血管內(nèi)皮生長因子VEGF和轉(zhuǎn)錄因子YY1在垂體瘤中表達(dá)的意義

孫文早，王　亮，黃　晶，鄒　毅

(湖北省仙桃市第一人民醫(yī)院，湖北 仙桃　433000)

血管內(nèi)皮生長因子VEGF和轉(zhuǎn)錄因子YY1在垂體瘤中表達(dá)的意義

孫文早，王亮，黃晶，鄒毅

(湖北省仙桃市第一人民醫(yī)院，湖北 仙桃433000)

摘要：目的探討血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和轉(zhuǎn)錄因子(Yin Yang-1,YY1)在垂體瘤中表達(dá)的意義。方法采用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry-SP法)對臨床垂體瘤組織標(biāo)本進(jìn)行VEGF和YY-1蛋白表達(dá)的檢測，應(yīng)用RNAi(RNA interference)的方法對大鼠垂體瘤細(xì)胞系做傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行VEGF和YY1干擾，干擾后提取蛋白，用western blot測兩者蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤(P<0.05)。RNAi的結(jié)果分析顯示，當(dāng)干擾VEGF后，YY1的蛋白表達(dá)也降低(P<0.05)，反過來干擾了YY1因子后VEGF蛋白的表達(dá)也降低(P<0.05)。同時在垂體瘤中VEGF和YY1蛋白共陽性表達(dá)率為80.77%(21/26)，VEGF和YY1蛋白共陰性表達(dá)率為78.72%(37/47)，兩組表達(dá)表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤，且VEGF和YY1蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的大小沒有明顯相關(guān)，而與腫瘤的分化程度、浸潤程度以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等存在一定的關(guān)系，且在垂體瘤中VEGF和YY1蛋白表達(dá)存在正相關(guān)。

關(guān)鍵詞:垂體瘤；血管內(nèi)皮生長因子；轉(zhuǎn)錄因子

垂體瘤是顱內(nèi)常見的良性腫瘤，多發(fā)于成年人，由異常分泌的激素導(dǎo)致臟器損害，垂體瘤中侵襲性垂體瘤易表現(xiàn)為惡性腫瘤的一些特性。垂體瘤的發(fā)生、發(fā)展與新生血管的形成密切相關(guān)，隨著血管的形成，垂體瘤的侵襲潛能表現(xiàn)出來。而新生血管的形成依賴于血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，龔曉燕等[1]總結(jié)VEGF的作用為促進(jìn)血管內(nèi)皮的增殖以及增加血管的通透性等，且VEGF的表達(dá)水平與腫瘤的微血管密度以及惡性程度成正相關(guān)[2]。所以VEGF能特異的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，對細(xì)胞的有絲分裂起促進(jìn)作用，從而有助于腫瘤的生長，趙達(dá)等[3]的研究稱VEGF對直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。而轉(zhuǎn)錄因子YY1的作用非常廣泛，對在細(xì)胞的分化增殖以及凋亡以及胚胎發(fā)育等方面起作用[4]，除此之外，轉(zhuǎn)錄因子YY1(Yin Yang-1,YY1)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用也被廣泛研究，Zaravinos等[5]對36個公共基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫中多種類型腫瘤的YY1的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)它的基因轉(zhuǎn)錄水平在大部分腫瘤中都顯著增高。本文就血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和轉(zhuǎn)錄因子(YY1)在垂體瘤中的表達(dá)情況做分析，并探討兩者表達(dá)情況對垂體瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料收集2012年1月到2014年1月在我院神經(jīng)外科收治的73例垂體瘤患者，包括男35例，女38例，平均年齡在45.3歲。所有患者行視力、視野檢查，并做頭顱CT、MRI檢查，并對患者根據(jù)Hardy分級分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組[6]。符合下列三項中任意一項者我們認(rèn)為是侵襲性垂體瘤：(1)輔助檢查顯示腫瘤包繞雙側(cè)頸內(nèi)動脈；(2)Hardy-Knosp分級分期：Ⅲ級或以上以及 C-E期；(3)病理證實鞍底硬膜和鄰近骨質(zhì)有瘤細(xì)胞。除侵襲性垂體瘤其余都?xì)w為非侵襲性垂體瘤。

1.2實驗方法本實驗研究采用免疫組化SP法檢測垂體瘤組織中VEGF以及YY1蛋白的表達(dá)。對標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)固定、包埋、切片(4 μm)。用已知陽性表達(dá)的垂體瘤組織切片作陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，所有實驗操作步驟按照SP試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行。購買大鼠垂體瘤細(xì)胞系，做傳代培養(yǎng)，并對細(xì)胞進(jìn)行RNA干擾，提取相應(yīng)蛋白做western blot，檢測相應(yīng)蛋白的表達(dá)情況。細(xì)胞培養(yǎng)及RNA干擾技術(shù)都按照相應(yīng)操作說明嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3結(jié)果判斷對所有組織切片進(jìn)行鏡下觀察，在腫瘤細(xì)胞的胞核、胞漿中可見黃染的顆粒為VEGF陽性染色，在腫瘤細(xì)胞的胞核中可見黃染的顆粒為YY1陽性染色。我們根據(jù)黃染的深淺程度(0分：未見黃染，1分：有輕微黃染，2分：中度黃染，3分：重度黃染)以及黃染細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)(0分：未見黃染，1分：黃染細(xì)胞<25%，2分：黃染細(xì)胞25%～50%，3分：黃染細(xì)胞>50%)綜合評定得分作為判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計數(shù)據(jù)并對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料的組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料則采用卡方檢驗。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1VEGF和YY1蛋白在垂體瘤中的表達(dá)情況免疫組織化學(xué)分析顯示，侵襲性垂體瘤和非侵襲性垂體瘤性別以及年齡相比較沒有顯著性差異(P>0.05)，但是VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　VEGF和YY1蛋白在垂體瘤中的表達(dá)情況

2.2VEGF和YY1蛋白的表達(dá)對大鼠垂體瘤細(xì)胞系GH3進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并分別做VEGF和YY1的RNA干擾，干擾24 h后，提取相應(yīng)蛋白做western blot。對VEGF因子進(jìn)行RNA干擾后，YY1的蛋白表達(dá)量較未干擾前降低(P<0.05)，對YY1因子進(jìn)行RNA干擾后，VEGF的蛋白表達(dá)量較未干擾前降低(P>0.05)。

2.3VEGF和YY1蛋白表達(dá)的相關(guān)性在73例我們選取的垂體瘤組織中，當(dāng)VEGF蛋白陽性表達(dá)(26例)時，YY1蛋白陽性表達(dá)為21例，所以共陽性表達(dá)率為80.77%(21/26)。而當(dāng)VEGF蛋白陰性表達(dá)(47例)時，而同時有YY1蛋白陰性表達(dá)為37例，所以共陰性表達(dá)率為78.72%(37/47)。通過分類變量關(guān)聯(lián)性分析，我們可以認(rèn)為VEGF和YY1蛋白表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2　VEGF和YY1蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3討論

垂體瘤是常見的顱內(nèi)良性腫瘤，雖然是良性腫瘤，它的生物學(xué)行為卻差異很大，僅用輔助影像學(xué)檢查我們很難客觀的評價其生物學(xué)行為。而目前國內(nèi)外的研究主要對垂體瘤相關(guān)的多種細(xì)胞因子進(jìn)行研究，從而對它的生物學(xué)特性有個更好的理解，從而對臨床工作具有更好的指導(dǎo)意義。垂體瘤的發(fā)生發(fā)展與新生血管的形成密切相關(guān)。VEGF能與血管內(nèi)皮細(xì)胞受體相結(jié)合，從而促進(jìn)新生血管的形成，在惡性腫瘤中，VEGF的表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)[7]。而核轉(zhuǎn)錄因子(YY1)是一種對細(xì)胞的增殖分化以及凋亡起重要作用的因子，其通過下調(diào)Notch配體從而對增殖起負(fù)調(diào)控作用[8]。劉光輝等[9]的研究稱其在腫瘤的侵襲遷移過程中發(fā)揮作用，同時段海峰等[10]的研究稱其對垂體瘤的侵襲作用有關(guān)，YY1通過上調(diào)MM-2、MM-9的表達(dá)來實現(xiàn)它的侵襲性作用。所以本實驗通過對垂體瘤患者的VEGF和YY1的表達(dá)情況進(jìn)行探討，以期闡明兩者在垂體瘤中表達(dá)的意義。

VEGF和YY1廣泛表達(dá)與人體各種組織細(xì)胞中，VEGF是已知的促血管生長的重要因子，而YY1參與眾多的生物學(xué)過程。本實驗研究中，73例患者分為侵襲性垂體瘤和非侵襲性垂體瘤，他們在性別以及年齡上相比較沒有顯著性差異(P>0.05)，但是VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這與多項研究認(rèn)為的VEGF與腫瘤的血管形成及發(fā)生發(fā)展過程中起作用相一致。腫瘤的發(fā)生發(fā)展需要血管的支持，在侵襲性垂體瘤中VEGF的表達(dá)高于非侵襲性垂體瘤，這與它的生物學(xué)特性相吻合，說明VEGF的確參與垂體瘤的生長過程。YY1在侵襲性垂體瘤中的高表達(dá)，也與Nigris等[11-12]認(rèn)為的YY1的高表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)相一致。有研究稱YY1的活性抑制后，腫瘤細(xì)胞的凋亡會增加[13]。通過我們的RNA干擾研究分析VEGF和YY1蛋白的在垂體瘤中的表達(dá)，當(dāng)VEGF因子被干擾后，YY1蛋白的表達(dá)降低(P<0.05)，當(dāng)YY1因子被干擾后， VEGF蛋白的表達(dá)降低(P<0.05)。最后我們的研究分析了VEGF和YY1蛋白的表達(dá)的相關(guān)性，在73例我們選取的垂體瘤組織中，當(dāng)VEGF蛋白陽性表達(dá)(26例)時，YY1蛋白陽性表達(dá)為21例，所以陽性表達(dá)率為80.77%(21/26)。而當(dāng)VEGF蛋白陰性表達(dá)(47例)時，而同時有YY1蛋白陰性表達(dá)為37例，所以陽性表達(dá)率為78.72%(37/47)。通過分類變量關(guān)聯(lián)性分析，我們可以認(rèn)為VEGF和YY1蛋白表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05)，目前關(guān)于VEGF和YY1蛋白在垂體瘤中的共表達(dá)問題還未見報道。

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(收稿日期：2015-01-22，修回日期：2015-03-26)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.09.045