病理技術(shù)HE染色用于病理診斷中的價(jià)值分析

病理技術(shù)HE染色用于病理診斷中的價(jià)值分析

馬峰，劉仲祥*

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林 長(zhǎng)春130033)

病理診斷屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中最具權(quán)威性的一種診斷方法，其病理診斷準(zhǔn)確性除了受病理檢查醫(yī)師技術(shù)水平的影響，還受組織病理片的處理質(zhì)量及染色效果的影響。并且在現(xiàn)代病理檢查工作中，因標(biāo)本固定時(shí)間不規(guī)范、組織脫水不完全或者是在某些因素影響下導(dǎo)致試劑濃度改變等因素的影響，對(duì)制片質(zhì)量造成了巨大影響，因此加大了臨床診斷難度[1]。為了研究病理技術(shù)HE染色在病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值，選取我院400例石蠟切片及組織進(jìn)行染色，并對(duì)100例染色標(biāo)本的細(xì)胞學(xué)制片進(jìn)行詳細(xì)觀察，現(xiàn)將其相關(guān)報(bào)告總結(jié)如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取2014年1月-2014年12月我院各科室送檢的400例石蠟切片作為研究對(duì)象，主要為胃腸、膽、脂肪以及骨石蠟切片，嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)范進(jìn)行操作HE染色，并觀察其中100例染色標(biāo)本的細(xì)胞學(xué)制片。其中在本次觀察的100例細(xì)胞學(xué)制片中，骨組織10例，脂肪組織17例，胃鏡活檢36例，子宮內(nèi)膜30例，胃腸、子宮、肝膽7例。

1.2方法

1.2.1HE染色方法本次所有器官或大塊組織標(biāo)本均來源于手術(shù)室；細(xì)胞學(xué)及穿刺小標(biāo)本來源于內(nèi)窺鏡和超聲、CT引導(dǎo)下穿刺。為了保證組織病理的制片質(zhì)量，在取材過程中要求快速、準(zhǔn)確。在選材、片中需按照不同組織而選擇適當(dāng)?shù)墓潭ā⒚撍畷r(shí)間以及相應(yīng)的制片染色方法。如：在小標(biāo)本中，其固定時(shí)間及脫水時(shí)間需適當(dāng)縮短；脂肪組織固定時(shí)間及脫水時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)；硬組織需要選用新切片刀進(jìn)行制片；破碎組織、軟組織以及活檢組織需選擇已經(jīng)使用過的舊切片刀進(jìn)行制片。HE染色操作方法如下：①經(jīng)3次二甲苯去蠟5-10 min；②脫蠟水洗3 min，無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇以及70乙醇各1 min；③使用蘇木紫液染色3-5 min，染色時(shí)間可根據(jù)具體情況適當(dāng)增減；④使用濃度為1%的酸性乙醇或濃度為1%的鹽酸分化進(jìn)行水洗。⑤流水浸洗時(shí)間需大于15 min，直至細(xì)胞核變?yōu)樗{(lán)色即可。若核染色深度不理想，可進(jìn)行再分化，或者重染；⑥使用伊紅液染色0.5-1 min，隨后進(jìn)行85%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇各2次，每次1-2 min；⑦二甲苯透明3次，每次3-5 min；⑧使用中性樹膠進(jìn)行蓋片封片，并貼上相應(yīng)的標(biāo)簽。

1.2．2病理技術(shù)改進(jìn)方法在病理檢查中將大小不同的標(biāo)本分開進(jìn)行固定、脫水、染色等處理，根據(jù)不同組織特性完成制片，使細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)以及鈣鹽顆粒染為深藍(lán)色，黏液染為灰藍(lán)色。細(xì)胞間質(zhì)被伊紅染為粉紅色、桃紅色等深淺不同的紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒細(xì)胞被染為鮮紅色。一般膠原纖維表現(xiàn)為淡粉紅色，彈力纖維表現(xiàn)為亮粉紅色；紅血球表現(xiàn)為橘紅色，蛋白性液體表現(xiàn)為粉紅色。由于組織著色程度和組織、細(xì)胞種類有密切關(guān)系，并且也能夠根據(jù)生活周期、病理變化而出現(xiàn)改善。如大多數(shù)細(xì)胞在新生時(shí)期，其胞漿對(duì)伊紅著色較淡，但當(dāng)其處于衰老期，或出現(xiàn)退行性變化時(shí)，伊紅著色可逐漸加深。

2結(jié)果

通過對(duì)不同組織進(jìn)行科學(xué)的制片及HE染色，不同組織制片、HE染色一般均可達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，本次觀察的100例染色標(biāo)本的細(xì)胞學(xué)制片中，病理技術(shù)改進(jìn)前后其染色結(jié)果均有明顯改善，見表1。

表1　病理技術(shù)改進(jìn)前后染色結(jié)果變化情況[n(%)]

3討論

在病理檢查過程中，組織染色質(zhì)量直接影響了臨床診斷結(jié)果，并且還可間接影響到臨床治療方案的制定，影響臨床治療安全性。在HE染色操作過程中，染色質(zhì)量主要是由細(xì)胞核的染色質(zhì)量決定的，這是一項(xiàng)化學(xué)、物理共同作用下進(jìn)行的工作。主要是因組織內(nèi)部存在大量的微小細(xì)孔，在染料充分滲透后，和組織結(jié)合牢固，染料被組織吸收后開始逐漸出現(xiàn)溶解、擴(kuò)散[2]。另外，組織細(xì)胞內(nèi)含有不同比例的酸性或者堿性物質(zhì)，其中含有酸性物質(zhì)的組織，能夠和染液中的陽(yáng)離子結(jié)合，并生成固定分子；而含有堿性物質(zhì)的組織，能夠和染液中的陰離子結(jié)合，共同發(fā)揮其牢固性作用[3]。

但細(xì)胞和組織的HE染色質(zhì)量易受取材操作、固定時(shí)間、操作時(shí)間、切片質(zhì)量等因素的影響，因此在組織染色中需根據(jù)不同的標(biāo)本類型，選擇相應(yīng)的取材范圍、取材方式及取材工具，以免對(duì)組織形成擠壓，改變組織結(jié)構(gòu)[4]。在組織使用鉗取難度較大時(shí)，可改用針吸方式取材，針吸取材方式一般應(yīng)用在實(shí)質(zhì)性臟器直徑超過2 cm患者中。例如，對(duì)于肺癌表面覆蓋有較厚一層凝固性壞死或脂性分泌物時(shí)，為了保證標(biāo)本陽(yáng)性檢出率，需選擇針吸的方式進(jìn)行，對(duì)其進(jìn)行深部取樣；對(duì)于體液量較多患者需對(duì)其離心后取其沉渣。骨組織需要進(jìn)行脫鈣操作，否則制片難度較大，且易對(duì)其細(xì)胞結(jié)構(gòu)造成破壞，其HE染色質(zhì)量不佳。并且在制片中需要適當(dāng)延長(zhǎng)脂肪組織脫水固定時(shí)間，嚴(yán)格控制好骨組織脫鈣時(shí)間，以免影響HE染色效果，影響病理診斷結(jié)果[5]。

所有需要送檢的組織均需先進(jìn)行固定(除特殊要求組織外)，其固定的目的主要就是為了有效保證組織和活體成分、形態(tài)相似，并且可避免在制片過程中組織發(fā)生自溶。因?yàn)榻M織原有構(gòu)造被破壞或消失后，可嚴(yán)重影響制片質(zhì)量，影響臨床診斷結(jié)果[6]。并且組織在固定后需在規(guī)定時(shí)間內(nèi)送檢，避免因固定時(shí)間過長(zhǎng)而造成組織變硬、變脆，影響切片效果，進(jìn)而影響診斷結(jié)果。除此之外，HE染色操作中需注意所選用試劑濃度的變化情況，恰當(dāng)控制溫度、濕度，保證所有操作的科學(xué)性，為臨床診斷提供重要資料[7]。

綜上所述，病理檢查作為臨床診斷中權(quán)威性最高的診斷方法，而病理技術(shù)中HE染色技術(shù)在病理檢查中具有重要作用，需不斷提高HE染色技術(shù)，根據(jù)不同組織完成相應(yīng)的固定操作、脫水操作以及切片操作等，以此來全面提高切片質(zhì)量，提高病理診斷準(zhǔn)確性，為臨床診斷及治療提供有價(jià)值的參考資料，保證臨床治療效果，值得臨床加大對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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(收稿日期：2015-03-19)

文章編號(hào)：1007-4287(2015)12-2103-02

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