丹參注射液對高脂血癥合并重癥急性胰腺炎大鼠胰腺血流量和組織病理改變的影響

馮　力　王衛(wèi)星

丹參注射液對高脂血癥合并重癥急性胰腺炎大鼠胰腺血流量和組織病理改變的影響

馮力王衛(wèi)星*

【摘要】目的：觀察丹參注射液對高脂血癥合并重癥急性胰腺炎大鼠(SAP)胰腺局部血流量和組織病理改變的影響。方法：32只雄性SPF級大鼠隨機分為普通飲食空白組(SO組，普通飼料喂養(yǎng))、高脂血癥組(HL組，高脂飲食喂飼建立高脂血癥模型)、高脂+SAP組(HAP組，高脂血癥模型建模成功后再建SAP模型)、高脂+SAP+丹參治療組(SM組，在HAP組基礎(chǔ)上加用丹參注射液干預)，每組各8只大鼠。應用多普勒超聲檢測系統(tǒng)測定各組胰腺局部血流量，下腔靜脈取血測定各組血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)及淀粉酶(AMY)水平，取各組大鼠胰腺行HE染色，觀察組織病理學改變，并行病理評分。結(jié)果：HL組大鼠胰腺局部血流量明顯低于SO組，HAP組更低(P<0.01)，而SM組明顯高于HAP組(P<0.01)。HL組和/或HAP組大鼠AMY、TC、TG水平明顯高于SO組，SM組則顯著降低(P<0.01)。HL組和HAP組胰腺組織分別出現(xiàn)脂肪組織增生、腺泡壞死、出血及炎性細胞浸潤、胰腺病理評分顯著升高(P<0.01)，而SM組的上述病理組織學變化緩解，胰腺病理評分也明顯下降(P<0.01)。結(jié)論：丹參注射液能夠改善高脂血癥合并SAP大鼠的胰腺血流狀況和組織病理學變化。

【關(guān)鍵詞】高脂血癥；重癥急性胰腺炎；丹參；胰腺血流

Effect of Salvia Miltiorrhiza on Pancreatic Blood Flow in Hyperlipidemic Rats with Severe Acute Pancreatitis

FENG Li, Wang Wei-xing*

Department of Hepatobiliary Surgery，Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060,China;*Corresponding author

【Abstract】Objective: To observe the effect of salvia miltiorrhiza on pancreatic blood flow in hyperlipidaemia rats with severe acute pancreatitis.Method: 32 SPF S-D rats were randomly divide into four groups: normal diet control group(SO group), fat diet group(HL group), fat diet and SAP group(HAP group), fat diet and SAP and salvia miltiorrhiza group(SM group).Each group was 8 rats. The rats who received fat diet two weeks can induced the experimental hyperlipidaemia and then the hyperlipemia rats were divided into the sham-operation group, the severe acute pancreatitis group, the salvia miltiorrhiza group.The normal group was divided into sham-operation group and severe acute group. At the 12 hour time point after the each model were made we examined the pancreatic blood flow and the serum levels of amylase(AMY), triglyceride (TG),total cholesterol(TC) and HE staining technique was used to measure the pancreas injury.Results: Compared with the pancreatic blood flow in SO group, the level of HL group conspicuously decreased (P<0.01) and that of HAP group was more lower than HL group (P<0.01) ,and the level of SM group was higher than HAP group (P<0.01).The level of AMY, TC and TG in HL and HAP group were higher than SO group (P<0.01), and these levels in SM group were lower than in HL and HAP group (P<0.01). The adipose tissue hyperplasia, acini necrosis, hemorrhage, inflammatory cell infiltration were found in HL and HAP group, and the grading of pancreas pathology was significantly increased. But the above histopatho-

[作者單位]武漢大學人民醫(yī)院肝膽腔鏡外科，武漢 430060;*通訊作者，E-mail:sate.llite@163.com

本文2015-06-24收到，2015-09-28修回

logical changes in SM group was of alleviation and the the grading of pancreas pathology significantly decreased than HL and HAP group (P<0.01).Conclusion: The salvia miltiorrhiza can improve the pancreatic blood flow and alleviate the damage of pancreas in the hyperlipidaemia rats with severe acute pancreatitis.

【Key words】Hyperlipidaemia; Severe acute pancreatitis; Salvia miltiorrhiza; Pancreatic blood flow

高脂血癥是除膽道疾病、酒精性因素外誘發(fā)急性胰腺炎(AP)的第三大病因，可以加速胰腺疾病的進展。研究[1]表明，12%-38%的AP患者伴有血脂水平不同程度升高，嚴重影響AP預后。重癥急性胰腺炎(SAP)是AP的嚴重表現(xiàn)，早期可出現(xiàn)血流動力學改變及全身炎癥反應，高脂血癥合并SAP的機制尚不清楚，其病理過程可能與機體整體和局部缺血、微循環(huán)障礙相關(guān)。針對高脂血癥合并SAP的治療方法較多，但尚無突破性進展。中醫(yī)中藥對其治療已有相關(guān)報道，但尚未見到丹參注射液的有關(guān)報道。本實驗制備大鼠高脂血癥合并SAP模型后，采用丹參注射液進行干預，觀察其胰腺局部血流量及組織病理變化，為臨床應用提供實驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1　實驗動物與分組

SPF級雄性SD大鼠32只(購于武漢大學動物中心，合格證編號4200050002679)，體重180-200g。根據(jù)數(shù)字表法隨機分為普通飲食空白組(SO組，n=8)、高脂血癥組(HL組，n=8)、高脂+SAP組(HAP組，n=8)、高脂+SAP+丹參治療組(SM組，n=8)。

1.2　主要試劑、藥品及儀器

丹參注射液購自成都天臺山制藥有限公司(生產(chǎn)批號：Z51020205)； 5%牛黃膽酸鈉溶液(STC)購自美國Sigma公司；高脂飼料由北京華阜康公司加工，其配比為普通飼料77%、膽固醇3%、豬油20%。Imcxlab 9100多普勒超聲診斷儀購自美國Imex公司。

1.3　建模及給藥

SO組以普通飼料喂養(yǎng)2周，余3組先行制備高脂血癥模型：參照文獻[2]給予高脂飼料喂養(yǎng)2周后24只大鼠全部成模。其中8只作HL組，余16只再行制備SPA模型：實驗大鼠禁食12h,自由飲水，采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3ml/kg),腹部消毒，劍突下正中切口進入腹腔，于膽胰管在十二指腸的開口處逆行插管，將5%的STC以1ml/min勻速注入膽胰管，觀察大鼠胰腺大體改變，待胰腺出現(xiàn)水腫、出血、壞死即為SPA模型成功[3]。本次16只大鼠全部成模，留取8只作為HAP組，余8只成模后30min股靜脈注入丹參注射液(1ml/100g)[4]，6h后再次給予相同劑量一次，作為SM組。其它各組在相同時間以相同方法注入等量生理鹽水。

1.4　觀測指標和方法

1.4.1胰腺血流量測定：以上處理完成后12h，各組大鼠再腹腔注射10%水合氯醛麻醉，開腹，在胰頭、胰體交界處找到與胰管平行的胰腺血管，采用文獻方法[5]將多普勒超聲探頭與血管成45°夾角，測定胰腺血流量，以頻率(kHz)表示。

1.4.2血清淀粉酶(AMY)及血脂水平測定：各組大鼠胰腺血流量測定后，下腔靜脈抽血，分離血清，由本院檢驗科按常規(guī)方法檢測AMY、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)水平。

1.4.3組織病理學觀察：斷頭處死各組大鼠后，隨即取胰頭組織按常規(guī)方法進行固定、包埋、切片(3μm)和HE染色，顯微鏡觀察胰腺形態(tài)、炎性改變和出血壞死，并進行胰腺病理學評分。評分標準根據(jù)Schmidt等[6]的方法，水腫：無水腫0分，輕度組織間隙擴張1分，重度擴張2分；腺泡壞死：無壞死0分，輕度壞死1分，中度壞死2分，中-重度壞死3分，重度壞死4分；出血：無出血0分，有出血1分；炎性細胞侵潤：每高倍鏡視野內(nèi)有5個炎性細胞記0.5分，>30個記4分。

1.5　統(tǒng)計學處理

2結(jié)果

2.1　各組胰腺局部血流量

單因素方差分析顯示，4組大鼠胰腺血流量差異有統(tǒng)計學意義(F=176.30，P<0.01)。與SO組比較，HL組和HAP組胰腺血流量降低(t=5.85，P<0.01)，HAP組降低更明顯(t=16.89,P<0.01)，SM組胰腺血流量明顯高于HAP組(t=10.48,P<0.01)，但仍低于SO組(t=8.10,P<0.01)。見表1。

表1　各組胰腺局部血流量及病理評分±s，n均=8)

注：與SO組比較，1)P<0.01；與HL組比較，2)P<0.01；與HAP組比較，3)P<0.01

2.2　各組血清學指標

各組AMY、TC、TG差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。HAP組AMY明顯高于SO組和HL組(P<0.01)，SM組則顯著低于HAP組(P<0.01)。HL組和HAP組TC及TG較SO組明顯升高(P<0.01)，SM組較HL和HAP組顯著下降(P<0.01)。見表2。

表2　各組血清學指標水平均=8)

注：與SO組比較，1)P<0.01；與HL組比較，2)P<0.01；與HAP組比較，3)P<0.01

2.3　各組胰腺病理改變和評分

SO組胰腺無異常改變；HL組胰腺結(jié)構(gòu)清楚，但胰周脂肪組織增生；HAP組胰腺結(jié)構(gòu)不清、腺泡壞死、有出血及壞死，并伴有炎性細胞浸潤；SM組仍見胰腺組織出血、腺泡組織壞死及炎癥細胞，但較HAP組輕。見圖1。

各組胰腺病理評分顯示其差異有統(tǒng)計學意義(F=253.86，P<0.05)。HAP組明顯高于SO組及HL組(t值分別為27.85、26.69，P均<0.01)，SM組較HAP明顯下降(t=7.60，P<0.01)。見表1。

[本文圖1見封3]

3討論

高脂血癥合并急性胰腺炎的發(fā)病率正日益增加，僅次于膽源性胰腺炎和酒精性胰腺炎[7]。其發(fā)病機制復雜，胰腺局部血流變化是導致胰腺病理改變的重要原因之一，高脂血癥嚴重影響胰腺微血流，脂質(zhì)聚集，導致胰腺血流動力學改變，使胰腺血液高凝乃至血栓形成，進一步阻塞胰腺微小血管，引起胰腺微循環(huán)狀態(tài)改變[8]，也成為可能機制之一。高脂血癥時機體血小板被激活，可釋放血管活性物質(zhì)如血栓素A2(TXA2)等，不僅具有強的縮血管作用，而且能夠損傷血管內(nèi)皮細胞，使其減少擴血管物質(zhì)前列腺素(PGI2)的分泌，進而加重胰腺的微循環(huán)障礙。同時，胰腺和胰周高濃度的TG被胰脂肪酶分解、釋放大量游離脂肪酸，進而激活胰蛋白酶原，加重AP。此外，游離脂肪酸還可以直接對細胞產(chǎn)生毒性作用，加重胰腺缺血壞死[9]。上述微循環(huán)障礙存在于AP的整個病程中，持續(xù)微循環(huán)障礙可致水腫型AP進展為出血壞死型AP[10]。高脂血癥合并SAP患者的微循環(huán)障礙較普通水腫型胰腺炎更嚴重。因此，早期改善機體的微循環(huán)障礙對疾病轉(zhuǎn)歸具有重要意義。

丹參已廣泛應用于臨床，其具有祛瘀止痛、活血通絡、清心去煩等多重功效。丹參的主要化學成分為水溶性酚酸和脂溶性丹參酮類，具有抑制氧自由基[11]、解除血小板聚集[12]、調(diào)節(jié)脂質(zhì)炎性介質(zhì)代謝[13]、減少TXA2產(chǎn)生、擴張血管[14]等作用。近年來被應用于AP的實驗研究中，其結(jié)果表明對AP過程中存在的嚴重微循環(huán)障礙具有重要調(diào)節(jié)作用。本研究應用丹參注射液治療HAP大鼠，觀察其胰腺局部血流和組織病理學變化，結(jié)果顯示，HAP大鼠胰腺局部血流較HL組明顯下降，應用丹參注射液治療后，血流量顯著增加，胰腺的病理損害也明顯減輕。因而認為丹參注射液對高脂血癥合并SPA大鼠具有明確的治療作用，其機制可能與丹參增加胰腺局部的血流量有關(guān)。

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馮力(1980-)，男，土家族，碩士研究生，研究方向為胰腺疾病的臨床診療

參考文獻

1Toskes PP. Hyperlipidemic pancreatitis[J]. Gastroenterol Clin North Am,1990,19(4):783-791.

2張偉，王興鵬，俞卓偉，等. 高脂血癥相關(guān)性急性胰腺炎大鼠蛋

白質(zhì)組學分析[J]. 中華醫(yī)學雜志,2008,88(16):1 132-1 136.

3徐健雄，劉黎明，鄧文宏，等. 花姜酮對重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷的保護作用[J]. 微循環(huán)學雜志,2014，24(2):9-13.

4張建新，程國祚，李龍，等. 丹參對急性胰腺炎大鼠腸微循環(huán)的影響及其保護作用[J]. 中華肝膽外科雜志,2002，8(12):50-51.

5陶坤，張義勝，張曉峰，等. 血栓素前列環(huán)素在大鼠輕癥急性胰腺炎向重癥急性胰腺炎轉(zhuǎn)變中的變化和意義[J]. 肝膽外科雜志,2007,15(3):226-228.

6Schmidt J, Rattner DW, Lewandrowski K, et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy[J]. Ann Surg,1992,215(1):44-56.

7巴圖爾·尼牙子，趙凱亮，鄧文宏，等. 羅格列酮對高脂血癥大鼠合并重癥急性胰腺炎肺損傷的作用機制[J]. 微循環(huán)學雜志,2012，22(4):80-84.

8Hackert T, Pfeil D, Hartwig W, et al. Platelet function in acute experimental pancreatitis induced by ischaemia-reperfusion[J]. Br J Surg,2005,92(6):724-728.

9王剛，孫備，姜洪池. 高脂血癥急性胰腺炎的研究進展[J]. 中國普通外科雜志,2005，14(11):63-65.

10Banerjee AK, Steele RJ. Current views on the pathophysiology of acute biliary pancreatitis[J]. Gut,1995,36(6):803-805.

11張鐵，陳鐵良. 丹參對急性胰腺炎大鼠氧自由基水平的影響[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2004，10(01):38-40.

12李魯楊，唐占府，孔令鈞. 復方丹參注射液對冠心病患者血小板活化率的影響[J]. 山東中醫(yī)雜志,2001，20(04):204-205.

13Li M, Zhao C, Wong R N, et al. Inhibition of shear-induced platelet aggregation in rat by tetramethylpyrazine and salvianolic acid B[J]. Clin Hemorheol Microcirc,2004,31(2):97-103.

14余曉兵，陳玉石. 丹參治療急性壞死性胰腺炎的實驗研究[J]. 中華醫(yī)院感染學雜志,2004，14(02):58-60.

作者簡介：本文第一

[中圖分類號]R576

[文獻標識碼]A

[文章編號]1005-1740(2015)04-0025-04

doi：10．3969／j．issn．1005－1740．2015．04．006

微循環(huán)學雜志，2015，25（4）：25－27，31

? 2015 CHINESE JOURNAL OF MICROCIRCULATION