細(xì)胞周期素A表達(dá)與胃癌預(yù)后關(guān)系的研究

林建賢， 張俊榕， 謝建偉， 李　平， 鄭朝輝， 黃昌明

細(xì)胞周期素A表達(dá)與胃癌預(yù)后關(guān)系的研究

林建賢， 張俊榕， 謝建偉， 李平， 鄭朝輝， 黃昌明

摘要:目的探討細(xì)胞周期素A(Cyclin A)在胃癌組織中的表達(dá)及其與腫瘤預(yù)后的關(guān)系。方法回顧性分析125例行胃癌根治術(shù)患者的臨床病理資料，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)組織中Cyclin A的表達(dá)情況，對(duì)比Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)患者臨床病理資料的差異，并對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行單因素、多因素分析。結(jié)果Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)者78例，陰性表達(dá)者47例。與陰性組比較，陽(yáng)性組病理分化類型較差、腫瘤直徑較大、浸潤(rùn)深度深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移多、TNM分期晚，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陽(yáng)性組患者術(shù)后5年生存率為30.8%，明顯低于陰性組的72.3%。單因素分析顯示，腫瘤大小、Lauren分型、分化類型、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期和Cyclin A表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)。多因素Cox回歸分析顯示，浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。結(jié)論Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者，腫瘤惡性度較高，病期較晚，預(yù)后較差；Cyclin A可以作為預(yù)后判斷的輔助指標(biāo)。

關(guān)鍵詞:胃腫瘤； 免疫組織化學(xué)； 細(xì)胞周期蛋白類/生物合成； 預(yù)后

作者單位: 福建醫(yī)科大學(xué) 附屬協(xié)和醫(yī)院胃外科，福州350001

細(xì)胞周期素A(Cyclin A)參與DNA的合成和復(fù)制的調(diào)控，是細(xì)胞周期必不可少的部分。Cyclin A的過(guò)度表達(dá)可以引起細(xì)胞異常增殖，甚至導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[1]。研究表明，Cyclin A在結(jié)直腸癌、食管癌、乳腺癌等多種腫瘤中都存在表達(dá)異常的情況，與腫瘤大小、分化程度和預(yù)后等相關(guān)[2-4]。本研究觀察Cyclin A在胃癌中的表達(dá)情況，探討其表達(dá)的病理學(xué)因素及對(duì)胃癌患者預(yù)后的影響，報(bào)道如下。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象收集2009年1-12月就診的胃癌患者125例，男性90例，女性35例，年齡(61.2±10.6)歲(39～88歲)。按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)(2010)：早期胃癌18例，進(jìn)展期胃癌107例[5]。根據(jù)Lauren分型：腸型61例，彌漫型47例，混合型17例。腫瘤部位：賁門胃底部36例，胃體部22例，幽門部67例。全組術(shù)前均無(wú)化療、放療史。全部病例手術(shù)方式及術(shù)后病理組織學(xué)均按日本胃癌協(xié)會(huì)《胃癌處理規(guī)約》規(guī)定施行[6]，其中全胃切除術(shù)70例，遠(yuǎn)端胃大部切除術(shù)55例；D1淋巴結(jié)清掃16例，D2淋巴結(jié)清掃109例。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學(xué)方法樣本以10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度5 μm。采用Envision兩步法，試驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。鼠抗人Cyclin A單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)。切片IHC染色后，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察，細(xì)胞核內(nèi)著棕黃色為陽(yáng)性染色。20倍鏡下，染色最強(qiáng)區(qū)域內(nèi)至少5個(gè)視野中≥5%的細(xì)胞核著色為陽(yáng)性表達(dá)[7-8]。

1.2.2隨訪術(shù)后隨訪由專人進(jìn)行，采用門診、上門、信件及電話隨訪等方式進(jìn)行。除死亡病例外，余術(shù)后隨訪時(shí)間均>5年。記錄的生存時(shí)間為手術(shù)時(shí)間至末次隨訪時(shí)間,或死亡時(shí)間，或隨訪數(shù)據(jù)庫(kù)截止的時(shí)間(如失訪、死于其他疾病等)。

2結(jié)果

2.1Cyclin A 在胃癌組織中的表達(dá)Cyclin A表達(dá)于細(xì)胞核，陽(yáng)性表達(dá)78例(62.4%)，陰性表達(dá)47例(37.6%)，具體見(jiàn)圖1。

2.2Cyclin A表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系陽(yáng)性組與陰性組在Lauren分型、腫瘤大小、分化類型、浸潤(rùn)深度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面的差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而在年齡、性別、腫瘤部位、體質(zhì)量指數(shù)和脈管浸潤(rùn)方面差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

A：正常胃上皮細(xì)胞；B：低分化胃癌細(xì)胞；C：中分化胃癌細(xì)胞；D：高分化胃癌細(xì)胞.圖1　正常胃上皮細(xì)胞和不同分化類型胃癌細(xì)胞Cyclin A染色(Envision　×400)Fig 1　Expression of cyclin A in normal gastric epithelial cell and different types of gastric cancer cells(Envision　×400)

Tab 1Relationship between the expression of Cyclin A and clinicopathologic features for gastric cancer

臨床病理參數(shù)陽(yáng)性組陰性組n7847年齡/歲61.7±10.460.5±10.9性別 男53(67.9)37(78.7) 女25(32.1)10(21.3)腫瘤部位 上部22(28.2)14(29.8) 中部12(15.4)10(21.3) 下部44(56.4)23(48.9)體質(zhì)量指數(shù)/(kg·m-2)21.7±3.022.4±3.2Lauren分型☆ 腸型28(35.9)33(70.2) 彌漫型39(50.0)8(17.0) 混合型11(14.1)6(12.8)d腫瘤/cm☆5.9±2.44.2±1.9分化類型☆ 分化型35(44.9)38(80.9) 未分化型43(55.1)9(19.1)脈管浸潤(rùn) 是6(7.7)3(6.4) 否72(92.3)44(93.6)浸潤(rùn)深度☆ T13(3.8)15(31.9) T27(9.0)7(14.9) T30(0)1(2.1) T4a68(87.2)24(51.1)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移☆ N013(16.7)22(46.8) N112(15.4)8(17.0) N214(17.9)5(10.6) N339(50.0)12(25.5)TNM分期☆ Ⅰ6(7.7)20(42.6) Ⅱ8(10.3)9(19.1) Ⅲ63(80.8)18(38.3)

表中數(shù)據(jù)除例數(shù)、年齡、體質(zhì)量指數(shù)和腫瘤直徑外，余數(shù)據(jù)為n(%).2組間比較，☆：P<0.01.

2.3隨訪結(jié)果全組患者122例(97.6%)獲得隨訪，隨訪時(shí)間3～72月。術(shù)后5年生存率陽(yáng)性組為30.8%，陰性組為72.3%，2組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2)。

圖2　Cyclin A表達(dá)與胃癌患者預(yù)后Kaplan-Meier生存曲線Fig 2　Kaplan-Meier method of overall survival rates in patients with gastric cancer

2.4臨床病理因素影響患者預(yù)后的單因素分析腫瘤大小(P=0.004)及Lauren分型、分化類型、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和Cyclin A表達(dá)與否(均為P<0.001)與患者預(yù)后密切相關(guān)(表2)。

2.5影響患者預(yù)后的多因素分析將腫瘤大小、Lauren分型、分化類型、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和Cyclin A表達(dá)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素預(yù)后分析顯示，腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期(P<0.05)是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(表3)。

3討論

胃癌是我國(guó)主要惡性腫瘤之一，死亡率高居前列，福建省就是胃癌的高發(fā)地區(qū)之一[9]。迄今為止，胃癌的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散是其預(yù)后不良的主要原因。盡管胃癌的綜合治療措施不斷發(fā)展完善，但仍未能獲得滿意效果。細(xì)胞周期的控制點(diǎn)是細(xì)胞周期循序進(jìn)展的關(guān)鍵部位，決定著DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂的起始與完成。在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中都存在著某種或多種細(xì)胞周期調(diào)控因子的失衡，或多種癌基因、抑癌基因發(fā)生突變，最終導(dǎo)致細(xì)胞周期的紊亂、細(xì)胞的不正常生長(zhǎng)和增生，乃至腫瘤的發(fā)生[10]。

表2全組胃癌患者預(yù)后單因素分析

Tab 2Univariate analysis of variables associated with survival in patients with gastric cancer

臨床病理因素n5年生存率(%)性別 男9050.0 女3537.1年齡/歲 ≤605848.3 >606744.8d腫瘤/cm☆ ≤57755.8 >54831.2腫瘤部位 胃上部3661.1 胃中部2254.5 胃下部6735.8Lauren分型☆ 腸型6162.3 彌漫型4723.4 混合型1752.9分化類型☆ 分化型7361.6 未分化型5225.0脈管浸潤(rùn) 是933.3 否11647.4浸潤(rùn)深度☆ T118100 T21464.3 T31100 T4a9232.6淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移☆ N03585.7 N12065.0 N21936.8 N35115.7TNM分期☆ Ⅰ2696.2 Ⅱ1758.8 Ⅲ8228.0CyclinA表達(dá)☆ 陽(yáng)性7830.8 陰性4772.3

同指標(biāo)內(nèi)比較，☆：P<0.01.

Cyclin A由432個(gè)氨基酸組成，是細(xì)胞周期G2/M期限制點(diǎn)重要的正性調(diào)控因子，于G1晚期合成，在S期逐漸增加，并在G2/M期達(dá)到高峰，于M中晚期降解，參與DNA合成、復(fù)制，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂，它的正常表達(dá)是保證細(xì)胞S期、G2/M期進(jìn)程順利完成的主要因子。早期Paterlini等的研究發(fā)現(xiàn)，血液系統(tǒng)腫瘤Cyclin A mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平與細(xì)胞處于S期和G2/M期的比例正相關(guān)，認(rèn)為它可以作為腫瘤增殖的指標(biāo)之一[11]。隨后研究發(fā)現(xiàn)，Cyclin A基因擴(kuò)增及蛋白的過(guò)表達(dá)與人類許多腫瘤密切相關(guān)，腫瘤組織中Cyclin A的表達(dá)水平明顯高于非腫瘤組織[12]。Baldini等對(duì)乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，45.3%的乳腺癌患者存在Cyclin A過(guò)表達(dá)，且Cyclin A過(guò)表達(dá)的腫瘤患者無(wú)病生存期明顯短于Cyclin A低表達(dá)的患者[2]。Nozoe等的研究則顯示，Cyclin A在結(jié)直腸癌的腫瘤組織中過(guò)表達(dá)是預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[3]。Sugai等報(bào)道，在胃型和混合型胃癌中，Cyclin A的表達(dá)量明顯高于腸型患者，且其表達(dá)量與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)[13]。本研究結(jié)果顯示，在胃癌組織中Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)率較高(62.4%)，且Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)，說(shuō)明Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)患者腫瘤惡性度較高，病期較晚，提示Cyclin A的過(guò)度表達(dá)可以引起細(xì)胞增殖，促進(jìn)胃腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

目前Cyclin A與腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系尚存爭(zhēng)議。在食管癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤中，Cyclin A都被當(dāng)作是影響預(yù)后的一個(gè)關(guān)鍵因素，Cyclin A高表達(dá)的患者，5年生存率低，預(yù)后較差[14-15]。Mrena等的研究顯示，55%胃癌標(biāo)本中免疫組織化學(xué)Cyclin A呈高表達(dá)，其與高齡、病期較晚、胃上部癌和腸型密切相關(guān)，預(yù)后分析顯示，Cyclin A高表達(dá)者預(yù)后較差，是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一[8]。復(fù)習(xí)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)比不同Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型多因素分析結(jié)果較為困難，因?yàn)椴煌膱?bào)道往往包括不同的參數(shù)及病例組別等。在本研究中，雖然Cyclin A的陽(yáng)性表達(dá)患者預(yù)后明顯低于陰性表達(dá)患者，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是多因素分析顯示，Cyclin A并非本組患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但這并不說(shuō)明Cyclin A這個(gè)變量不重要，而是表明其可能是影響預(yù)后的間接因素。本研究發(fā)現(xiàn)，Cyclin A陽(yáng)性表達(dá)率較高，且陽(yáng)性表達(dá)患者腫瘤分化程度較差，腫瘤病期較晚，預(yù)后亦較差，其與胃癌患者發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究探索。

表3　影響患者預(yù)后的多因素分析

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(編輯：何佳鳳)

Relationship between the Expression of Cyclin A and

Prognosis in Patients with Gastric Cancer

LIN Jianxian, ZHANG Junrong, XIE Jianwei, LI Ping, ZHENG Chaohui, HUANG Changming

Department of Gastric Surgery, Fujian Medical University Union Hospital, Fuzhou 350001, China

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expression of Cyclin A in gastric cancer and to assess the correlation of Cyclin A to prognosis of patients gastric cancer.Methods125 cases of gastric cancer patients at Fujian Medical University Union Hospital were analyzed retrospectively.We examined the expression of Cyclin A by immunohistochemistry.The survival rate was calculated by the Kaplan-Meier

method, the Log-rank test and Cox’s proportional hazards regression model using SPSS 16.0.ResultsThere were 78 patients (62.4%) with the positive expression level of Cyclin A in gastric cancer.Compared with the negative group, cases in the positive group have poor pathologic types, larger tumor, and more advanced cancer.The 5-year survival rate in patients with positive and negative Cyclin A expression was 30.8% and 72.3%, respectively, with the difference being statistically significant (P<0.05).Univariate survival analysis showed that the tumor size, Lauren types, pathologic types, depth of tumor invasion, lymph node metastasis, TNM stage, and Cyclin A were associated with the prognosis.Multivariate analysis demonstrated that depth of tumor invasion, lymph node metastasis, and TNM stage were independent risk factors for the prognosis (P<0.05).ConclusionPatients with positive expression of Cyclin A are prone to poor pathologic changes andadvanced cancer, leading to worse outcomes.Cyclin A may be identified as a biomarker for predicting the prognosis of gastric cancer.

KEY WORDS:stomach neoplasms; immunohistochemistry; cyclins/biosynthesis; prognosis

通訊作者:黃昌明. Email:hcmlr2002@163.com

作者簡(jiǎn)介:林建賢(1984-)，男，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(81441123)；國(guó)家臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)基金([2012]649)；福建省衛(wèi)生計(jì)生委青年科研課題(2014-1-48)

收稿日期:2015-06-23

中圖分類號(hào):R341； R341.31； R349.12； R735.2； R977.6

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-4194(2015)05-0284-05