• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    CIA 小鼠血清中IL-27、IL-10、IL-17 的動(dòng)態(tài)分析①

    2015-03-18 11:41:40郭亞春封桂英宋鴻儒邢恩鴻趙曉菲承德醫(yī)學(xué)院承德067000
    中國免疫學(xué)雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:紅腫關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子

    郭亞春 封桂英 宋鴻儒 邢恩鴻 安 高 趙曉菲 (承德醫(yī)學(xué)院,承德 067000)

    類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、炎癥性、組織特異性的自身免疫性疾病,盡管很多研究證實(shí)多種細(xì)胞和因子參與了關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)和組織破壞,但抗原特異性T 細(xì)胞的激活被認(rèn)為是RA 發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié),CD4+T 細(xì)胞作為效應(yīng)T 細(xì)胞,參與免疫應(yīng)答的各個(gè)階段,在疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為Th1/Th2比例失衡在RA 發(fā)病過程中起重要作用[1],但隨著CD4+T 新亞群Th17/Treg 的發(fā)現(xiàn),越來越多的研究證實(shí)Th17/Treg 細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子的失衡參與了RA 發(fā)病過程[2,3],IL-27 是調(diào)控Th17/Treg 平衡的重要因子[4],但在RA 發(fā)病機(jī)制中的作用還未肯定,本研究以雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠為模型,觀察動(dòng)物血清中IL-27、IL-17、IL-10 的動(dòng)態(tài)變化,探討IL-27、IL-17、IL-10 與RA 疾病進(jìn)展的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 54 只雄性SPF 級(jí)DBA1/J 小鼠,7~8 周齡,[上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司,許可證號(hào)碼:SCXK(滬)2012-0002]。所有動(dòng)物于SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)室均自由飲食,室內(nèi)溫度20℃~25℃,室內(nèi)濕度為70%左右,定時(shí)換氣,保持通風(fēng),每日光照10 h。

    1.1.2 試劑與儀器 雞Ⅱ型膠原(Chondrex 公司),弗氏完全佐劑(Sigma 公司),Mouse Th1/Th2/Th17/Th22 13plex(eBioscience 公司),F(xiàn)low Cytomix Kit,F(xiàn)ACSCalibur 流式細(xì)胞儀(BD 公司),ESJ200-4電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 動(dòng)物模型建立 參考文獻(xiàn)[5],將雞Ⅱ型膠原2 mg/ml 與弗氏完全佐劑等體積混合乳化,制成Ⅱ型膠原乳劑,無菌條件下以每只0.1 ml 的劑量在小鼠背部及尾根部多點(diǎn)皮內(nèi)注射,第21 天相同劑量加強(qiáng)1次。對(duì)照組按照上述方法注射等量生理鹽水。

    1.2.2 關(guān)節(jié)癥狀評(píng)分 參考文獻(xiàn)[6],用關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis index,AI)作為判斷模型是否成功的標(biāo)準(zhǔn),肢體關(guān)節(jié)腫脹按0~Ⅳ級(jí)評(píng)分:0=無紅腫;Ⅰ=趾關(guān)節(jié)稍腫;Ⅱ=趾關(guān)節(jié)及足趾關(guān)節(jié)腫脹;Ⅲ=踝關(guān)節(jié)以下足爪腫脹;Ⅳ=包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。AI 值=四肢肢體關(guān)節(jié)腫脹級(jí)評(píng)分之和(0 級(jí)為0 分、Ⅰ級(jí)為1 分、Ⅱ級(jí)為2 分、Ⅲ級(jí)為3 分、Ⅳ級(jí)為4 分,總分為16 分),AI≥4 分為造模成功。AI指數(shù)越高,關(guān)節(jié)炎癥狀越嚴(yán)重。

    1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及取材 54 只DBA1/J 小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組18 只(疾病早中晚期各6 只)和模型組36 只(疾病早中晚期各12 只)。各組小鼠均無菌摘眼球取血,制備血清,-80℃保存。

    1.2.4 細(xì)胞因子的檢測(cè) 按試劑盒說明書將樣品中的待測(cè)物與連接有熒光珠的抗體緊密結(jié)合。加入與生物素結(jié)合的第二抗體混合物,特異性抗體與被第一抗體檢測(cè)到的待檢測(cè)物結(jié)合,加入三抗,蛋白鏈霉素-藻紅蛋白與生物素偶聯(lián)物和放射性熒光信號(hào)結(jié)合,通過辨別微球的熒光強(qiáng)度和型號(hào)大小,用Flow cytomix 法檢測(cè)血清中細(xì)胞因子IL-27、IL-17、IL-10 的水平。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)以±s 表示,組間比較用單因素方差分析,兩兩比較用t 檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 小鼠的一般情況、足爪腫脹度及AI 值 加強(qiáng)免疫后模型組小鼠活動(dòng)遲緩,進(jìn)食減少,體重較正常組明顯減輕(見表1),在模型鼠的背部及尾根部形成多處大小不一的潰瘍,至加強(qiáng)后7 d 95%以上模型鼠AI 指數(shù)在4 分以上。在CIA 鼠疾病的早期(加強(qiáng)免疫7 d),模型鼠足墊增厚,足爪充血紅腫明顯,運(yùn)動(dòng)受限。隨著疾病進(jìn)展,至加強(qiáng)14 天,即疾病中期,足爪充血紅腫達(dá)高峰,不能負(fù)重。至疾病進(jìn)展晚期(加強(qiáng)35 d),模型鼠足爪充血紅腫明顯減輕,但足墊依然增厚,足爪開始出現(xiàn)畸形,行動(dòng)不便;而正常對(duì)照組小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期一般狀態(tài)良好,四肢關(guān)節(jié)無明顯變化。各組小鼠足爪腫脹度動(dòng)態(tài)變化見表2,AI 指數(shù)變化見表3。

    2.2 CIA 小鼠血清細(xì)胞因子水平 模型組IL-27 在疾病早期顯著降低(P<0.05),直至疾病中期依然下降明顯(P<0.01),至疾病晚期開始恢復(fù),與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05);模型組IL-17 在疾病早期有增高趨勢(shì),但與正常組比較無明顯區(qū)別(P >0.05),到疾病中期明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05),疾病晚期逐漸下降,與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)。IL-10 在CIA 小鼠發(fā)病過程中,模型組與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)。CIA 小鼠血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化見表4。

    表1 各組小鼠在疾病不同時(shí)期體重變化情況( ±s,n=6,g)Tab.1 Changes of body weight of mice in each group at different time(±s,n=6,g)

    表1 各組小鼠在疾病不同時(shí)期體重變化情況( ±s,n=6,g)Tab.1 Changes of body weight of mice in each group at different time(±s,n=6,g)

    Note:1)P<0.01 vs normal group.

    表2 各組小鼠在疾病不同時(shí)期足爪腫脹度變化情況( ±s,n=6,cm)Tab.2 Paws swelling of mice in each group at different time(±s,n=6,cm)

    表2 各組小鼠在疾病不同時(shí)期足爪腫脹度變化情況( ±s,n=6,cm)Tab.2 Paws swelling of mice in each group at different time(±s,n=6,cm)

    Note:1)P<0.01 vs normal group.

    表3 各組小鼠在疾病不同時(shí)期AI 值動(dòng)態(tài)變化( ±s,n=6)Tab.3 AI of mice in each group at different time(±s,n=6)

    表3 各組小鼠在疾病不同時(shí)期AI 值動(dòng)態(tài)變化( ±s,n=6)Tab.3 AI of mice in each group at different time(±s,n=6)

    Note:1)P<0.05 vs normal group.

    表4 CIA 小鼠血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化(±s,n=6,pg/ml)Tab.4 Changes of cytokines of mice in each group at different time(±s,n=6,pg/ml)

    表4 CIA 小鼠血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化(±s,n=6,pg/ml)Tab.4 Changes of cytokines of mice in each group at different time(±s,n=6,pg/ml)

    Note:1)P<0.05 ;2)P<0.01 vs normal group.

    3 討論

    類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、炎癥性、組織特異性的自身免疫性疾病,目前為止,其發(fā)病原因并不是很清楚。許多研究表明,免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。IL-17 是Th17 分泌的主要細(xì)胞因子,Th17 細(xì)胞在RA 中的作用主要靠IL-17 來實(shí)現(xiàn),本研究也證明了在CIA 小鼠疾病的中期,即關(guān)節(jié)紅腫最嚴(yán)重時(shí)期,IL-17 水平明顯升高,說明IL-17 參與了CIA 小鼠的炎癥反應(yīng),與文獻(xiàn)報(bào)道一致。IL-17 可能通過單獨(dú)或與TNF-α、IL-1β 等協(xié)同刺激關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞表達(dá)IL-6、IL-8 等炎性因子,IL-17 也可能促進(jìn)滑膜血管新生、軟骨基質(zhì)的破壞等參與RA 的發(fā)?。?],有文獻(xiàn)表明抑制IL-17 可以改善RA 患者的病情[7]。

    Treg 細(xì)胞作為一種專職的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞亞群,在抑制自身免疫性疾病的發(fā)生,維持自身耐受中發(fā)揮重要作用。Treg 通過分泌IL-10 和TGF-β 發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。其中IL-10 是T 細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞的有效抑制因子,也可以抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子IL-1 和TNF-α 的釋放,促進(jìn)IL-1 受體拮抗劑和可溶性TNF-α 受體的產(chǎn)生[8]。在RA 中IL-10 可以抑制Th17 細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),促使Treg的生成,減輕RA 滑膜組織中淋巴細(xì)胞浸潤和破骨細(xì)胞的活化,減輕關(guān)節(jié)腫脹,抑制病變發(fā)展,發(fā)揮明顯的免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)功能[9,10]。也有研究表明RA 患者IL-10 的水平明顯高于對(duì)照組,但與活動(dòng)期組和緩解期組無顯著性差異,說明IL-10 可能參與了RA 的發(fā)?。?1],本研究發(fā)現(xiàn)在CIA 小鼠整個(gè)病程中IL-10 的變化與正常組比較無明顯區(qū)別,說明在CIA 小鼠的發(fā)病過程中,IL-10 的分泌紊亂可能失去了其有效的保護(hù)性調(diào)節(jié)功能。

    IL-27 是屬于IL-12 超家族的細(xì)胞因子,主要由樹突狀細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞分泌產(chǎn)生,已有的研究證明IL-27 在自身免疫和組織炎癥反應(yīng)中起到雙重的調(diào)控作用,是平衡促炎和抑炎的關(guān)鍵的細(xì)胞因子。IL-27 可以阻止Th2 細(xì)胞的分化而促進(jìn)Th1 細(xì)胞及其細(xì)胞因子的分泌,但在Th1 細(xì)胞高度極化時(shí),IL-27 可以限制Th1 型免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間,從而保護(hù)機(jī)體免受過度的免疫反應(yīng)的損傷[12],同時(shí)IL-27 可以促進(jìn)Treg 的分化而抑制Th17 的產(chǎn)生,在抑炎方面起重要作用[13]。有研究表明,在膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠(CIA)中,注射IL-27,可以使IL-6 和IL-17 等炎性細(xì)胞因子水平降低,改善關(guān)節(jié)炎的癥狀,另外還有研究表明IL-27 可能在RA 病情加重時(shí)具有免疫病理作用,有可能作為疾病活動(dòng)度的新的替代指標(biāo),用其作為治療自身免疫性疾病的抑制劑的效果并不樂觀[14]。本研究通過觀察小鼠血清中IL-27 在疾病的發(fā)病過程中動(dòng)態(tài)變化情況,發(fā)現(xiàn)在CIA 小鼠關(guān)節(jié)明顯紅腫的早期、中期IL-27 的水平較正常組明顯下降,說明IL-27 可能參與了CIA 小鼠的急性期的炎癥反應(yīng),其抑炎的免疫調(diào)控功能失調(diào),其機(jī)制可能在調(diào)節(jié)Th17/Treg及其分泌細(xì)胞因子IL-17、IL-10 平衡的方面出現(xiàn)障礙。而在小鼠關(guān)節(jié)紅腫減弱,關(guān)節(jié)畸形明顯的時(shí)期,IL-27 的水平和正常組無明顯區(qū)別,說明IL-27 有可能和關(guān)節(jié)畸形的發(fā)生有一定的關(guān)系。

    綜上所述,免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)參與了RA 的發(fā)生和發(fā)展,不同免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)平衡可能在RA 發(fā)病的不同時(shí)期起不同的作用,研究免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)平衡的調(diào)節(jié)可能為RA 的治療提供新的思路,但關(guān)于IL-27、IL-17、IL-10 的平衡與RA 疾病進(jìn)展關(guān)系的確切機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

    [1]Yudoh K,Matsuno H.Reduce expression of regulatory CD4+T cell subset is related to Th1/Th2 balance and diseas severity in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,2000,43:617-627.

    [2]徐 雪,呂 玲.白細(xì)胞介素-17 與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2008,12(10):719-721.

    [3]Sakaguchi S,Yamaguchi T,Nomura T,et al.Regulatory T cells and immune tolerance[J].Cell,2008,133(5):775.

    [4]Pflanz S,Hibbert L,Mattson J,et al.WSX-1 and glycoprotein 130 constitute a signal transducing receptor for IL-27[J].J Immunol,2004,172(4):2225-2231.

    [5]郭 明,封桂英,郭亞春,等.Th1 型細(xì)胞因子在膠原蛋白誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠血清中的動(dòng)態(tài)變化[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2014,30(3):250-253.

    [6]Welles WL,Batlisto JR.Suppression of adjuvant arthritis by antibodies specific for collagen typeⅡ[J].Immunol Commun,1981,10(8):673-685.

    [7]Hueber W.Effects of AIN457,a fully human antibody to interleukin-17A,on psoriasis,rheumatoid arthritis,and uveitis[J].Sci Translation Med,2010,2(52):52-72.

    [8]井申榮,鄒全明.白細(xì)胞介素10 的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志,2006,22(3):26-28,32.

    [9]Carter NA,Rosser EC,Mauri C.Interleukin-10 produced by B cells is crucial for the suppression of Th17/Th1 responses,induction of T regulatory type 1 cells and reduction of collagen -induced arthritis[J].Arthritis Res Ther,2012,14(1):R32.

    [10]Yang M,Deng J,Liu Y,et al.IL-10-producing regulatory B10 cells ameliorate collagen -induced arthritis via suppressing Th17 cell generation[J].Am J Pathol,2012,180(6):2375-2385.

    [11]安 新,高利常,劉白鷺.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IVMP-13、sICAIVM、IL-10 檢測(cè)的臨床意義[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2014,34(1):52-55.

    [12]Mascanfroni ID,Yeste A,Vieira SM,et al.IL-27 acts on DCs to suppress the T cell response and autoimmunity by inducing expression of the immunoregulatory molecule CD39[J].Nat Immunol,2013,14(10):1054-1063.

    [13]Pflanz S,Timans JC,Cheung J,et al.L-27,a hetarodimeric cytokine composec of EB13 and p28 protein,induces proliferation of nave CD4+T cells[J].Immunity,2002,16(6):779-790.

    [14]賴曉雯,張莉萍.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中IL-27、炎癥指標(biāo)和疾病活動(dòng)度的相關(guān)性分析[J].免疫學(xué)雜志,2014,30(6):536-538.

    猜你喜歡
    紅腫關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子
    Red panda Roshani visits Melbourne Zoo vet
    關(guān)節(jié)炎的“養(yǎng)護(hù)手冊(cè)”
    抗GD2抗體聯(lián)合細(xì)胞因子在高危NB治療中的研究進(jìn)展
    早期急性乳腺炎患者采用綜合護(hù)理對(duì)其紅腫、炎性癥狀改善時(shí)間的影響
    求醫(yī)更要求己的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎
    乳房紅腫可預(yù)防
    特別健康(2018年4期)2018-01-28 10:48:29
    X線、CT、MRI在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用對(duì)比
    躲避蚊子有方法
    急性心肌梗死病人細(xì)胞因子表達(dá)及臨床意義
    細(xì)胞因子在慢性腎缺血與腎小管-間質(zhì)纖維化過程中的作用
    午夜免费激情av| 91在线观看av| 午夜福利18| 一级毛片女人18水好多| 国产精品 国内视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 在线播放国产精品三级| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久99热这里只有精品18| 此物有八面人人有两片| 一a级毛片在线观看| 免费看a级黄色片| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲男人天堂网一区| 欧美性猛交黑人性爽| 性色av乱码一区二区三区2| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 在线观看免费视频日本深夜| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲精品在线美女| 国产亚洲av高清不卡| 精品日产1卡2卡| 后天国语完整版免费观看| 久久99热这里只有精品18| 特级一级黄色大片| 日韩有码中文字幕| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲av成人av| 亚洲精品一区av在线观看| 曰老女人黄片| 国产精品永久免费网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| a在线观看视频网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品在线美女| 亚洲人成网站高清观看| 精品欧美一区二区三区在线| 日韩高清综合在线| 久久精品国产清高在天天线| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美成人午夜精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 在线播放国产精品三级| 日韩有码中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| a级毛片在线看网站| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久水蜜桃国产精品网| 免费看a级黄色片| 岛国在线观看网站| 亚洲人与动物交配视频| 午夜福利欧美成人| 激情在线观看视频在线高清| 日日爽夜夜爽网站| 最近最新中文字幕大全电影3| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲精品色激情综合| 国产成年人精品一区二区| 9191精品国产免费久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久久久久九九精品二区国产 | 国产一区在线观看成人免费| 日本三级黄在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美zozozo另类| 首页视频小说图片口味搜索| 久久久水蜜桃国产精品网| 妹子高潮喷水视频| 怎么达到女性高潮| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久午夜亚洲精品久久| 久久九九热精品免费| 美女黄网站色视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 国内揄拍国产精品人妻在线| 免费在线观看影片大全网站| 国产成人系列免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 搡老妇女老女人老熟妇| a在线观看视频网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人18禁在线播放| 午夜激情av网站| www.自偷自拍.com| 在线永久观看黄色视频| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 老司机福利观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 特级一级黄色大片| 精品电影一区二区在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久久久久久午夜电影| 免费观看人在逋| 首页视频小说图片口味搜索| 国产探花在线观看一区二区| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| av中文乱码字幕在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 啦啦啦免费观看视频1| 日本免费a在线| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 成人国产一区最新在线观看| 88av欧美| 欧美日韩黄片免| 黑人操中国人逼视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一本久久中文字幕| 制服丝袜大香蕉在线| 免费观看人在逋| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲自拍偷在线| 999久久久国产精品视频| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产成+人综合+亚洲专区| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲av片天天在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 欧美日韩一级在线毛片| 国产av不卡久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日本熟妇午夜| 麻豆国产av国片精品| 女警被强在线播放| 精品久久久久久,| 一级毛片女人18水好多| 后天国语完整版免费观看| 两个人看的免费小视频| 国产高清视频在线播放一区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲片人在线观看| 精品高清国产在线一区| 午夜福利视频1000在线观看| 身体一侧抽搐| 亚洲av成人一区二区三| 国产亚洲精品久久久久5区| 1024香蕉在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲一区高清亚洲精品| 在线观看免费午夜福利视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 99在线视频只有这里精品首页| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久久精品欧美日韩精品| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜精品久久久久久毛片777| 日本一二三区视频观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久99热这里只有精品18| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲国产精品合色在线| 看黄色毛片网站| 中文字幕高清在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲av成人av| 18禁观看日本| 老熟妇仑乱视频hdxx| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲av成人一区二区三| 日韩欧美在线乱码| 免费在线观看亚洲国产| 国产视频内射| 色av中文字幕| 久久伊人香网站| 久久久国产精品麻豆| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 午夜免费观看网址| 亚洲乱码一区二区免费版| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久久久久人人人人人| 久久精品人妻少妇| 久久久久久九九精品二区国产 | 欧美成人午夜精品| 欧美日韩精品网址| 白带黄色成豆腐渣| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产午夜精品久久久久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产亚洲精品久久久久5区| 成人av一区二区三区在线看| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品98久久久久久宅男小说| 天天添夜夜摸| 十八禁网站免费在线| 美女大奶头视频| 色老头精品视频在线观看| 亚洲精品在线美女| 亚洲美女黄片视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 美女大奶头视频| 午夜免费观看网址| 亚洲美女视频黄频| 无遮挡黄片免费观看| 1024香蕉在线观看| 欧美午夜高清在线| 国产欧美日韩一区二区三| 97碰自拍视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品乱码一区二三区的特点| av片东京热男人的天堂| 国产单亲对白刺激| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美中文综合在线视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产单亲对白刺激| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产野战对白在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 一本久久中文字幕| 久久精品成人免费网站| 又大又爽又粗| 欧美3d第一页| 欧美另类亚洲清纯唯美| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲国产欧美网| 不卡av一区二区三区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 女同久久另类99精品国产91| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 精品久久久久久,| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 99久久精品热视频| 免费高清视频大片| 久久久精品欧美日韩精品| 91成年电影在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 免费电影在线观看免费观看| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看完整版高清| 床上黄色一级片| 色播亚洲综合网| 亚洲人成77777在线视频| av中文乱码字幕在线| 日韩欧美 国产精品| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲成人久久性| 亚洲乱码一区二区免费版| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费看a级黄色片| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 老司机靠b影院| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲最大成人中文| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 成人三级做爰电影| 成熟少妇高潮喷水视频| 热99re8久久精品国产| 成在线人永久免费视频| 亚洲美女视频黄频| 一本综合久久免费| 亚洲专区国产一区二区| 国产男靠女视频免费网站| 精品国产美女av久久久久小说| 露出奶头的视频| 黄频高清免费视频| 麻豆av在线久日| 免费在线观看亚洲国产| 成人亚洲精品av一区二区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲专区字幕在线| 可以在线观看毛片的网站| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 波多野结衣巨乳人妻| 国产熟女xx| 日本黄大片高清| 日韩欧美三级三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 窝窝影院91人妻| 校园春色视频在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品久久视频播放| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美色视频一区免费| 欧美3d第一页| 精品欧美国产一区二区三| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产区一区二久久| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久热爱精品视频在线9| 久久久国产欧美日韩av| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲五月天丁香| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 青草久久国产| 日本a在线网址| 久久久国产精品麻豆| 淫秽高清视频在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久99热这里只有精品18| 久久香蕉精品热| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 婷婷精品国产亚洲av| 午夜视频精品福利| 日本黄大片高清| av福利片在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美高清成人免费视频www| 特级一级黄色大片| 国产99白浆流出| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产在线精品亚洲第一网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美大码av| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲无线在线观看| 久久久久九九精品影院| 麻豆成人午夜福利视频| 在线播放国产精品三级| 国产精品免费视频内射| 国产精品久久久av美女十八| 国产一区二区在线av高清观看| 精品久久久久久久末码| 一本一本综合久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲av五月六月丁香网| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产爱豆传媒在线观看 | 男女午夜视频在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品免费一区二区三区在线| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲五月婷婷丁香| 成人午夜高清在线视频| 中亚洲国语对白在线视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久久久久久精品吃奶| www.熟女人妻精品国产| 怎么达到女性高潮| 午夜两性在线视频| 黄色女人牲交| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲,欧美精品.| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲在线自拍视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久香蕉国产精品| 1024视频免费在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲最大成人中文| 啦啦啦免费观看视频1| 黄片小视频在线播放| av有码第一页| 51午夜福利影视在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 午夜日韩欧美国产| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲自拍偷在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 黄色视频不卡| 一级片免费观看大全| 在线看三级毛片| xxx96com| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 少妇粗大呻吟视频| 精品电影一区二区在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 2021天堂中文幕一二区在线观| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产乱人伦免费视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 深夜精品福利| 久久久久久九九精品二区国产 | 特级一级黄色大片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲18禁久久av| 女人被狂操c到高潮| 中文亚洲av片在线观看爽| 黄色视频不卡| 精品久久蜜臀av无| 一级黄色大片毛片| 国产av不卡久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美三级亚洲精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲自拍偷在线| 午夜福利视频1000在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 午夜福利成人在线免费观看| 身体一侧抽搐| 日本a在线网址| 亚洲成av人片在线播放无| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美成人性av电影在线观看| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| aaaaa片日本免费| 老汉色∧v一级毛片| av超薄肉色丝袜交足视频| 日日夜夜操网爽| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产麻豆成人av免费视频| 全区人妻精品视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 脱女人内裤的视频| 亚洲美女视频黄频| 久久久国产成人精品二区| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费看十八禁软件| 国产精品亚洲美女久久久| 麻豆国产97在线/欧美 | 国产精品国产高清国产av| 淫秽高清视频在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产一区二区在线av高清观看| 黄色视频,在线免费观看| 日本三级黄在线观看| 国产三级在线视频| 可以在线观看的亚洲视频| 免费无遮挡裸体视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99热这里只有是精品50| 国产免费av片在线观看野外av| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 成年人黄色毛片网站| 757午夜福利合集在线观看| 免费av毛片视频| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品在线观看二区| 男女视频在线观看网站免费 | 午夜福利在线在线| 国产真实乱freesex| 国产免费男女视频| 亚洲激情在线av| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久久精品大字幕| 成人三级黄色视频| 一级片免费观看大全| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品久久久久久,| 高清毛片免费观看视频网站| 久久 成人 亚洲| 一级a爱片免费观看的视频| 99在线视频只有这里精品首页| 不卡av一区二区三区| 久久中文看片网| 很黄的视频免费| 国产视频一区二区在线看| 久久亚洲真实| 久久人妻av系列| 欧美黑人精品巨大| 一本一本综合久久| 欧美日韩精品网址| 国产一区二区在线av高清观看| 国产真实乱freesex| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | xxx96com| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一个人免费在线观看电影 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久国产精品影院| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲av电影不卡..在线观看| 身体一侧抽搐| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜两性在线视频| 黄频高清免费视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 香蕉av资源在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜日韩欧美国产| 天堂动漫精品| 两个人看的免费小视频| 精品国产美女av久久久久小说| 高清在线国产一区| 精品国产美女av久久久久小说| 在线播放国产精品三级| 在线永久观看黄色视频| 午夜成年电影在线免费观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 精品久久久久久成人av| 欧美在线黄色| 91麻豆av在线| av欧美777| www.熟女人妻精品国产| 免费av毛片视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 免费av毛片视频| 伦理电影免费视频| 国产精品,欧美在线| 午夜久久久久精精品| 丰满的人妻完整版| 黄频高清免费视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 老司机午夜十八禁免费视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲成人久久爱视频| 男人舔奶头视频| 精品无人区乱码1区二区| 两个人的视频大全免费| 久久久国产成人免费| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品国产亚洲在线| 香蕉国产在线看| 国产高清视频在线播放一区| av福利片在线| 国产爱豆传媒在线观看 | 一级毛片精品| 中文字幕熟女人妻在线| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美在线一区亚洲| av免费在线观看网站| 高清毛片免费观看视频网站| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一级作爱视频免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 女警被强在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久9热在线精品视频| 亚洲全国av大片| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜久久久久精精品| 男人舔奶头视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲av熟女| 麻豆成人av在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 日本熟妇午夜| 亚洲精品色激情综合| 欧美在线一区亚洲| 日韩精品青青久久久久久| 国产三级中文精品| 国产三级在线视频| 一进一出好大好爽视频| 色综合站精品国产| 一进一出抽搐动态| 看免费av毛片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲五月婷婷丁香| 国产成人精品久久二区二区免费| 欧美在线黄色| 国产av又大| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一本精品99久久精品77| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 精品久久久久久成人av| 又黄又爽又免费观看的视频| 色综合站精品国产| 色综合欧美亚洲国产小说| 日日爽夜夜爽网站| 美女大奶头视频| 日韩大码丰满熟妇|