zha LS.Records of edible insects from China［J］.Agriculture Science ＆ Technology，2009，10 (6):114-118.

Hu R，Ma YP，Xu JP，et al.Virulence of AcNPV · Bt · En formulation against Spodoptera exigua larvae［J］.Chinese Journal of Biological Control，2002，18 (1):47-49.［胡蓉，馬永平，徐進(jìn)平，等.cNPV·Bt·En 復(fù)配劑對(duì)甜菜夜蛾幼蟲的毒力測(cè)定［J］.中國(guó)生物防治，2002，18 (1):47-49］

Hu RX.Study on Extraction of Protein from Tenebrio mlitor and Preparation of Protein Powder［D］.Jinan:Shandong Polytechnic University，2009.［胡榮學(xué).黃粉蟲蛋白質(zhì)提取及蛋白粉制備工藝研究［D］.濟(jì)南:山東輕工業(yè)學(xué)院，2009］

Huang XW.Study on salt solution technology of Tenebrio molitor protein［J］.Food ＆ Machinery，2010，26 (3):150-152.［黃雄偉.鹽提法提取黃粉蟲蛋白質(zhì)工藝研究［J］.食品與機(jī)械，2010，26 (3):150-152］

Hwangbo J，Hong EC，Jang A，et al.Utilization of house fly-maggots，a feed supplement in the production of broiler chickens［J］.Journal of Environmental Biology，2009，30:609-614.

Jia SF，Ma YB.Study on the effect of fly maggot powder on weight gain of broiler chicken ［J］.Chinese Poultry，2007，29 (12):39.［賈生福，馬彥彪.蠅蛆粉對(duì)肉仔雞增重效果試驗(yàn)［J］.中國(guó)家禽，2007，29 (12):39］

Jin HX，Xie SA，Shi RJ，et al.Comparison of chemical extraction methods of the proteins from the larve of Cryptotympana pustulata［J］.Journal of Northwest Forestry University，2012，27 (6):128-130.［金會(huì)鑫，謝壽安，史睿杰，等.不同方法提取蚱蟬若蟲蛋白質(zhì)效果比較［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，27 (6):128-130］

Jin HY，Hui Q，Jun JY，et al.Preliminary studies on the zinc-induced metallothione in protein with antibacterial activity in housefly larvae，Musca domestica［J］.Acta Biologica Hungarica，2005，56:283-295.

Jinn TR，Tu WC，Lu CI，et al.Enhancing insecticidal efficacy of baculovirus by early expressing an insect neurotoxin，LqhIT2，in infected Trichoplusia ni larvae ［J］.Applied Microbiology and Biotechnology，2006，72 (6):1247-1253.

Lei TQ.Study on Cultivation of Musca domestica Larvae and Extraction Process，Antibacterial Activity of the Larval Proteins ［D］.Wuhan:Wuhan Polytechnic University，2014.［雷土青.蠅蛆的培養(yǎng)及其蛋白提取工藝與抗菌活性的研究［D］.武漢:武漢輕工大學(xué)，2014］

Li GY，Cui TB，Chen L.Preliminary study on production of antioxidant peptide from silkworm pupa protein using enzymatic hydrolysis method ［J］.Modern Food Science and Technology，2011，27 (7):810-814.［李高揚(yáng)，崔堂兵，陳亮.蠶蛹蛋白酶解制備抗氧化肽的初步研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2011，27 (7):810-814］

Li HC，Ji ZX，Gao SH.The nutrition and health functions of Tenebrio molitor Linneeus ［J］.Journal of Hebei Vocation-Technical Teachers College，2007，21 (3):17-21 ［李漢臣，吉志新，高素紅，等.黃粉蟲的營(yíng)養(yǎng)保健作用［J］.河北科技師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，21 (3):17-21］

Li J，Mu W，Jiang YY，et al.Development and utilization of several commonly seen insect protein feed ［J］.Grassland and Feed，2007，3:24-25.［李靜，穆巍，姜陽(yáng)有，等.幾種常見(jiàn)昆蟲蛋白質(zhì)飼料的開發(fā)與利用［J］.吉林畜牧獸醫(yī)，2007，3:24-25］

Li LL，Li S，Jiang N，et al.Selection of enzymolysis technologic parameter in defatted fly maggot［J］.Journal of Domestic Animal Ecology，2008，29 (3):53-55.［李玲玲，李帥，姜寧，等.蠅蛆生物活性肽的生產(chǎn)工藝研究［J］.家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2008，29 (3):53-55］

Li QY，Hu BL.Study of male silk moth，silkworm chrysalis，and silkworm sand ［J］.Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine，1996，29 (11)，45-47.［李琴韻，胡蓓莉.雄蠶蛾、蠶蛹及蠶砂的研究概況［J］.上海中醫(yī)藥雜志，1996，29 (11):45-47］

Li S，Zhang AZ，Li LL，et al.Study on extraction of fly larval protein and qualification of relative molecular weight ［J］.Special Wild Economic Animal and Plant Research，2008，1:15-18.［李帥，張愛(ài)忠，李玲玲，等.蠅蛆蛋白的提取及相對(duì)分子最的鑒定［J］.特產(chǎn)研究，2008，1:15-18］

Li SP，Xu XC，F(xiàn)eng AH.The comparison study on methods of extract protein from ant［J］.Journal of Xinyang Normal University，2009，22 (4):537-540.［李淑萍，徐心誠(chéng)，馮愛(ài)華.螞蟻蛋白質(zhì)提取方法的比較研究［J］.信陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，22 (4):537-540］

Li XB.The Application of Housefly (Musca domestica)Meal as Feed Additive in the Cultivation of Carassius auratus［D］.Guangzhou:Southern Medical University，2013.［李小波.家蠅幼蟲粉作為飼料添加劑在鯽魚養(yǎng)殖中的應(yīng)用［D］.廣州:南方醫(yī)科大學(xué):2013］

Li YR，Jiang YX，Li CP.Research development of Tenebrio molitor protein extraction［J］.Anhui Medical and Pharmaceutical Journal，2010，14 (7):751-753.［李奕冉，姜玉新，李朝品.黃粉蟲蛋白提取工藝的研究進(jìn)展［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14 (7):751-753］

Liu HY，Tong FD.The research progress of bee venom and its clinical application［J］.Traditional Chinese Medicine，2003，26 (6):456-458.［劉紅云，童富淡.蜂毒的研究進(jìn)展及其臨床應(yīng)用［J］.中藥材，2003，26 (6):456-458］

Liu QZ，Zhao HJ，Liu P，et al.Regeneration of tetraploid plants with cecropin MB39gene from“Royal Gala”apple ［J］.Acta Horticulturae Sinica，200l，28 (5):392-398.［劉慶忠，趙紅軍，劉鵬，等.抗菌肽MB39基因?qū)恕盎始腋吕病碧O果及其四倍體植株的培育［J］.園藝學(xué)報(bào)，2001，28 (5):392-398］

Li YJ，Liu FY，Meng N，et al.Humoral immunoreactions in pupae of the camphor silkworm，Dictyoploca japonica ［J］.Sericulture Science，2009，35 (1):170-173.［李亞潔，劉鳳云，孟楠，等.栗蠶蛹體液的一些免疫反應(yīng)［J］.蠶業(yè)科學(xué)，2009，35 (1):170-173］

Lou JX.Compound of silkworm chrysalis amino acid for the treatment of malignant tumor［J］.China Cancer，1995，4 (5):29.［樓錦新.蠶蛹復(fù)合氨基酸治療惡性腫瘤［J］.中國(guó)腫瘤，1995，4 (5):29］

Lu J，Zhong Y，Liu L，et al.Optimization of extraction technique for antibacterial peptides from Musca domestica larvae ［J］.Acta Entomologica Sinica，2007，50 (2):106-112.［陸婕，鐘雅，柳林，等.家蠅蛆抗菌肽提取工藝研究［J］.昆蟲學(xué)報(bào)，2007，50 (2):106-112］

Lu WJ，Han T，Zhang HY，et al.Study on enzymatic hydrolysis of protein in Tenebrio molitor with trypsin ［J］.Journal of Beijing University of Agriculture，2012，27 (4):77-80.［盧文靜，韓濤，張海英，等.黃粉蟲胰蛋白酶酶解工藝的研究［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，27 (4):77-80］

Luo Z.Study on Extraction of Tenebrio molitor Protein and its Physical and Chemical Properties ［D］.Changsha:Hunan Agricultural University，2009.［羅贊.黃粉蟲蛋白的提取及理化性質(zhì)的研究［D］.長(zhǎng)沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009］

Ma LL.Study on Extraction and Cationic Modification of Silkworm Pupa Protein ［D］.Taiyuan:Shanxi University of Science ＆Technology，2013.［馬林林.蠶蛹蛋白的提取與陽(yáng)離子化改性研究［D］.太原:陜西科技大學(xué)，2013］

Makkar HPS，Tran G，Heuzé V，et al.State-of-the-art on use of insects as animal feed［J］.Animal Feed Science and Technology，2014，197:1-33.

Mu LX，Liao ST，Zhan BS，et al.Optimization of ultrasonic treatment on preparation of silkworm pupa protein by alkaline extraction［J］.Chinese Journal of Tropical Crops，2014，35 (5):1005-1011.［穆利霞，廖森泰，詹寶瑟，等.超聲處理對(duì)堿法制備蠶蛹蛋白條件的優(yōu)化［J］.熱帶作物學(xué)報(bào)，2014，35 (5):1005-1011］

Newton GL，Booram CV，Barker RW，et al.Dried Hermetia illucens larvae meal as a supplement for swine ［J］.Journal of Animal Science，1977，44，395-400.

Newton L，Sheppard C，Watson DW，et al.Using the black soldier fly，Hermetia illucens，as a value-added tool for the management of swine manure.In:Report for Mike Williams，Director of the Animal and Poultry Waste Management Center［C］.North Carolina State University，2005.

Odesanya BO，Ajayi SO，Agbaogun BKO，et al.Comparative evaluation of nutritive value of maggots［J］.International Journal of Engineering Research，2011，2.

Ogunji JO，Nimptsch J，Wiegand C，et al.Evaluation of the influence of housefly maggot meal (magmeal)diets on catalase，glutathione Stransferase and glycogen concentration in the liver of Oreochromis niloticus fingerling ［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part A，Molecular ＆ Integrative Physiology，2007，147:942-947.

Okah U，Onwujiariri EB.Performance of finisher broiler chickens fed maggot meal as a replacement for fish meal ［J］.Journal of Agricultural Science and Technology，2012，8:471-477.

Ossey YB，Koumi AR，Koffi KM，et al.Use of soybean，bovine brain and maggot as sources of dietary protein in larval Heterobranchus longifilis (Valenciennes，1840)［J］.Journal of Animal and Plant Sciences，2012，15:2099-2108.

Pan YO.The Compare Researching of Technics of Extract Proteins from Insects［D］.Changchun:Jilin Agriculture University，2005.［潘怡歐.昆蟲蛋白質(zhì)提取工藝的比較研究［D］.長(zhǎng)春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005］

Pretorius Q.The Evaluation of Larvae of Musca domestica (common house fly)as Protein Source for Broiler Production ［D］.Cape Town:University of Stellenbosch，2011.

Qi F，Li GX.Insect nutrition and feeding value ［J］.Journal of Zhangjiakou Agriculture College，2001，17 (2):35-36.［祁芳，李崗生.昆蟲的營(yíng)養(yǎng)成分及飼用價(jià)值［J］.張家口農(nóng)專學(xué)報(bào)，2001，17 (2):35-36］

Qi YX，Meng J，Cao BY，et al.Immunoregulation functions of pupa polypeptides in mice［J］.Food Science，2009，30 (23):419-421.［戚穎欣，孟軍，曹柏營(yíng)，等.蠶蛹蛋白多肽對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究［J］.食品科學(xué)，2009，30 (23):419-421］

Qiang CK，Yang ZF，Du YZ，et al.Study on the antimicrobial activity of the defensive secretion of Tenebrio molitor L.［J］.Biotechnology，2006，1:22-24.［強(qiáng)承魁，楊兆芬，杜予州，等.黃粉蟲防御性分泌物抑菌活性的研究［J］.生物技術(shù)，2006，1:22-24］

Qiu XY，Liu Y，Chen XL，et al.Anticancer activity of antimicrobial peptides isolated from Musca domestica Vicina ［J］.Chineses Journal of Hygienic Insecticides ＆ Equipments.2003，9 (1):13-16.［邱曉燕，劉艷，陳小麟，等.舍蠅抗菌肽的提取及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用［J］.中華衛(wèi)生殺蟲藥械，2003，9 (1):13-16］

Qiu YH，Sun WD，Wang YH，et al.Study on the extraction and deodorization of protein from silkworm pupa ［J］.Chinese Food Additives，2012，3:133-136.［邱英華，孫衛(wèi)東，王玉海，等.蠶蛹蛋白提取與脫臭工藝研究［J］.中國(guó)食品添加劑，2012，3:133-136］

Ran WB，Zhao CX.Research progress on the development and utilization of proteins in edible insects［J］.Agriculture Science ＆Technology，2014，15 (4):683-687.

Schabel HG.Forest insects as food:Humans bite back［C］.Bangkok，Thailand，F(xiàn)AO:2010，37-64.

Sealey WM，Gaylord TG，Barrows FT，et al.Sensory analysis of rainbow trout，Oncorhynchus mykiss，fed enriched black soldier fly prepupae，Hermetia illucens［J］.Journal of the World Aquaculture Society，2011，42，34-45.

Shen LR，Ren YC.Progress on the development and utilization of edible and medicinal ants in our country［J］.Entomological Knowledge，1999，36 (4):251-253.［沈立榮，任玉翠.我國(guó)食用和藥用螞蟻的開發(fā)利用進(jìn)展.昆蟲知識(shí)，1999，36 (4):251-253］

Spiros NA.Development of serum-free media for Lepidopteran insect cell lines［J］.Baculovirus Insect Cell Expression Protocols，2008，388:155-185.

St-Hilaire S，Cranfill K，McGuire MA，et al.Fish offal recycling by the black soldier fly produces a foodstuff high in omega-3 fatty acids［J］.Journal of the World Aquaculture.Society，2007a，38，309-313.

St-Hilaire S，Sheppard C，Tomberlin JK，et al.Fly prepupae as a feedstuff for rainbow trout，Oncorhynchus mykiss［J］.Journal of the World Aquaculture Society，2007b，38，59-67.

Sun Y，Ren FZ，F(xiàn)an JB，et al.Optimization of the alkaline extraction of silkworm (Bombyx mori L.)pupae protein［J］.Transaction of the CSAE，2009，25 (2):285-289.［孫雁，任發(fā)政，范金波，等.堿法制備蠶蛹蛋白浸提條件的優(yōu)化［J］.農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2009，25 (2):285-289］

Tan GR，F(xiàn)u P，Wu JW，et al.Study on immunological effect of housefly protein in mice ［J］.Journal of Chinese Medicinal Materials，2007，6 (30):635-637.［覃容貴，傅平，吳建偉，等.蠅蛆蛋白粉對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］.中藥材，2007，6 (30):635-637］

Tang YL，Shi YH，Zhao W，et al.Interaction of MDpep9，a novel antimicrobial peptide from Chinese traditional edible larvae of housefly，with Escherichia coli genomic DNA ［J］.Food Chemistry，2009，l15:867-872.

Wachinger M，Kleinschmidt A，Winder N，et al.Antimicrobial peptides melittin and cecropin inhibit replication of human immunodeficiency virus I by suppressing viral gene expression［J］.Journal of General Virology，1998，79 (4):731-740.

Wang W，He GQ，Kim YC.The integrated using progress analysis and exploit foreground expectation of silkworm protein［J］.Food and Fermentation Industries，2006，32 (9):112-115.［王偉，何國(guó)慶，金英哲.蠶蛹蛋白的綜合利用現(xiàn)狀分析和開發(fā)前景展望［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2006，32 (9):112-115］

Wang WL，Wang SJ，Deng P.Extraction of oil from Tenebrio molitor L.by solvent［J］.Science and Technology of Food Industry.2008，10 (29):162-164.［王文亮，王守經(jīng)，鄧鵬.利用溶劑法對(duì)黃粉蟲油脂提取工藝的初探［J］.食品工業(yè)科技，2008，10 (29):162-164］

Wang YL，Tian H，Shi J，et al.The research progress of bots on animal immune function regulation ［J］.Culture and Breeding，2009，11:54-56.［王毅力，田河，石君，等.蠅蛆對(duì)動(dòng)物免疫機(jī)能調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展［J］.養(yǎng)殖與飼養(yǎng)，2009，11:54-56］

Wen CH，Qu CZ，Li DY，et al.Influence of immuned hemolymph of housefly on ultrastructures and cell cycles of SMMC-7721 cells［J］.Henan Journal of Oncology，2004，17 (2):100-103.［文彩虹，曲傳智，李東英，等.家蠅免疫血淋巴對(duì)SMMC-7721 肝癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和增殖周期的影響［J］.河南腫瘤學(xué)雜志，2004，17 (2):100-103］

Xie BL.Analysis and study of nutritional components of Tenebrio molitor［J］.Entomological Knowledge，1994，31 (3):175-176.［謝保令.黃粉蟲營(yíng)養(yǎng)成分的分析研究［J］.昆蟲知識(shí).1994，31 (3):175-176］

Yang AS，Chen HB，Zheng GY，et al.Study on preparation conditions of immuno-active peptides from silkworm pupa protein by enzyme hydrolysis［J］.Food Science and Technology，2008，29 (1):225-227.［楊安樹，陳紅兵，鄭功源，等.酶法水解蠶蛹蛋白制備免疫活性肽工藝的研究［J］.食品工業(yè)科技，2008，29 (1):225-227］

Yang JL，Yan J.Research progress of the development and utilization of insect proteins ［J］.Guangdong Agricultural Sciences，2011，2:114-146.［楊金蘭，閻杰.昆蟲蛋白開發(fā)利用的研究進(jìn)展［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，2:114-146］

Yang ML，Cheng YL.Optimization of the extraction of the silkworm chrysalis oil (SCO)from silkworm chrysalis by the orthogonal experimental design［J］.Food Research and Development，2006，27 (1):79-83.［楊梅琳，成玉粱.正交實(shí)驗(yàn)對(duì)蛹油提取工藝的優(yōu)化［J］.食品研究與開發(fā)，2006，27 (1):79-83］

Yang RL，Ren XY，Zhang YZ.Study on oral immunogenicity of HBsAg(PreS2+S)expressed in silkworm pupa ［J］.Immunological Journal，2003，19 (6):429-432 ［楊瑞麗，任學(xué)毅，張耀洲.家蠶蛹表達(dá)的乙型肝炎表面抗原中蛋白口服免疫原性的研究［J］.免疫學(xué)雜志，2003，19 (6):429-432］

Yang T.Study on the Tenebrio molitor Oil Removal and Preparation of Protein Powder［D］.Taigu:Shanxi Agriculture University，2014.［楊田.黃粉蟲油脂脫除及蛋白粉制備工藝研究［D］.太古:山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014］

Yang ZF，Lin YX，Chen YS，et al.Nutritional components of the larvae of Tenebrio molitor L.and its control［J］.Entomological Knowledge，1999，36 (2):97-100.［楊兆芬，林躍鑫，陳寅山，等.黃粉蟲幼蟲營(yíng)養(yǎng)成分分析和保健功能的實(shí)驗(yàn)研究［J］.昆蟲知識(shí)，1999，36 (2):97-100］

Yin K.Development of insect food［J］.New Technology of Country，2008，2:59.［尹凱.開發(fā)昆蟲食品潛力大［J］.農(nóng)村新技術(shù)，2008，2:59］

Yin WY，Peng L.Amino acids of silkworm pupa on the immune function of mice［J］.Journal of Health Toxicology，1998，12 (1):63.［尹武英，彭力.蠶蛹氨基酸對(duì)小鼠免疫功能影響［J］.衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，1998，12 (1):63］

Yu XD，Li B.Bioactive peptide from bee venom for adjuvant-induced arthritis in rats ［J］.Chinese Journal of Clinical rehabilitation，2005，9 (15):242-243.

Zhang JH，Zhou EF.Resources and Use of Feed［M］.Beijing:China Agriculture Press，2002.［張建紅，周恩芳.飼料資源及利用大全［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002］

Zhao DJ.Nutritional components and edible value of Tenebrio molitor［J］.Science Technology of Cereals，Oils and Foods，2000，2:41-42.［趙大軍.黃粉蟲的營(yíng)養(yǎng)成分及食用價(jià)值［J］.糧油食品科技，2000，2:41-42］

Zhao P，Dong XP，Ye N，et al.Study on technology for hydrolysis of chrysalis's protein and its products analysis［J］.Journal of Dalian Institute of Light Industry，2005，24 (2):123-127.［趙鵬，董秀萍，葉楠，等.酶解蠶蛹蛋白工藝的研究及產(chǎn)物分析［J］.大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24 (2):123-127］

Zheng W，Dong ZG，Wang XQ，et al.Effects of dietary fly maggot Musca domestica on growth and body compositions in Chinese shrimpFenneropenaeus chinensis Juveniles［J］.Fisheries Science，2010，29 (4):187-192.［鄭偉，董志國(guó)，王興強(qiáng)，等.投喂蠅蛆對(duì)中國(guó)明對(duì)蝦生長(zhǎng)及生化組成的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2010，29 (4):187-192］

Zhong Y，Shi SS，Liang XH，et al.Comparison of effect of extract insect protein with different methods［J］.Jilin Agriculture Science，2009，34 (3):58-60.［仲義，史樹森，梁煊赫，等.不同方法提取昆蟲蛋白質(zhì)效果比較［J］.吉林農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，34 (3):58-60］

Zhu HJ.Study on Protein Extraction from Zophobas morio ［D］.Urumqi:Xinjiang Agricultural University，2013.［祝海娟.大麥蟲蛋白質(zhì)的提取研究［D］.烏魯木齊:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013］