電針傍刺對(duì)大鼠皮膚壓瘡Ang-1及Ang-2表達(dá)的影響

李超然，孫忠人，仇立波，孫琦

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

壓瘡又稱為褥瘡、席瘡、壓力性潰瘍，多由于皮膚組織長(zhǎng)期受到壓力、剪切力、摩擦力作用，使組織持續(xù)缺血、缺氧、營(yíng)養(yǎng)不良而致骨突隆處局限性損傷。現(xiàn)代研究表明，通過(guò)電刺激可以治療皮膚損傷類疾病［1］。由此推斷電針療法對(duì)壓瘡局部皮膚修復(fù)具有促進(jìn)作用。電針具有運(yùn)行氣血、通絡(luò)活絡(luò)、祛瘀止痛之功效，在創(chuàng)面修復(fù)過(guò)程中起到良好的抗炎、促進(jìn)細(xì)胞增殖再生、提高機(jī)體免疫力的作用，但其具體作用機(jī)制尚未明確。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)及臨床研究證實(shí)，促血管生成(Angiopoitins)家族中Ang-1與Ang-2兩種生長(zhǎng)因子對(duì)形成生理狀態(tài)下血管至關(guān)重要。因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)連續(xù)觀察電針傍刺對(duì)大鼠皮膚壓瘡修復(fù)過(guò)程中創(chuàng)面修復(fù)的形態(tài)學(xué)變化以及對(duì)血管生成素Ang-1與Ang-2表達(dá)的影響，探究電針傍刺對(duì)大鼠壓瘡皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

健康清潔級(jí)SD大鼠90只，雌性，體質(zhì)量250g～300g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK京2009-001。標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)環(huán)境，室溫20～28℃，相對(duì)濕度40%～50%，自然照明，單籠飼養(yǎng)。按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為電針組、針刺組、空白組，每組30只。每組30只大鼠再隨機(jī)分為5個(gè)治療時(shí)間點(diǎn)，即1天組、3天組、5天組、7天組、9天組，每組6只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用與操作方法嚴(yán)格遵循國(guó)家科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》中相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

1.2 試劑及儀器

免疫組化試劑Rabbit Angiopoietion 1 Polyclonal Antibody、Rabbit Anti-Angiopoietin 2(北京博奧森生物技術(shù)有限公司);DAB顯色劑(武漢博士德生物工程有限公司);戊巴比妥麻醉劑(德國(guó)Merck公司);華佗牌0.25mm×13mm針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司);薇婷脫毛膏(中國(guó)利潔時(shí)家化有限公司);碘伏(山東利爾康消毒科技股份有限公司);酒精(齊齊哈爾市藥研消毒劑廠)。

1.3 儀器

體質(zhì)量秤(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);G6805-B電刺激儀(上海欣曼科教設(shè)備有限公司);CX41奧林巴斯顯微鏡(日本奧林巴斯公司);TKC9201EC型JVC攝像頭(日本JVC公司);RM2235型LEICA切片機(jī)(德國(guó)LEICA公司)。

2 方法

2.1 大鼠皮膚壓瘡模型制備

將清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)SD大鼠90只，在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下喂養(yǎng)，每天給予標(biāo)準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)，自由攝食飲水，實(shí)驗(yàn)全程單籠飼養(yǎng)。

自制裝置:切取3塊長(zhǎng)方體有機(jī)玻璃板，并在一塊有機(jī)玻璃板中心鉆一圓孔，將其用亞克力膠水粘成n形。再將膨脹螺絲外管穿過(guò)中心圓孔，其上放置礦泉水瓶底座，其內(nèi)放入鐵砂。外周配合尼龍?jiān)鷰б怨潭▔函徫恢茫?］。

將大鼠常規(guī)捆綁固定后脫毛處理，并將其用尼龍?jiān)鷰Ч潭ㄓ阼F絲網(wǎng)上。其后將裝置固定于大鼠腿部近膝關(guān)節(jié)骨隆突處，并將自制裝置、大鼠、鐵絲網(wǎng)共同置于水平實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，使壓力基本呈垂直狀態(tài)作用于大鼠近膝關(guān)節(jié)骨隆突處。

先用碘伏對(duì)裝置接觸處及大鼠腿部造模位置消毒，后以75%酒精脫碘。采用缺血-再灌注損傷方式建立壓瘡創(chuàng)面。壓強(qiáng)P=100mmHg，以螺釘錐度的面積作為壓瘡模型面積S=1cm2，計(jì)算出所需鐵砂的質(zhì)量M=134g［3］。

將自制裝置持續(xù)作用于大鼠造模位置2h，使局部組織處于缺血狀態(tài)，再將大鼠松開活動(dòng)，自由攝食進(jìn)水0.5h，此記為一個(gè)循環(huán)。故每個(gè)循環(huán)為2h缺血期和0.5h再灌注期，每日5個(gè)循環(huán)，連續(xù)造模3天?？傆?jì)缺血-再灌注15個(gè)損傷循環(huán)，缺血時(shí)間30h［3］。

2.2 治療方法

造模成功1天后進(jìn)行治療。將大鼠按模型制備的方法常規(guī)固定，裸露腿部壓瘡損傷處。針刺組采用傍刺方法，在創(chuàng)面中間垂直針刺1針，然后在創(chuàng)面外周平刺第2針，方向與中心針尖相對(duì)，兩針深度均為0.2寸左右。連接6805-B電針儀，但不通電。電針組先同針刺組傍刺治療，后連接電針儀通電。負(fù)極連接壓瘡皮膚中心直刺第1針，正極連接創(chuàng)面外周平刺第2針，電流強(qiáng)度0.5mA，頻率0.5Hz，疏密波?？瞻捉M不針刺，僅將大鼠固定于鐵絲網(wǎng)上靜置未給予任何治療措施。3組大鼠每次治療30min，每日1次。同時(shí)給予相同基礎(chǔ)飼養(yǎng)方式。

2.3 樣本采集

造模3天結(jié)束后，將電針組、針刺組與空白組90只大鼠按1天、3天、5天、7天、9天進(jìn)行治療，并在第2天、4天、6天、8天、10天取壓瘡損傷處皮膚組織標(biāo)本。稱大鼠重量，給予1%戊巴比妥350mg/1000g腹腔麻醉注射。麻醉后，在皮損部位切取正方形(1cm2)全層皮膚組織。用10%甲醛溶液固定，乙醇梯度脫水、浸蠟，常規(guī)石蠟包埋，切片。經(jīng)恒溫箱烤片后，再將切片脫蠟、染色、脫水、透明、封片，進(jìn)行免疫組化學(xué)觀察。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1 壓瘡分期診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照2007年美國(guó)壓瘡專家委員會(huì)(NPUAP)壓瘡分期標(biāo)準(zhǔn)，將壓瘡損傷標(biāo)準(zhǔn)定為II期及以上［4］。

Ⅰ期:在骨隆突處的皮膚完整伴有壓之不褪色的局限性紅斑。深色皮膚可能無(wú)明顯的蒼白改變，但其顏色可能與周圍組織不同。Ⅱ期:真皮層部分缺失，表現(xiàn)為一個(gè)淺的開放性潰瘍，無(wú)壞死組織或青腫。伴粉紅色傷口床(創(chuàng)面)，無(wú)腐肉，也可能表現(xiàn)為一個(gè)完整的或破裂的血清性水皰。Ⅲ期:全層皮膚組織缺失，可見皮下脂肪暴露，骨頭、肌腱、肌肉未外露;有腐肉存在，但組織缺失的深度不明確，可能包含有潛行和隧道。Ⅳ期:全層組織缺失，伴有骨、肌腱或肌肉外露。傷口床的某些部位有腐肉或焦痂，常有潛行或隧道。

2.4.2 組織形態(tài)學(xué)觀察

觀察造模期間大鼠傷口情況，具體包括滲出物(血性、膿性、水性、無(wú));結(jié)痂次數(shù)、部位(中心、周圍)、質(zhì)地(較軟、較硬)及顏色(紫紅、鮮紅、灰白、黃褐、黃白、黑色)等。

2.4.3 大鼠行為學(xué)觀察

觀察造模期間大鼠精神狀態(tài)，具體包括整體狀況(活躍、良好、安靜)、性情(暴躁、溫順、低迷)、步態(tài)(正常、活動(dòng)不利、跛行、拖行)、二便情況(正常、便稀、便干)等。

2.4.4 免疫組化檢查及結(jié)果判斷

Ang-1及Ang-2表達(dá)測(cè)定:取石蠟組織4μm切片，進(jìn)行常規(guī)免疫組化處理。采集每張切片在400×倍光鏡下的5個(gè)視野圖像。光鏡下將Ang-1及Ang-2陽(yáng)性定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿和(或)包膜，呈細(xì)小棕黃色顆粒彌漫分布［5］。根據(jù)觀察可見，免疫組化染色深度著色明顯且基本一致，表達(dá)細(xì)胞胞漿內(nèi)顆粒較細(xì)，故將陽(yáng)性細(xì)胞積分均記為1分。為更鮮明表述陽(yáng)性細(xì)胞及其分布區(qū)域，免疫組化染色圖示均以200×光鏡下采集的視野作為示例。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間組內(nèi)計(jì)量資料比較均采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異具有顯著性意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 傷口修復(fù)的形態(tài)學(xué)變化

治療第1天，大鼠精神狀態(tài)良好，性情暴躁。大部分壓瘡皮膚出現(xiàn)膿性或血性滲出物，質(zhì)地軟，且有波動(dòng)性，大鼠呈跛行步態(tài);治療第2天，電針組大部分創(chuàng)面干燥，逐漸結(jié)痂，質(zhì)地較軟，呈紫紅色，針刺組與空白組創(chuàng)面濕潤(rùn)，仍有滲出物;治療第3天，電針組結(jié)痂處皮膚由軟變硬，創(chuàng)面邊緣皮膚紅潤(rùn)，呈紫紅、灰白、黃白或黃褐色，無(wú)感染，大鼠步態(tài)呈活動(dòng)不利，較針刺組與空白組靈活。三組結(jié)痂處皮膚均無(wú)滲出物;治療第5天，大鼠性情溫順，壓瘡局部皮膚損傷區(qū)域縮小，結(jié)痂處可見皮膚皺褶增多，電針組可見薄皮覆蓋;治療第7天，三組大鼠步態(tài)基本恢復(fù)正常，結(jié)痂處皮膚呈黃褐色或黑色，電針組大部分創(chuàng)面基本愈合，可見結(jié)痂皮膚脫落，出現(xiàn)暗紅色肉芽組織，而針刺組于第8天結(jié)痂皮膚脫落;治療第9天，電針組與針刺組創(chuàng)面基本愈合，僅遺留不明顯線性痕跡，空白組仍存在少部分未愈合創(chuàng)面。整個(gè)治療過(guò)程中大鼠二便基本正常，針刺組與空白組共2只大鼠因體質(zhì)虛弱，飼養(yǎng)環(huán)境溫度略低而至壓瘡后感染死亡。

3.2 免疫組化結(jié)果

光鏡下觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠皮膚創(chuàng)面內(nèi)Ang-1表達(dá)情況(見圖1):在1天組中，Ang-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，其中電針組較針刺組及空白組Ang-1表達(dá)更多，陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。在3天組中，Ang-1表達(dá)均逐漸升高，且電針組與空白組Ang-1在此時(shí)間點(diǎn)同時(shí)達(dá)到高峰，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目:電針組＞針刺組＞空白組。其中電針組分別對(duì)比針刺組、空白組的陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。對(duì)比電針1天組，電針3天組的Ang-1表達(dá)顯著升高，并達(dá)到高峰(P＜0.05)。在5天組中，針刺組Ang-1表達(dá)達(dá)到峰值，對(duì)比針刺組3天明顯增高(P＜0.05)。同時(shí)，電針組與空白組Ang-1表達(dá)情況正逐漸下降，針刺組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目依次高于電針組、空白組，陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。在7天組中，Ang-1表達(dá)情況整體呈下降趨勢(shì)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目電針組＞針刺組＞空白組，陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。在9天組中，Ang-1表達(dá)逐漸減弱且三組均呈平穩(wěn)下降狀態(tài)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目電針組＞針刺組＞空白組，且電針組分別對(duì)比針刺組與空白組陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

圖1 各時(shí)間點(diǎn)三組間大鼠壓瘡皮膚修復(fù)組織內(nèi)Ang-1表達(dá)比較

圖2 各時(shí)間點(diǎn)三組間大鼠壓瘡皮膚修復(fù)組織內(nèi)Ang-2表達(dá)比較

光鏡下觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠皮膚創(chuàng)面內(nèi)Ang-2表達(dá)情況(見圖2):在1天組中，三組Ang-2均有相應(yīng)表達(dá)，其中電針組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最多，并依次大于針刺組、空白組。電針組對(duì)比空白組陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在3天組中，Ang-2表達(dá)整體呈增高趨勢(shì)，電針組Ang-1表達(dá)達(dá)到頂峰，其對(duì)比電針1天組與電針5天組均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同時(shí)在此時(shí)間點(diǎn)，針刺組與空白組Ang-1表達(dá)均緩慢上升，故電針組對(duì)比針刺組與空白組陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較具有極顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。針刺組對(duì)比空白組具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在5天組中，針刺組與空白組Ang-2表達(dá)均達(dá)到高峰，而電針組逐漸減低，且針刺組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目依次高于電針組、空白組。其中電針組對(duì)比針刺組、針刺組對(duì)比空白組陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較均具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在7天組中，三組Ang-2表達(dá)均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，其中針刺7天組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目對(duì)比針刺5天組顯著減少(P＜0.05)。因此，此時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目:電針組＞針刺組＞空白組，電針組對(duì)比針刺組、空白組陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較均具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在9天組中，電針組Ang-2表達(dá)下降快于針刺組與空白組，故針刺組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目依次高于電針組、空白組。電針組對(duì)比空白組陽(yáng)性細(xì)胞累計(jì)積分比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

4 討論

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，壓瘡的治療可歸屬為皮膚創(chuàng)傷性修復(fù)的范疇［8］，其是一個(gè)由多種細(xì)胞及生長(zhǎng)因子調(diào)控的復(fù)雜分子生物學(xué)過(guò)程。在這一過(guò)程中，促血管生成素作為血管形成的信號(hào)傳導(dǎo)通路，對(duì)壓瘡后皮膚創(chuàng)面修復(fù)起到了一定的促進(jìn)作用。促血管生成素包括Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4。Ang-1與Ang-2是特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，其在促進(jìn)血管發(fā)生、重塑、成熟、維持、調(diào)節(jié)血管功能等方面具有重要作用，而Ang-3、Ang-4在血管新生中作用較弱［6-7］。現(xiàn)代研究表明，Ang-1的主要作用是加速形成新生血管管腔，維持血管網(wǎng)絡(luò)的穩(wěn)定性、成熟性、完整性以及靜息狀態(tài)［9］。而Ang-2作為Ang-1的拮抗劑，將破壞血管網(wǎng)絡(luò)的穩(wěn)定平衡狀態(tài)，這將有利于血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂及血管網(wǎng)絡(luò)的重建［5，10］。由此可見Ang-1與Ang-2通過(guò)促進(jìn)血管新生進(jìn)而加速創(chuàng)面組織的修復(fù)。國(guó)內(nèi)外研究表明，電刺激治療皮膚潰瘍頗有療效［1］，故電針療法在大鼠壓瘡皮膚組織修復(fù)方面具有一定意義。同時(shí)電針配合傍刺法可以在損傷的局部組織皮膚處形成較強(qiáng)的損傷電流，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移與聚集。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，電針組、針刺組和空白組Ang-1及Ang-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目變化曲線均為先逐漸增高后逐漸減低，并在不同時(shí)間段出現(xiàn)峰值。由表1可知，電針組在治療3天時(shí)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目依次高于空白組、針刺組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。電針組雖與空白組增長(zhǎng)趨勢(shì)相似，但電針組Ang-1表達(dá)情況明顯高于空白組。同時(shí)，電針3天組對(duì)比電針1天組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，更在一定意義上證明電針傍刺極大的促進(jìn)了Ang-1的釋放。針刺組在治療5天后，Ang-1表達(dá)從3天時(shí)三組最低水平迅速增高，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而電針組與空白組Ang-1表達(dá)正逐漸下降，故陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目針刺組＞電針組＞空白組。同時(shí)對(duì)比空白3天組Ang-1表達(dá)明顯增高，表明經(jīng)過(guò)針刺治療促進(jìn)了Ang-1的釋放，卻延后了創(chuàng)面修復(fù)組織的最佳時(shí)間，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。而由表2可知在電針組治療1天時(shí)，Ang-2在三組內(nèi)均有相應(yīng)表達(dá)，且電針組表達(dá)情況明顯高于針刺組與空白組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在治療3天時(shí)，Ang-2在三組中表達(dá)均升高，其中電針組對(duì)比針刺組與空白組的表達(dá)明顯增高，具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同時(shí)，電針1天組與電針3天組，電針3天組與電針5天組對(duì)比，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，由此可見電針傍刺極大的促進(jìn)與提前了Ang-2的釋放。在治療5天時(shí)，針刺組與空白組Ang-2表達(dá)明顯升高，而電針組表達(dá)呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為針刺組＞電針組＞空白組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明針刺治療一定意義上促進(jìn)了Ang-2的釋放。在治療7天時(shí)，三組Ang-2表達(dá)均降低，針刺組下降趨勢(shì)快于電針組與空白組，故針刺5天組對(duì)比針刺7天組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目依次為電針組、針刺組、空白組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明三種治療方法后Ang-2的釋放均逐漸下降。治療9天時(shí)，電針組出現(xiàn)顯著下降，對(duì)比空白組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。故電針傍刺促進(jìn)了大鼠壓瘡皮膚組織內(nèi)Ang-1及Ang-2的表達(dá)，同時(shí)提前了Ang-2的釋放，從而加快了創(chuàng)口愈合的速度，使創(chuàng)面皮膚修復(fù)時(shí)間縮短。

綜上所述，電針傍刺治療皮膚壓瘡安全、簡(jiǎn)單、無(wú)副作用。其可以通過(guò)促進(jìn)促血管生成素Ang-1及Ang-2的表達(dá)，加速Ang-2的釋放，使創(chuàng)面的血管內(nèi)皮細(xì)胞不斷增殖與再生，從而加快皮膚壓瘡后創(chuàng)面的修復(fù)，縮短創(chuàng)傷愈合時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)為動(dòng)物研究，其雖為臨床研究提供了基礎(chǔ)及理論依據(jù)，但更深層次的臨床分子生物學(xué)作用機(jī)制以及臨床研究尚需進(jìn)一步探討。

［1］孫忠人，任雪，張秦宏，等.電針傍刺對(duì)大鼠褥瘡炎性細(xì)胞的影響［J］.上海針灸，2014，33(9):863-867.

［2］郭玉懷，孫忠人，孫琦，等.簡(jiǎn)易大鼠壓瘡缺血再灌注模型造模裝置的設(shè)計(jì)及應(yīng)用［J］.護(hù)理研究，2015，29(2):592-593.

［3］Peirce SM，Skalak TC，Rodeheaver G.Ischemia-reperfusion injury in chronic pressure ulcer formation:a skin model in the rat［J］.Wound Repair Regen，2000，8:68-75.

［4］Reid RR，Sull AC，Mogford JE，et al.A novelmurinemodel of cyclical cutaneous ischemia-reperfusion injury［J］.JSurg Res，2004，116(1):172-180.

［5］吳正思.Ang1、Ang2及Tie2在血管內(nèi)皮細(xì)胞及體外三維培養(yǎng)血管樣結(jié)構(gòu)中的表達(dá)及意義［D］.福州:福建醫(yī)科大學(xué)，2008.

［6］Hata K，Udagawa J，F(xiàn)ujiwaki R，etal.Expression of angiopoietin-1，angiopoietin-2，and Tie2 genes in normal ovary with corpus luteum and in ovarian cancer［J］.Oncology，2002，62(4):340-348.

［7］Mitsuhashi N，Shimizu H，Ohtsuka M，et al.Angiopoietins and Tie-2 expression in angiogenesis and proliferation of human hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，2003，37(5):1105-1113.

［8］王學(xué)偉.中西醫(yī)結(jié)合治療重度褥瘡療效觀察［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2013，41(2):77-78.

［9］Sundberg C，KowanetzM，Brown LF，etal.Stable expression of Angiopoietin-1 and other markers by cultured pericytes:phenotypic similarities to a subpopulation of cells in maturing vessels during later stages of Angiogenesis in vivo［J］.Lab Invest，2002，2(4):387-401.

［10］Murray BW，Padrique ES，Pinko C，et al.Mechanistic effects of auto-phosphorylation on receptor tyrosine kinase catalysis:Enzymatic characterization of Tie2 and phospho-Tie2［J］.Biochemistry，2001，40(34):10243-10253.