胃幽康胃漂浮片的制備及其體外釋藥特性研究Δ

楊 晨，楊志潔，邱余新，蔡寶昌，李偉東（.溧陽市中醫(yī)院藥劑科，江蘇 溧陽 3300；.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京 003）

胃幽康胃漂浮片的處方來源于名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，由黨參、黃連、黃芩、延胡索、甘草、黃芪和丹參等中藥組成，具有健脾益氣、清熱解毒、活血化瘀的功效，主治胃痛痞滿等證，以及慢性胃炎見上述癥狀者。本處方作為醫(yī)院制劑協(xié)定處方，以湯劑和顆粒劑兩種劑型在臨床使用十多年，總有效率在90%以上。但湯劑臨時(shí)煎煮不便，而顆粒劑也存在日服次數(shù)多（4次）和單次服用劑量大（10 g）等缺點(diǎn)，且湯劑和顆粒劑這兩種普通劑型在胃部停留時(shí)間短，不利于本處方在胃部發(fā)揮其殺滅胃幽門螺旋桿菌（HP）、抗?jié)?、保護(hù)胃黏膜和抑制胃酸分泌等藥理活性。由于本品所治疾病為慢性疾病，需要長期服藥，為了降低給藥次數(shù)、提高患者服藥順應(yīng)性、延長藥物在胃部停留時(shí)間從而提高臨床療效，筆者擬將該處方研制成胃幽康胃漂浮片，并對(duì)其體外藥物緩釋特性和體外漂浮性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 儀器

RC610 型智能藥物溶出儀（天津醫(yī)療器械研究所）；MJ-500 型電子天平（精度：1 mg，日本Chyo 公司）；Libror AEL型電子天平（精度：0.01 mg，瑞典Shimadzu公司）；DP-30d型單沖壓片機(jī)（北京國藥龍立科技有限公司）；PYS-20 型片劑硬度計(jì)（上海黃海藥檢儀器有限公司）；Waters 515型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Waters公司）。

1.2 藥材與試劑

羥丙基甲基纖維素K15M（HPMC-K15M，批號(hào)：RC02012-N07）、HPMC-K4M（批號(hào)：RG13011N08）購自上?？房蛋录夹g(shù)有限公司；十八醇、聚乙烯基吡咯烷酮K30（PVP-K30）、碳酸氫鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；硬脂酸鎂、微粉硅膠（上?；瘜W(xué)試劑公司）。所有藥材均購自安徽省亳州市藥材總公司中藥分公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室吳德康教授鑒定均符合2010年版《中國藥典》（一部）標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 復(fù)方提取精制物的制備

取黃連和延胡索加70%乙醇回流提取2次，第1次10倍量2 h，第2次8倍量1 h。合并2次醇提液，減壓回收乙醇，濃縮至0.5 g（生藥）/ml。另取黨參、黃芩和甘草等10 味藥材，加水煎煮2 次，第1 次加水11 倍量1.5 h，第2 次加水9 倍量1 h。合并水提液，減壓濃縮至0.5 g（生藥）/ml。將乙醇提取濃縮液和水提濃縮液分別采用AB-8大孔樹脂吸附法精制，70%乙醇洗脫有效成分，收集洗脫液，減壓回收乙醇，真空干燥，即得胃幽康提取精制物。

2.2 制劑處方設(shè)計(jì)

本品原劑型為顆粒劑，單日處方劑量為（按藥材計(jì)）92 g，是由處方中藥材經(jīng)水提、減壓濃縮和噴霧干燥得到的浸膏加適量輔料制備。由于未采用分離純化工藝，劑量較大，每日需口服4 次，每次10 g。經(jīng)過提取分離后，本制劑的單日口服劑量（按復(fù)方提取精制物計(jì)）為4.5 g左右。基于胃漂浮片需要加入大量胃漂浮材料以保證漂浮性能，因此本制劑擬設(shè)計(jì)成每日口服3次，每次5片的胃漂浮片。為了保證胃漂浮片能達(dá)到有效血藥濃度，本制劑的藥材處方日服劑量與原顆粒日服劑量相同；由于胃漂浮片具有緩釋效果，所以將服藥次數(shù)由4 次降低到3次。胃幽康胃漂浮片中每片含復(fù)方提取精制物0.3 g，輔料用量控制在0.3 g，片質(zhì)量控制在0.6 g左右。

2.3 體外釋放度和漂浮性能測定

2.3.1 體外釋放度測定 采用2010年版《中國藥典》（二部）附錄中釋放度測定第一法——轉(zhuǎn)籃法[1]。溶出介質(zhì)為脫氣的人工胃液900 ml，溫度（37±0.5）℃。取胃幽康胃漂浮片6片，精密稱定，投入6個(gè)干燥的轉(zhuǎn)籃內(nèi)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為100 r/min，待其平穩(wěn)后，將轉(zhuǎn)籃降入恒溫的溶出杯中，自樣品接觸溶出介質(zhì)起立即計(jì)時(shí)，至規(guī)定時(shí)間后直接取樣3 ml（每次取樣后補(bǔ)充新鮮介質(zhì)3 ml），用0.22 μm微孔濾膜濾過。取濾液采用HPLC法分別測定小檗堿、黃芩苷、甘草酸、延胡索乙素含量，計(jì)算累積釋放度。

2.3.2 體外漂浮性能測定 通過起漂時(shí)間（T1）和持續(xù)漂浮時(shí)間（T1）評(píng)價(jià)制劑的漂浮性能。采用2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅩC溶出度測定法第二法——漿法[1]裝置，轉(zhuǎn)速為50 r/min，介質(zhì)為脫氣的0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml，溫度為（37±0.5）℃。投入胃幽康胃漂浮片6 片，立即計(jì)時(shí)，記錄各片上浮到液面所需的時(shí)間（T1）和再次下沉所需的時(shí)間（T2）。

2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)選輔料用量

要滿足中藥復(fù)方胃漂浮片快速起漂、長時(shí)間漂浮和緩釋3個(gè)條件，需多種藥用輔料協(xié)同作用。前期試驗(yàn)優(yōu)選出了胃幽康胃漂浮片的輔料為HPMC-K15M（水凝膠骨架材料）、十八醇（低密度助漂劑）、碳酸氫鈉（發(fā)泡劑）、PVP-K30（釋放調(diào)節(jié)劑）和硬脂酸鎂（潤滑劑）。筆者以對(duì)制劑漂浮和釋藥性能具有重要影響的HPMC-K15M（A）、十八醇（B）、碳酸氫鈉（C）3 種輔料用量為考察因素（D 為空白對(duì)照），設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)，每個(gè)處方200 片，另含有藥物浸膏粉60 g、PVP-K30 2 g、硬脂酸鎂1 g，采用全粉末壓片。因素與水平見表1。

本制劑臨床主治為HP感染相關(guān)性慢性胃病，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)主要來源于黃連生物堿，其代表性成分為小檗堿[2]，因此，擬選擇小檗堿在2、4、8 h的累積釋放度（Y2h、Y4h、Y8h）為考察指標(biāo)。此外，體外漂浮性能（T1應(yīng)小于3 min，T2應(yīng)大于8 h）也是本制劑的重要特性，但體外漂浮性能指標(biāo)不易量化，因此僅作為參考指標(biāo)。根據(jù)“2.3.1“項(xiàng)下方法測定所制片劑中小檗堿的Y2h、Y4h、Y8h，以2 h釋放30%（評(píng)價(jià)是否能快速起效和是否突釋）、4 h釋放55%（評(píng)價(jià)是否具緩釋性）和8 h釋放90%以上（評(píng)價(jià)生物利用度是否符合要求）為基準(zhǔn)，以X值（計(jì)算公式如下）為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)。X值越小說明釋放越接近設(shè)計(jì)目標(biāo)，通常X＜0.2即可[3]。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素與水平（g）Tab 1 Factors and levels（g）

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Tab 2 Design and results of orthogonal test

表3 方差分析結(jié)果Tab 3 Results of variance analysis

方差分析結(jié)果表明，因素B 和C 對(duì)小檗堿體外累積釋放度的影響不顯著，而因素A 對(duì)小檗堿體外累積釋放度的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。直觀分析結(jié)果表明，最優(yōu)工藝條件為A3B1C1，即HPMC-K15M 40 g、十八醇14 g、碳酸氫鈉6 g（200片量，片質(zhì)量約0.6 g）。制劑成型工藝為：取藥物浸膏粉、HPMC-K15M、十八醇、碳酸氫鈉和PVP-K30混勻，加入硬脂酸鎂，全粉末壓片（0.615 g/片）即得。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按上述優(yōu)選處方進(jìn)行3批放大試驗(yàn)（放大10倍，每批2 000片）。結(jié)果顯示，3批制劑（批號(hào)：20140518、20140519、20140520）的T1均小于3 min、T2均大于8 h，符合設(shè)計(jì)要求；2、4、8 h 的平均累積釋放度分別為31.94%、55.88%、93.34%，RSD 分別為1.2%、1.5%、1.5%（n＝3），表明工藝穩(wěn)定，結(jié)果見表4。

2.6 多成分體外藥物釋放度研究

本制劑中黃連、延胡索、黃芩和甘草是主要臣藥，現(xiàn)代研究表明，其具有明確的殺滅HP 和保護(hù)胃黏膜等藥理作用[4-5]，因此選擇其代表性活性成分小檗堿、延胡索乙素、黃芩苷和甘草酸評(píng)價(jià)所制制劑的體外釋藥規(guī)律。按“2.3.1”項(xiàng)下方法測定釋放度。所制制劑中各有效成分體外釋藥具有明顯的緩釋特性，結(jié)果見表5。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab 4 Results of verification test

表5 4種有效成分不同時(shí)間的體外累積釋放度Tab 5 Cumulative release rate of four active ingredients at different time

2.7 體外多成分釋藥規(guī)律研究

2.7.1 釋放模型擬合 將小檗堿、延胡索乙素、黃芩苷和甘草酸的體外釋放百分率（F）和時(shí)間（t）分別按Higuchi 方程、零級(jí)釋放模型和一級(jí)釋放模型進(jìn)行擬合，求出釋放方程，以相關(guān)系數(shù)r最大者為最優(yōu)釋放模型。所制制劑中小檗堿等4種指標(biāo)成分的釋放規(guī)律均以Higuchi釋放模型為最佳擬合模型，結(jié)果見表6。

表6 4種有效成分的釋藥模型擬合結(jié)果Tab 6 Fitting results of release kinetic modeling for four active ingredients

2.7.2 釋藥機(jī)制 采用Peppas 方程Ft/F∞＜ktn[或lg（Ft/F∞）＝nlgt+lgk]探討釋放機(jī)制。式中Ft/F∞是t時(shí)刻的累積釋放百分率，k為骨架結(jié)構(gòu)的幾何特征常數(shù)，n為釋放參數(shù)。當(dāng)0.45≤n＜0.89時(shí)，藥物釋放機(jī)制為非Fick’s擴(kuò)散，即擴(kuò)散與骨架溶蝕協(xié)同作用；當(dāng)n＜0.45 時(shí)，藥物釋放機(jī)制為Fick’s 擴(kuò)散；當(dāng)n≥0.89時(shí)，藥物釋放機(jī)制為骨架溶蝕作用[5]。胃幽康胃漂浮片中小檗堿等4 種指標(biāo)成分的釋放機(jī)制均為擴(kuò)散協(xié)同骨架溶蝕作用，結(jié)果見表7。

表7 4種有效成分的釋藥機(jī)制Tab 7 Release mechanism of four active ingredients

2.8 4種成分釋藥曲線相似性評(píng)價(jià)

采用Kok.K.P提出的相似因子（f2）法[6]分別判斷兩條釋藥曲線的相似性。下列公式中Xti和XTi分別表示兩條釋放曲線在同一時(shí)間的累積釋放百分率。如果f2大于50，則認(rèn)為兩條曲線是相似的。

結(jié)果表明，所制制劑中小檗堿等4種指標(biāo)成分的體外釋放曲線兩兩比較f2均大于80，說明各成分均衡釋放，釋放相似性結(jié)果見表8。

表8 4種有效成分體外釋藥曲線的相似因子Tab 8 f2of in vitro cumulative release curve of four active ingredients

3 討論

中藥復(fù)方胃內(nèi)漂浮給藥系統(tǒng)是根據(jù)流體動(dòng)力學(xué)平衡原理制備的口服后可長期漂浮在胃液之上的一種特殊緩釋制劑，是當(dāng)前中藥新劑型研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一[7-10]。筆者將治療HP感染相關(guān)性慢性胃炎的臨床有效驗(yàn)方制劑“胃幽康顆?！毖兄瞥晌钙∑?，對(duì)提高胃幽康的臨床療效、促進(jìn)中藥新型給藥系統(tǒng)的研究具有重要意義。研制的胃幽康胃漂浮片達(dá)到了設(shè)計(jì)要求，其體外漂浮性能良好，可快速起漂（起漂時(shí)間在3 min以內(nèi)）和長時(shí)間漂?。ǔ掷m(xù)漂浮時(shí)間大于8 h）。體外釋放度研究結(jié)果顯示，本制劑具有良好的緩釋特性：各成分能在2 h 釋放30%左右，提示本制劑可保證快速起效且無突釋現(xiàn)象；4 h釋放55%左右，提示本制劑具有緩釋特性；8 h釋放90%以上，提示本制劑的生物利用度可符合要求。此外，各成分的釋放模型均以Higuchi方程為最佳擬合模型，釋放機(jī)制均為擴(kuò)散協(xié)同骨架溶蝕作用，以上結(jié)果說明胃幽康胃漂浮片的劑型選擇與制備工藝是科學(xué)合理的。在此基礎(chǔ)上，筆者將進(jìn)一步開展胃幽康胃漂浮片的藥動(dòng)學(xué)及臨床應(yīng)用等研究，并探討體外釋藥曲線與體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的相關(guān)性，為臨床應(yīng)用提供參考。

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