哈蟆油勻漿水溶液抗疲勞作用研究

蔡悅萍 張貴君 武亞楠 渠磊 鄭婧 高曉美 王道君

·論著·

哈蟆油勻漿水溶液抗疲勞作用研究

蔡悅萍 張貴君 武亞楠 渠磊 鄭婧 高曉美 王道君

目的 研究哈蟆油的抗疲勞作用。方法 制備0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液,采用小鼠灌胃給藥,按成人日攝入量的1、10、30倍(即0.3、3.3、10.0 mL/kgBW)連續(xù)灌胃30天,與陰性對照組比較,測定負(fù)重小鼠游泳后血清尿素、肝糖原和血乳酸的含量。結(jié)果 10.0 mL/kgBW劑量組能延長小鼠負(fù)重游泳時間,減少小鼠游泳時血清尿素和血乳酸的產(chǎn)生,與陰性對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)論 成人每天服用20mL的0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液(0.1 g哈蟆油)有明顯的抗疲勞作用。

哈蟆油; 抗疲勞; 血清尿素; 肝糖原; 血乳酸

中藥材哈蟆油(oviductus ranae)為蛙科動物中國林蛙Rana temporaria chensinensis David雌蛙的輸卵管,經(jīng)采制干燥而得。蛤蟆油味甘、咸,性平,具有補(bǔ)腎益精、健脾益胃、滋陰補(bǔ)腎、潤肺生津等功效[1],其藥理作用主要有抗疲勞、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、鎮(zhèn)咳祛痰、抗衰老、滋陰養(yǎng)顏、調(diào)節(jié)血脂、抗缺氧、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和應(yīng)激性及抗焦慮等[2],對體弱氣虛、精力耗損、記憶力不佳、神經(jīng)衰弱等療效較好,有滋補(bǔ)“軟黃金”的美譽(yù),具有非常高的應(yīng)用價值。目前蛤蟆油的研究主要是針對其復(fù)方及不同劑型的產(chǎn)品,具有一定的局限性[3]。本文從蛤蟆油的藥理作用—抗疲勞方面進(jìn)行研究,考察了較低含量的蛤蟆油對小鼠的負(fù)重游泳時間、血清尿素氮、肝糖原以及游泳前后血乳酸水平等指標(biāo)[4]的影響,為更高效地利用中藥材蛤蟆油及其產(chǎn)品開發(fā)提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試品

0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液,白色乳膠狀液體(吉林黃梔花藥業(yè)有限公司提供)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

ICR清潔級雄性小鼠,體質(zhì)量18～22 g[吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心,SCXK-(吉)2007-0003]。小鼠基礎(chǔ)飼料[長春市億思實(shí)驗(yàn)動物飼料廠,生產(chǎn)許可證號:SCXK-(吉)2010-0001]。

1.3 主要儀器與試劑

游泳箱(50 cm×50 cm×40 cm),電子天平、鉛皮、722分光光度計(jì)、秒表、血乳酸測

試酶膜(上海一基實(shí)業(yè)有限公司)、尿素測定試劑盒(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)、肝糖原試劑盒(南京市建成生物工程研究所)、TBA-120FR型全自動生化分析儀(日本東芝)、SBA-40C型生物傳感分析儀(山東省科學(xué)院生物研究所)。

1.4 劑量設(shè)計(jì)

按照成人(人體質(zhì)量以60 kg計(jì))每天攝入20mL 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液,即0.3 mL/kgBW,按照成人日攝入量的1、10、30倍設(shè)置日灌胃劑量,即0.3、3.3、10.0 mL/kgBW,分別取 3.3、33.3、100 mL成品加蒸餾水至200 mL,蒸餾水作陰性對照組,該試驗(yàn)不需設(shè)置糖對照組。各組小鼠每天灌胃量均為0.2 mL/10 gBW,連續(xù)灌胃30天。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 負(fù)重游泳試驗(yàn) 末次給予受試物30分鐘后,置小鼠在游泳箱中游泳,水深約30 cm,水溫(25±1)℃,鼠尾根部負(fù)荷5%體質(zhì)量的鉛皮。記錄小鼠自游泳開始至死亡時間,作為小鼠游泳時間。

1.5.2 血清尿素測定 末次給予受試物30分鐘,在溫度為(30±0.5)℃的水中游泳90分鐘,休息60分鐘摘眼球采血。取血清,進(jìn)行尿素含量測定。

1.5.3 肝糖原測定 末次給予受試物30分鐘處死小鼠取肝臟,經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干,精確稱取肝臟75 mg,每管加入225μL試劑盒提供的堿溶液,用薄膜封住管口,扎一透氣孔,沸水浴20分鐘,冷卻后加入7.2mL蒸餾水,充分混勻,按試劑說明書操作加入顯色劑,沸水浴5分鐘,用722分光光度計(jì)在620 nm波長進(jìn)行比色測定,按說明書提供的公式換算肝糖原。

1.5.4 血乳酸測定 末次給予受試物30分鐘后采血20μL,再在溫度為(30±0.5)℃的水中不負(fù)重游泳10分鐘,分別于游泳后立即(游泳后0分鐘)和游泳后休息20分鐘各采血20μL,采用生物傳感分析儀測定以上三個時間點(diǎn)的血乳酸值。(溶血劑及測定液均由山東省科學(xué)院生物研究所提供)。以上三個時間點(diǎn)的血乳酸曲線下面積(計(jì)算公式見后)判斷結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠負(fù)重游泳時間及小鼠增重的影響

由表1可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液30天,各實(shí)驗(yàn)組小鼠增重與陰性對照組比較無顯著性差異(P＞0.05),高劑量組游泳時間長于陰性對照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),說明0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液能延長小鼠負(fù)重游泳時間而對小鼠增重?zé)o影響。

2.2 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠血清尿素及小鼠增重的影響

由表2可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液30天,各實(shí)驗(yàn)組小鼠增重與陰性對照組比較無顯著性差異(P＞0.05),高、中劑量組小鼠游泳后血清尿素低于陰性對照組,且與陰性對照組比較有顯著性差異(P＜0.05),說明0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液具有抑制小鼠游泳后血清尿素升高的作用而對小鼠增重?zé)o影響。

表1 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠負(fù)重游泳時間及小鼠增重的影響(±s)

注:與陰性對照組比較,aP＜0.05。

組別 n 始重(g) 終重(g) 增重(g) 游泳時間(分鐘) 10 19.0±1.0 32.9±1.6 14.0±1.8 379±1.36 0.3 mL/kgBW組 10 19.3±0.7 32.9±3.0 13.6±3.0 3.28±1.33 3.3 mL/kgBW組 10 19.0±0.8 34.0±3.4 14.9±3.1 5.07±2.409 10.0 mL/kgBW組 10 19.3±0.9 34.2±2.8 14.9±2.5 5.56±2.23陰性對照組a

表2 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠游泳后血清尿素及小鼠增重的影響(±s)

注:與陰性對照組比較,aP＜0.05。

組別 n 始重(g) 終重(g) 增重(g) 血清尿素(mmol/L) 10 19.2±1.0 33.4±2.0 14.1±1.7 11.25±1.41 0.3 mL/kgBW組 10 19.1±0.7 32.8±3.2 13.7±3.1 11.19±1.26 3.3 mL/kgBW組 10 19.0±0.8 33.9±3.3 14.8±3.0 9.87±1.62a10.0 mL/kgBW組 10 19.3±0.9 33.9±2.5 14.6±2.2 9.49±1.53陰性對照組a

表3 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠肝糖原含量及小鼠增重的影響(±s)

組別 n 始重(g) 終重(g) 增重(g) 肝糖原(mg/g肝組織) 10 19.3±1.0 32.9±2.1 13.6±1.7 35.55±7.41 0.3 mL/kgBW組 10 19.4±0.9 32.8±3.1 13.4±2.7 35.70±11.23 3.3 mL/kgBW組 10 18.8±0.6 33.8±2.9 15.0±2.4 36.40±9.90 10.0 mL/kgBW組陰性對照組10 19.4±1.2 33.3±3.0 13.9±2.3 37.98±8.20

表4 給予0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液小鼠游泳前、后及休息20分鐘三個時間點(diǎn)血乳酸值(±s,mmol/L)

10 2.85±0.75 6.30±1.09 3.21±0.80 0.3 mL/kgBW組 10 2.85±0.76 6.00±1.17 2.94±0.83 3.3 mL/kgBW組 10 2.85±0.86 4.86±1.21 3.39±0.55 10.0 mL/kgBW組分鐘陰性對照組組別 n 游泳前(mmol/L) 游泳后0分鐘 游泳后休息20 10 2.82±0.74 4.65±0.65 3.12±0.47

表5 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠三個時間點(diǎn)血乳酸曲線下面積及小鼠增重的影響(±s)

注:與陰性對照組比較,aP＜0.05。

組別 n 始重(g) 終重(g) 增重(g) 三個時間點(diǎn)血乳酸曲線下面積(mmol/L) 10 19.4±1.1 33.3±2.5 13.9±2.5 140.9±25.6 0.3 mL/kgBW組 10 19.4±1.0 32.9±3.2 13.5±3.0 133.7±25.7 3.3 mL/kgBW組 10 18.9±0.7 33.8±3.4 14.9±2.9 121.1±26.3 10.0 mL/kgBW組 10 19.5±1.0 33.5±2.3 14.1±2.1 115.1±15.1陰性對照組a

2.3 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠肝糖原含量及小鼠增重的影響

由表3可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液30天,各實(shí)驗(yàn)組小鼠增重與陰性對照組比較無顯著性差異(P＞0.05),各劑量肝糖原含量與對照組相比未見顯著性差異(P＞0.05),說明0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對增加肝糖原儲備及小鼠增重未見影響。

2.4 0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液對小鼠血乳酸值及小鼠體重的影響

三個時間點(diǎn)血乳酸曲線下面積=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0分鐘血乳酸值+2×游泳后休息20分鐘血乳酸值)

由表5可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液30天,各實(shí)驗(yàn)組小鼠增重與陰性對照組比較無顯著性差異(P＞0.05),各實(shí)驗(yàn)組乳酸曲線下面積與陰性對照組相比均有減小,其中高劑量組小鼠游泳后三個時間點(diǎn)血乳酸曲線下面積有所降低,且與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),說明0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液能夠抑制游泳時血乳酸的產(chǎn)生而對小鼠增重?zé)o影響。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)灌胃給予小鼠0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液,連續(xù)灌胃30天,10.0 mL/kgBW劑量組能延長小鼠負(fù)重游泳時間,減少小鼠游泳時血清尿素的產(chǎn)生,減少血乳酸的產(chǎn)生;3.3 mL/kgBW劑量組能減少小鼠游泳時血清尿素的產(chǎn)生,與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),即0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液有緩解體力疲勞作用。

本研究采用的負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)是評價抗運(yùn)動性疲勞的重要指標(biāo)。另外許多研究認(rèn)為,體力性疲勞的產(chǎn)生與運(yùn)動機(jī)體的能量消耗、代謝物堆積和內(nèi)環(huán)境變化等因素密切相關(guān),故本研究針對這幾方面確定了抗疲勞的評價指標(biāo),即肝糖原的儲備、血乳酸水平及血清尿素含量[5]。通過分析研究結(jié)果可知,成人每天服用20 mL的0.5%g/mL哈蟆油勻漿水溶液(0.1 g哈蟆油)有較明顯的抗疲勞保健功能,這為臨床上更高效地利用中藥材蛤蟆油及其保健產(chǎn)品的開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。

[1] 常樂,劉汶,張琳.哈蟆油的研究進(jìn)展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報, 2011,28(5):350-409.

[2] 劉郁,劉連新.林蛙油的成分及藥理研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué), 2007,19(12):1-3.

[3] 王涵,趙雨,張梅.哈蟆油降血脂、耐缺氧和抗疲勞的功能研究[J].食品研究與開發(fā),2012,33(8):201-203.

[4] 張梅,趙雨,楊士慧.哈蟆油抗疲勞藥理活性研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,39(8):1978-1979.

[5] 李津明,宋茜,孫仁爽.林蛙油酶解前后抗疲勞作用對比研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2008,21(2):30-34.

Study on the anti fatigue effect of oviductus ranae homogenate solution

CAIYue-ping,ZHANGGui-jun,WU Ya-nan,et al. School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102,China

ZHANGGui-jun,E-mail:guijunzhang@163.com

Objective To study the anti-fatigue effectof Oviductus Ranae.Methods The Oviductus Ranae homogenate solution 0.5%g/mLwas prepared,themice were orally administered the drug into stomach at doses that1,10 and 30 times the average adult amount of to adult(0.3,3.3,10mL/kgBW)for 30 days,and then loaded them before determining the level of serum urea,liver glycogen and blood lactic acid.The results between intervention and control groups were then compared.Results Mice from 10 mL/kgBW dose group exhibited a prolonged the swimming time,and reduced blood urea nitrogen and blood lactic acid production levels.These differences were statistically significant between intervention the control groups(P＜0.05). Conclusion 0.5%g/mL of Oviductus Ranae homogenate solution serves anti-fatigue effects inmice.

Oviductus Ranae; Anti-fatigue; Serum urea; Glycogen; Blood lactate

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2015.11.016

2015-08-12)

(本文編輯:董歷華)

100102 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院[蔡悅萍(碩士研究生)、張貴君、武亞楠、渠磊、鄭婧、高曉美];北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥學(xué)部(蔡悅萍);吉林黃梔花藥業(yè)有限公司(王道君)

蔡悅萍(1984-),女,2009級在職碩士研究生。研究方向:中藥鑒定方法研究。E-mail:lovingcyp@126.com

張貴君(1954-),本科,教授,博士生導(dǎo)師。研究方向:中藥鑒定方法學(xué)、中藥藥效組分及藥效組分質(zhì)量評價體系研究。E-mail:guijunzhang@163.com