支氣管肺泡灌洗液和血清腫瘤標志物檢測在肺癌診斷中的應用

白曉敏 楊小崗

1.河北省邯鄲市第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北邯鄲056000;2.河北省邯鄲市第一醫(yī)院腫瘤科，河北邯鄲056000

支氣管肺泡灌洗液和血清腫瘤標志物檢測在肺癌診斷中的應用

白曉敏1楊小崗2

1.河北省邯鄲市第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北邯鄲056000;2.河北省邯鄲市第一醫(yī)院腫瘤科，河北邯鄲056000

目的探討檢測支氣管肺泡灌洗液和血清腫瘤標志物在肺癌診斷中的應用。方法選擇2013年1～12月在邯鄲市第一醫(yī)院治療的58例肺癌患者以及42例肺部良性病變患者，檢測并分析患者支氣管肺泡灌洗液以及血清中的CEA、Cyfra21-1以及NSE水平。結(jié)果肺癌患者支氣管肺泡灌洗液中CEA［(255.3±89.4)ng/mL］、Cyfra21-1［(244.1±79.2)ng/mL］、NSE［(75.2±21.1)ng/mL］水平均顯著高于血液中［(61.7±22.3)、(16.1±4.9)、(31.5±11.4)ng/mL］(P＜0.01)，肺部良性病變患者支氣管肺泡灌洗液中CEA［(14.1±4.8)ng/mL］、Cyfra21-1［(11.6±3.6)ng/mL］、NSE［(20.2± 6.9)ng/mL］水平均顯著高于血液中［(3.2±1.0)、(3.1±0.9)、(12.1±3.8)ng/ml］(P＜0.01);肺癌患者支氣管肺泡灌洗液以及血液中CEA、Cyfra21-1、NSE水平均顯著高于肺部良性病變患者(P＜0.01)。CEA在腺癌水平最高，Cyfra21-1在鱗癌水平最高，NSE在小細胞癌的水平最高(P＜0.01)。隨著病理分期的提高，支氣管肺泡灌洗液以及血液中腫瘤標志物的水平均顯著升高(P＜0.01)。支氣管肺泡灌洗液CEA、Cyfra21-1對肺癌診斷的敏感性和準確性顯著高于血液檢測結(jié)果(P＜0.01)。支氣管肺泡灌洗液聯(lián)合血清中CEA+Cyfra21-1+NSE檢測的敏感性最高(P＜0.01)。結(jié)論肺癌患者支氣管肺泡灌洗液中腫瘤標志物水平顯著高于血液中水平，并且聯(lián)合檢測支氣管肺泡灌洗液以及血液中的腫瘤標志物能夠顯著提高對肺癌診斷的敏感性。

支氣管肺泡灌洗液;腫瘤標志物;肺癌;診斷

肺癌是臨床常見惡性腫瘤，惡性程度高，患者病死率高，超過50%的患者在確診時已經(jīng)是肺癌晚期。早期診斷、早期治療對提高患者的生存率，改善預后具有重要的臨床意義。肺癌的確診主要是組織病理學以及細胞學，但是獲得標本具有一定的難度。支氣管肺泡灌技術近年來在臨床的廣泛應用，對灌洗液進行腫瘤標志物的檢測成為輔助診斷肺癌的重要方法［1］。邯鄲市第一醫(yī)院(以下簡稱“我院”)通過檢測支氣管肺泡灌洗液以及血液中腫癌標志物用于肺癌的診斷，取得了一定的效果，現(xiàn)將結(jié)果報道如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年1～12月在我院治療的58例肺癌患者以及42例肺部良性疾病患者的臨床資料進行回顧性分析。所有納入研究的患者均行支氣管肺泡灌洗術輔助診斷，肺癌患者均經(jīng)病理確診。肺癌患者中男33例，女25例，平均年齡(61.3±7.7)歲，腺癌25例，鱗癌19例，小細胞癌14例;肺部良性病變患者中男24例，女18例，平均年齡(59.5±8.3)歲，肺炎16例，支氣管擴張11例，肺結(jié)核8例，肺塵埃沉著病7例。兩組患者性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 方法

所有患者均行支氣管肺泡灌洗術，并留肺泡灌洗液用于檢查。儀器為Olympus纖維支氣管鏡，1%利多卡因咽喉部局部噴霧麻醉，纖維支氣管鏡經(jīng)口插入，直視下觀察左右支氣管，根據(jù)X線檢查結(jié)果，將纖維支氣管鏡末端楔于病變段支氣管開口，對于病變廣泛，或者病變部位不確定的患者，將纖維支氣管鏡末端楔于左肺舌葉或者右肺中葉的支氣管開口。注入20 mL無菌鹽水，負壓吸出，重復3次。灌洗后根據(jù)情況進行活檢及刷片?；厥展嘞匆?0 mL，濾除黏液，離心10 min，取上清液，-70℃保存待測。纖維支氣管鏡術當天采集清晨空腹靜脈血3 mL，離心10 min，取上清-70℃待測。采用電化學發(fā)光免疫分析儀測定灌洗液以及血液中癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、Cyfra21-1含量。所選試劑與儀器配套，所有操作均嚴格按照說明書進行。

計算支氣管肺泡灌洗液以及血清中腫瘤標志物以及各腫瘤標志物聯(lián)合檢測的敏感性、特異性、準確性。敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性);特異性=真陰性/(真陰性+假陽性);準確性=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)。聯(lián)合檢測的陽性判斷為聯(lián)合檢測項目至少一項為陽性，陰性判斷為聯(lián)合檢測項目均不超過正常標準。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌和肺部良性疾病患者的支氣管肺泡灌洗液以及血清中CEA、Cyfra21-1、NSE水平

肺泡灌洗液中CEA、Cyfra21-1、NSE水平均顯著高于血液中(P＜0.01);肺癌組肺泡灌洗液以及血液中CEA、Cyfra21-1、NSE水平均顯著高于肺部良性疾病組患者(P＜0.01)。見表1。

表1 肺癌和肺部良性疾病患者的支氣管肺泡灌洗液以及血清中CEA、Cyfra21-1、NSE水平(ng/mL±s)

注:與肺部良性疾病同一樣本比較，#P＜0.01;CEA:癌胚抗原;NSE:神經(jīng)元特異烯醇化酶

組別例數(shù)樣本C E A C y f r a 2 1 -1 N S E肺癌5 8肺部良性疾病4 2肺泡灌洗液血液t值P值肺泡灌洗液血液t值P值2 5 5 . 3 ± 8 9 . 4#6 1 . 7 ± 2 2 . 3#1 6 . 0 0 2＜0 . 0 1 1 4 . 1 ± 4 . 8 3 . 2 ± 1 . 0 1 6 . 9 3 1＜0 . 0 1 2 4 4 . 1 ± 7 9 . 2#1 6 . 1 ± 4 . 9#2 1 . 8 8 2＜0 . 0 1 1 1 . 6 ± 3 . 6 3 . 1 ± 0 . 9 1 7 . 4 4 5＜0 . 0 1 7 5 . 2 ± 2 1 . 1#3 1 . 5 ± 1 1 . 4#1 3 . 8 7 7＜0 . 0 1 2 0 . 2 ± 6 . 9 1 2 . 1 ± 3 . 8 7 . 8 3 1＜0 . 0 1

2.2 不同病理類型肺癌患者的支氣管肺泡灌洗液以及血清中CEA、Cyfra21-1、NSE水平

CEA在腺癌肺泡灌洗液以及血液中的水平最高，Cyfra21-1在鱗癌肺泡灌洗液以及血液中的水平最高，NSE在小細胞癌肺泡灌洗液以及血液中的水平最高(P＜0.01)。見表2。

2.3 不同病理分期肺癌患者的支氣管肺泡灌洗液以及血清中腫瘤標志物水平

不同病理分期肺癌患者的肺泡灌洗液中腫瘤標志物水平顯著高于血液(P＜0.01);并且隨著病理分期的提高，肺泡灌洗液以及血液中腫瘤標志物的水平均顯著升高(P＜0.01)。見表3。

2.4 支氣管肺泡灌洗液以及血清中腫瘤標志物診斷肺癌的敏感性、特異性及準確性

支氣管肺泡灌洗液CEA、Cyfra21-1對肺癌診斷的敏感性和準確性顯著高于血液檢測結(jié)果(P＜0.01)，特異性差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);而支氣管肺泡灌洗液NSE檢測的敏感性、特異性、準確性與血液檢測差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表4。

2.5 不同腫瘤標志物聯(lián)合檢測結(jié)果比較

結(jié)果顯示氣管肺泡灌洗液聯(lián)合血清中CEA+ Cyfra21-1+NSE檢測的敏感性最高(P＜0.01)，而不同聯(lián)合檢測的特異性和準確性差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表5。

表3 不同病理分期肺癌患者的支氣管肺泡灌洗液以及血清中腫瘤標志物水平(ng/mL，±s)

注:與Ⅳ期同一樣本比較，#P＜0.01;與Ⅲ期同一樣本比較，△P＜0.01; CEA:癌胚抗原;NSE:神經(jīng)元特異烯醇化酶

病理分期例數(shù)樣本C E A C y f r a 2 1 -1 N S EⅠ～Ⅱ期1 3Ⅲ期1 9Ⅳ期2 6支氣管肺泡灌洗液血液t值P值支氣管肺泡灌洗液血液t值P值支氣管肺泡灌洗液血液t值P值7 7 . 1 ± 2 8 . 4#△4 . 9 ± 1 . 8#△9 . 1 4 8＜0 . 0 1 2 5 2 . 5 ± 7 1 . 6#5 9 . 1 ± 1 7 . 4#1 0 . 4 7 1＜0 . 0 1 2 9 9 . 3 ± 8 8 . 3 1 0 4 . 2 ± 3 7 . 9 1 0 . 3 5 3＜0 . 0 1 7 4 . 8 ± 1 5 . 2#△4 . 0 ± 1 . 2#△1 6 . 7 4 2＜0 . 0 1 1 9 6 . 3 ± 5 3 . 7#1 5 . 9 ± 5 . 3#1 3 . 4 1 4＜0 . 0 1 2 8 2 . 4 ± 7 7 . 5 2 1 . 2 ± 6 . 4 1 7 . 1 2 7＜0 . 0 1 6 4 . 6 ± 2 1 . 4#△1 3 . 1 ± 3 . 8#△8 . 5 4 3＜0 . 0 1 8 0 . 7 ± 2 5 . 3#3 5 . 2 ± 1 1 . 6#6 . 4 2 9＜0 . 0 1 1 0 3 . 1 ± 3 7 . 5 4 9 . 2 ± 1 3 . 8 6 . 8 7 8＜0 . 0 1

3 討論

肺癌是臨床常見惡性腫瘤，有較高的發(fā)病率以及較高的病死率，在我國的大城市以及工業(yè)發(fā)達地區(qū)，肺癌已經(jīng)成為發(fā)病率和病死率居首位的惡性腫瘤，威脅人們的健康和生命。肺癌大多起病隱匿，尤其是周圍型肺癌，早期患者可無癥狀和體征，診斷困難，大多肺癌患者在確診時已經(jīng)是癌癥中晚期，錯過最佳治療時間，預后差。目前關于肺癌早期診斷的研究較多，常見的早期診斷方法有經(jīng)肺壁針吸肺穿刺術、X線導向下肺活檢術以及肺穿刺術，放射核素方法等，均能夠提高肺癌的早期診斷率。檢測血清以及支氣管肺泡灌洗液中的腫瘤標志物是近年來逐漸在臨床上應用的方法，具有敏感性高、創(chuàng)傷小、并發(fā)癥少等優(yōu)點［2-3］。目前研究認為，腫瘤標志物大多由腫瘤細胞直接產(chǎn)生，少數(shù)是機體針對腫瘤細胞而產(chǎn)生的相關物質(zhì)，這些標志物可存在于肺癌患者體內(nèi)，也可存在于肺部良性疾病患者的體內(nèi)，甚至是正常人體內(nèi)，只是含量存在差異。

1960年支氣管肺泡灌洗術首次被應用于臨床，受回收量以及技術的限制，發(fā)展較緩慢。近10余年，隨著纖維支氣管鏡技術的發(fā)展，其在臨床逐漸普及，成為診斷和治療呼吸系統(tǒng)疾病的重要方法，具有安全、無創(chuàng)傷等優(yōu)點。支氣管肺泡灌洗液是支氣管肺泡表面被覆液混合灌入的生理鹽水。支氣管肺泡發(fā)生癌變時，產(chǎn)生或者釋放的某些物質(zhì)可進入血清以及被覆在支氣管肺泡表面的黏液中，使該物質(zhì)的質(zhì)和量發(fā)生改變［4-5］。通過支氣管肺泡灌洗術，獲取灌洗液，對灌洗液進行分析，可以獲得被覆液中的各種細胞成分、酶類、免疫球蛋白等，從而了解肺泡結(jié)構(gòu)的病變性質(zhì)以及病變程度，因此支氣管肺泡灌洗液的臨床應用價值實際很大程度上取決于支氣管肺泡灌洗技術的可靠性以及穩(wěn)定性［6-7］。

目前用于臨床診斷的血清腫瘤標志物較多，但是這些腫瘤標志物在血清中的濃度較低，因此對肺癌的診斷意義不是很大。而支氣管肺泡灌洗取自病變部位支氣管肺泡內(nèi)，從理論上肺癌患者病變部位的腫瘤標志物應該較血清腫瘤標志物出現(xiàn)更早、濃度更高，因此對肺癌的診斷應該具有重要的臨床意義。腫瘤標志物產(chǎn)生的機制［8-9］:①致癌因素導致基因異常表達，從而產(chǎn)生相應的腫瘤標志物。癌基因的活化、基因突變、病毒基因的活化、正?；虻娜笔Ь蓪е抡Ｎ镔|(zhì)的增加或者減少，出現(xiàn)胚胎性酶、胚胎性蛋白異常表達。②針對腫瘤細胞的異常產(chǎn)物，機體產(chǎn)生相應的腫瘤標志物。腫瘤細胞的產(chǎn)物刺激淋巴細胞，可產(chǎn)生相應的反應性蛋白、抗病毒抗體、抗腫瘤抗體。③異常產(chǎn)物可繼發(fā)導致病毒相關抗原、癌相關糖鏈抗原、異常代謝物蓄積等。影響癌癥患者血清以及支氣管肺泡灌洗液中腫瘤標志物濃度的因素［10-11］:①腫瘤細胞產(chǎn)生的標志物量，取決于腫瘤細胞數(shù)量以及癌細胞分泌標志物的程度。本次研究結(jié)果顯示，隨著肺癌臨床分期的增加，CEA、Cyfra21-1、NSE在支氣管肺泡灌洗液以及血液中的含量均顯著升高。②機體清除腫瘤標志物的能量。大多腫瘤標志物經(jīng)血液循環(huán)進入肝臟進行代謝或者經(jīng)過腎臟排出。因此在腫瘤早期，一方面腫瘤標志物產(chǎn)生較少，再經(jīng)過血液循環(huán)后，經(jīng)肝腎代謝，血液中的濃度可進一步降低。③癌癥局部血運以及淋巴管是否豐富也影響標志物在血液循環(huán)中的水平。④體液的稀釋作用影響標志物在血液循環(huán)中的濃度。肺癌細胞分泌腫瘤標志物后，首先至支氣管肺泡內(nèi)，然后再被吸收進入血液循環(huán)。在疾病的早期腫瘤標志物分泌較少，再加上稀釋作用，血清中較難檢測出，但是支氣管肺泡灌洗液中腫瘤標志物出現(xiàn)早，并且濃度高。本研究也證實支氣管肺泡灌洗液中的腫瘤標志物濃度均顯著高于血液中。

CEA屬于一種廣譜性的腫瘤標志物，可反映多種腫瘤。最初在結(jié)腸癌以及胎兒的腸組織中發(fā)現(xiàn)，廣泛存在于內(nèi)胚葉起源的系統(tǒng)［12］。CEA是細胞膜表面的一種糖蛋白。其在臨床上那個作為腫瘤標志物用于腫瘤的診斷已久，但是研究結(jié)果差異比較大。有學者認為其在肺癌診斷中的價值不大，也有學者認為其對肺癌的診斷具有一定的意義，可以用于監(jiān)測臨床療效。血液循環(huán)中的CEA經(jīng)過肝臟時就被代謝，因此血清中CEA水平較低。本研究結(jié)果也顯示，血清中CEA水平顯著低于支氣管肺泡灌洗液中的濃度。另外，肺癌患者無論是支氣管肺泡灌洗液中還是血清中，CEA水平均顯著高于肺部良性病變患者(P＜0.01)，說明其在肺癌的診斷中具有一定的參考價值，尤其是支氣管肺泡灌洗液中的濃度。進一步分析顯示CEA在腺癌中的表達水平最高。

Cyfra21-1是細胞角蛋白19的可溶性片段，對肺癌的診斷具有重要的臨床意義［13-15］。細胞角蛋白(cytokeratins)是形成上皮細胞的結(jié)構(gòu)蛋白之一中間絲的亞單位。惡性上皮細胞中，激活的蛋白酶加速了細胞的降解，使得大量細胞角蛋白片段釋放入血，其可溶性片段可與兩株單克隆抗體KS19.1和BM19.21特異性結(jié)合，故稱為Cyfra21-1［16］。本研究中，肺部良性疾病患者的血清中以及支氣管肺泡灌洗液中Cyfra21-1均有一定程度的表達。而肺癌中其表達水平均顯著高于肺良性病變，并且隨著臨床分期的升高，其表達水平也顯著升高。進一步分析結(jié)果顯示其在鱗癌中的表達水平最高。

NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)是血清NSE是神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞所特有的一種酸性蛋白酶，在本次研究中，小細胞肺癌支氣管灌洗液以及血清中NSE濃度最高，顯高于肺腺癌、肺鱗癌。NSE可用于鑒別診斷，監(jiān)測小細胞肺癌放療，化療后的治療效果，治療有效時NSE濃度逐漸降低至正常水平，復發(fā)時血清NSE升高［17］。用神經(jīng)元特異性烯醇化酶監(jiān)測小細胞肺癌的復發(fā)，比臨床確定復發(fā)要早4～12周。本研究結(jié)果顯示，隨著臨床分期的升高，支氣管肺泡灌洗液以及血清中NSE水平也顯著升高，并且支氣管肺泡灌洗液中的濃度顯著高于血液中。

對3種腫瘤標志物對診斷肺癌的敏感性、特異性以及準確性進行分析，結(jié)果顯示支氣管肺泡灌洗液中3種腫瘤標志物對診斷肺癌的敏感性、特異性以及準確性均顯著高于血液中。且3種腫瘤標志物聯(lián)合檢測的敏感性最高，而不同的組合特異性和準確性差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

綜上所述，支氣管肺泡灌洗液中CEA、Cyfra21-1以及NSE腫瘤標志物濃度顯著高于血清中的濃度，CEA在腺癌中的表達最高，Cyfra21-1在鱗癌中的表達最高，NSE在小細胞癌中的表達最高。隨著臨床分期的升高，各腫瘤標志物的濃度也顯著升高。支氣管肺泡灌洗液中CEA、Cyfra21-1以及NSE對診斷肺癌的敏感性、特異性以及準確性均顯著高于血清中CEA、Cyfra21-1以及NSE檢測。聯(lián)合檢測支氣管肺泡灌洗液以及血清中CEA、Cyfra21-1以及NSE，能夠顯著提高對肺癌診斷的敏感性。

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Application of bronchoalveolar lavage fluid and serum tumor markers detection on diagnosis of lung cancer

BAI Xiaomin1YANG Xiaogang21.Department of Respiratory，the First Hospital of Handan City，Hebei Province，Handan056000，China；2.Department of Oncology，the First Hospital of Handan City，Hebei Province，Handan056000，China

Objective To discuss the application of bronchoalveolar lavage fluid and serum tumor markers detection in the diagnosis of lung cancer.Methods From January to December 2013，in the First Hospital of Handan City，58 patients with lung cancer and 42 patients with benign lung lesions were selected.CEA，Cyfra21-1 and NSE levels of bronchoalveolar lavage fluid and blood were detected.Results CEA［(255.3±89.4)ng/mL］，Cyfra21-1［(244.1±79.2)ng/mL］and NSE［(75.2±21.1)ng/mL］levels in bronchoalveolar lavage fluid from lung cancer patients were higher than those in blood［(61.7±22.3)，(16.1±4.9)，(31.5±11.4)ng/mL］(P＜0.01)；and CEA［(14.1±4.8)ng/mL］，Cyfra21-1［(11.6±3.6)ng/mL］and NSE［(20.2±6.9)ng/mL］levels in bronchoalveolar lavage fluid from benign lung lesions patients were higher than those in blood(P＜0.01)；CEA，Cyfra21-1 and NSE levels in bronchoalveolar lavage fluid and blood from lung cancer patiens were higher than those from benign lung lesions patients［(3.2±1.0)，(3.1±0.9)，(12.1±3.8)ng/ml］(P＜0.01)；CEA level in adenocarcinoma was the highest，Cyfra21-1 level in squamous cell carcinoma was highest，and NSE level in small cell carcinoma was highest.With the improvement of the pathological staging，average bronchoalveolar lavage fluid and blood tumor markers were significantly increased(P＜0.01).Sensitivity and accuracy of CEA，Cyfra21-1 in bronchoalveolar lavage fluid were higher than those in serum(P＜0.01).Sensitivity of CEA+Cyfra21-1+NSE in bronchoalveolar lavage fluid and blood was highest(P＜0.01).Conclusion Tumor marker levels of bronchoalveolar lavage fluid from patients with lung cancer is significantly higher than those in blood，and combined detection of bronchoalveolar lavage fluid and blood tumor markers can significantly improve the sensitivity of diagnosis of lung cancer.

Bronchoalveolar lavage fluid；Tumor markers；Lung cancer；Diagnosis

R734.2

A

1673-7210(2015)02(c)-0040-05

2014-11-16本文編輯:蘇暢)

河北省衛(wèi)生廳醫(yī)學科學研究課題計劃項目(編號2013 0350);河北省邯鄲市科學技術研究與發(fā)展計劃項目(編號1323108089-5)。

白曉敏(1975.4-)，女，河北邯鄲人，副主任醫(yī)師;研究方向:呼吸內(nèi)科學。