• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黑木耳“黑皮病”病原菌鑒定

    2015-03-06 05:55:04劉佳寧馬銀鵬王玉文張介馳張丕奇
    黑龍江科學 2015年1期
    關鍵詞:孢菌菌袋分生孢子

    劉佳寧,馬銀鵬,王玉文,張介馳,張丕奇

    (黑龍江省科學院微生物研究所,哈爾濱 150010)

    木耳(Auricularia auricular judae)別名黑木耳、光木耳,真菌學分類屬擔子菌綱、木耳目、木耳科。其擔子果膠質,圓盤形或耳形,新鮮時軟,干后收縮,色澤黑褐,質地柔軟,味道鮮美,營養(yǎng)豐富,是強身健體的理想食品。它還具有很高的藥用價值,是世界公認的高營養(yǎng)保健食品[1]。我國的栽培規(guī)模逐年擴大,木耳產業(yè)已經(jīng)成為東北部分地區(qū)的主導產業(yè),在農業(yè)總產值中占有較大比重。

    近年來,東北地區(qū)特別是黑龍江東寧、尚志、伊春和吉林蛟河等地區(qū)的栽培面積不斷擴大,部分地域由一年一季生產變?yōu)榇呵飪杉旧a。但由于栽培環(huán)境的惡化,連年重復生產的老耳房,環(huán)境滅菌的次數(shù)和間隔時間達不到要求,造成在高溫、陰暗、潮濕、通風不良、衛(wèi)生條件差的環(huán)境條件下大量生產,極易發(fā)生雜菌侵染性病害,致使木耳減產,嚴重影響收益。

    近期在以上地區(qū)就發(fā)生了一種高危侵染性病害,其發(fā)病特點為病原菌生長迅速,在接菌后7~10d,長覆蓋菌袋表面,整個菌袋表面迅速變?yōu)楹谏?在菌袋與培養(yǎng)基中間形成一層致密的黑色菌絲覆蓋層,并伴有大量黑色的凸起產生。該病具有發(fā)病快、傳播廣的特點。生產第一線種植戶將這種病害稱之為“黑木耳黑皮病”。目前,關于該病害病原菌的分類地位、危害狀況、遺傳分化狀況等情況均未見報道,更缺乏對該病害的防治方法。為防止該病害蔓延,減少農民收益損失,迫切需要對該病害進行深入而系統(tǒng)地研究,夯實基礎,為研發(fā)出適合的綜合防治方法提供依據(jù)。

    從4個木耳主產區(qū)采集多個病原樣品,根據(jù)科赫法則的基本步驟進行了一系列分離培養(yǎng)、病原菌回接等試驗,確定病原菌為一種黑色腐生真菌,并且通過形態(tài)觀察比對,確定了該病原菌的分類地位,利用I TS序列分析,進一步對該菌株進行鑒定及遺傳多樣性分析。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    試驗所用病原菌菌種由病原地采集獲得。對照試驗所用木耳菌種為“黑29”,由黑龍江省科學院微生物研究所提供。I TS序列擴增所用引物為I TS1-F:5′-CTT GGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′和ITS4-B∶

    5′-CAGGAGACTTGTACACGGTCCAG-3′,引物由大連寶生物有限公司合成。試驗用培養(yǎng)基配方為:第一,改良PDA培養(yǎng)基,配方為:水1000m L、馬鈴薯200g、葡萄糖 20g、瓊脂 20g、磷酸二氫鉀 3g、硫酸鎂1.5g。第二,改良P D液體培養(yǎng)基,配方為:水1000m L、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、馬鈴薯200g、葡萄糖20g。第三,三級種配方為:木屑78%、麥麩20%、石膏1%、石灰1%。

    1.2 方法

    1.2.1 病害調查與病原菌菌株獲取

    采集具有典型病害特征的樣品(見圖1)進行分離培養(yǎng),獲取純病原菌菌株。該病典型發(fā)病特征為:初期菌絲潔白生長迅速,7~10d,長滿袋(袋規(guī)格為16cm×33cm)。長滿袋后7~10 d菌袋變?yōu)楹谏?,于菌袋與培養(yǎng)基之間形成大量黑色凸起。大約20~24d左右,在黑色凸起處產生黃色絲狀物質并隨風傳播。菌袋內黑木耳菌絲由于沒有足夠生長空間,造成產量劇減甚至絕產。將分離出的病原菌暫時定名為未知真菌unknownfungi,以便于后期應用分子生物學方法進行數(shù)據(jù)分析使用。4d,用挑取適量菌絲在顯微鏡下觀察照相并測量。用刀片切取真子座型載孢體截面觀察結構和其內部的分生孢子形態(tài)。

    圖1 黑木耳“黑皮病”病害樣品圖Fig.1 Sample of black skin of Auricularia auricular

    1.2.4 菌絲體培養(yǎng)及DNA提取

    將病原菌菌種接種于液體P D培養(yǎng)基中,25℃培養(yǎng)3~5 d,收集菌絲,濾紙吸干后冷凍保存。采用CTAB法提取DNA,DNA提取物于-20℃冰箱貯藏備用。

    1.2.5 I TS序列提取、對比與分析

    對未知真菌unknownfungi進行ITS序列的擴增。引物為PCR反應在Gene Amp PCRSystem 9700 PCR儀上進行擴增,20μL的反應體系內各種成分反應濃度(見表1)。擴增程序為:94℃預變性5min,94℃變性 30s,56 ℃退火 45 s,72 ℃延伸 2min,30 個循環(huán),最后在72℃延伸10min,每次反應均設置一個空白對照,以去離子水代替模板,以排除系統(tǒng)誤差。PCR擴增產物用1.0%的瓊脂糖(含0.5μg/m LEB)電泳,在U VP凝膠成像系統(tǒng)下成像保存。測序由上海生物工程有限公司完成。

    試驗選用樣本正反向測序。用BioEdit的ClustalW分別進行序列對位排列分析,對有N值和計算機誤讀的個別剪輯進行人工校對。對獲得的序列進行序列分析。將測得的I TS序列在Gene Bank進行BLAST,從GeneBank核酸序列數(shù)據(jù)庫進行比對,獲得相似率較高、親源關系較近的物種,研究其中的系統(tǒng)發(fā)育關系。采用ME G A4.0系統(tǒng)發(fā)育分析軟件中的UPGMA法構建系統(tǒng)進化樹[2,3]。

    1.2.2 回接試驗復制病害典型特征

    根據(jù)科赫式法則進行回接試驗,將分離出的真菌分別與黑木耳菌進行回接試驗,定期觀察,記錄發(fā)病情況。同期將病原菌unknownfungi和黑木耳“黑29”轉入養(yǎng)基配方、體積、重量、接菌時間、培養(yǎng)時間及培養(yǎng)條件等完全相同的菌袋中,并保留空白菌袋做對照。經(jīng)過2w的培養(yǎng)以后,載有病原菌unknownfungi菌袋出現(xiàn)了與病原地所采集樣品同樣的發(fā)病特征,證明病原菌unknownfungi即為黑木耳“黑皮病”的致病菌。

    1.2.3 病原菌宏觀形態(tài)鑒定

    1.2.3.1 病原菌菌落形態(tài)

    用直徑為5mm的打孔器沿菌落邊緣,打取菌齡一致的菌餅,接種于改良PDA培養(yǎng)基斜面中央,然后于25℃恒溫箱中培養(yǎng)。從第3 d開始,每隔24 h測量一次菌落直徑,直到菌絲最前端接近平板培養(yǎng)基邊緣為止。

    1.2.3.2 菌絲、分生孢子及真子座型載孢體形態(tài)

    將病原菌菌株轉接至改良PDA培養(yǎng)基上,培養(yǎng)

    表1 ITS序列擴增反應體系表Tab.1 System table of ITS sequence amplified reaction

    2 結果與分析

    2.1 形態(tài)學鑒定

    2.1.1 菌落形態(tài)

    斜面(見圖2)內菌絲萌發(fā)時為白色,菌落具有發(fā)達的菌絲體。在24℃的培養(yǎng)條件下,菌絲長勢旺盛,在固體培養(yǎng)基中,菌絲向培養(yǎng)基內深入,在距離表面約1mm厚的區(qū)域內形成菌絲層。隨著培養(yǎng)時間的延長,菌絲向氣相延展,并開始變色,菌絲大量聚集的區(qū)域變?yōu)樯詈谏?,斜面末端呈黑灰色,后期全部變?yōu)楹谏T摼谛泵嬷兄挥^察到菌絲,未能觀察到其他結構。

    圖2 菌落形態(tài)圖Fig.2 Aspectgraph of colony

    2.1.2 菌絲、分生孢子形態(tài)及真子座型載孢體

    2.1.2.1 菌絲(見圖3-A)

    菌絲體初期白色,逐漸變?yōu)楹稚?后期逐漸變?yōu)楹谏?,呈擴散狀生長,有氣生菌絲,接種后6d長滿直徑9 cm平板,生長速度平均為0.75c m/d,菌絲體寬度(2.4)3~7(8.5)μm,有隔,光滑,菌絲體中段有分叉,形成新的菌絲體。

    2.1.2.2 真子座型載孢體(見圖3-B、C)

    真子座型載孢體,黑色,呈球形或近球形,大小為(89)105~260(285)μm×(89)105~260(285)μm,有明顯的外壁,外壁厚度(9)11~17(18.5)μm。分生孢子通過分生孢子梗連接于載孢體內壁,頂端無凸起或短小凸起,有頂孔,用于釋放分生孢子。

    2.1.2.3 分生孢子(見圖 3-E、F、G、H)

    分生孢子呈橢圓形或亞圓形,表面光滑,兩端鈍圓,初期無隔,無色,大小為(10.7)14~18(22.7)μm×(7.5)8.2~11(13.7)μm。后期于孢子中間產生一個隔膜,形成二孢結構,且孢子變?yōu)楹稚蚝谏7稚咦俞尫乓院?,形成分生孢子束,分生孢子束肉眼可見,淺黃色或黃色,直徑0.4~1.0mm。

    圖3 病原菌結構顯微觀察圖Fig.3 Microscopic graph of pathogen

    該菌形態(tài)特征與已知品種可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae基本一致,初步確定該菌株為可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae。

    2.2 序列分析

    2.2.1 I TS擴增結果及分析

    I TS-PCR產物電泳結果如圖4所示,M ar k er為D L2000,1號泳道為病原菌,2號泳道為去離子水對照。供試菌株的I TS產物大小在500~750 b p,測序結果顯示,供試菌株I TS序列為533 b p(見圖5)。

    圖4 ITS產物擴增電泳圖Fig.4 Electrophoretogram of ITS products amplified

    圖5 病原菌ITS序列圖Fig.5Sequence diagram of ITS pathogen

    2.2.2 I TS序列系統(tǒng)發(fā)育分析

    用已經(jīng)獲得的病原菌ITS序列在GenBank中比對,與相似度最高的11個不同品種的已知序列建立進化樹,各品種序列名稱及GenBank號見表2。

    表2 毛雙孢屬Lasiodiplodia(Botryosphaeria為有性階段)Tab.2 Lasiodiplodia(Botryosphaeria in perfect stage)11個種的ITS序列名稱及號碼表

    由圖6可知,各分枝內菌株間的最大遺傳距離在0.003 892,最小為0.0000,說明各分枝內菌株的ITS 差異很小,11 個品種具有極強的相似性,但又略有區(qū)別,證明所有品種來源于同一個屬,即毛雙孢屬Lasiodiplodia 。其中病原菌(unknown fungi)與已知種Lasiodiplodia theobromae,GenBank 編號EU918707 的序列遺傳距離差異為0.0000,經(jīng)比對其相似度為99.999 %,結合宏觀經(jīng)典分類學數(shù)據(jù)進一步確定該病原菌為可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae。其生物學分類為子囊菌綱Ascomycetes、假球殼目Pleosporales、葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae、毛雙孢屬Lasiodiplodia、可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae。

    圖6 病原菌(unknown fungi)菌株與毛雙孢屬Lasiodiplodia 11個種的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.6 Phylogenetic tree of pathogen strains and 11 species of Lasiodiplodia

    3 結論

    黑木耳“黑皮病”的病原菌,經(jīng)過分離純化、形態(tài)鑒定和分子生物學鑒定后,確定為可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae。

    4 討論

    通過與GenBank中的序列比對,在已公布序列的菌種中,本文中的病原菌菌株與可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae遺傳距離最近,且相似度最高。結合宏觀形態(tài)和分子生物學分析結果可以確定該病原菌為可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae。本文中可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae,是該菌的無性世代,該菌還有異名Botryosphaeria theobromae.和Diplodia gossypina等。該菌的有性型屬于子囊菌葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae屬,在本次試驗中未能觀察到。

    目前,國內外鮮有可可毛色二孢菌作為黑木耳病害的研究報道,尤其在我國東北黑木耳主產區(qū)該病害出現(xiàn)的時間不長,但是污染規(guī)模和造成的損失有逐年遞增的趨勢。隨著研究的不斷深入,我們也發(fā)現(xiàn)該病害如果在黑木耳菌絲成活以后侵染黑木耳菌袋,則不會造成黑木耳絕產。通過拮抗實驗發(fā)現(xiàn)病原菌與黑木耳菌絲之間有明顯的分割線,說明黑木耳菌絲體對該病有一定的抵抗能力,可與其共生,在黑木耳子實體形成期也可獲得部分黑木耳子實體,但是整體產量將大幅下降。由于該病原菌與黑木耳菌絲生長、生殖所必須的營養(yǎng)、溫度、濕度、pH、水分等基礎條件有巨大的交集,因此對可可毛色二孢菌病害的防治造成較大困難,目前只能通過嚴格控制其進入菌袋,隔絕其接觸菌袋內的培養(yǎng)基來防止這類病害的發(fā)生。目前缺乏病原菌侵入菌袋后的治療方法,希望通過后續(xù)研究能夠找到應對該病害的合理措施。

    [1] 李慧蓉.白腐真菌生物學和生物技術[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005:76-88.

    [2] 劉佳寧,宋瑞清.扎龍濕地水生真菌多樣性研究[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學,2008.

    [3] 宋瑞清,余江勇,冀瑞卿.四個姬松茸菌株rDNA ITS序列比較[J].林業(yè)科技,2007,(03):23-24.

    猜你喜歡
    孢菌菌袋分生孢子
    油松枯梢病菌孢子萌發(fā)率測定方法探索
    河南省食用菌產業(yè)科技特派員服務團到宜陽縣開展科技服務
    鐮孢菌與大豆根腐病研究進展
    湖北省蔬菜根際土壤中的鐮孢菌分布特征
    四川省套作玉米莖腐病致病鐮孢菌的分離與鑒定
    油松枯梢病菌分生孢子器誘導方法探索
    東北林業(yè)大學成功研發(fā)“袋頂出耳技術”
    農家書屋(2018年6期)2018-07-03 06:16:12
    固定菌袋插桿
    科技資訊(2016年9期)2016-05-14 00:55:35
    尖鐮孢菌細胞色素P45055A1與NO相互作用的熒光光譜法研究
    香梨樹腐爛病菌分生孢子獲取方法及萌發(fā)條件的研究
    搡老熟女国产l中国老女人| 欧美高清成人免费视频www| 在线国产一区二区在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 91久久精品国产一区二区成人 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 窝窝影院91人妻| 欧美黄色淫秽网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美中文日本在线观看视频| www日本在线高清视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产亚洲精品久久久com| 国产高清videossex| 少妇高潮的动态图| 亚洲片人在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产激情欧美一区二区| 精品一区二区三区人妻视频| 国产一区二区在线av高清观看| 青草久久国产| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 全区人妻精品视频| 五月玫瑰六月丁香| 女警被强在线播放| 91在线观看av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 69人妻影院| 成年免费大片在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲乱码一区二区免费版| 一个人免费在线观看的高清视频| 无人区码免费观看不卡| 欧美日韩国产亚洲二区| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美一区二区亚洲| 免费看日本二区| 亚洲人成网站高清观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一区福利在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲人成网站高清观看| 久久九九热精品免费| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| av在线天堂中文字幕| 欧美在线一区亚洲| 亚洲五月婷婷丁香| 中文字幕久久专区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美一级毛片孕妇| 欧美区成人在线视频| 国产免费av片在线观看野外av| 日本 欧美在线| 亚洲不卡免费看| 国产毛片a区久久久久| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 观看美女的网站| 国产精品久久久久久久久免 | 亚洲成av人片在线播放无| 嫩草影视91久久| 欧美一区二区国产精品久久精品| 很黄的视频免费| 少妇的逼水好多| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 淫秽高清视频在线观看| 少妇的丰满在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 中亚洲国语对白在线视频| 日本在线视频免费播放| 国产99白浆流出| 国产高清视频在线观看网站| 欧美色视频一区免费| 精品国内亚洲2022精品成人| 91久久精品电影网| 欧美一区二区国产精品久久精品| 免费在线观看亚洲国产| 日韩精品中文字幕看吧| 精品乱码久久久久久99久播| 国产淫片久久久久久久久 | 国内精品一区二区在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 女同久久另类99精品国产91| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲人成电影免费在线| 国产探花极品一区二区| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| www.熟女人妻精品国产| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜日韩欧美国产| 熟女电影av网| 日韩欧美精品v在线| 少妇的逼好多水| 日韩有码中文字幕| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 丁香欧美五月| 亚洲精品影视一区二区三区av| 日韩欧美国产在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品久久久久久久久免 | 手机成人av网站| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日韩欧美精品免费久久 | 动漫黄色视频在线观看| 久久久久久大精品| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲精品色激情综合| 欧美色视频一区免费| 中文字幕高清在线视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 脱女人内裤的视频| 欧美bdsm另类| 99riav亚洲国产免费| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美日本亚洲视频在线播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产成人a区在线观看| 好男人电影高清在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产v大片淫在线免费观看| 国产毛片a区久久久久| 香蕉av资源在线| 日韩亚洲欧美综合| 成人国产综合亚洲| 国产一区二区激情短视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 岛国在线观看网站| 久久香蕉国产精品| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产精品合色在线| 岛国视频午夜一区免费看| 午夜激情欧美在线| 成人国产综合亚洲| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | svipshipincom国产片| 精品一区二区三区人妻视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久精品人妻少妇| 色精品久久人妻99蜜桃| 91在线观看av| 亚洲av免费在线观看| 女警被强在线播放| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国内精品久久久久久久电影| 欧美区成人在线视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美3d第一页| 亚洲专区国产一区二区| 99国产综合亚洲精品| www.熟女人妻精品国产| 国产野战对白在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 中文字幕久久专区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 精品一区二区三区视频在线 | 久久精品91无色码中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频| 色综合婷婷激情| 亚洲成人久久爱视频| 午夜福利视频1000在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 免费在线观看日本一区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲国产色片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 夜夜爽天天搞| 亚洲第一电影网av| 在线观看66精品国产| 欧美bdsm另类| 久久6这里有精品| 狂野欧美激情性xxxx| 女同久久另类99精品国产91| 一个人免费在线观看电影| 午夜久久久久精精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美乱妇无乱码| netflix在线观看网站| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 亚洲成av人片在线播放无| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久99久视频精品免费| 搞女人的毛片| 国产精品久久久久久精品电影| 国产亚洲精品久久久com| 一级毛片高清免费大全| 久久亚洲精品不卡| 久99久视频精品免费| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产精品综合久久久久久久免费| 日本a在线网址| 国产高清videossex| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲avbb在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 岛国视频午夜一区免费看| 免费看十八禁软件| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 午夜福利在线在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产色爽女视频免费观看| 中文字幕av成人在线电影| а√天堂www在线а√下载| 最近在线观看免费完整版| 午夜福利视频1000在线观看| 久久久久久久久大av| 九色成人免费人妻av| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本三级黄在线观看| 欧美最新免费一区二区三区 | 婷婷精品国产亚洲av| 一进一出好大好爽视频| 高清毛片免费观看视频网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 十八禁网站免费在线| 国产成人aa在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲精品在线观看二区| 精品免费久久久久久久清纯| 人妻久久中文字幕网| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲av美国av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 免费看十八禁软件| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 麻豆国产97在线/欧美| 高清在线国产一区| av在线蜜桃| 免费高清视频大片| 一区二区三区激情视频| 久久这里只有精品中国| 舔av片在线| 51国产日韩欧美| 免费在线观看亚洲国产| 香蕉久久夜色| 国产主播在线观看一区二区| 久9热在线精品视频| netflix在线观看网站| av国产免费在线观看| 十八禁人妻一区二区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 99国产精品一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 日本a在线网址| av黄色大香蕉| 欧美激情久久久久久爽电影| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 色老头精品视频在线观看| 久久人人精品亚洲av| 亚洲七黄色美女视频| 99热这里只有精品一区| 日本成人三级电影网站| 国产不卡一卡二| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲成av人片在线播放无| 热99在线观看视频| 国产私拍福利视频在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 99国产精品一区二区三区| eeuss影院久久| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品电影一区二区三区| 男人舔奶头视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 欧美乱妇无乱码| 精品久久久久久久久久免费视频| 我的老师免费观看完整版| 国产欧美日韩一区二区三| 久久亚洲真实| 色视频www国产| 成人国产综合亚洲| 在线视频色国产色| 久久久久久国产a免费观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 一级毛片高清免费大全| 亚洲欧美日韩无卡精品| 69av精品久久久久久| 色尼玛亚洲综合影院| 国产亚洲精品久久久久久毛片| or卡值多少钱| 老司机福利观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 中文字幕av成人在线电影| 叶爱在线成人免费视频播放| 老司机福利观看| 亚洲av二区三区四区| 岛国视频午夜一区免费看| 午夜激情欧美在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美又色又爽又黄视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 狂野欧美激情性xxxx| 小说图片视频综合网站| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜福利在线观看吧| 看免费av毛片| 国产乱人视频| 久久6这里有精品| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 免费无遮挡裸体视频| 天堂√8在线中文| 女警被强在线播放| 国产伦在线观看视频一区| 少妇丰满av| 亚洲最大成人手机在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久久久久久大av| 国产真实乱freesex| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费电影在线观看免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 熟女电影av网| 丰满人妻一区二区三区视频av | 夜夜夜夜夜久久久久| 日本黄大片高清| 丰满乱子伦码专区| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产一级毛片七仙女欲春2| 露出奶头的视频| 国产69精品久久久久777片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 黄片小视频在线播放| 午夜激情欧美在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜a级毛片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美日本视频| 亚洲美女视频黄频| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲av五月六月丁香网| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 午夜免费观看网址| 亚洲人与动物交配视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 精品日产1卡2卡| 精品不卡国产一区二区三区| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲七黄色美女视频| 国产av一区在线观看免费| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美色视频一区免费| 一级黄色大片毛片| 变态另类丝袜制服| 婷婷丁香在线五月| 国产精品影院久久| 精品欧美国产一区二区三| 一级黄色大片毛片| 51午夜福利影视在线观看| 脱女人内裤的视频| 日韩欧美精品v在线| 免费看十八禁软件| 久久久久久久久中文| 亚洲美女视频黄频| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久99热这里只有精品18| av片东京热男人的天堂| 动漫黄色视频在线观看| 嫩草影院精品99| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产男靠女视频免费网站| 男插女下体视频免费在线播放| 国产伦精品一区二区三区四那| 精品国产三级普通话版| av片东京热男人的天堂| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 午夜免费观看网址| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| 两个人视频免费观看高清| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产主播在线观看一区二区| 国产日本99.免费观看| 在线观看66精品国产| 免费观看人在逋| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久久大av| 欧美黄色淫秽网站| 日本黄大片高清| а√天堂www在线а√下载| 成人一区二区视频在线观看| 黄色女人牲交| 亚洲人成伊人成综合网2020| 波野结衣二区三区在线 | 一本久久中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费看a级黄色片| 在线观看午夜福利视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 香蕉av资源在线| 国产日本99.免费观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 我要搜黄色片| 国产综合懂色| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲人成电影免费在线| 熟女电影av网| 欧美在线一区亚洲| 国产亚洲精品av在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品国产亚洲在线| 女警被强在线播放| 一级a爱片免费观看的视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久国产成人免费| 久久精品人妻少妇| 久久久国产成人精品二区| 一区福利在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 在线播放无遮挡| 一夜夜www| 黄色成人免费大全| 久久久国产成人免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 可以在线观看的亚洲视频| 少妇的丰满在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| xxxwww97欧美| 亚洲片人在线观看| 一级毛片女人18水好多| 免费看美女性在线毛片视频| 免费av不卡在线播放| 一本久久中文字幕| 波多野结衣高清无吗| 婷婷丁香在线五月| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| netflix在线观看网站| 69人妻影院| 小说图片视频综合网站| bbb黄色大片| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 首页视频小说图片口味搜索| 香蕉av资源在线| 成人一区二区视频在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 婷婷精品国产亚洲av| 精品欧美国产一区二区三| av天堂在线播放| 精品日产1卡2卡| 美女黄网站色视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 国产免费一级a男人的天堂| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产高清激情床上av| 欧美一级a爱片免费观看看| 90打野战视频偷拍视频| 免费无遮挡裸体视频| 精品欧美国产一区二区三| 最好的美女福利视频网| 黄色丝袜av网址大全| 久久香蕉国产精品| 国产毛片a区久久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 日本与韩国留学比较| 国产成人啪精品午夜网站| 长腿黑丝高跟| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 男女那种视频在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲av五月六月丁香网| 成人性生交大片免费视频hd| 欧美av亚洲av综合av国产av| 最新美女视频免费是黄的| 成人特级av手机在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美大码av| 露出奶头的视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 一进一出抽搐动态| 色噜噜av男人的天堂激情| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品精品国产色婷婷| 在线观看66精品国产| 国产成人av教育| 亚洲片人在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| av视频在线观看入口| 色哟哟哟哟哟哟| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久久久久久久大av| 真人做人爱边吃奶动态| 一个人观看的视频www高清免费观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 99久久综合精品五月天人人| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产真实乱freesex| www日本黄色视频网| 亚洲av成人精品一区久久| 免费观看人在逋| 成年女人看的毛片在线观看| 国产97色在线日韩免费| 色吧在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲美女黄片视频| 国产成人av激情在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| www国产在线视频色| 在线免费观看的www视频| 欧美+日韩+精品| 久久性视频一级片| 久久人人精品亚洲av| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美区成人在线视频| 成年免费大片在线观看| 黄片小视频在线播放| 又黄又粗又硬又大视频| 99在线视频只有这里精品首页| 久久精品国产自在天天线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产高清有码在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲国产欧美人成| 日韩国内少妇激情av| 午夜精品久久久久久毛片777| 最好的美女福利视频网| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 一个人免费在线观看电影| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲人成网站在线播| 久久精品综合一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 美女高潮的动态| 亚洲av成人av| 国产黄片美女视频| 免费在线观看成人毛片| 免费电影在线观看免费观看| 日韩国内少妇激情av| 欧美日韩一级在线毛片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 神马国产精品三级电影在线观看| 国产综合懂色| 69人妻影院| 好男人电影高清在线观看| 级片在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美一区二区精品小视频在线| svipshipincom国产片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美日韩黄片免| 99热这里只有精品一区| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲电影在线观看av| 亚洲av不卡在线观看| 丰满乱子伦码专区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成年女人毛片免费观看观看9| 变态另类丝袜制服| 小说图片视频综合网站| 狂野欧美激情性xxxx| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 69人妻影院| 91字幕亚洲| 欧美大码av| 成人午夜高清在线视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日本一本二区三区精品| 日韩av在线大香蕉| 最好的美女福利视频网| 99精品在免费线老司机午夜| 夜夜爽天天搞| 欧美日本亚洲视频在线播放| 两个人看的免费小视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 网址你懂的国产日韩在线| 国产美女午夜福利| 亚洲,欧美精品.| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产亚洲av嫩草精品影院|