五氯柳胺的研究進(jìn)展

張吉麗，司鴻飛，李冰，周緒正，張繼瑜

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸藥創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050)

?

五氯柳胺的研究進(jìn)展

張吉麗，司鴻飛，李冰，周緒正，張繼瑜*

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸藥創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050)

五氯柳胺是水楊酰苯胺類抗寄生蟲類化學(xué)藥物，主要用于治療牛、羊的肝片吸蟲感染引起的疾病，對(duì)絳蟲和線蟲也有良好的治療效果。本文主要對(duì)五氯柳胺的理化性質(zhì)、作用機(jī)制、臨床藥效、毒理及殘留等方面的研究進(jìn)展與展望進(jìn)行了綜述，以期對(duì)五氯柳胺上市制劑的研究和開發(fā)提供參考。

五氯柳胺；理化性質(zhì)；作用機(jī)制；臨床藥效；藥物殘留

寄生蟲類疾病的流行不僅阻礙著畜牧業(yè)的發(fā)展，危害著人類的健康，也造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，整體生活環(huán)境的提高，寄生蟲類疾病得到了一定的控制，但在我國部分地區(qū)由于經(jīng)濟(jì)條件、飲食習(xí)慣的影響，寄生蟲感染的發(fā)病率仍然較高，其中蠕蟲感染最為常見。2011年底至2012年初，云南省賓川縣出現(xiàn)大片形吸蟲的消息引起了國家、省、市、縣領(lǐng)導(dǎo)高度重視[1]。據(jù)調(diào)查，在我國29個(gè)省市仍然有豬帶絳蟲感染，特別是在農(nóng)村地區(qū)更為流行。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國肝吸蟲病的平均感染率逐年上升，在廣東、廣西、吉林等地區(qū)上升幅度最為明顯，分別為182%、164%、630%，經(jīng)濟(jì)損失巨大[2]。在全球約20億人受到蠕蟲感染，廣泛分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)，撒哈拉以南非洲、美洲和東亞地區(qū)感染數(shù)最多[3]。五氯柳胺作為一種抗蠕蟲感染的化學(xué)合成藥物，具有廣譜，低毒，低殘留等優(yōu)良特性，在治療吸蟲、絳蟲等蠕蟲感染中效果顯著，且至今為止沒有相關(guān)耐藥性的報(bào)道，是臨床抗蠕蟲感染的首選。國外對(duì)于五氯柳胺的研究較早，特別是在印度、英國、美國等寄生蟲感染的高發(fā)病地區(qū)，已有大量研究表明該藥具有較好的驅(qū)蟲效果，應(yīng)用十分廣泛。國內(nèi)尚未對(duì)該藥進(jìn)行系統(tǒng)研究和相關(guān)報(bào)道。本文主要通過對(duì)五氯柳胺的理化性質(zhì)、作用機(jī)制、臨床應(yīng)用效果以及其毒性、殘留等方面進(jìn)行綜述，以期為該藥在我國開展相關(guān)研究與臨床應(yīng)用提供參考資料。

1 五氯柳胺的理化性質(zhì)及合成過程

五氯柳胺也稱羥氯柳胺、羥氯柳苯胺和羥氯扎胺等，是水楊酰苯胺類抗寄生蟲類化學(xué)藥物，其分子式為C13H6Cl5NO3，如圖1所示，化學(xué)名為：2,3,5,-三氯-N-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-6-羥基苯甲酰胺。五氯柳胺的粉末為米白色或米色，無味或幾乎無味。它不溶于水，易溶于丙酮，溶于乙醇(96%)，微溶于氯仿。在制劑生產(chǎn)過程中，要充分考慮到該藥的水不溶性等特性，國外常常采用混懸制劑，既解決了上述問題，也在一定程度上提高了該藥的生物利用度。五氯柳胺的熔點(diǎn)較高，在208 ℃左右。在紫外區(qū)300 nm處有最大光吸收，吸光度為0.76，為其含量測(cè)定提供了參考。五氯柳胺的合成過程并不復(fù)雜，如圖2所示，劉祥宜等[4]通過2,4-二氯苯酚為原料，經(jīng)稀硝酸硝化得到2,4-二氯-6-硝基苯酚后，再經(jīng)水合肼還原得到2-氨基-4,6-二氯苯酚，該物質(zhì)在氯化亞砜作用下,與3,5,6-三氯水楊酸縮合可以得到五氯柳胺粗品。然后，在甲醇中精制得到五氯柳胺成品。

圖1 五氯柳胺化學(xué)結(jié)構(gòu)

圖2 五氯柳胺的合成過程

2 五氯柳胺的作用機(jī)制

在20世紀(jì)中后期，國外關(guān)于五氯柳胺作用機(jī)制的研究工作陸續(xù)開展，并相繼報(bào)道了五氯柳胺作為一種氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，在治療牛、羊的吸蟲感染引起的疾病中呈現(xiàn)良好治療效果。此外，該藥對(duì)絳蟲也有很好的驅(qū)殺作用。同其他的水楊酰苯胺類抗寄生蟲藥一樣，五氯柳胺是一種氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，其主要的作用機(jī)理是通過阻斷蟲體的氧化磷酸化過程，抑制蟲體線粒體中的三磷酸腺苷(ATP)即能量的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致蟲體因能量代謝紊亂而死亡[5]。Edwards等[6]初步設(shè)想五氯柳胺是氧化磷酸化的解偶聯(lián)劑，可以提高膽管中肝片吸蟲耗氧能力，使ATP水平下降，有時(shí)還會(huì)引起肝片吸蟲的神經(jīng)毒性損傷。Corbett等[7]在用氧電極法進(jìn)行大鼠肝線粒體測(cè)試時(shí)發(fā)現(xiàn)五氯柳胺的最小解偶聯(lián)濃度是3×10-6～4×10-6mol/L。

3 五氯柳胺的臨床藥效學(xué)

多年來，國內(nèi)外的專家學(xué)者利用牛、羊等動(dòng)物對(duì)五氯柳胺進(jìn)行了大量的臨床實(shí)驗(yàn)，證明五氯柳胺在抗蠕蟲感染過程中，具有良好的療效，特別是在治療肝片吸蟲感染方面效果顯著，并且未出現(xiàn)耐藥性現(xiàn)象，是抗蠕蟲藥物的首選[8]。

Sanabria等[9]在用五氯柳胺治療Paramphistomumleydeni自然感染的成年羊時(shí)，以20 mg/kg.bw給藥，在治療后的3 d和5 d，分別取糞便樣品，通過糞便蟲卵計(jì)數(shù)來評(píng)價(jià)藥效。治療后，治療組與對(duì)照組對(duì)比顯示：五氯柳胺治療組蟲體減少99%，可見，五氯柳胺對(duì)Paramphistomumleydeni感染非常有效。

Galdhar等[10]將感染前后盤吸蟲病的12頭水牛隨機(jī)分為兩個(gè)組。一組用五氯柳胺劑量為10 mg/kg.bw治療；第二組不給予治療。在治療后0、7、14、21 d后，分別取糞便樣品，通過糞便蟲卵計(jì)數(shù)的減少量，臨床癥狀的消失以及各項(xiàng)生化指標(biāo)的改善來評(píng)價(jià)藥效。結(jié)果同樣表明，五氯柳胺在對(duì)抗Paramphistome感染水牛的治療中效果較好，治療后水牛的臨床生化參數(shù)最終恢復(fù)到正常值。

Paraud等[11]用五氯柳胺治療Calicophorondaubney感染的山羊，在感染后第10天，蟲卵未成熟階段，用22.5 mg/kg.bw劑量的五氯柳胺治療，蟲體減少82%。在蠕蟲感染后的131 d的成熟階段，分別以劑量15 mg/kg.bw和22.5 mg/kg.bw治療，觀察效果。以劑量為15 mg/kg.bw的五氯柳胺治療時(shí)，蠕蟲減少95.6%；同時(shí)，以劑量為22.5 mg/kg.bw的五氯柳胺治療時(shí)，蟲體減少了95.9%，可見兩個(gè)劑量間沒有明顯差異。實(shí)驗(yàn)證明五氯柳胺在治療Calicophorondaubney感染山羊的成熟階段非常有效。

Athar等[12]在用五氯柳胺治療牛蠕蟲感染時(shí)，第14天后治療的效果較好，糞便中蟲卵數(shù)明顯降低，水牛糞便蟲卵減少了96.66%，黃牛糞便中的蟲卵數(shù)減少了95.64%。并且在治療后，兩種牛的體重均升高。

此外，大量文獻(xiàn)顯示，五氯柳胺在與其他抗蠕蟲藥物進(jìn)行對(duì)比治療中，表現(xiàn)出良好的治療效果，還可用于治療對(duì)其他藥物具有耐藥性的蠕蟲感染。Arias等[13]在治療抗Calicophoron(Paramphistomum)daubneyi感染的牛時(shí)，分別采用的四種藥物進(jìn)行對(duì)比治療，五氯柳胺的效果最好，驅(qū)蟲效果達(dá)到90%以上。Mooney 等[14]采用多種抗寄生蟲藥對(duì)比治療肝片吸蟲感染羊的過程中，在感染后7、14、21、56 d分別收集糞便樣品，進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)在用五氯柳胺治療第14天后，糞便中蟲卵數(shù)減少到100%。實(shí)驗(yàn)證明在治療對(duì)三氯苯達(dá)唑等有耐藥性的寄生蟲感染時(shí)，五氯柳胺治療組的效果顯著。Coles等[15]在用四種藥物治療對(duì)三氯苯達(dá)唑具有耐藥性的吸蟲感染中，五氯柳胺和左旋咪唑聯(lián)合應(yīng)用效果最好。Verma等[16]以劑量10 mg/kg.bw的五氯柳胺和和10 mL/50 kg.bw的三氯苯達(dá)唑治療后，貧血癥狀消除，白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞增多現(xiàn)象得到恢復(fù)。五氯柳胺治療組在第28天的治愈率為100%，治療效果比三氯苯達(dá)唑好。Piňeiro等[17]分別用萘托比胺和五氯柳胺治療感染吸蟲的牛時(shí)，7頭牛作為對(duì)照組，14頭牛用萘托比胺治療，15頭用五氯柳胺治療，治療后的第13周檢查糞便中蟲卵數(shù)發(fā)現(xiàn)，五氯柳胺治療組幾乎痊愈，萘托比胺治療組蟲卵減少了64%。Hopkins等[18]實(shí)驗(yàn)證明五氯柳胺在低劑量為4 mg/kg可以驅(qū)除鼠膽管中的小口膜殼絳蟲。

4 五氯柳胺的毒理及殘留

五氯柳胺毒性較低，幾乎無殘留。歐洲醫(yī)藥產(chǎn)品評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)對(duì)五氯柳胺的總結(jié)報(bào)告中顯示：五氯柳胺在牛中的推薦使用劑量為10～15 mg/kg.bw，綿羊和山羊的使用劑量為15 mg/kg.bw。大鼠急性口服五氯柳胺的半數(shù)致死量(LD50)為3519 mg/kg.bw。急性癥狀為：腹瀉，呼吸加快，嗜睡，剖檢中可見多個(gè)器官充血，還有肝中毒癥狀。歐盟委員會(huì)要求五氯柳胺在動(dòng)物肌肉和脂肪中的殘留量為20 μg/kg，在腎臟中的殘留量為100 μg/kg，肝臟中的殘留量在500 μg/kg以下。澳大利亞藥品以及食品法典委員會(huì)均已制定了五氯柳胺用于牛和羊的肌肉、脂肪、腎臟以及肝臟中的殘留限度，與歐盟委員會(huì)所制訂的殘留標(biāo)準(zhǔn)相同[19]。國外試驗(yàn)表明,綿羊?qū)ξ迓攘返淖畲竽褪芰靠蛇_(dá)60 mg/kg.bw。牛按60～75 mg/kg.bw劑量投藥，有可能引起死亡。國外按13.1～28.5 mg/kg.bw的劑量口服治療鹿肝片吸蟲感染時(shí)，不僅能殺滅吸蟲，對(duì)鹿也無任何的毒副作用[20]。

Takeba等[21]將牛奶樣品經(jīng)處理后，用高效液相色譜法和雙電極電量檢測(cè)法測(cè)定牛奶中的殘留范圍為0.01～0.1 μg/kg。Whelan等[22]將六頭患病奶牛在用五氯柳胺治療長達(dá)16 d，牛奶樣品用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析，五氯柳胺的殘留量小于25 μg/kg，低于一般殘留限度。王偉等[23]在采用高效液相色譜法檢測(cè)液態(tài)奶中的五氯柳胺的殘留在 5～500 μg/kg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不低于0.99；檢出限和定量限均低于歐盟的 MRL值，滿足殘留檢測(cè)的要求。Sakamoto等[24]實(shí)驗(yàn)證明利用液質(zhì)聯(lián)用方法檢測(cè)五氯柳胺等藥物在牛奶中的殘留含量在5～600 μg/kg，低于日本的最低殘留限量。Jo等[25]用高效液相色譜法檢測(cè)牛奶和牛肉中的五氯柳胺殘留量，利用反向色譜測(cè)得牛奶和牛肉中的五氯柳胺含量在分別為9.7 μg/kg和9.8 μg/kg，殘留量極低。五氯柳胺給藥消退期在肌肉和臟器的消退期在28 d，牛奶中消退期是72 h。

其次，五氯柳胺的副作用較輕微，在正常給藥劑量時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)牛、羊的糞便輕微的軟化，極個(gè)別的動(dòng)物可能會(huì)出現(xiàn)排便次數(shù)增多，短暫性的食欲不振等現(xiàn)象。對(duì)于奶牛等經(jīng)濟(jì)動(dòng)物可能會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)奶量少量下降，但隨著療程的結(jié)束，各種癥狀均會(huì)消失，患畜的各項(xiàng)指標(biāo)均會(huì)恢復(fù)正常。此外，五氯柳胺可用于幼畜、孕期及哺乳期動(dòng)物。五氯柳胺口服給藥后，24 h血漿中濃度緩慢上升。該藥主要通過糞便排泄，藥物消除過程通過膽汁排泄。

5 展望

動(dòng)物寄生蟲病是動(dòng)物常發(fā)且造成巨大損失的傳染病，藥物防治是寄生蟲病防控的關(guān)鍵，并將長期伴隨畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。隨著一些廣譜、低毒、高效的抗寄生蟲藥物的應(yīng)用，使寄生蟲類疾病得到了較好的控制，與此同時(shí)，耐藥性的出現(xiàn)，也成為了臨床用藥的重要障礙。五氯柳胺作為化學(xué)合成類抗寄生蟲藥物，具有性質(zhì)穩(wěn)定，療效顯著等優(yōu)點(diǎn)，是新型、高效、安全的抗蠕蟲藥物，且該藥具備無污染、低殘留等良好的理化性質(zhì)，與其他具有相似作用的三氯苯達(dá)唑、氯苯碘柳胺、阿苯達(dá)唑等藥物相比，五氯柳胺至今未出現(xiàn)耐藥性的相關(guān)報(bào)道，并憑借其顯著的治療效果在國外廣泛使用。

五氯柳胺是當(dāng)前抗蠕蟲的必然選擇，具有良好的應(yīng)用前景。國外對(duì)五氯柳胺的研究工作自上世紀(jì)五十年代開始，至今為止，已經(jīng)上市的制劑有五氯柳胺片劑：OKZAN-F，口服混懸劑(Oxyclozanide Oral Suspension)：ZANIL Fluke Drench 34 mg/mL Oral Suspension，以及與其他藥物復(fù)方制劑如：Oxyclozanide 3%W/V & Levamisole 1.5%W/V Suspension、Levamisole+Oxyclozanide Tablets等。而目前國內(nèi)對(duì)五氯柳胺的研究僅停留在原料藥方面，還沒有上市的制劑。為了適應(yīng)國內(nèi)獸醫(yī)臨床對(duì)五氯柳胺的需求，開發(fā)和研制一種或幾種五氯柳胺的制劑，克服其水不溶性，使其在臨床應(yīng)用過程中，更好的發(fā)揮其治療作用，是科研工作者的努力方向。

[1] 張克勤,陳寶杰,張克志,等.賓川縣片形吸蟲感染疫情的調(diào)查報(bào)告[J].衛(wèi)生軟科學(xué),2013,27(3):164-166.

[2] 王永怡,張?jiān)戚x,王姝,等.2014年傳染病相關(guān)熱點(diǎn)回顧[J].傳染病信息,2015,28(1):3-8.

[3] 劉明遠(yuǎn),劉全,方維煥,等.我國的食源性寄生蟲病及其相關(guān)研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,34(7):1205-1224.

[4] 劉祥宜,朱建民,張建峰,等.五氯柳胺的合成[J].浙江化工, 2010, 41(8): 11-12.

[5] Veenendaal G H, W M J.Uncoupling activity of the anthelmintic oxyclozanide in rodents[J].British Journal of Pharmacology, 1974, 50(3): 435-437.

[6] Edwards S R, Campbell A J, Sheers M,etal.Studies of the effect of diamphenethide and oxyclozanide on the metabolism ofFasciolahepatica[J].Molecular and Biochemical Parasitology, 1981, 2(5): 323-338.

[7] Corbett J R, Goose J.A possible biochemical mode of action of the fasciolicidesnitroxynil, hexachlorophene and oxyclozanide[J].Pesticide Science, 1971, 2(3): 119-121.

[8] Rana M A A , Roohi N, Khan M A.Fascioliasis in cattle-a review[J].J Anim Plant Sci, 2014,24(3):668-675.

[9] Sanabria R, Moreno L, Alvarez L,etal.Efficacy of oxyclozanide against adultParamphistomumleydeniin naturally infected sheep[J].Veterinary Parasitology, 2014, 206(3): 277-281.

[10]Galdhar C N, Roy M, Roy S.Efficacy of oxyclozanide (Neozide suspension) against paramphistomiasis in buffaloes[J].Intas Polivet, 2003, 4(2): 266-268.

[11]Paraud C, Gaudin C, Pors I,etal.Efficacy of oxyclozanide against the rumen flukeCalicophorondaubneyiin experimentally infected goats[J].The Veterinary Journal, 2009, 180(2): 265-267.

[12]Athar L A, Khan M N, Sajid M S,etal.Cost benefits analysis of anthelmintic treatment of cattle and buffaloes[J].Pakistan Veterinary Journal, 2011, 31(2): 149-152.

[13]Arias M S, Sanchís J, Francisco I,etal.The efficacy of four anthelmintics againstCalicophorondaubneyiin naturally infected dairy cattle[J].Veterinary Parasitology, 2013, 197(1): 126-129.

[14]Mooney L, Good B, Hanrahan J P,etal.The comparative efficacy of four anthelmintics against a natural acquiredFasciolahepaticainfection in hill sheep flock in the west of Ireland[J].Veterinary Parasitology, 2009, 164(2): 201-205.

[15]Coles G C, Stafford K A.Activity of oxyclozanidenitroxynil, clorsulonalbendazole again.adulttriclabendazole resistantFasciolahepatica[J].Veterinary Record,2001,(148): 723-724.

[16]Verma S K, Gupta M P, Juyal P D.Efficacy of oxyclozanide and triclabendazole in buffaloes infected with paramphistomosis[J].Journal of Veterinary Parasitology, 2006, 20(1): 61-64.

[17]Piňeiro P, Suárez J L, Vázquez L,etal.Chemotherapy againstCalicophorondaubneyiin Rubia Gallega cattle[C].XIV Jordanas Sobre Produccion Animal, Zaragoza, Espana, 17 y 18 de Mayo de 2011.

[18]Hopkins C A, Grant P M, Stallard H.The effect of oxyclozanide onHymenolepismicrostomaandH.diminuta[J].Parasitology, 1973, 66(2): 355-365.

[19]李帥鵬,黃顯會(huì),王偉,等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛羊組織中苯酚類和水楊酸苯胺類抗蠕蟲藥多殘留[J].分析化學(xué), 2015, 42(3): 423-428.

[20]蔡登棣.五氯柳胺對(duì)家畜蠕蟲的活性[J].中國獸醫(yī)科技,1990,(11):31-32.

[21]Takeba K, Itoh T, Matsumoto M,etal.Simultaneous determination of five fasciolicides in milk by liquid chromatography with electrochemical detection[J].Journal of AOAC International, 1995, 79(4): 848-852.

[22]Whelan M, Chirollo C, Furey A,etal.Investigation of the persistence of levamisole and oxyclozanide in milk and fate in cheese[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010, 58(23): 12204-12209.

[23]王偉,黃顯會(huì),王輝,等.高效液相色譜法檢測(cè)液態(tài)奶中的苯酚類和水楊酸苯胺類抗蠕蟲藥[J].色譜, 2013, 31(10): 1028-1032.

[24]Sakamoto M, Takeba K, Sasamoto T,etal.Determination of bithionol, bromophen, nitroxynil, oxyclozanide, and tribromsalan in milk with liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry[J].Journal of AOAC International, 2010, 93(4): 1340-1346.

[25]Jo K, Cho H J, Yi H,etal.Determination of oxyclozanide in beef and milk using high-performance liquid chromatography system with UV detector[J].Laboratory Animal Research, 2011, 27(1): 37-40.

(編輯：侯向輝)

Progress in Research of Oxyclozanide

ZHANG Ji-li，SI Hong-fei，LI Bing，ZHOU Xu-zheng，ZHANG Ji-yu*

(KeyLaboratoryofVeterinaryPharmaceuticalDevelopment,MinistryofAgriculture,LanzhouInstituteofHusbandryandPharmaceuticalSciencesofCAAS,Lanzhou730050,China)

Oxyclozanide is a chemical anti-parasite drug of Salicylanilide,it can treat the disease of cattles and sheep infected with fasciola,and has a good treatment to against tapeworms and nematodes.The physical and chemical properties, mechanism of action, clinical application, toxicology and residue of oxyclozanide were reviewed in this paper to provide a reference listed onoxyclozanide formulations research and development.

oxyclozanide;physical and chemical properties;mechanism of action；clinical application;drug residue

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)(CAR-38)；“十二五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)(2015BAD1101)

張吉麗，碩士在讀，從事動(dòng)物抗寄生蟲藥研究。

張繼瑜。E-mail: infzjy@sina.com

2015-10-16

A

1002-1280 (2015) 11-0065-05

S859.795