可見(jiàn)光分光光度法測(cè)定頭孢曲松鈉*

劉榮森，張長(zhǎng)水

（1.河南林業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南洛陽(yáng)471002；2.河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南洛陽(yáng)471003）

頭孢曲松鈉（Ceftriaxone Sodium）是第三代頭孢菌素類(lèi)抗生素，用于敏感致病菌所致的下呼吸道感染、尿路、膽道感染，以及腹腔感染、盆腔感染、皮膚軟組織感染、骨和關(guān)節(jié)感染、敗血癥、腦膜炎等及手術(shù)期感染預(yù)防。測(cè)定頭孢曲松鈉的含量對(duì)藥品質(zhì)量的控制及指導(dǎo)臨床用藥都具有極其重要的意義。

目前，已報(bào)道的測(cè)定頭孢曲松鈉的方法有：可見(jiàn)光分光光度法[1-3]、紫外分光光度法[4]、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法[5，6]、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法[7]、共振銳利散射光譜法[8]、高效液相色譜法[9]等。但基于生成普魯士藍(lán)來(lái)測(cè)定頭孢曲松鈉的方法還未見(jiàn)報(bào)道。

研究表明：在一定溫度下，F(xiàn)e3+能被頭孢曲松鈉還原為Fe2+，F(xiàn)e2+與鐵氰化鉀生成可溶性普魯士藍(lán)，通過(guò)測(cè)定普魯士藍(lán)的吸光度間接測(cè)定頭孢曲松鈉的含量。本法和其他分光光度法相比，由于使用無(wú)毒、價(jià)格便宜的鐵氰化鉀進(jìn)行顯色，使測(cè)試成本低廉；采用FeCl3在一定條件下直接氧化頭孢曲松鈉，由于分析步驟少，使分析誤差較低；使用可見(jiàn)光分光光度法進(jìn)行分析，具有測(cè)試儀器簡(jiǎn)單、操作容易等優(yōu)點(diǎn)；本法還具有靈敏度高，線(xiàn)性范圍較寬等特點(diǎn)。用于市售頭孢曲松鈉針劑中頭孢曲松鈉含量的測(cè)定，結(jié)果令人滿(mǎn)意。可用于基層醫(yī)藥檢驗(yàn)部門(mén)對(duì)頭孢曲松鈉的檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料、儀器與試劑

注射用頭孢曲松鈉粉針劑（市售）。

TU-1900 雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；電熱水浴鍋（鄭州科工貿(mào)公司）；電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；pH-3C 型精密酸度計(jì)（上海大普儀器有限公司）。

頭孢曲松鈉對(duì)照品（大連美侖生物技術(shù)有限公司），用二次水配成100μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冷藏避光保存；FeCl3（A.R.）:加入適量HCl，用二次水配制成1.500×10-2mol·L-1的溶液；鐵氰化鉀（AR）:用二次水配置成1.500×10-2mol·L-1的溶液。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在12.50mL 比色管中，加入2.00mL 1.500×10-2mol·L-1FeCl3溶液，一定量的頭孢曲松鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)溶液，在100℃水浴中加熱30min。冷卻至室溫，加入0.80mL 1.500×10-2mol·L-1鐵氰化鉀，加水至刻度，室溫放置20min。以試劑空白為參比，在733nm 處測(cè)定溶液的吸光度。

2 結(jié)果和討論

2.1 最大吸收波長(zhǎng)

按照1.2 實(shí)驗(yàn)方法配制試劑空白溶液（不加入頭孢曲松鈉）。以蒸餾水為參比溶液，掃描了試劑空白在500～900nm 范圍內(nèi)的吸收光譜（圖1 曲線(xiàn)b）；以試劑空白為參比，掃描了頭孢曲松鈉與FeCl3在100℃水浴中加熱30min 后與鐵氰化鉀反應(yīng)生成普魯士藍(lán)的吸收光譜（圖1 曲線(xiàn)a），最大吸收波長(zhǎng)為733nm，而試劑空白在733nm 處吸收很小。故本試驗(yàn)以試劑空白為參比，在733nm 處測(cè)定生成的普魯士藍(lán)的吸光度。

圖1 吸收光譜Fig.1 Absorption spectrum

2.2 FeCl3 氧化頭孢曲松鈉反應(yīng)的溫度和時(shí)間對(duì)吸光度的影響

考察了反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)FeCl3氧化頭孢曲松鈉的影響。固定反應(yīng)時(shí)間為30min，測(cè)定了FeCl3氧化頭孢曲松鈉反應(yīng)溫度分別為為25、30、50、70、90、100℃的吸光度。隨著反應(yīng)溫度逐漸升高，溶液吸光度隨著增大，溫度達(dá)到100℃時(shí)，溶液的吸光度達(dá)到最大。故選擇頭孢曲松鈉與FeCl3反應(yīng)溫度為100℃。

固定反應(yīng)溫度為100℃，考察了FeCl3氧化頭孢曲松鈉的反應(yīng)時(shí)間對(duì)吸光度的影響，在5～80min 時(shí)間范圍內(nèi)，每隔5min 測(cè)定一次吸光度。當(dāng)反應(yīng)時(shí)間到30min 時(shí)，溶液的吸光度最大。故選擇頭孢曲松鈉與FeCl3反應(yīng)時(shí)間為30min。

2.3 FeCl3 用量對(duì)吸光度的影響

FeCl3作為氧化劑，需把頭孢曲松鈉氧化完全，實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)FeCl3用量達(dá)到1.80mL 時(shí)，溶液吸光度最大，若FeCl3的用量繼續(xù)增大，溶液的吸光度幾乎保持不變。為保證頭孢曲松鈉完全被氧化，F(xiàn)eCl3需稍過(guò)量，使故本實(shí)驗(yàn)選擇加入2.00mLFeCl3（1.500×10-2mol·L-1）。

2.4 鐵氰化鉀用量的選擇

固定FeCl3用量為2.00mL，考察了鐵氰化鉀用量對(duì)吸光度的影響，隨著鐵氰化鉀用量的增大，吸光度也增大，當(dāng)鐵氰化鉀用量達(dá)到0.80mL 時(shí)達(dá)到最大，再增加鐵氰化鉀用量，溶液吸光度幾乎不變，說(shuō)明當(dāng)鐵氰化鉀用量為0.80mL 時(shí)已與還原生成的Fe2+反應(yīng)完全。本實(shí)驗(yàn)選擇加入0.80mL 鐵氰化鉀（1.500×10-2mol·L-1）。

2.5 顯色時(shí)間的影響

FeCl3與頭孢曲松鈉反應(yīng)后，冷卻至室溫，加入0.80mL 的鐵氰化鉀溶液，在室溫下放置顯色，隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，溶液的吸光度增大，當(dāng)顯色時(shí)間到20min 時(shí)，吸光度達(dá)到最大。20min 到60min，溶液的吸光度基本不變，說(shuō)明顯色反應(yīng)已完成。故顯色時(shí)間選擇室溫下放置20min。

2.6 溶液中過(guò)量的Fe3+對(duì)吸光度的影響

考察了過(guò)量的Fe3+對(duì)吸光度的影響。按照試驗(yàn)方法，分別加入2.00mL 1.500×10-2mol·L-1FeCl3溶液，但不加入頭孢曲松鈉，在100℃水浴中加熱30min。冷卻至室溫，加入0.80mL 1.500×10-2mol·L-1鐵氰化鉀，加水至刻度，以蒸餾水為參比，每隔5min 測(cè)定其在733nm 處的吸光度，從5 到60min 吸光度都很小且基本不變。故選擇試劑空白為參比，過(guò)量的Fe3+不影響本試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果。

2.7 工作曲線(xiàn)

配制頭孢曲松鈉含量分別0.1、0.3、0.6、1.0、1.5、2.0、2.6、3.2、4.0、4.8、5.6、6.4、7.2μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2 的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。頭孢曲松鈉含量在0.11～7.20 μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸方程A=0.2717ρ（μg·mL-1）+0.0325，相關(guān)系數(shù)R=0.9992，表觀摩爾系數(shù)ε=1.8×105L·（mol·cm）-1。選擇頭孢曲松鈉含量為1.00μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行11 次重復(fù)測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.32 %。檢測(cè)限（3σ/k）為0.014μg·mL-1。

2.8 樣品測(cè)定

用市售頭孢曲松鈉粉針劑進(jìn)行含量的測(cè)定。準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的頭孢曲松鈉針劑（相當(dāng)于頭孢曲松鈉0.1000g），加水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中，稀釋至刻度。按照最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。產(chǎn)品平均加標(biāo)回收率為100.5%，結(jié)果令人滿(mǎn)意。

表1 樣品的測(cè)定及回收率的試驗(yàn)（n=6）Tab.1 Determination results of samples and recovery（n=6）

3 結(jié)論

本研究利用生成普魯士藍(lán)的反應(yīng)間接測(cè)定頭孢曲松鈉的含量，選擇了最佳實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)果表明：頭孢曲松鈉含量在0.11～7.20μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線(xiàn)性關(guān)系,平均回收率達(dá)到100.5%。能用于市售頭孢曲松鈉粉針劑含量的測(cè)定。

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