D2-40在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其在淋巴轉(zhuǎn)移中的作用

張西坤，牛洪欣，徐忠法(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院，濟(jì)南250031)

D2-40在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其在淋巴轉(zhuǎn)移中的作用

張西坤，牛洪欣，徐忠法(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院，濟(jì)南250031)

摘要：目的探討D2-40在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其在淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。方法選擇35例肝細(xì)胞癌患者的手術(shù)標(biāo)本，其中伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例、無(wú)轉(zhuǎn)移24例。分別取癌組織(肝癌組)、癌邊緣組織(癌邊緣組)及癌以遠(yuǎn)(距腫瘤邊緣10 cm以上)正常組織(對(duì)照組)，采用SP免疫組化兩步法檢測(cè)三組D2-40表達(dá)，計(jì)數(shù)微淋巴管密度。結(jié)果D2-40的陽(yáng)性表達(dá)主要分布于癌邊緣組織內(nèi)淋巴管生長(zhǎng)密集區(qū)。癌邊緣組發(fā)生轉(zhuǎn)移者D2-40陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。肝癌組未見明顯微淋巴管，微淋巴管主要分布于癌邊緣組及對(duì)照組。癌邊緣組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者微淋巴管密度高于未轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。結(jié)論 D2-40可促進(jìn)肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移，其機(jī)制為促進(jìn)微淋巴管形成。D2-40表達(dá)可作為預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。

關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞癌；淋巴轉(zhuǎn)移；微淋巴管密度

肝細(xì)胞癌是原發(fā)性肝癌中最常見的一種類型，約占原發(fā)性肝癌的90%以上[1]。肝細(xì)胞癌容易發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，研究淋巴轉(zhuǎn)移規(guī)律對(duì)于肝細(xì)胞癌的診斷及治療具有重要意義。D2-40是一種分子量為40 kD的唾液酸糖蛋白，可用于標(biāo)記腫瘤組織中的淋巴管內(nèi)皮，是新發(fā)現(xiàn)的判斷腫瘤組織是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的特異性淋巴管標(biāo)志物[2]。2011年1月～2013年6月，我們檢測(cè)了35例肝細(xì)胞癌組織中D2-40的表達(dá)，探討D2-40在肝細(xì)胞肝癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2011年1月～2013年1月在山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者手術(shù)標(biāo)本35例份，每例份標(biāo)本均包括癌組織(肝細(xì)胞癌組)、癌邊緣組織(癌邊緣組)及癌以遠(yuǎn)(距腫瘤邊緣10 cm以上)正常組織(對(duì)照組)。患者中男30例、女5例，年齡41～72歲、中位年齡68歲。均經(jīng)病理檢查確診。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例、無(wú)轉(zhuǎn)移24例。術(shù)前均未行任何抗腫瘤治療。所選病例均通過醫(yī)院倫理道德委員會(huì)的同意，并由患者或其家屬簽署知情同意書。

1.2相關(guān)指標(biāo)觀察

1.2.1D2-40表達(dá)將手術(shù)標(biāo)本放入10%中性甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為4 μm，行SP免疫組織化學(xué)兩步法檢測(cè)三組標(biāo)本中D2-40的表達(dá)。由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片，D2-40以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，每例切片至少計(jì)數(shù)10個(gè)200倍視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞占所有細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)﹥25%為陽(yáng)性，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例分為：﹤10%(-)，11%～25%(+)，25%～50%(++)，﹥50%(+++)。

1.2.2微淋巴管密度(MLVD) 將D2-40陽(yáng)性的淋巴管腔視為微淋巴管，其管腔為棕黃色細(xì)長(zhǎng)管壁包繞的條索狀或塌陷狀不規(guī)則形，內(nèi)無(wú)紅細(xì)胞，由大且向腔內(nèi)突出的單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成。按照Choi等[3]方法由兩名診斷豐富的病理醫(yī)生按雙盲法先于低倍鏡(10×10)下全面觀察切片，確定淋巴管密度最高且染色清晰、背景對(duì)照良好的區(qū)域，再于高倍鏡(10×20)下計(jì)數(shù)微淋巴管數(shù)目。每例切片先后計(jì)數(shù)2次，記錄4個(gè)視野內(nèi)的微淋巴管數(shù)，取其平均數(shù)。

2結(jié)果

2.1D2-40表達(dá)D2-40的陽(yáng)性表達(dá)主要分布于癌邊緣組織內(nèi)，淋巴管生長(zhǎng)密集區(qū)。肝細(xì)胞癌組D2-40未見明顯陽(yáng)性表達(dá)。癌邊緣組D2-40陽(yáng)性表達(dá)率為77.14%，組內(nèi)轉(zhuǎn)移、無(wú)轉(zhuǎn)移者陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.89%、79.17%，癌邊緣組發(fā)生轉(zhuǎn)移者D2-40陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見表1。

表1　三組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移者D2-40表達(dá)率

注：與同組轉(zhuǎn)移者比較，﹡P<0.05。

2.2微淋巴管密度肝細(xì)胞癌組未見微淋巴管分布。癌邊緣組織微淋巴管分布較密集，且管腔擴(kuò)張。癌邊緣組、對(duì)照組微淋巴管染色清晰，微淋巴管呈擴(kuò)張狀態(tài)，管壁薄而不規(guī)則，無(wú)平滑肌，管腔內(nèi)未見紅細(xì)胞、偶見淋巴細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞無(wú)染色。癌邊緣組微淋巴管計(jì)數(shù)為10.21±1.45，組內(nèi)轉(zhuǎn)移與無(wú)轉(zhuǎn)移組微淋巴管計(jì)數(shù)分別為14.67±3.44、6.17±2.93，組內(nèi)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見表1。

3討論

目前，我國(guó)肝細(xì)胞肝癌發(fā)病率逐年升高，但目前缺乏針對(duì)肝細(xì)胞癌特異性的早期診斷方法，且癌細(xì)胞容易通過血管、淋巴管發(fā)生肝內(nèi)及淋巴轉(zhuǎn)移，因此深入研究肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的途徑、淋巴轉(zhuǎn)移的規(guī)律，對(duì)于提高肝細(xì)胞癌整體診治水平有著十分重要的意義。淋巴轉(zhuǎn)移是肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的主要途徑之一[4]，由于對(duì)肝細(xì)胞癌微淋巴管分布狀況及淋巴引流、腫瘤轉(zhuǎn)移途徑缺乏足夠的認(rèn)識(shí)，腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的機(jī)制目前仍不十分清楚，其中一個(gè)重要的問題是腫瘤組織中除了微血管外是否還存在微淋巴管，后者是否同微血管一樣，也為腫瘤提供了轉(zhuǎn)移通道，雖然淋巴管對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用非常明顯，但由于缺乏適當(dāng)?shù)牧馨蛢?nèi)皮特異性標(biāo)記物和對(duì)淋巴管生成因子的認(rèn)識(shí)，使得對(duì)腫瘤淋巴管生成的研究相對(duì)滯后。

淋巴轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，肝細(xì)胞癌的淋巴轉(zhuǎn)移率為25.5 %～32.9 %[5，6]。由于缺乏鑒別淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，目前對(duì)腫瘤患者淋巴轉(zhuǎn)移的早期診斷尚較困難。D2-40 是一種新近被發(fā)現(xiàn)的分子量為40 kDa的淋巴管標(biāo)記物，具有高度的特異性和敏感性[7]，其主要定位于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜上，個(gè)別可呈現(xiàn)由幾個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的細(xì)胞簇或閉鎖的條索狀。D2-40在淋巴管瘤中陽(yáng)性表達(dá)，在良性血管腫瘤中表達(dá)陰性，可用于微淋巴管及新生淋巴管的定位及定量觀察[8，9]。文獻(xiàn)報(bào)道[10～13]，D2-40在結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、口腔癌等腫瘤組織中的表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、臨床分期等呈正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，D2-40的陽(yáng)性表達(dá)主要分布于肝細(xì)胞癌癌邊緣組織內(nèi)，癌組織內(nèi)無(wú)明顯表達(dá)，癌邊緣組織內(nèi)淋巴管密度增大，可促使大量癌細(xì)胞進(jìn)入淋巴管，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，提示常規(guī)檢查癌邊緣組織內(nèi)微淋巴管密度可預(yù)測(cè)術(shù)后淋巴轉(zhuǎn)移。

淋巴轉(zhuǎn)移是肝細(xì)胞癌主要的轉(zhuǎn)移途徑之一，肝細(xì)胞癌淋巴轉(zhuǎn)移最容易累及肝門淋巴結(jié)。淋巴系統(tǒng)往往成為癌細(xì)胞潛伏、隱藏的主要場(chǎng)所，易導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。目前有關(guān)腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的假說較公認(rèn)的有兩種[14]，一種認(rèn)為腫瘤周邊原有的微淋巴管結(jié)構(gòu)不完整，可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞容易進(jìn)入淋巴管，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。另一種認(rèn)為如同腫瘤微血管生成促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制，腫瘤周圍同樣存在新生的微淋巴管，有助于腫瘤擴(kuò)散至淋巴系統(tǒng)，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。Roma等[15]用D2-40標(biāo)記前列腺癌中的微淋巴管，認(rèn)為有淋巴轉(zhuǎn)移組癌旁組織的微淋巴管密度明顯高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組。Sedivy等[16]對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)行研究，表明微淋巴管密度與腫瘤的分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌組未見明顯微淋巴管，微淋巴管主要分布于癌邊緣組織及癌以遠(yuǎn)正常組織，癌邊緣組微淋巴管密度明顯高于對(duì)照組及肝細(xì)胞癌組，考慮癌邊緣組微淋巴管密度增高，可能與以下因素有關(guān)：一方面不斷生長(zhǎng)的癌細(xì)胞可能產(chǎn)生機(jī)械擴(kuò)張力，導(dǎo)致癌組織內(nèi)部間隙壓力升高，使微淋巴管萎縮、喪失功能；腫瘤細(xì)胞向四周侵襲生長(zhǎng)的同時(shí)可能刺激癌邊緣組織分泌淋巴管生長(zhǎng)因子，侵襲破壞癌組織微淋巴管，促使癌邊緣組織內(nèi)微淋巴管的生長(zhǎng)[17,18]，提示肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中可伴隨著新生淋巴管的生成，D2-40可作為預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。本研究發(fā)現(xiàn)，癌邊緣組發(fā)生轉(zhuǎn)移者D2-40陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)轉(zhuǎn)移者，淋巴轉(zhuǎn)移患者癌邊緣組的微淋巴管密度高于未轉(zhuǎn)移者，肝細(xì)胞癌組轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者均未發(fā)現(xiàn)微淋巴管密度，提示肝細(xì)胞癌邊緣組織內(nèi)微淋巴管密度增高可促進(jìn)癌細(xì)胞通過淋巴轉(zhuǎn)移。

綜上所述，D2-40可促進(jìn)肝細(xì)胞癌微淋巴管形成及淋巴轉(zhuǎn)移。D2-40的檢測(cè)可作為預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。

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(收稿日期：2014-10-10)

中圖分類號(hào)：R735.7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2015)10-0074-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.10.028