郁李仁配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究Δ

晏小云（江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇江陰 214434）

郁李仁為薔薇科植物歐李Prunus humilisBge.、郁李P.japonicaThunb.或長(zhǎng)柄扁桃P.pedunculataMaxim.的干燥成熟種子，具有潤(rùn)燥滑腸、下氣、利水之功效[1]。郁李仁中含有的苦杏仁苷為其主要藥效成分，是臨床常用的祛疲止咳劑和輔助性抗癌藥物[2-4]。為有效控制郁李仁配方顆粒的質(zhì)量，筆者參考原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》的相關(guān)要求，采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)郁李仁配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀（美國(guó)Agilent公司）；REPROSTAR 3型薄層自動(dòng)成像儀（瑞士CAMAG公司）；BS110S型萬(wàn)分之一天平（德國(guó)賽多利斯公司）；十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-250B型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；硅膠G薄層板（20 cm×10 cm，青島海洋化工廠）。

1.2 藥品與試劑

郁李仁配方顆粒（江陰天江藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1210008、1207085、1202037、1110100、1107095、1101086、1009031、1003112、0907216）；苦杏仁苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：1108020-201305，純度＞98%）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

取本品1.0 g，加甲醇20 ml，超聲（功率：300 W，頻率：50 kHz）處理20 min，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml分散，用水飽和的正丁醇溶液萃取2次，每次15 ml，合并萃取液，蒸干，加1 ml甲醇使溶解，搖勻，作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含5 mg苦杏仁苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜（TLC）法[2010年版《中國(guó)藥典》（一部）附錄VIB]試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水溶液（3 ∶8 ∶5 ∶2，V/V/V/V）于10 ℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，立即噴以5%香草醛硫酸乙醇試液，于105 ℃烘箱中加熱5～10 min，置于日光下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。TLC圖見(jiàn)圖1。

圖1 薄層色譜圖1～3.供試品；S.苦杏仁苷對(duì)照品Fig 1 TLC chromatograms1-3.test sample；S.amygdalin reference control

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：GP-Phenyl（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（10 ∶90，V/V）；流速：0.8 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：5 μl。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000；分離度＞1.5。高效液相色色譜見(jiàn)圖2。

圖2 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；1.苦杏仁苷Fig 2 HPLC chromatogramsA.control sample；B.test sample；C.negative control；1.amygdalin

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對(duì)照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1.018 4 mg/ml的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取本品細(xì)粉約0.1 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇溶液25 ml，稱定質(zhì)量，加熱回流提取30 min，放冷，再次精密稱定，加稀乙醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣5 μl，記錄峰面積。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：y＝5.390 6x+41.788（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，苦杏仁苷的質(zhì)量濃度在50.92～611.04 μg/ml范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液3.0 ml于10 ml量瓶中，加甲醇定容，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果RSD＝0.22%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液適量，分別于放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果RSD＝0.87%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取郁李仁配方顆粒（批號(hào)：1210008）適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果苦杏仁苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.89%，RSD＝2.08%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的本品粉末（批號(hào)：1210008）0.05 g，共6份，分別精密加入苦杏仁苷對(duì)照品各適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.2.9 樣品含量測(cè)定 取9批郁李仁配方顆粒樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積，重復(fù)2次，計(jì)算苦杏仁苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，含苦杏仁苷（C20H27NO11）不得少于1.5%。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝2）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝2）

3 討論

預(yù)試驗(yàn)中，筆者采用2010年版《中國(guó)藥典》（一部）中郁李仁的TLC鑒別方法：用甲醇超聲提取后，將濾液蒸干，再用甲醇溶解制備供試品溶液，以磷鉬酸溶液為顯色劑。結(jié)果該方法斑點(diǎn)拖尾嚴(yán)重，分離度差，斑點(diǎn)顯色不清晰。而本研究所采用的方法斑點(diǎn)清晰、分離度好[1，5-6]。

在研究郁李仁配方顆粒的含量測(cè)定方法中發(fā)現(xiàn)，采用文獻(xiàn)方法或者2010年版《中國(guó)藥典》苦杏仁苷的含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件[以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（12 ∶88，V/V）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm]，苦杏仁苷峰與另一未知峰難以分離；而采用本試驗(yàn)的色譜條件，苦杏仁苷峰與另一未知峰能達(dá)到基線分離，峰形可得到明顯改善[1，7-8]。

筆者還比較了超聲和回流兩種提取方式對(duì)苦杏仁苷含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)回流提取效率更高，因此本研究選用了回流提取的方式。此外，筆者還考察了水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、30%乙醇、稀乙醇、70%乙醇和乙醇等9種溶劑對(duì)苦杏仁苷的提取效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)稀乙醇提取效果最好、苦杏仁苷的含量最高，因此最終選擇稀乙醇為提取溶劑。

綜上所述，該方法操作簡(jiǎn)單、靈敏、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可作為郁李仁配方顆粒的質(zhì)量控制方法。

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