• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    CIA 小鼠血清中IL-27、IL-10、IL-17 的動(dòng)態(tài)分析①

    2015-03-18 11:41:40郭亞春封桂英宋鴻儒邢恩鴻趙曉菲承德醫(yī)學(xué)院承德067000
    中國免疫學(xué)雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:紅腫關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子

    郭亞春 封桂英 宋鴻儒 邢恩鴻 安 高 趙曉菲 (承德醫(yī)學(xué)院,承德 067000)

    類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、炎癥性、組織特異性的自身免疫性疾病,盡管很多研究證實(shí)多種細(xì)胞和因子參與了關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)和組織破壞,但抗原特異性T 細(xì)胞的激活被認(rèn)為是RA 發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié),CD4+T 細(xì)胞作為效應(yīng)T 細(xì)胞,參與免疫應(yīng)答的各個(gè)階段,在疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為Th1/Th2比例失衡在RA 發(fā)病過程中起重要作用[1],但隨著CD4+T 新亞群Th17/Treg 的發(fā)現(xiàn),越來越多的研究證實(shí)Th17/Treg 細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子的失衡參與了RA 發(fā)病過程[2,3],IL-27 是調(diào)控Th17/Treg 平衡的重要因子[4],但在RA 發(fā)病機(jī)制中的作用還未肯定,本研究以雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠為模型,觀察動(dòng)物血清中IL-27、IL-17、IL-10 的動(dòng)態(tài)變化,探討IL-27、IL-17、IL-10 與RA 疾病進(jìn)展的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 54 只雄性SPF 級(jí)DBA1/J 小鼠,7~8 周齡,[上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司,許可證號(hào)碼:SCXK(滬)2012-0002]。所有動(dòng)物于SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)室均自由飲食,室內(nèi)溫度20℃~25℃,室內(nèi)濕度為70%左右,定時(shí)換氣,保持通風(fēng),每日光照10 h。

    1.1.2 試劑與儀器 雞Ⅱ型膠原(Chondrex 公司),弗氏完全佐劑(Sigma 公司),Mouse Th1/Th2/Th17/Th22 13plex(eBioscience 公司),F(xiàn)low Cytomix Kit,F(xiàn)ACSCalibur 流式細(xì)胞儀(BD 公司),ESJ200-4電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 動(dòng)物模型建立 參考文獻(xiàn)[5],將雞Ⅱ型膠原2 mg/ml 與弗氏完全佐劑等體積混合乳化,制成Ⅱ型膠原乳劑,無菌條件下以每只0.1 ml 的劑量在小鼠背部及尾根部多點(diǎn)皮內(nèi)注射,第21 天相同劑量加強(qiáng)1次。對(duì)照組按照上述方法注射等量生理鹽水。

    1.2.2 關(guān)節(jié)癥狀評(píng)分 參考文獻(xiàn)[6],用關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis index,AI)作為判斷模型是否成功的標(biāo)準(zhǔn),肢體關(guān)節(jié)腫脹按0~Ⅳ級(jí)評(píng)分:0=無紅腫;Ⅰ=趾關(guān)節(jié)稍腫;Ⅱ=趾關(guān)節(jié)及足趾關(guān)節(jié)腫脹;Ⅲ=踝關(guān)節(jié)以下足爪腫脹;Ⅳ=包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。AI 值=四肢肢體關(guān)節(jié)腫脹級(jí)評(píng)分之和(0 級(jí)為0 分、Ⅰ級(jí)為1 分、Ⅱ級(jí)為2 分、Ⅲ級(jí)為3 分、Ⅳ級(jí)為4 分,總分為16 分),AI≥4 分為造模成功。AI指數(shù)越高,關(guān)節(jié)炎癥狀越嚴(yán)重。

    1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及取材 54 只DBA1/J 小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組18 只(疾病早中晚期各6 只)和模型組36 只(疾病早中晚期各12 只)。各組小鼠均無菌摘眼球取血,制備血清,-80℃保存。

    1.2.4 細(xì)胞因子的檢測(cè) 按試劑盒說明書將樣品中的待測(cè)物與連接有熒光珠的抗體緊密結(jié)合。加入與生物素結(jié)合的第二抗體混合物,特異性抗體與被第一抗體檢測(cè)到的待檢測(cè)物結(jié)合,加入三抗,蛋白鏈霉素-藻紅蛋白與生物素偶聯(lián)物和放射性熒光信號(hào)結(jié)合,通過辨別微球的熒光強(qiáng)度和型號(hào)大小,用Flow cytomix 法檢測(cè)血清中細(xì)胞因子IL-27、IL-17、IL-10 的水平。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)以±s 表示,組間比較用單因素方差分析,兩兩比較用t 檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 小鼠的一般情況、足爪腫脹度及AI 值 加強(qiáng)免疫后模型組小鼠活動(dòng)遲緩,進(jìn)食減少,體重較正常組明顯減輕(見表1),在模型鼠的背部及尾根部形成多處大小不一的潰瘍,至加強(qiáng)后7 d 95%以上模型鼠AI 指數(shù)在4 分以上。在CIA 鼠疾病的早期(加強(qiáng)免疫7 d),模型鼠足墊增厚,足爪充血紅腫明顯,運(yùn)動(dòng)受限。隨著疾病進(jìn)展,至加強(qiáng)14 天,即疾病中期,足爪充血紅腫達(dá)高峰,不能負(fù)重。至疾病進(jìn)展晚期(加強(qiáng)35 d),模型鼠足爪充血紅腫明顯減輕,但足墊依然增厚,足爪開始出現(xiàn)畸形,行動(dòng)不便;而正常對(duì)照組小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期一般狀態(tài)良好,四肢關(guān)節(jié)無明顯變化。各組小鼠足爪腫脹度動(dòng)態(tài)變化見表2,AI 指數(shù)變化見表3。

    2.2 CIA 小鼠血清細(xì)胞因子水平 模型組IL-27 在疾病早期顯著降低(P<0.05),直至疾病中期依然下降明顯(P<0.01),至疾病晚期開始恢復(fù),與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05);模型組IL-17 在疾病早期有增高趨勢(shì),但與正常組比較無明顯區(qū)別(P >0.05),到疾病中期明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05),疾病晚期逐漸下降,與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)。IL-10 在CIA 小鼠發(fā)病過程中,模型組與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)。CIA 小鼠血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化見表4。

    表1 各組小鼠在疾病不同時(shí)期體重變化情況( ±s,n=6,g)Tab.1 Changes of body weight of mice in each group at different time(±s,n=6,g)

    表1 各組小鼠在疾病不同時(shí)期體重變化情況( ±s,n=6,g)Tab.1 Changes of body weight of mice in each group at different time(±s,n=6,g)

    Note:1)P<0.01 vs normal group.

    表2 各組小鼠在疾病不同時(shí)期足爪腫脹度變化情況( ±s,n=6,cm)Tab.2 Paws swelling of mice in each group at different time(±s,n=6,cm)

    表2 各組小鼠在疾病不同時(shí)期足爪腫脹度變化情況( ±s,n=6,cm)Tab.2 Paws swelling of mice in each group at different time(±s,n=6,cm)

    Note:1)P<0.01 vs normal group.

    表3 各組小鼠在疾病不同時(shí)期AI 值動(dòng)態(tài)變化( ±s,n=6)Tab.3 AI of mice in each group at different time(±s,n=6)

    表3 各組小鼠在疾病不同時(shí)期AI 值動(dòng)態(tài)變化( ±s,n=6)Tab.3 AI of mice in each group at different time(±s,n=6)

    Note:1)P<0.05 vs normal group.

    表4 CIA 小鼠血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化(±s,n=6,pg/ml)Tab.4 Changes of cytokines of mice in each group at different time(±s,n=6,pg/ml)

    表4 CIA 小鼠血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化(±s,n=6,pg/ml)Tab.4 Changes of cytokines of mice in each group at different time(±s,n=6,pg/ml)

    Note:1)P<0.05 ;2)P<0.01 vs normal group.

    3 討論

    類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、炎癥性、組織特異性的自身免疫性疾病,目前為止,其發(fā)病原因并不是很清楚。許多研究表明,免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。IL-17 是Th17 分泌的主要細(xì)胞因子,Th17 細(xì)胞在RA 中的作用主要靠IL-17 來實(shí)現(xiàn),本研究也證明了在CIA 小鼠疾病的中期,即關(guān)節(jié)紅腫最嚴(yán)重時(shí)期,IL-17 水平明顯升高,說明IL-17 參與了CIA 小鼠的炎癥反應(yīng),與文獻(xiàn)報(bào)道一致。IL-17 可能通過單獨(dú)或與TNF-α、IL-1β 等協(xié)同刺激關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞表達(dá)IL-6、IL-8 等炎性因子,IL-17 也可能促進(jìn)滑膜血管新生、軟骨基質(zhì)的破壞等參與RA 的發(fā)?。?],有文獻(xiàn)表明抑制IL-17 可以改善RA 患者的病情[7]。

    Treg 細(xì)胞作為一種專職的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞亞群,在抑制自身免疫性疾病的發(fā)生,維持自身耐受中發(fā)揮重要作用。Treg 通過分泌IL-10 和TGF-β 發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。其中IL-10 是T 細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞的有效抑制因子,也可以抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子IL-1 和TNF-α 的釋放,促進(jìn)IL-1 受體拮抗劑和可溶性TNF-α 受體的產(chǎn)生[8]。在RA 中IL-10 可以抑制Th17 細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),促使Treg的生成,減輕RA 滑膜組織中淋巴細(xì)胞浸潤和破骨細(xì)胞的活化,減輕關(guān)節(jié)腫脹,抑制病變發(fā)展,發(fā)揮明顯的免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)功能[9,10]。也有研究表明RA 患者IL-10 的水平明顯高于對(duì)照組,但與活動(dòng)期組和緩解期組無顯著性差異,說明IL-10 可能參與了RA 的發(fā)?。?1],本研究發(fā)現(xiàn)在CIA 小鼠整個(gè)病程中IL-10 的變化與正常組比較無明顯區(qū)別,說明在CIA 小鼠的發(fā)病過程中,IL-10 的分泌紊亂可能失去了其有效的保護(hù)性調(diào)節(jié)功能。

    IL-27 是屬于IL-12 超家族的細(xì)胞因子,主要由樹突狀細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞分泌產(chǎn)生,已有的研究證明IL-27 在自身免疫和組織炎癥反應(yīng)中起到雙重的調(diào)控作用,是平衡促炎和抑炎的關(guān)鍵的細(xì)胞因子。IL-27 可以阻止Th2 細(xì)胞的分化而促進(jìn)Th1 細(xì)胞及其細(xì)胞因子的分泌,但在Th1 細(xì)胞高度極化時(shí),IL-27 可以限制Th1 型免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間,從而保護(hù)機(jī)體免受過度的免疫反應(yīng)的損傷[12],同時(shí)IL-27 可以促進(jìn)Treg 的分化而抑制Th17 的產(chǎn)生,在抑炎方面起重要作用[13]。有研究表明,在膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠(CIA)中,注射IL-27,可以使IL-6 和IL-17 等炎性細(xì)胞因子水平降低,改善關(guān)節(jié)炎的癥狀,另外還有研究表明IL-27 可能在RA 病情加重時(shí)具有免疫病理作用,有可能作為疾病活動(dòng)度的新的替代指標(biāo),用其作為治療自身免疫性疾病的抑制劑的效果并不樂觀[14]。本研究通過觀察小鼠血清中IL-27 在疾病的發(fā)病過程中動(dòng)態(tài)變化情況,發(fā)現(xiàn)在CIA 小鼠關(guān)節(jié)明顯紅腫的早期、中期IL-27 的水平較正常組明顯下降,說明IL-27 可能參與了CIA 小鼠的急性期的炎癥反應(yīng),其抑炎的免疫調(diào)控功能失調(diào),其機(jī)制可能在調(diào)節(jié)Th17/Treg及其分泌細(xì)胞因子IL-17、IL-10 平衡的方面出現(xiàn)障礙。而在小鼠關(guān)節(jié)紅腫減弱,關(guān)節(jié)畸形明顯的時(shí)期,IL-27 的水平和正常組無明顯區(qū)別,說明IL-27 有可能和關(guān)節(jié)畸形的發(fā)生有一定的關(guān)系。

    綜上所述,免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)參與了RA 的發(fā)生和發(fā)展,不同免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)平衡可能在RA 發(fā)病的不同時(shí)期起不同的作用,研究免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)平衡的調(diào)節(jié)可能為RA 的治療提供新的思路,但關(guān)于IL-27、IL-17、IL-10 的平衡與RA 疾病進(jìn)展關(guān)系的確切機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

    [1]Yudoh K,Matsuno H.Reduce expression of regulatory CD4+T cell subset is related to Th1/Th2 balance and diseas severity in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,2000,43:617-627.

    [2]徐 雪,呂 玲.白細(xì)胞介素-17 與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2008,12(10):719-721.

    [3]Sakaguchi S,Yamaguchi T,Nomura T,et al.Regulatory T cells and immune tolerance[J].Cell,2008,133(5):775.

    [4]Pflanz S,Hibbert L,Mattson J,et al.WSX-1 and glycoprotein 130 constitute a signal transducing receptor for IL-27[J].J Immunol,2004,172(4):2225-2231.

    [5]郭 明,封桂英,郭亞春,等.Th1 型細(xì)胞因子在膠原蛋白誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠血清中的動(dòng)態(tài)變化[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2014,30(3):250-253.

    [6]Welles WL,Batlisto JR.Suppression of adjuvant arthritis by antibodies specific for collagen typeⅡ[J].Immunol Commun,1981,10(8):673-685.

    [7]Hueber W.Effects of AIN457,a fully human antibody to interleukin-17A,on psoriasis,rheumatoid arthritis,and uveitis[J].Sci Translation Med,2010,2(52):52-72.

    [8]井申榮,鄒全明.白細(xì)胞介素10 的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志,2006,22(3):26-28,32.

    [9]Carter NA,Rosser EC,Mauri C.Interleukin-10 produced by B cells is crucial for the suppression of Th17/Th1 responses,induction of T regulatory type 1 cells and reduction of collagen -induced arthritis[J].Arthritis Res Ther,2012,14(1):R32.

    [10]Yang M,Deng J,Liu Y,et al.IL-10-producing regulatory B10 cells ameliorate collagen -induced arthritis via suppressing Th17 cell generation[J].Am J Pathol,2012,180(6):2375-2385.

    [11]安 新,高利常,劉白鷺.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IVMP-13、sICAIVM、IL-10 檢測(cè)的臨床意義[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2014,34(1):52-55.

    [12]Mascanfroni ID,Yeste A,Vieira SM,et al.IL-27 acts on DCs to suppress the T cell response and autoimmunity by inducing expression of the immunoregulatory molecule CD39[J].Nat Immunol,2013,14(10):1054-1063.

    [13]Pflanz S,Timans JC,Cheung J,et al.L-27,a hetarodimeric cytokine composec of EB13 and p28 protein,induces proliferation of nave CD4+T cells[J].Immunity,2002,16(6):779-790.

    [14]賴曉雯,張莉萍.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中IL-27、炎癥指標(biāo)和疾病活動(dòng)度的相關(guān)性分析[J].免疫學(xué)雜志,2014,30(6):536-538.

    猜你喜歡
    紅腫關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子
    Red panda Roshani visits Melbourne Zoo vet
    關(guān)節(jié)炎的“養(yǎng)護(hù)手冊(cè)”
    抗GD2抗體聯(lián)合細(xì)胞因子在高危NB治療中的研究進(jìn)展
    早期急性乳腺炎患者采用綜合護(hù)理對(duì)其紅腫、炎性癥狀改善時(shí)間的影響
    求醫(yī)更要求己的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎
    乳房紅腫可預(yù)防
    特別健康(2018年4期)2018-01-28 10:48:29
    X線、CT、MRI在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用對(duì)比
    躲避蚊子有方法
    急性心肌梗死病人細(xì)胞因子表達(dá)及臨床意義
    細(xì)胞因子在慢性腎缺血與腎小管-間質(zhì)纖維化過程中的作用
    国产成人免费观看mmmm| 18禁动态无遮挡网站| 天堂8中文在线网| 草草在线视频免费看| 大话2 男鬼变身卡| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久99热6这里只有精品| 国产黄片视频在线免费观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 熟女电影av网| 韩国高清视频一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 联通29元200g的流量卡| 嫩草影院入口| 少妇人妻 视频| 亚洲久久久国产精品| 一级黄片播放器| 91久久精品国产一区二区成人| 国产亚洲91精品色在线| freevideosex欧美| 欧美高清成人免费视频www| 黄色视频在线播放观看不卡| 色婷婷av一区二区三区视频| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久99热6这里只有精品| 午夜福利影视在线免费观看| 国产高清国产精品国产三级 | 麻豆国产97在线/欧美| 国产一区二区三区av在线| 亚洲色图av天堂| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 插阴视频在线观看视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品成人在线| 久久久久久久久久久免费av| 久久久久久人妻| 毛片女人毛片| 欧美一区二区亚洲| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 久久久久国产网址| 日日啪夜夜爽| 国产人妻一区二区三区在| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 成人黄色视频免费在线看| av福利片在线观看| 美女中出高潮动态图| 男人和女人高潮做爰伦理| 18禁在线播放成人免费| 一区二区av电影网| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日韩成人伦理影院| 久久久久久人妻| 成人无遮挡网站| 99热网站在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 最近中文字幕2019免费版| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久久久网色| 丰满迷人的少妇在线观看| 99热国产这里只有精品6| 亚洲av日韩在线播放| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产 一区 欧美 日韩| 美女视频免费永久观看网站| 久久国内精品自在自线图片| 国精品久久久久久国模美| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产爱豆传媒在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 久久亚洲国产成人精品v| h视频一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 免费看av在线观看网站| 精品一区二区三区视频在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 秋霞在线观看毛片| 精品少妇久久久久久888优播| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久久久久伊人网av| 99热国产这里只有精品6| 久久99蜜桃精品久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲第一av免费看| 欧美成人精品欧美一级黄| 熟女人妻精品中文字幕| 99久国产av精品国产电影| 高清不卡的av网站| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国内揄拍国产精品人妻在线| av福利片在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看 | 在线观看一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| av线在线观看网站| 晚上一个人看的免费电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 一本一本综合久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲欧洲日产国产| 99久久精品热视频| 成人国产麻豆网| 丰满乱子伦码专区| 最近中文字幕高清免费大全6| 精品午夜福利在线看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 中文欧美无线码| 午夜福利在线在线| 日日啪夜夜撸| 久久久亚洲精品成人影院| 边亲边吃奶的免费视频| av在线蜜桃| 欧美xxⅹ黑人| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品.久久久| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品不卡视频一区二区| 久久久a久久爽久久v久久| 免费看不卡的av| 成人综合一区亚洲| 亚洲三级黄色毛片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 婷婷色综合www| 性色avwww在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产av国产精品国产| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲精品久久午夜乱码| 我要看日韩黄色一级片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 三级经典国产精品| 日韩欧美一区视频在线观看 | 丰满少妇做爰视频| 我要看日韩黄色一级片| 精品一区在线观看国产| 久久久久久伊人网av| 国产极品天堂在线| 国产免费一级a男人的天堂| 看十八女毛片水多多多| 中国美白少妇内射xxxbb| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久国产网址| 一个人看视频在线观看www免费| av专区在线播放| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品一区蜜桃| 一个人免费看片子| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 丝袜脚勾引网站| 国产亚洲精品久久久com| 高清欧美精品videossex| 99久久精品国产国产毛片| 97热精品久久久久久| 简卡轻食公司| 在线 av 中文字幕| 久久午夜福利片| 一级二级三级毛片免费看| 中国国产av一级| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产黄片视频在线免费观看| 久久97久久精品| 性色avwww在线观看| 99久久综合免费| 国产精品欧美亚洲77777| 国产成人免费观看mmmm| 国产成人精品一,二区| 一级爰片在线观看| 国产精品国产av在线观看| 亚洲久久久国产精品| 老司机影院毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 色吧在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 日韩中文字幕视频在线看片 | 特大巨黑吊av在线直播| 色视频www国产| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲不卡免费看| 精品久久久噜噜| 另类亚洲欧美激情| 国产成人精品福利久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产高潮美女av| 交换朋友夫妻互换小说| 国产精品av视频在线免费观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久青草综合色| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久久久精品性色| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 99精国产麻豆久久婷婷| 身体一侧抽搐| 99热国产这里只有精品6| 十分钟在线观看高清视频www | av.在线天堂| av网站免费在线观看视频| 久久久午夜欧美精品| 成人黄色视频免费在线看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 午夜老司机福利剧场| 麻豆成人午夜福利视频| 免费黄色在线免费观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 这个男人来自地球电影免费观看 | 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美xxⅹ黑人| 精品久久久久久久久亚洲| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 高清不卡的av网站| 国产中年淑女户外野战色| videos熟女内射| 日韩国内少妇激情av| 身体一侧抽搐| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 舔av片在线| 亚洲四区av| 高清毛片免费看| 蜜桃在线观看..| 天堂中文最新版在线下载| av国产免费在线观看| 夫妻午夜视频| 久久韩国三级中文字幕| 女性被躁到高潮视频| 午夜精品国产一区二区电影| 91精品一卡2卡3卡4卡| 插逼视频在线观看| 美女主播在线视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲成人手机| 日韩一区二区三区影片| 97在线人人人人妻| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 18禁在线播放成人免费| 男人爽女人下面视频在线观看| av线在线观看网站| 麻豆成人av视频| 中文天堂在线官网| 中国三级夫妇交换| 国产成人免费无遮挡视频| 51国产日韩欧美| 国产精品三级大全| 一区二区三区四区激情视频| 乱系列少妇在线播放| 直男gayav资源| 高清视频免费观看一区二区| 高清黄色对白视频在线免费看 | 最新中文字幕久久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 热99国产精品久久久久久7| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久热这里只有精品99| 免费av不卡在线播放| 日日啪夜夜撸| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品一及| 国产成人91sexporn| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 在线观看一区二区三区激情| 看十八女毛片水多多多| 国产真实伦视频高清在线观看| 97在线视频观看| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 边亲边吃奶的免费视频| 黑人高潮一二区| av国产久精品久网站免费入址| 国产精品久久久久久久久免| 日韩在线高清观看一区二区三区| 永久免费av网站大全| 高清日韩中文字幕在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 99热全是精品| 日韩一区二区视频免费看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产成人免费观看mmmm| 欧美zozozo另类| 婷婷色av中文字幕| 男人添女人高潮全过程视频| 国产精品久久久久久久电影| 一区二区av电影网| 超碰av人人做人人爽久久| 一本一本综合久久| 国产 一区 欧美 日韩| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品福利在线免费观看| 精品午夜福利在线看| 国产精品熟女久久久久浪| 精品亚洲成国产av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美日韩在线观看h| 久久影院123| 午夜激情福利司机影院| av专区在线播放| 大话2 男鬼变身卡| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 免费看av在线观看网站| 人人妻人人看人人澡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 我的女老师完整版在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 日韩一区二区三区影片| 美女中出高潮动态图| 九九在线视频观看精品| 日本av免费视频播放| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久99热6这里只有精品| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲av中文av极速乱| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 免费观看的影片在线观看| 久久久久久久国产电影| av在线老鸭窝| 日韩免费高清中文字幕av| 1000部很黄的大片| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲国产av新网站| 一区二区三区四区激情视频| 日本黄色片子视频| 欧美人与善性xxx| 日本与韩国留学比较| 青青草视频在线视频观看| 欧美 日韩 精品 国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 观看av在线不卡| 91久久精品国产一区二区成人| 91精品国产九色| 日本黄色日本黄色录像| 欧美bdsm另类| 久久午夜福利片| 免费黄频网站在线观看国产| av天堂中文字幕网| 少妇被粗大猛烈的视频| 在线观看免费高清a一片| 国产深夜福利视频在线观看| .国产精品久久| 国产精品一及| 91精品伊人久久大香线蕉| 成年av动漫网址| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲av.av天堂| 99久国产av精品国产电影| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品一二三| 五月伊人婷婷丁香| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产a三级三级三级| 国产高清不卡午夜福利| 各种免费的搞黄视频| 在线免费十八禁| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 最近最新中文字幕大全电影3| 国产有黄有色有爽视频| 高清日韩中文字幕在线| 国产亚洲5aaaaa淫片| 日韩精品有码人妻一区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品一区二区在线观看99| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品久久久久久久久免| 熟女av电影| av播播在线观看一区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品第二区| 欧美+日韩+精品| av播播在线观看一区| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久久久性生活片| 日韩国内少妇激情av| 街头女战士在线观看网站| 久久99热这里只频精品6学生| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产高潮美女av| 青春草亚洲视频在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 伦精品一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 免费观看性生交大片5| 久久精品久久久久久久性| 黄色一级大片看看| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美+日韩+精品| 搡女人真爽免费视频火全软件| 老司机影院成人| 久久亚洲国产成人精品v| 草草在线视频免费看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 岛国毛片在线播放| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产成人精品久久久久久| 激情 狠狠 欧美| 久久精品国产a三级三级三级| 两个人的视频大全免费| 日韩成人av中文字幕在线观看| av在线app专区| 男人舔奶头视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 99热这里只有是精品50| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲欧美成人精品一区二区| 成人国产av品久久久| 亚洲av中文av极速乱| 国产av国产精品国产| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产成人a∨麻豆精品| 一级爰片在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲电影在线观看av| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 欧美日韩精品成人综合77777| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲精品日韩av片在线观看| 插阴视频在线观看视频| 蜜桃在线观看..| 七月丁香在线播放| 51国产日韩欧美| 大香蕉久久网| 亚洲国产欧美在线一区| 免费看日本二区| 国产免费一级a男人的天堂| 久久99热这里只频精品6学生| 在线观看一区二区三区激情| 日本与韩国留学比较| 最近手机中文字幕大全| 色5月婷婷丁香| 亚洲国产精品专区欧美| 免费在线观看成人毛片| 成人亚洲欧美一区二区av| 日韩强制内射视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 色视频在线一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| av播播在线观看一区| 一区二区三区乱码不卡18| 久久亚洲国产成人精品v| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 九九在线视频观看精品| 18禁在线播放成人免费| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲在久久综合| 国产精品三级大全| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产 一区精品| 少妇 在线观看| 色网站视频免费| 一级二级三级毛片免费看| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品偷伦视频观看了| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美精品国产亚洲| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 能在线免费看毛片的网站| 尾随美女入室| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 永久网站在线| 在线观看免费高清a一片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 最近的中文字幕免费完整| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av国产免费在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品久久久精品久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 看十八女毛片水多多多| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲图色成人| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久国产精品大桥未久av | 搡老乐熟女国产| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲av.av天堂| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 美女中出高潮动态图| 亚洲怡红院男人天堂| 91精品国产九色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲四区av| 高清午夜精品一区二区三区| 高清不卡的av网站| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产一区二区三区av在线| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产熟女欧美一区二区| 91久久精品国产一区二区成人| 人妻一区二区av| 国国产精品蜜臀av免费| 99热这里只有是精品50| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲成人一二三区av| 男女边摸边吃奶| 五月天丁香电影| 欧美三级亚洲精品| 日韩欧美精品免费久久| 十八禁网站网址无遮挡 | 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品日本国产第一区| 黑丝袜美女国产一区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品不卡视频一区二区| 国产精品免费大片| 精品久久久噜噜| 日韩三级伦理在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲av综合色区一区| 久久久午夜欧美精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99热网站在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲伊人久久精品综合| 丝袜脚勾引网站| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费观看在线日韩| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 一个人看视频在线观看www免费| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 男女边吃奶边做爰视频| 精品久久久噜噜| 九色成人免费人妻av| 国产伦精品一区二区三区四那| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久久人妻| 亚洲美女视频黄频| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一个人免费看片子| 大码成人一级视频| 国产免费又黄又爽又色| 久久久国产一区二区| 国产淫语在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 日韩欧美一区视频在线观看 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 男女下面进入的视频免费午夜| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲第一av免费看| 777米奇影视久久| 免费人成在线观看视频色| xxx大片免费视频| 激情五月婷婷亚洲| 色婷婷av一区二区三区视频| 天堂8中文在线网| av福利片在线观看| 美女福利国产在线 | 内地一区二区视频在线| 高清日韩中文字幕在线| 色5月婷婷丁香| 日韩中文字幕视频在线看片 |