• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    金鳳顆粒對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎兔關(guān)節(jié)軟骨MMP-1/TIMP-1 表達(dá)影響①

    2015-03-18 11:42:00王曉倩郭建生朱克儉
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:金鳳痛風(fēng)性家兔

    王曉倩 李 鑫 郭建生 朱克儉

    (湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)沙 410208)

    痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(Gouty arthritis,GA)是一種由于體內(nèi)嘌呤代謝異常,使尿酸鈉在關(guān)節(jié)腔內(nèi)沉積形成結(jié)晶,造成關(guān)節(jié)腫脹、變形的結(jié)晶性關(guān)節(jié)炎[1]。隨著居民大量的攝食蛋白質(zhì)及富含嘌呤成分的食物,痛風(fēng)已成為影響我國(guó)人口健康的重大代謝性疾病之一,引起國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的高度關(guān)切[2]。

    研究認(rèn)為,痛風(fēng)發(fā)病機(jī)制主要為血液中尿酸含量升高,達(dá)到飽和狀態(tài)形成尿酸鈉微結(jié)晶。當(dāng)關(guān)節(jié)腔內(nèi)的尿酸鹽結(jié)晶被白細(xì)胞吞噬后,沉積并刺激關(guān)節(jié)滑膜、軟骨及關(guān)節(jié)周?chē)M織,釋放出組胺、趨化因子及相關(guān)前炎癥因子等物質(zhì),使調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的基質(zhì)金屬蛋白酶-1(Matrix metalloproteinases,MMP-1)高表達(dá),導(dǎo)致MMP-1/TIMP-1(Tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1,組織金屬蛋白酶抑制劑-1)失衡,關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生病理性改變[3],導(dǎo)致局部血管擴(kuò)張、白細(xì)胞大量聚集,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)[4],形成痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎[5]。

    目前臨床治療痛風(fēng)以緩解癥狀為主,多使用秋水仙堿、吲哚美辛等非甾體類(lèi)化學(xué)藥品。然而上述藥物的使用并不能延緩病情發(fā)展,且存在腹瀉、血小板減少等副作用。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,痛風(fēng)以脾、腎虧虛為本,痰瘀、濕熱為標(biāo),痰瘀為病之變,濕熱為病之現(xiàn)[6]。中醫(yī)藥治療痛風(fēng)不僅療效確切,且安全性高。本課題組擬研發(fā)治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的創(chuàng)新中藥——金鳳顆粒,該藥由萆薢、鳳尾草、艾葉、金錢(qián)草等組成。前期研究顯示,金鳳顆粒能顯著降低氧嗪酸鉀鹽所致高尿酸血癥小鼠的尿酸水平[7],能有效抑制TNF-α、IL-8、IFN-γ 等促炎性因子釋放[8]。本研究擬建立痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)兔模型,研究金鳳顆粒對(duì)關(guān)節(jié)病理?yè)p傷及關(guān)節(jié)軟骨MMP-1/TIMP-1 的影響,進(jìn)而明確其治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制,為其臨床治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎提供科學(xué)實(shí)證依據(jù)。

    在開(kāi)展本實(shí)驗(yàn)研究工作前均簽署動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查書(shū),且所有工作的進(jìn)行均符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相關(guān)條件及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會(huì)的相關(guān)要求及所有規(guī)定。

    1 材料與方法

    1.1 試藥及試劑

    1.1.1 受試藥物 金鳳顆粒(No.140301),湖南省中醫(yī)藥研究院;腺嘌呤(No.0183),英國(guó)Amresco 公司;尿酸鈉(No.U2875),美國(guó)Sigma 公司;鹽酸乙胺丁醇片(No.1304041),沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司;別嘌醇片(No.20140108),廣東彼迪藥業(yè)有限公司;痛風(fēng)定膠囊(No.1405112),四川升和藥業(yè)股份有限公司。

    1.1.2 試劑 兔抗人MMP-1(No.BA0568)、TIMP-1(No.BA0575)多克隆抗體,SABC 免疫組化染色試劑盒(No.SA1022),DAB 顯色試劑盒(No.AR10 22),武漢博士德生物工程有限公司;甲醛溶液(No.20140204),天津市百世化工有限公司。

    1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新西蘭家兔,雄性,體重1.5~2 kg,湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,合格證編號(hào):SCXK(湘)2011-0003。

    1.2 方法

    1.2.1 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎家兔模型建立[9]取新西蘭家兔70 只,按體重進(jìn)行隨機(jī)化分組,分為空白組(10只)和模型組(60 只)。模型組灌服腺嘌呤(200 mg/kg)和乙胺丁醇(250 mg/kg),1 次/d,連續(xù)7 d。末次給藥后30 min,將10%MSU 混懸液經(jīng)上髕骨韌帶(關(guān)節(jié)伸直45°,4 號(hào)針頭進(jìn)針,插入脛骨肌腱內(nèi)側(cè))注射入兔右踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腔,0.3 ml/只,復(fù)制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。

    1.2.2 分組及給藥 模型成功后,按體重進(jìn)行隨機(jī)化分組,分為模型組、金鳳顆粒高、中、低劑量組(19.6、9.8、4.9 g/kg)、別嘌醇組(0.028 g/kg)及痛風(fēng)定組(0.448 g/kg)。各組分別給予相應(yīng)藥液,模型組、空白組給予等容積蒸餾水,ig 給藥,8 ml/kg,1次/d,連續(xù)7 d。

    1.2.3 金鳳顆粒對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎家兔關(guān)節(jié)軟骨組織病理形態(tài)學(xué)改變的影響 末次給藥24 h 后,麻醉家兔,取關(guān)節(jié)軟骨組織,10 %甲醛溶液固定,將軟骨病理標(biāo)本做成蠟塊,間斷連續(xù)切片,切片厚約5 μm,HE 染色,采用盲法實(shí)驗(yàn)原則,選用未知分組人員觀察其病理形態(tài)學(xué)的改變,并評(píng)分,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1[10]。

    1.2.4 金鳳顆粒對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎家兔關(guān)節(jié)軟骨中MMP-1、TIMP-1 表達(dá)的影響 末次給藥2 h 后,麻醉家兔,取關(guān)節(jié)軟骨組織,于10%甲醛溶液固定,行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作,采用免疫細(xì)胞化學(xué)SP(鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶復(fù)合物)法檢測(cè)。每張切片選取5 個(gè)典型區(qū)域拍攝數(shù)碼圖像,使用圖像分析軟件分析各組照片的單位光密度值并進(jìn)行比較,根據(jù)光密度值的大小判斷各指標(biāo)表達(dá)水平。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS18.0 軟件分析,數(shù)據(jù)用±s 表示。組間比較,計(jì)量資料首先做正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn),滿足方差齊性,采用Oneway ANOVA 進(jìn)行方差分析,不滿足方差齊性采用非參數(shù)法檢驗(yàn)。P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表1 關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)改變的組織學(xué)分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Histological classification criteria of synovial histologic change

    2 結(jié)果

    2.1 金鳳顆粒對(duì)家兔關(guān)節(jié)軟骨組織病理變化的影響 空白組關(guān)節(jié)軟骨面完整,未見(jiàn)有血管充血、黏膜腫脹、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及組織壞死,也未見(jiàn)有絨毛狀增生和血管翳形成。模型組家兔關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)紊亂,有血管充血及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),部分樣本關(guān)節(jié)軟骨組織壞死,與空白組比較,評(píng)分有顯著性差異(P<0.01),提示模型復(fù)制成功。經(jīng)金鳳顆粒治療后,各劑量組家兔關(guān)節(jié)軟骨組織血管充血、黏膜腫脹、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、組織壞死情況均有顯著的改善,差異具有顯著性(P<0.05 或P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2 及圖1。

    2.2 金鳳顆粒對(duì)家兔軟骨組織MMP-1、TIMP-1 表達(dá)影響 與空白組相比,模型組家兔關(guān)節(jié)軟骨組織MMP-1 表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)、TIMP-1 表達(dá)顯著降低(P<0.01),提示模型建立成功。經(jīng)金鳳顆粒治療后,與模型組相比,高劑量組MMP-1 表達(dá)顯著降低(P<0.05),TIMP-1 表達(dá)增強(qiáng)(P<0.01)。中劑量組MMP-1 的表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3,圖2、3。

    表2 關(guān)節(jié)軟骨改變的組織學(xué)分級(jí)評(píng)分結(jié)果(±s,n=10)Tab.2 Results of grading histological change of articular cartilage tissue(±s,n=10)

    表2 關(guān)節(jié)軟骨改變的組織學(xué)分級(jí)評(píng)分結(jié)果(±s,n=10)Tab.2 Results of grading histological change of articular cartilage tissue(±s,n=10)

    Note:1)P<0.01 as compared to the normal subject;2)P<0.05,3)P<0.01 as compared to the model subject.

    表3 金鳳顆粒對(duì)家兔關(guān)節(jié)軟骨組織MMP-1、TIMP-1 及MMP-1/TIMP-1 影響(±s,n=10)Tab.3 Effect of Jinfeng granules on MMP-1,TIMP-1 and MMP-1/TIMP-1 in rabbit articular cartilage(±s,n=10)

    表3 金鳳顆粒對(duì)家兔關(guān)節(jié)軟骨組織MMP-1、TIMP-1 及MMP-1/TIMP-1 影響(±s,n=10)Tab.3 Effect of Jinfeng granules on MMP-1,TIMP-1 and MMP-1/TIMP-1 in rabbit articular cartilage(±s,n=10)

    Note:1)P<0.01 as compared to the normal subject;2)P<0.05,3)P<0.01 as compared to the model subject.

    圖1 金鳳顆粒對(duì)家兔關(guān)節(jié)軟骨組織病理形態(tài)學(xué)影響(×400)Fig.1 Effect of Jinfeng granule on pathomorpholoy of rabbit articular cartilage tissue(×400)

    圖2 金鳳顆粒對(duì)家兔關(guān)節(jié)軟骨組織MMP-1 表達(dá)的影響(×400)Fig.2 Effect of Jinfeng granule on expression of MMP-1 in rabbit articular cartilage tissue(×400)

    圖3 金鳳顆粒對(duì)家兔關(guān)節(jié)軟骨組織TIMP-1 表達(dá)的影響(×400)Fig.3 Effect of Jinfeng granule on expression of TIMP-1 in rabbit articular cartilage tissue(×400)

    3 討論

    MMP-1 是細(xì)胞外基質(zhì)降解最重要的蛋白系統(tǒng),參與了痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)組織創(chuàng)傷修復(fù)與重塑、炎癥反應(yīng)等過(guò)程[11]。TIMP-1 是MMP-1 的天然拮抗劑,與活化的MMP-1 結(jié)合形成復(fù)合物,從而阻斷MMP-1 活性,維系MMP-1/TIMP-1 平衡[12]。有學(xué)者研究提示,MMP-1 活化濃度與關(guān)節(jié)炎癥密切相關(guān),MMP-1/TIMP-1 失衡可能是痛風(fēng)性炎癥病程中難以愈合的重要因素之一[13]。

    本研究發(fā)現(xiàn),模型組家兔關(guān)節(jié)軟骨組織排列紊亂,血管充血及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),部分樣本關(guān)節(jié)軟骨組織壞死,關(guān)節(jié)軟骨組織中MMP-1 顯著升高(P<0.01)、TIMP-1 顯著下降(P<0.01),MMP-1/TIMP-1 失衡(P<0.01)。提示機(jī)體受到MSU 晶體刺激后,MMP-1 表達(dá)增強(qiáng),TIMP-1 不同程度的丟失或低表達(dá),導(dǎo)致MMP-1/TIMP-1 失衡,對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解能力增強(qiáng),激活炎癥瀑布反應(yīng)而出現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨組織嚴(yán)重充血、大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、明顯腫脹、壞死,而導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨嚴(yán)重受損。

    經(jīng)金鳳顆粒治療后,高劑量組MMP-1 得到明顯抑制(P<0.01),TIMP-1 表達(dá)明顯加強(qiáng)(P<0.05),MMP-1/TIMP-1 顯著降低(P<0.01);中劑量組MMP-1 有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),MMP-1/TIMP-1趨向平衡(P<0.05);病理形態(tài)學(xué)改變也得到明顯改善(P<0.05 或P<0.01)。研究結(jié)果提示,金鳳顆粒的作用機(jī)制可能與通過(guò)抑制MMP-1 高表達(dá),加強(qiáng)TIMP-1 表達(dá),調(diào)節(jié)MMP-1/TIMP-1 平衡,阻斷炎癥反應(yīng)循環(huán)鏈,而實(shí)現(xiàn)其臨床療效。

    綜上,金鳳顆粒能有效抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病理?yè)p害,其作用機(jī)制可能是與通過(guò)阻斷MMP-1 活性,恢復(fù)MMP-1/TIMP-1 失衡有關(guān)。

    [1]黃雪芳.四妙散加味治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎臨床應(yīng)用[J].中外醫(yī)療,2012,31(4):139.

    [2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)分泌學(xué)分會(huì).高尿酸血癥和痛風(fēng)治療的中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)[J].中華內(nèi)分泌代謝,2013,29(11):913-920.

    [3]Monika Merkle,Andrea Ribeiro,Simone Koppel.TNF-α enhances TLR3 dependent effects on MMP-9 expression in human mesangial cells[J].Cell Biol Int,2012,36(12):1155-1160.

    [4]Thomas CM,F(xiàn)uller CJ,Whittles CE,et al.Chondrocyte death by apoptosis is associated with cartilage matrix degradation[J].Osteoarthr Cartil,2007,15(1):27-34.

    [5]佟 穎,孟 潔,金 湯,等.痹寧膠囊對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型IL-1 及MMP-9 的研究[J].世界中醫(yī)藥,2013,8(5):543-545.

    [6]崔 炎,李玉鳳.崔公讓教授治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎經(jīng)驗(yàn)介紹[J].新中醫(yī),2009,41(10):12-13.

    [7]王曉倩,李 鑫,郭建生,等.金苓痛風(fēng)舒微丸對(duì)高尿酸血癥小鼠血尿?qū)O、肌酐、尿素氮及黃嘌呤氧化酶活性的影響[J].西北藥學(xué)雜志,2014,29(5):483-486.

    [8]王曉倩,李 鑫,郭建生,等.金苓痛風(fēng)舒微丸抗炎作用及其機(jī)制研[J].中藥新藥與臨床藥理,2014,25(6):700-704.

    [9]Mc Cartney-Francis N,Allen JB,Mizel DI,et al.Superssion of arthritis by an inhibitor of nitric oxide synthase[J].J Exp Med,1993,1178(8):749-754.

    [10]Jovanovic DVJ,Martel-Pelletier A,di Battista F,et al.Stimulation of 92-kd gelatinase(matrix metalloproteinase 9)production by interleukin-17 in human monocyte/macrophages:a possible role in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,2000,43:1134-1144.

    [11]談益芬,唐艷麗,王勝香,等.中藥組方NDRF 對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎家兔滑膜MMP-3、VEGF 分子及其mRNA 的影響[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2014,30(1):57-60.

    [12]Tyagi A.Agarwal C,Dwyer-Nield L,et al.Silibinin modulates TNF-alpha and IFN-gamma mediated signaling to regulate COX2 and iNOS expression in tumorigenic mouse lung epithelial LM2 cells[J].Mol Carcinog,2012,51(10):832.

    [13]Rathnayake N,Akerman S,Klinge B,et al.Salivary biomarkers of oral health:a cross-sectional study[J].J Clin Periodontol,2013,40(2):140.

    猜你喜歡
    金鳳痛風(fēng)性家兔
    家兔“三催”增效飼養(yǎng)法
    痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的辨治經(jīng)驗(yàn)
    甜蜜合伙人
    痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的中醫(yī)治療
    “田園都市”山水美 “五彩金鳳”展翅飛
    X線、CT、MRI在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用對(duì)比
    綠揚(yáng)引金鳳:揚(yáng)州人才引進(jìn)計(jì)劃
    家兔常見(jiàn)皮膚病的防治
    家兔便秘的防治辦法
    家兔胰島分離純化方法的改進(jìn)
    国产伦理片在线播放av一区| 国产一区亚洲一区在线观看| 少妇的逼水好多| 久久久久久国产a免费观看| 看免费成人av毛片| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲国产欧美在线一区| 色网站视频免费| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产黄片视频在线免费观看| 久久国产乱子免费精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 青春草国产在线视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲国产高清在线一区二区三| 青春草国产在线视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品99久久久久久久久| 日本黄色片子视频| 91久久精品国产一区二区三区| 精品熟女少妇av免费看| 国产综合懂色| 久久精品久久精品一区二区三区| 色综合亚洲欧美另类图片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 如何舔出高潮| 综合色丁香网| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 大话2 男鬼变身卡| av在线亚洲专区| 嘟嘟电影网在线观看| 丰满乱子伦码专区| 99视频精品全部免费 在线| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲国产精品专区欧美| 成年版毛片免费区| 免费黄网站久久成人精品| 日韩av在线大香蕉| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 麻豆成人av视频| av女优亚洲男人天堂| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 色网站视频免费| 少妇人妻一区二区三区视频| eeuss影院久久| 色尼玛亚洲综合影院| 两个人的视频大全免费| 成年av动漫网址| 久久久色成人| 日本免费a在线| 2022亚洲国产成人精品| 别揉我奶头 嗯啊视频| 午夜福利视频精品| av免费观看日本| 久久久久久久久久成人| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲精品一区蜜桃| 七月丁香在线播放| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲最大成人av| 老司机影院成人| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| xxx大片免费视频| ponron亚洲| av在线老鸭窝| 2018国产大陆天天弄谢| 美女xxoo啪啪120秒动态图| av网站免费在线观看视频 | 午夜福利在线观看吧| 亚洲色图av天堂| 毛片女人毛片| 黑人高潮一二区| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲内射少妇av| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产在视频线在精品| 熟女人妻精品中文字幕| 国产成人福利小说| 欧美xxⅹ黑人| 又爽又黄a免费视频| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲精品成人久久久久久| 搞女人的毛片| 美女高潮的动态| 日韩欧美三级三区| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产精品无大码| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久精品久久久久久久性| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 一级片'在线观看视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 日日啪夜夜爽| 国产av国产精品国产| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产一区有黄有色的免费视频 | 高清日韩中文字幕在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 中文字幕免费在线视频6| 成人特级av手机在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产成人a区在线观看| 老司机影院成人| 一边亲一边摸免费视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 成人欧美大片| 亚洲高清免费不卡视频| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品一区二区在线观看99 | 中文字幕亚洲精品专区| 嫩草影院新地址| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 我的老师免费观看完整版| 黄色欧美视频在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 777米奇影视久久| 亚洲av男天堂| 亚洲精品aⅴ在线观看| 又爽又黄a免费视频| 一区二区三区乱码不卡18| 91久久精品国产一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 免费无遮挡裸体视频| 中文字幕制服av| 亚洲欧美清纯卡通| 免费av毛片视频| 波野结衣二区三区在线| 日本一本二区三区精品| 国产黄频视频在线观看| 中文资源天堂在线| 丝瓜视频免费看黄片| 99久国产av精品| 最近手机中文字幕大全| 久久久精品94久久精品| 最近最新中文字幕免费大全7| 成年版毛片免费区| 久久久久久久国产电影| 一区二区三区四区激情视频| 久久99热这里只有精品18| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产久久久一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲av国产av综合av卡| 搞女人的毛片| 欧美97在线视频| 国产精品伦人一区二区| 国产精品久久视频播放| 嫩草影院入口| 有码 亚洲区| 中文字幕av成人在线电影| 99久久精品一区二区三区| 极品教师在线视频| 精品久久久久久久末码| 国产精品一及| 国产成人精品久久久久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 老女人水多毛片| 国精品久久久久久国模美| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲精品乱久久久久久| 免费电影在线观看免费观看| 1000部很黄的大片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 爱豆传媒免费全集在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产91av在线免费观看| 国产乱来视频区| 日韩av在线大香蕉| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 熟女电影av网| 成人亚洲精品一区在线观看 | 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产老妇女一区| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产午夜福利久久久久久| 国产成人freesex在线| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产免费福利视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频 | 午夜久久久久精精品| 久久国内精品自在自线图片| 日韩欧美三级三区| 国产av在哪里看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 日韩欧美一区视频在线观看 | 欧美激情久久久久久爽电影| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲成人一二三区av| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲欧美日韩东京热| 麻豆久久精品国产亚洲av| 大话2 男鬼变身卡| 美女cb高潮喷水在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 九九爱精品视频在线观看| 国产av不卡久久| 精品一区二区免费观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 大话2 男鬼变身卡| 中文字幕av在线有码专区| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩强制内射视频| 插逼视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲电影在线观看av| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 一区二区三区四区激情视频| 久久久久久久久大av| 最近最新中文字幕免费大全7| 又大又黄又爽视频免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲国产色片| 久久久精品94久久精品| 嫩草影院新地址| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一级a做视频免费观看| 一级毛片电影观看| 久久久久久久久久黄片| 亚洲美女视频黄频| 男女边摸边吃奶| 国产成人精品久久久久久| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲,欧美,日韩| 国产在线男女| 亚洲av成人精品一区久久| 特大巨黑吊av在线直播| av线在线观看网站| 美女高潮的动态| 99热6这里只有精品| 午夜爱爱视频在线播放| 国产91av在线免费观看| 中文字幕免费在线视频6| 99热这里只有精品一区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲精品一区蜜桃| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 午夜视频国产福利| 亚洲无线观看免费| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久久网色| 丝袜美腿在线中文| 有码 亚洲区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产av不卡久久| 亚洲av.av天堂| 26uuu在线亚洲综合色| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产熟女欧美一区二区| 永久免费av网站大全| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 免费看美女性在线毛片视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产不卡一卡二| 亚洲精品色激情综合| 美女国产视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 久久这里只有精品中国| 日本黄大片高清| 欧美不卡视频在线免费观看| 欧美97在线视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美成人一区二区免费高清观看| 少妇丰满av| 三级国产精品欧美在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲欧美日韩无卡精品| 婷婷色麻豆天堂久久| 一区二区三区高清视频在线| 日本免费在线观看一区| av播播在线观看一区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品熟女少妇av免费看| 色网站视频免费| 看十八女毛片水多多多| 亚洲性久久影院| 久久久久免费精品人妻一区二区| 夜夜爽夜夜爽视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 99久久精品一区二区三区| 99久久精品国产国产毛片| 极品教师在线视频| 精品欧美国产一区二区三| 免费黄色在线免费观看| 人妻系列 视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久久久久久久中文| 寂寞人妻少妇视频99o| 成人亚洲欧美一区二区av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| av国产免费在线观看| 国产成人精品婷婷| 久久久国产一区二区| 一级片'在线观看视频| 一个人免费在线观看电影| 日本爱情动作片www.在线观看| 青青草视频在线视频观看| 午夜福利在线观看吧| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美成人一区二区免费高清观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图| or卡值多少钱| 久久久久久久午夜电影| 天天躁日日操中文字幕| 91久久精品国产一区二区成人| 啦啦啦中文免费视频观看日本| or卡值多少钱| 亚洲精品自拍成人| 国产熟女欧美一区二区| 插逼视频在线观看| 久久久久国产网址| 欧美三级亚洲精品| 国产老妇女一区| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美区成人在线视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 人妻夜夜爽99麻豆av| av播播在线观看一区| 国产不卡一卡二| 久久人人爽人人爽人人片va| 黑人高潮一二区| 最后的刺客免费高清国语| 午夜老司机福利剧场| 精品人妻熟女av久视频| 久久久a久久爽久久v久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 中文字幕av在线有码专区| 国产乱人视频| 国产 一区精品| 欧美精品国产亚洲| 久久久色成人| 久久久久性生活片| 国产视频内射| 免费人成在线观看视频色| 久久这里有精品视频免费| 尾随美女入室| av专区在线播放| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日日啪夜夜撸| 午夜激情久久久久久久| 视频中文字幕在线观看| 国精品久久久久久国模美| 欧美丝袜亚洲另类| 国产精品嫩草影院av在线观看| 高清欧美精品videossex| 欧美丝袜亚洲另类| 免费黄频网站在线观看国产| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产免费又黄又爽又色| 黄色一级大片看看| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产午夜精品一二区理论片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美+日韩+精品| 黄色日韩在线| 国产高潮美女av| 可以在线观看毛片的网站| 免费少妇av软件| 寂寞人妻少妇视频99o| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲自拍偷在线| 亚洲综合色惰| 欧美成人a在线观看| 高清欧美精品videossex| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲在久久综合| 熟女电影av网| 蜜臀久久99精品久久宅男| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久人人爽人人爽人人片va| 99久久精品热视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产大屁股一区二区在线视频| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲在久久综合| av在线蜜桃| 日本色播在线视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 免费大片18禁| 99久久精品国产国产毛片| 免费黄色在线免费观看| 天堂影院成人在线观看| 黄色配什么色好看| 精品久久久久久久久亚洲| 色哟哟·www| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产探花在线观看一区二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 岛国毛片在线播放| 午夜日本视频在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久国产乱子免费精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 丰满少妇做爰视频| 一区二区三区乱码不卡18| 免费高清在线观看视频在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 人妻一区二区av| or卡值多少钱| 一区二区三区四区激情视频| 婷婷色综合www| 国产在视频线在精品| 免费观看在线日韩| 精品久久久久久久久亚洲| or卡值多少钱| 久久久久久久国产电影| 伦精品一区二区三区| 亚洲欧美精品自产自拍| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产有黄有色有爽视频| 久久久成人免费电影| 久久久久精品性色| 亚洲人成网站高清观看| 精品酒店卫生间| 国产精品人妻久久久影院| 精品久久久精品久久久| 99久久精品一区二区三区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 久久99精品国语久久久| 精品久久国产蜜桃| 日日干狠狠操夜夜爽| 色综合亚洲欧美另类图片| 精品久久久久久久末码| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 人体艺术视频欧美日本| 久久热精品热| 国精品久久久久久国模美| 午夜精品国产一区二区电影 | 三级经典国产精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 中文天堂在线官网| 亚洲av成人av| 亚洲最大成人av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲av中文av极速乱| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲国产精品成人久久小说| 男女那种视频在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 国产精品一及| 亚洲精品第二区| 久热久热在线精品观看| 成年女人在线观看亚洲视频 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 午夜老司机福利剧场| 亚洲欧美成人精品一区二区| 午夜激情福利司机影院| 日韩一区二区视频免费看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 欧美性感艳星| 欧美 日韩 精品 国产| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | www.av在线官网国产| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 午夜福利在线在线| 亚洲综合色惰| 高清av免费在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 青春草国产在线视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 99久久精品热视频| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲性久久影院| 91午夜精品亚洲一区二区三区| videossex国产| 乱码一卡2卡4卡精品| 最近中文字幕2019免费版| 国产一区亚洲一区在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 久久久久久九九精品二区国产| 高清日韩中文字幕在线| 99热全是精品| 午夜视频国产福利| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 好男人在线观看高清免费视频| 精品久久久久久久末码| 久久亚洲国产成人精品v| 久久精品人妻少妇| 免费大片18禁| 中文字幕免费在线视频6| 欧美人与善性xxx| 久久久成人免费电影| 色视频www国产| 亚洲久久久久久中文字幕| 男的添女的下面高潮视频| 久久久精品欧美日韩精品| 久久99热6这里只有精品| 亚洲欧美日韩东京热| 欧美另类一区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 日韩精品青青久久久久久| 免费观看的影片在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产有黄有色有爽视频| 春色校园在线视频观看| 成年女人在线观看亚洲视频 | 久久久a久久爽久久v久久| 最近中文字幕2019免费版| 国产av国产精品国产| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美区成人在线视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲不卡免费看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩制服骚丝袜av| 一级毛片我不卡| 国产色爽女视频免费观看| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲av免费在线观看| 国产精品一二三区在线看| 麻豆成人av视频| 国产av在哪里看| 六月丁香七月| 联通29元200g的流量卡| 国产精品国产三级专区第一集| 热99在线观看视频| 久久久久九九精品影院| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美xxⅹ黑人| 免费看美女性在线毛片视频| 精品人妻熟女av久视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日本色播在线视频| 69av精品久久久久久| 国产探花极品一区二区| 精品久久久久久久久亚洲| 国产在视频线精品| 久久久久久久久中文| 精品人妻视频免费看| 日韩av在线大香蕉| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲精品日本国产第一区| 欧美高清成人免费视频www| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产男人的电影天堂91| 亚洲国产精品国产精品| 久久久亚洲精品成人影院| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美+日韩+精品| 两个人的视频大全免费| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 黄片wwwwww| 天天躁日日操中文字幕| 天堂网av新在线| 国产av在哪里看| 男女视频在线观看网站免费| 日韩欧美一区视频在线观看 | 少妇的逼水好多| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费观看的影片在线观看| 99久国产av精品| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 成人毛片a级毛片在线播放| 成人特级av手机在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲av不卡在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 高清日韩中文字幕在线| 高清在线视频一区二区三区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩强制内射视频| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲国产av新网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久a久久爽久久v久久|