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    超聲波輔助雙酶法酶解玉米淀粉的工藝條件優(yōu)化

    2015-03-18 12:22:42孟國(guó)良亓翠英何超元萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院山東萊蕪271100
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年32期
    關(guān)鍵詞:糖化酶淀粉酶糖化

    孟國(guó)良,亓翠英,何超元 (萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山東萊蕪271100)

    我國(guó)是淀粉制糖生產(chǎn)大國(guó),但是我國(guó)由淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖的工業(yè)化水平較低,需要尋找提高淀粉轉(zhuǎn)化率的有效途徑[1-6]。超聲波是頻率髙于20 kHz的聲波,超聲波處理能使生物質(zhì)高分子的形態(tài)結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化,有利于提高酶的催化活性[7]。目前對(duì)超聲波輔助液化酶和糖化酶水解淀粉的作用已有研究[8],但是在試驗(yàn)中僅考察單一因素對(duì)于葡萄糖含量的影響,所得到的工藝條件不夠科學(xué),說(shuō)服力不強(qiáng)。

    筆者采用正交設(shè)計(jì)對(duì)超聲波輔助液化酶和糖化酶水解淀粉進(jìn)行研究,試驗(yàn)的代表性強(qiáng),避免了全面試驗(yàn)所帶來(lái)的復(fù)雜性,減少了工作量,所得到的最優(yōu)工藝條件能夠?yàn)槠髽I(yè)提髙糖收率、降低生產(chǎn)成本提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    1.1.1 原料及試劑。玉米淀粉,自制;耐高溫 α-淀粉酶(100 000 U/ml),諾維信(中國(guó))生物技術(shù)有限公司;糖化酶(100 000 U/ml),諾維信(中國(guó))生物技術(shù)有限公司;其他試劑均為分析純。

    1.1.2 主要儀器。JY92-II DN型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī),寧波新藝超聲設(shè)備有限公司;HH-A型恒溫水浴攪拌器,江蘇省金壇市中大儀器廠;UV-1601型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),北京北分瑞利分析儀器有限公司。

    1.2 超聲波輔助酶解淀粉的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.2.1 液化過(guò)程試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選取淀粉質(zhì)量濃度、加酶量(耐高溫α-淀粉酶)、超聲功率、反應(yīng)時(shí)間為主要考察因素,設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。為減少試驗(yàn)誤差,同一條件下的試驗(yàn)重復(fù)3次。

    表1 液化過(guò)程正交試驗(yàn)因素水平

    1.2.2 糖化過(guò)程試驗(yàn)設(shè)計(jì)。在上述“1.2.1”液化過(guò)程優(yōu)選工藝的基礎(chǔ)上,選取加酶量(葡萄糖淀粉酶)、超聲功率、反應(yīng)時(shí)間為主要考察因素,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表2。

    表2 糖化過(guò)程正交試驗(yàn)因素水平

    1.3 玉米淀粉的酶解工藝流程[6]

    1.3.1 液化過(guò)程超聲處理。將淀粉和蒸餾水按一定比例進(jìn)行混合,然后用0.1 mol/L 的 HCl溶液調(diào) pH 為(5.9 ±0.1),加入液化酶,于95℃恒溫水浴攪拌器中將超聲波變幅桿插入淀粉乳液面以下2 cm,磁力攪拌轉(zhuǎn)速70%,超聲輔助液化10 min,液化完成后,冷卻至60℃,用HCl溶液調(diào)pH為2.2,滅酶30 min,測(cè)其DE值。

    1.3.2 糖化過(guò)程超聲處理。吸取上述按“1.3.1”方法液化完成后的液化液,用 1 mol/L NaOH 調(diào) pH(4.4±0.1),加入糖化酶,放入60℃恒溫水浴攪拌器中,將超聲波變幅桿插入淀粉乳液面以下2 cm,磁力攪拌轉(zhuǎn)速70%,超聲輔助糖化一定時(shí)間,糖化完成后,冷卻,測(cè)其DE值。

    1.4 DE值測(cè)定 參考GB/T 22428.1-2008淀粉水解產(chǎn)品還原力和葡萄糖當(dāng)量測(cè)定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 超聲波輔助淀粉酶酶解玉米淀粉的工藝條件優(yōu)化[9]由方差分析可知,F(xiàn)A=4.367 187 5,F(xiàn)B=0.968 75,F(xiàn)C=3.898 437 5,F(xiàn)D=2.023 437 5,F(xiàn)(0.05)(2,18)=3.55;由此可以看出,淀粉濃度、超聲波功率對(duì)液化液中DE值影響顯著。結(jié)合表3試驗(yàn)結(jié)果可知,淀粉濃度選0.3 g/ml最優(yōu),超聲波功率選100 W最優(yōu),加酶量和反應(yīng)時(shí)間對(duì)液化液中DE值影響不顯著,3個(gè)水平可以任選其一,但考慮到降低生產(chǎn)成本,提高企業(yè)效益,加酶量宜選最低水平20 U/g,液化反應(yīng)時(shí)間1 h為宜。綜上分析,超聲波輔助淀粉酶酶解淀粉的最佳工藝參數(shù)為:淀粉質(zhì)量濃度0.3 g/ml,加酶量20 U/g,超聲功率100 W,反應(yīng)時(shí)間1 h。

    表3 超聲波輔助淀粉酶酶解玉米淀粉正交試驗(yàn)的結(jié)果

    2.2 超聲波輔助糖化酶酶解玉米淀粉的工藝條件優(yōu)化 由方差分析可知,F(xiàn)A=151,F(xiàn)B=39,F(xiàn)C=43,F(xiàn)0.05(2,2)=19.0,F(xiàn)0.01(2,2)=99.0;由此可看出,加酶量、超聲波功率和糖化時(shí)間對(duì)糖化液中葡萄糖含量影響顯著。結(jié)合表4試驗(yàn)結(jié)果可知,加酶量選50 U/g淀粉最優(yōu),超聲波功率選100 W最優(yōu),糖化反應(yīng)時(shí)間選60 h最優(yōu)。綜上分析,超聲波輔助糖化酶酶解淀粉的最佳工藝參數(shù)為:加酶量50 U/g淀粉,超聲功率100 W,糖化反應(yīng)時(shí)間60 h。

    表4 超聲波輔助糖化酶酶解玉米淀粉正交試驗(yàn)的結(jié)果

    3 討論

    在淀粉酶解轉(zhuǎn)化為葡萄糖的過(guò)程中,液化液的質(zhì)量對(duì)于糖化液中葡萄糖的轉(zhuǎn)化率起著決定性的作用,為此,在預(yù)先試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,液化過(guò)程試驗(yàn)在酶解溫度、pH保持不變的條件下,確定了淀粉質(zhì)量濃度、加酶量、超聲功率、反應(yīng)時(shí)間4個(gè)因素3個(gè)水平的試驗(yàn)方案,并且同一條件下做了3次重復(fù)試驗(yàn),目的是為了確保優(yōu)選出最高液化DE值下的工藝條件,從而為糖化液中糖轉(zhuǎn)化率的提高奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

    經(jīng)優(yōu)化試驗(yàn)研究后,獲得的最佳液化工藝條件如下:淀粉質(zhì)量濃度0.3 g/ml,加酶量20 U/g淀粉,超聲功率100 W,反應(yīng)時(shí)間1 h;獲得的最佳糖化工藝條件如下:加酶量50 U/g淀粉,超聲功率100 W,糖化反應(yīng)時(shí)間60 h。

    預(yù)試驗(yàn)表明,酶解活性與超聲頻率無(wú)關(guān),僅與超聲功率相關(guān),與相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)論一致[10]。玉米淀粉按照優(yōu)化工藝條件制得的糖漿經(jīng)驗(yàn)證,DE值達(dá)到107%以上,完全符合GB/T20880-2007中的要求。

    [1]周治國(guó),徐樹(shù)來(lái),劉利軍.玉米淀粉糖生產(chǎn)新工藝的研究[J].農(nóng)機(jī)化研究,2012(10):169-225.

    [2]郝曉敏,王遂,崔凌飛.α-淀粉酶水解玉米淀粉的研究[J].食品科學(xué),2006,27(2):141 -143.

    [3]林親錄,周麗君,符瓊.淀粉轉(zhuǎn)化生產(chǎn)葡萄糖工藝研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2011(4):412-414.

    [4]丁皓,王冠,徐麗,等.α-淀粉酶的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].飼料博覽,2012(8):12 -14.

    [5]李平凡,邱玉美,吳海峰.雙酶法生產(chǎn)葡萄糖工藝優(yōu)化研究[J].現(xiàn)代食品科技,2008,24(3):262 -264.

    [6]李玉芹,袁正求,馮岳,等.α-淀粉酶和糖化酶協(xié)同酶解馬鈴薯淀粉的工藝條件優(yōu)化[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,39(7):148 -152.

    [7]石文奇,易長(zhǎng)海,甘厚磊,等.超聲波對(duì)液體α-淀粉酶酶學(xué)活性的影響[J].天津工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,31(2):43 -46.

    [8]王振斌,趙帥,邵淑萍,等.超聲波輔助淀粉雙酶水解技術(shù)及其機(jī)理[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào),2014,29(5):42 -47.

    [9]于勝.玉米淀粉制糖生產(chǎn)工藝與設(shè)備的改進(jìn)分析[J].應(yīng)用方法論,2011(21):166-211.

    [10]陳小麗,黃卓烈,巫光宏,等.超聲波對(duì)淀粉酶催化活性的影響[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,26(1):76 -79.

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