microRNA 在肝癌診治中的研究進(jìn)展

邱歷偉，潘劉翃，姚登福

南通大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，江蘇 南通226001

肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在惡性腫瘤中居第3 位。肝癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟參與的復(fù)雜過程，多種癌基因的激活和/或抑癌基因的失活在肝癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用［1］。microRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA，高度保守，可經(jīng)序列特異性翻譯抑制或mRNA 裂解來(lái)調(diào)控基因表達(dá)，參與細(xì)胞發(fā)育、增殖、分化、凋亡等［2］。自第一個(gè)miRNA 被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，大量新miRNA 陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，已鑒定命名的人類成熟體miRNA 超過2 500 個(gè)，調(diào)控體內(nèi)1/3以上的基因［3］。隨著miRNA 的發(fā)現(xiàn)和研究技術(shù)的進(jìn)步，在肝癌各個(gè)病理過程中，對(duì)miRNA 調(diào)控靶基因發(fā)揮作用的研究正在不斷深入。本文就近年miRNA 與肝癌研究的新進(jìn)展作一概述。

1 miRNA 在肝癌中作用機(jī)制

miRNA 由19 ～26 個(gè)核苷酸組成，以多順反子的形式與宿主基因共同轉(zhuǎn)錄。體內(nèi)miRNA 形成過程含初級(jí)miRNA(pri-miRNA)合成、前體(pre-miRNA)剪切、成熟雙鏈RNA 裝配等多個(gè)復(fù)雜步驟，有細(xì)胞核內(nèi)外RNA 聚合酶、Drosha 剪切酶、Dicer 剪切酶及輸出蛋白-5(Exportin-5)等多種酶類蛋白參與其中。成熟單鏈miRNA 與RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)結(jié)合，并誘導(dǎo)RISC 引起靶基因mRNA 降解或翻譯抑制。在動(dòng)物體內(nèi)，絕大多數(shù)情況下因miRNA 和靶mRNA 3＇-非編碼區(qū)并不完全互補(bǔ)配對(duì)，則主要是經(jīng)翻譯抑制下調(diào)靶mRNA 表達(dá)［4］。

miRNA 對(duì)其靶基因mRNA 的翻譯抑制具有網(wǎng)絡(luò)化的特點(diǎn)，單一miRNA 即可調(diào)節(jié)其下游多個(gè)甚至數(shù)百個(gè)靶基因(包括轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子、受體等)，幾種miRNA 也可聯(lián)合調(diào)控單一基因表達(dá)，與靶基因組成復(fù)雜的調(diào)節(jié)反饋回路［5］。此外，miRNA 調(diào)控的靶基因在各自的信號(hào)通路中往往起到重要的作用，因此，miRNA-靶基因-信號(hào)通路之間形成復(fù)雜而作用多樣的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，揭示miRNA 作用機(jī)制對(duì)體內(nèi)miRNAs 間、miRNAs與mRNA 間、miRNAs 與蛋白質(zhì)及DNA 間的網(wǎng)絡(luò)交互作用具有重要意義［6］。

肝癌是機(jī)體在基因轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控失去平衡，局部組織的細(xì)胞克隆性異常增生而形成的新生物。它的發(fā)生、發(fā)展是多個(gè)癌基因、抑癌基因表達(dá)紊亂及相關(guān)調(diào)控機(jī)制失衡的復(fù)雜過程［7］。在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中，miRNA 既可下調(diào)抑癌基因的活性，促使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，或抑制細(xì)胞分化和凋亡相關(guān)基因以促進(jìn)細(xì)胞永生化生長(zhǎng)，發(fā)揮遠(yuǎn)癌基因的作用;也可作為抑癌基因，下調(diào)原癌基因、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因等的活性，從而抑制肝癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移［8］。此外，miRNA 對(duì)基因調(diào)控在細(xì)胞水平產(chǎn)生廣泛作用，可對(duì)細(xì)胞活動(dòng)的各個(gè)層面進(jìn)行調(diào)節(jié)，參與如細(xì)胞增殖分化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞骨架重排等一系列的病理、生理進(jìn)程，因而miRNA 在肝細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、侵襲、轉(zhuǎn)移等各個(gè)病理生理過程中發(fā)揮重要作用［9］。

2 miRNA 與肝炎病毒感染

約70%以上的肝癌是由慢性肝炎經(jīng)肝硬化發(fā)展而來(lái)，在我國(guó)主要為HBV 感染，而歐美國(guó)家以HCV 多見。研究miRNA 在肝炎病毒感染復(fù)制、宿主免疫應(yīng)答、抗原呈遞等過程中的作用對(duì)探討肝癌發(fā)生機(jī)制具有重要意義［10］。研究顯示肝臟特異性miR-122 在肝臟中表達(dá)豐度最高，并在肝細(xì)胞分化、脂質(zhì)代謝等方面起核心調(diào)節(jié)作用，而在肝炎病毒感染復(fù)制過程中，miR-122 既可以通過與HCV 基因組相關(guān)位點(diǎn)結(jié)合，加強(qiáng)病毒基因穩(wěn)定性，進(jìn)而刺激HCV 病毒復(fù)制［11］;也可以經(jīng)miR-122-Cyclin G1/P53 通路，抑制HBV 基因表達(dá)和復(fù)制［12］。miR-122 在不同肝炎病毒病理過程中截然相反的作用機(jī)制，值得深入研究。除肝臟特異性miRNA外，尚有多種miRNA 與肝炎病毒促進(jìn)肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)，如HBV 可通過激活miRNA-181a 啟動(dòng)子上調(diào)miRNA-181a 表達(dá)，而miRNA-181a 上調(diào)可抑制其靶基因E2F5 轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而在體內(nèi)和體外促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，這可能是HBV 促肝癌發(fā)生的機(jī)制之一［13］。

miRNA-205 作為一種抑癌基因，可通過靶基因E2F1 抑制肝癌細(xì)胞的增殖，已在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中得到證實(shí)，但在多種HBV 陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞系中miRNA-205 低表達(dá)，與HBV-X 基因通過誘導(dǎo)miRNA-205 啟動(dòng)子甲基化密切相關(guān)，表明HBV 在病毒復(fù)制過程中有針對(duì)性地抑制肝癌相關(guān)抑癌基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生［14］。而HCV 相關(guān)肝癌研究顯示，HCV 核心蛋白可以通過抑制miR-152 上調(diào)Wnt1，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，而轉(zhuǎn)染miR-152 的模擬物后，Wnt1 在mRNA 和蛋白水平均表達(dá)下調(diào)，肝癌細(xì)胞增殖受到抑制［15］。miR-130a 通過其靶基因和相關(guān)信號(hào)通路，不但可恢復(fù)機(jī)體固有免疫應(yīng)答，同時(shí)還抑制miR-122 的表達(dá)，進(jìn)而抑制HCV 的復(fù)制，這種miRNA 之間相互作用的現(xiàn)象和機(jī)制，可能是未來(lái)miRNA 研究的新方向［16］。此外，HCV誘導(dǎo)miR-155 過表達(dá)，通過Wnt 通路促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和惡性轉(zhuǎn)化;miR-198 通過有絲分裂相關(guān)途徑抑制HCV 陽(yáng)性肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲等，均已有報(bào)道［17-18］。

3 miRNA 與肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化

HCC 發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞周期失控、癌基因與抑癌基因異常等有關(guān)。miRNA 在肝細(xì)胞癌發(fā)生過程中，既可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡或者細(xì)胞周期，也可以經(jīng)調(diào)節(jié)癌基因和/或抑癌基因參與腫瘤發(fā)生途徑，影響HCC的發(fā)生。其作用具有網(wǎng)絡(luò)化、雙向性及組織特異性的特點(diǎn)［19］。如肝癌組織miR-26a 表達(dá)明顯低于配對(duì)癌周和遠(yuǎn)癌組織，顯示miR-26a 可直接靶向于肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)［20］;同時(shí)對(duì)VEGF也有調(diào)控作用，阻止新生血管形成［21］，miR-26a 被認(rèn)為在肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中起抑癌基因作用;miR-21作為促癌miRNA，可抑制其靶基因絲裂原活化蛋白激酶激酶-3(MAP2K3)表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖;人肝癌HepG2 細(xì)胞中導(dǎo)入含miR-21 沉默質(zhì)粒后，MAP2K3 在基因和蛋白水平均上調(diào)表達(dá)，細(xì)胞增殖顯著減少［22］。

miRNA 經(jīng)多種信號(hào)通路途徑，在HCC 相關(guān)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期中起調(diào)控作用。作為最重要的肝臟特異性miRNA，占肝臟miRNA 總量70%的miR-122在Hep3B2、SNU-182 和SNU-475 等HBV 陽(yáng)性肝癌細(xì)胞系中表達(dá)下降，而AKT 信號(hào)通路中的AKT3 在這些細(xì)胞系中表達(dá)明顯升高，與miR-122 的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。經(jīng)證實(shí)AKT3 是miR-122 靶基因之一，在肝癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)入含miR-122 質(zhì)粒后，可抑制AKT3 以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并經(jīng)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)［23］。信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription，STAT)蛋白家族是一組可被不同細(xì)胞因子受體激活的相關(guān)蛋白，其中STAT3 與肝癌關(guān)系較為密切，miR-124可調(diào)控HepG2 細(xì)胞STAT3 基因表達(dá)及蛋白磷酸化，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，miR-124 表達(dá)下調(diào)被認(rèn)為是肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制之一［24］。

miRNA 還可通過細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白Cyclin 家族等途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，如miR-503 的直接靶基因是Cyclin D3 和E2F3，該miRNA 可以通過Rb-E2F 信號(hào)通路誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞G1期阻滯，因而作為抑癌miRNA在肝癌組織和肝癌細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)［25］;同樣作為抑癌miRNA，miR-451 的靶基因是核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 通路激活劑IκB，miR-451 通過調(diào)節(jié)NF-κB 通路影響其下游基因Cyclin D1 和c-myc，進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞G1期阻滯，誘導(dǎo)其凋亡，因此，miR-451 的表達(dá)抑制可能是肝癌惡性轉(zhuǎn)化的啟動(dòng)環(huán)節(jié)［26］。

4 miRNA 與HCC 侵襲、轉(zhuǎn)移

肝癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程，牽涉到許多細(xì)胞、分子之間的相互作用和改變，如肝癌細(xì)胞的局部侵襲、腫瘤新生血管的形成及上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)等［27］。miRNA 在這些病理生理過程中均發(fā)揮重要作用?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9 是公認(rèn)的與肝癌細(xì)胞局部侵襲密切相關(guān)的蛋白，miR-224 在高侵襲性的MHCC-97H 肝癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，顯示該miRNA可直接靶向同源異形盒基因(Hox)家族成員HoxD10，進(jìn)而激活下游MMP-9，促進(jìn)肝癌細(xì)胞局部侵襲［28］。對(duì)不同分化程度的肝癌組織和不同侵襲潛能的肝癌細(xì)胞系進(jìn)行miRNA 芯片分析發(fā)現(xiàn)，miR-491 在分化程度較低的肝癌組織和侵襲潛能較高的肝癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯下調(diào)。抑制低侵襲潛能的HepG2 中的miR-491 表達(dá)可以增加該細(xì)胞中MMP-2/9 的水平并增加細(xì)胞侵襲能力，反之在高侵襲力的MHCC-97H 細(xì)胞中過表達(dá)miR-491，則能降低MMP-2/9 水平和細(xì)胞侵襲能力。此外，miR-491 水平還與E-鈣黏素(E-cadherins)呈明顯正相關(guān)，與波形蛋白(Vimentin)呈明顯負(fù)相關(guān)，顯示miR-491 也可以通過封閉EMT 途徑抑制肝癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移［29］。

新生血管形成是腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)，而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是腫瘤血管生成最重要的啟動(dòng)因子，發(fā)現(xiàn)肝癌組織miR-195 表達(dá)明顯下調(diào)與肝癌血管新生、轉(zhuǎn)移及生存期短呈顯著負(fù)相關(guān)。體外研究顯示miR-195 不但可降低內(nèi)皮細(xì)胞微管形成，還可直接抑制肝癌細(xì)胞遷移能力、穿透基質(zhì)膠侵襲能力;體內(nèi)研究中，miR-195 明顯降低移植瘤內(nèi)微血管密度(MVD)、抑制肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移，其機(jī)制主要通過調(diào)節(jié)其靶基因VEGF 實(shí)現(xiàn)，在腫瘤微環(huán)境中下調(diào)miR-195 可增加VEGF 表達(dá)，進(jìn)一步激活內(nèi)皮細(xì)胞VEGF受體2 通路，促進(jìn)腫瘤血管新生［30］。

5 miRNA 與HCC 診斷

miRNA 與HCC 發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，在肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化早期即發(fā)生改變的miRNA，可用于肝癌早期發(fā)現(xiàn)和診斷。近來(lái)，隨著對(duì)miRNA 的認(rèn)識(shí)，循環(huán)miRNA(circulating miRNA)倍受關(guān)注，已發(fā)現(xiàn)外周血及尿液等體液中多種miRNA 表達(dá)豐度高，且理化特性穩(wěn)定，作為肝癌診斷標(biāo)志物具有臨床應(yīng)用前景［31］。以大通量檢測(cè)技術(shù)分析手術(shù)切除癌組織及手術(shù)前后血miRNA:發(fā)現(xiàn)癌組織miR-15b、miR-21、miR-130b 和miR-183 高表達(dá)，血miRNA 表達(dá)在手術(shù)切除前后差異顯著，推測(cè)血miRNA 源自肝癌組織。經(jīng)臨床驗(yàn)證表明，miR-15b 和miR-130b 是肝癌診斷較好標(biāo)志物，兩者聯(lián)合檢測(cè)敏感度為98.2%，特異度為91.5%;AFP 水平低于20 ng/ml 的肝癌患者敏感率達(dá)96.7%，具有互補(bǔ)診斷價(jià)值和良好效率［32］。

HBV 陽(yáng)性肝炎、肝硬化和肝癌患者血漿24 種miRNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR 分析，發(fā)現(xiàn)miR-125b-5p 表達(dá)分別上調(diào)2.85、2.46 和1.89 倍，而miR-223-3p 分別下調(diào)5.55、13.88 和12.65 倍，顯示兩種類型miRNA 在乙型肝炎經(jīng)肝硬化發(fā)展至肝癌過程中，早期血漿改變明顯，有可能成為肝癌早期診斷血清標(biāo)志物［33］。此外，芯片技術(shù)比較HCV 陽(yáng)性肝癌、慢性肝炎及對(duì)照人群尿液miRNA 表達(dá)譜改變，發(fā)現(xiàn)肝癌患者尿miR-625、miR-532 和miR-618 表達(dá)上調(diào)，miR-516-5p和miR-650 下調(diào);定量PCR 證實(shí)miR-618 和miR-650是早期診斷HCV 相關(guān)肝癌有效指標(biāo)，兩者聯(lián)合檢查敏感度為58%，特異度為75%，均優(yōu)于AFP［34］。

6 miRNA 與HCC 治療

癌組織miRNA 表達(dá)異常，針對(duì)肝癌相關(guān)的miRNA 進(jìn)行基因調(diào)控，進(jìn)而影響這些miRNA 下游靶基因的表達(dá)，可能是基因治療肝癌的新途徑。目前最有應(yīng)用前景也是研究最多的是針對(duì)肝臟特異性miR-122 的各種基因治療手段，如已進(jìn)入臨床2 期試驗(yàn)的miravirsen，是一種新型鎖核酸修飾的硫代反義寡核苷酸拮抗劑，它可以在體內(nèi)與miR-122 形成高度穩(wěn)定的雜交雙鏈，從而抑制其功能。一些臨床抗病毒治療耐受的慢性丙肝患者，皮下注射miravirsen 后，可在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)持續(xù)降低患者體內(nèi)HCV RNA 水平，抗病毒作用呈miravirsen 劑量依賴，且不產(chǎn)生病毒耐藥［35］。

腺病毒-單純皰疹病毒胸苷激酶基因載體聯(lián)合阿昔洛韋治療肝癌在臨床上取得了不錯(cuò)的療效，但也存在非目的載體擴(kuò)散、自殺基因表達(dá)等毒副作用引起的肝損傷。有研究將miR-122 靶向的基因序列插入TD基因3'非編碼區(qū)，構(gòu)建miR-122 調(diào)控性載體，轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞并注射入miR-122 缺失的原位肝癌小鼠瘤內(nèi)。顯示插入miR-122 調(diào)控序列可明顯減少細(xì)胞內(nèi)載體的轉(zhuǎn)基因表達(dá)，選擇性地保護(hù)miR-122 陽(yáng)性細(xì)胞;而在小鼠體內(nèi)，插入miR-122 調(diào)控序列可有效減少載體在正常肝臟中的表達(dá)，同時(shí)對(duì)載體在腫瘤中的表達(dá)沒有影響，提升了基因藥物在腫瘤內(nèi)的表達(dá)特異性。與未插入miR-122 調(diào)控序列的載體藥物相比較，小鼠在達(dá)到治療劑量時(shí)肝損傷明顯減少。因而miR-122 調(diào)控的TD 載體聯(lián)合阿昔洛韋治療在有效提升藥物抗腫瘤效力的同時(shí)還增強(qiáng)了藥物的安全性［36］。

以miRNA 治療肝癌仍處于探索階段，除miravirsen 外，絕大部分研究均為基礎(chǔ)性工作，應(yīng)用于臨床尚待時(shí)日。單純模擬或敲除某些特定miRNA，可能會(huì)因靶基因的復(fù)雜性而致某些副作用;肝癌是多基因疾病，如何針對(duì)多個(gè)肝癌過表達(dá)或缺失表達(dá)的基因設(shè)計(jì)miRNA，沉默或上調(diào)多個(gè)肝癌相關(guān)基因以增強(qiáng)治療效果值得探討。

7 miRNA 與HCC 預(yù)后

轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是肝癌術(shù)后患者生存的關(guān)鍵，因miRNA 與癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)，因而對(duì)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNA 進(jìn)行監(jiān)測(cè)，有助于肝癌的預(yù)后判斷。對(duì)不同分化程度的肝癌進(jìn)行大樣本miRNA 芯片分析，發(fā)現(xiàn)12 個(gè)miRNA 與肝癌的病理分化程度有關(guān)。其中miR-18b 在低分化肝癌中的表達(dá)明顯高于高分化肝癌，且肝癌手術(shù)后患者miR-18b 高表達(dá)預(yù)示其肝癌復(fù)發(fā)時(shí)間提前［36］。另有研究對(duì)治療后復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)肝癌患者miR-185 水平進(jìn)行分組分析，發(fā)現(xiàn)miR-185 的低表達(dá)與肝癌高復(fù)發(fā)率相關(guān)，而與肝癌臨床病理指標(biāo)如年齡、性別、AFP 水平、腫瘤大小、分化程度及包膜完整等無(wú)相關(guān)性，表明miR-185 的低表達(dá)是肝癌早期復(fù)發(fā)的靈敏預(yù)警指標(biāo)［37］。miR-100 作為肝癌轉(zhuǎn)移抑制基因，與miR-185 的表達(dá)趨勢(shì)相似，肝癌組織中miR-100 的水平明顯低于鄰近非癌組織，而miR-100 的低表達(dá)與肝癌的高分級(jí)、高淋巴轉(zhuǎn)移率、TNM 進(jìn)展期及高復(fù)發(fā)率密切相關(guān)［38］。而miR-25 在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于鄰近非癌組織，高miR-25 水平的肝癌患者生存期明顯低于低水平者，miR-25 表達(dá)水平、TNM 分期及血管侵襲均是肝癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子［39］。

8 展望

miRNA 與HCC 的相關(guān)性研究已取得明顯進(jìn)展，為基因診斷、治療等提供了理論依據(jù)和新思路，但因肝癌自身復(fù)雜性及技術(shù)局限性，需探討的問題仍很多，如miRNA 多態(tài)性與肝癌關(guān)系、調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和正反調(diào)節(jié)機(jī)制等;隨著大通量miRNA 檢測(cè)、痕量miRNA 檢測(cè)、循環(huán)miRNA 檢測(cè)及miRNA 寡核苷酸抗體等技術(shù)的發(fā)展，腫瘤發(fā)展不同階段miRNA 表達(dá)差異及其具體機(jī)制將被深入研究。隨著對(duì)miRNA 認(rèn)識(shí)的不斷深入，以miRNA 為橋梁，在肝癌診斷、發(fā)病機(jī)制和靶向治療等方面，將會(huì)有更廣闊的應(yīng)用前景。

［1］ Yao M，Yao DF，Bian YZ，et al. Values of circulating GPC-3 mRNA and alpha-fetoprotein in detecting patients with hepatocellular carcinoma［J］. Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2013，12(2):171-179.

［2］ Qi W，Liang W，Jiang H，et al. The function of miRNA in hepatic cancer stem cell［J］. Biomed Res Int，2013，2013:358902.

［3］ Schwarzenbach H，Nishida N，Calin GA，et al. Clinical relevance of circulating cell-free microRNAs in cancer［J］. Nat Rev Clin Oncol，2014，11(3):145-156.

［4］ Ameres SL， Zamore PD. Diversifying microRNA sequence and function［J］. Nat Rev Mol Cell Biol，2013，14(8):475-488.

［5］ Seton-Rogers S. MicroRNAs:lines of communication［J］. Nat Rev Cancer，2012，12(9):580-581.

［6］ Hermeking H. MicroRNAs in the p53 network:micromanagement of tumour suppression［J］. Nat Rev Cancer，2012，12(9):613-626.

［7］ Skipper M. Cancer genomics:a panoramic view of cancer［J］. Nat Rev Genet，2013，14(11):750.

［8］ Soon P，Kiaris H. MicroRNAs in the tumour microenvironment:big role for small players ［J］. Endocr Relat Cancer，2013，20(5):R257-R267.

［9］ Cheng Q，Yi B，Wang A，et al. Exploring and exploiting the fundamental role of microRNAs in tumor pathogenesis［J］. Onco Targets Ther，2013，6:1675-1684.

［10］ Sun B，Karin M. Inflammation and liver tumorigenesis［J］. Front Med，2013，7(2):242-254.

［11］ Hu J，Xu Y，Hao J，et al. MiR-122 in hepatic function and liver diseases［J］. Protein Cell，2012，3(5):364-371.

［12］ Wang S，Qiu L，Yan X，et al. Loss of microRNA 122 expression in patients with hepatitis B enhances hepatitis B virus replication through cyclin G(1)-modulated P53 activity ［J］. Hepatology，2012，55(3):730-741.

［13］ Zou C，Li Y，Cao Y，et al. Up-regulated MicroRNA-181a induces carcinogenesis in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma by targeting E2F5［J］. BMC Cancer，2014，14:97.

［14］ Zhang T，Zhang J，Cui M，et al. Hepatitis B virus X protein inhibits tumor suppressor miR-205 through inducing hypermethylation of miR-205 promoter to enhance carcinogenesis［J］. Neoplasia，2013，15(11):1282-1291.

［15］ Huang S，Xie Y，Yang P，et al. HCV core protein-induced downregulation of microRNA-152 promoted aberrant proliferation by regulating Wnt1 in HepG2 cells［J］. PLoS One，2014，9(1):e81730.

［16］ Li S，Duan X，Li Y，et al. MicroRNA-130a inhibits HCV replication by restoring the innate immune response［J］. J Viral Hepat，2014，21(2):121-128.

［17］ Zhang Y，Wei W，Cheng N，et al. Hepatitis C virus-induced up-regulation of microRNA-155 promotes hepatocarcinogenesis by activating Wnt signaling［J］. Hepatology，2012，56(5):1631-1640.

［18］ Elfimova N，Sievers E，Eischeid H，et al. Control of mitogenic and motogenic pathways by miR-198，diminishing hepatoma cell growth and migration ［J］. Biochim Biophys Acta，2013，1833 (5):1190-1198.

［19］ Wong CM，Kai AK，Tsang FH，et al. Regulation of hepatocarcinogenesis by microRNAs ［J］. Front Biosci (Elite Ed)，2013，5:49-60.

［20］ Yang X，Zhang XF，Lu X，et al. MicroRNA-26a suppresses angiogenesis in human hepatocellular carcinoma by targeting hepatocyte growth factor-cMet pathway ［J］. Hepatology，2014，59 (5):1874-1885.

［21］ Chai ZT，Kong J，Zhu XD，et al. MicroRNA-26a inhibits angiogenesis by down-regulating VEGFA through the PIK3C2α/Akt/HIF-1α pathway in hepatocellular carcinoma［J］. PLoS One，2013，8(10):e77957.

［22］ Xu G，Zhang Y，Wei J，et al. MicroRNA-21 promotes hepatocellular carcinoma HepG2 cell proliferation through repression of mitogen-activated protein kinase-kinase 3［J］. BMC Cancer，2013，13:469.

［23］ Nassirpour R，Mehta PP，Yin MJ. miR-122 regulates tumorigenesis in hepatocellular carcinoma by targeting AKT3 ［J］. PLoS One，2013，8(11):e79655.

［24］ Lu Y，Yue X，Cui Y，et al. MicroRNA-124 suppresses growth of human hepatocellular carcinoma by targeting STAT3［J］. Biochem Biophys Res Commun，2013，441(4):873-879.

［25］ Xiao F，Zhang W，Chen L，et al. MicroRNA-503 inhibits the G1/S transition by downregulating cyclin D3 and E2F3 in hepatocellular carcinoma［J］. J Transl Med，2013，11:195.

［26］ Li HP，Zeng XC，Zhang B，et al. miR-451 inhibits cell proliferation in human hepatocellular carcinoma through direct suppression of IKKβ［J］. Carcinogenesis，2013，34(11):2443-2451.

［27］ Chen J，Liu WB，Jia WD，et al. Overexpression of Mortalin in hepatocellular carcinoma and its relationship with angiogenesis and epithelial to mesenchymal transition［J］. Int J Oncol，2014，44(1):247-255.

［28］ Li Q，Ding C，Chen C，et al. miR-224 promotes cell migration and invasion by modulating p-PAK4 and MMP-9 via targeting HOXD10 in human hepatocellular carcinoma［J］. J Gastroenterol Hepatol，2013，13:12429.

［29］ Zhou Y，Li Y，Ye J，et al. MicroRNA-491 is involved in metastasis of hepatocellular carcinoma by inhibitions of matrix metalloproteinase and epithelial to mesenchymal transition［J］. Liver Int，2013，33(8):1271-1280.

［30］ Wang R，Zhao N，Li S，et al. MicroRNA-195 suppresses angiogenesis and metastasis of hepatocellular carcinoma by inhibiting the expression of VEGF，VAV2，and CDC42［J］. Hepatology，2013，58(2):642-653.

［31］ Qi J，Wang J，Katayama H，et al. Circulating microRNAs (cmiRNAs)as novel potential biomarkers for hepatocellular carcinoma［J］.Neoplasma，2013，60(2):135-142.

［32］ Liu AM，Yao TJ，Wang W，et al. Circulating miR-15b and miR-130b in serum as potential markers for detecting hepatocellular carcinoma:a retrospective cohort study ［J］. BMJ Open，2012，2(2):e000825.

［33］ Giray BG，Emekdas G，Tezcan S，et al. Profiles of serum microRNAs;miR-125b-5p and miR223-3p serve as novel biomarkers for HBV-positive hepatocellular carcinoma［J］. Mol Biol Rep，2014，41(7):4513-4519.

［34］ Abdalla MA，Haj-Ahmad Y. Promising candidate urinary microRNA biomarkers for the early detection of hepatocellular carcinoma among high-risk hepatitis C virus egyptian patients［J］. J Cancer，2012，3:19-31.

［35］ Janssen HL，Reesink HW，Lawitz EJ，et al. Treatment of HCV infection by targeting microRNA［J］. N Engl J Med，2013，368(18):1685-1694.

［36］ Wang G，Dong X，Tian W，et al. Evaluation of miR-122-regulated suicide gene therapy for hepatocellular carcinoma in an orthotopic mouse model［J］. Chin J Cancer Res，2013，25(6):646-655.

［37］ Zhi Q，Zhu J，Guo X，et al. Metastasis-related miR-185 is a potential prognostic biomarker for hepatocellular carcinoma in early stage［J］.Biomed Pharmacother，2013，67(5):393-398.

［38］ Chen P，Zhao X，Ma L. Downregulation of microRNA-100 correlates with tumor progression and poor prognosis in hepatocellular carcinoma［J］.Mol Cell Biochem，2013，383(1-2):49-58.

［39］ Su ZX，Zhao J，Rong ZH，et al. Upregulation of microRNA-25 associates with prognosis in hepatocellular carcinoma［J］. Diagn Pathol，2014，9:47.