血清Ang／Tie2、VEGF在糖尿病腎病病情評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值

霍亞杰，溫玉潔，劉陶文，夏含笑

血清Ang／Tie2、VEGF在糖尿病腎病病情評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值

霍亞杰1，溫玉潔2，劉陶文2，夏含笑2

摘要目的 觀察血清中血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）及其受體Tie2與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在糖尿病腎病（DN）病情進(jìn)展中的水平變化規(guī)律，探討平衡其比率在DN中的重要性。方法 選取2型糖尿病患者60例，依據(jù)尿白蛋白排泄率（UAER）分為3組：正常白蛋白尿患者20例（DM1組）、微量白蛋白尿患者22例（DM2組）、大量白蛋白尿患者18例（DM3組），另設(shè)健康對(duì)照患者22例（NC組）。采用ELISA法檢測(cè)受試者血清Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF水平，同時(shí)檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo)。結(jié)果 ①DM1組血清VEGF、Ang-2水平高于NC組，DM2組、DM3組進(jìn)一步升高，4組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。②DM1組血清Ang-1水平高于NC組，DM2組、DM3組逐漸下降，4組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③Tie2水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④UAER與Ang-2、VEGF呈正相關(guān)性（r＝0.470、0.404，P＜0.01），與Ang-1呈負(fù)相關(guān)性（r＝－0.310，P＜0.05）；Ang-2 與VEGF、Tie2呈正相關(guān)性（r＝0.450、0.725，P＜0.01）；Ang-1與Tie2呈正相關(guān)性（r＝0.571，P＜0.01），與Ang-2、VEGF呈負(fù)相關(guān)性（r＝－0.497、－0.396，P＜0.01，P＜0.05）。⑤以UAER為應(yīng)變量行多元線性逐步回歸分析顯示：Ang-1、Ang-2、VEGF、肌酐進(jìn)入回歸方程，是影響UAER的獨(dú)立相關(guān)因子。結(jié)論 血清中Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF水平與DN密切相關(guān)，可能參與了DN的發(fā)生發(fā)展，并影響DN病情的進(jìn)程。檢測(cè)血清Ang／Tie2及VEGF可作為評(píng)估DN病情的重要指標(biāo)。

關(guān)鍵詞糖尿病腎病；血管生成素；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；Tie2；尿白蛋白排泄率

2014－12－13接收

2廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院內(nèi)分泌科，桂林 541002

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是導(dǎo)致終末期腎病的一個(gè)首要原因，累積發(fā)病率為25%～40%［1］，由于糖尿病患病率增加及生存期的延長(zhǎng)，DN人數(shù)逐年上升。隨著病情進(jìn)展，患者最終要靠血液透析或腎移植來(lái)維持生命。目前臨床上常采用尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate， UAER）來(lái)診斷評(píng)估DN，通過(guò)控制血糖、血壓，改善血脂及腎臟血流動(dòng)力學(xué)延緩DN的進(jìn)程。事實(shí)上在微量白蛋白尿出現(xiàn)之前DN就存在血流動(dòng)力學(xué)異常和代謝紊亂，故需尋找一種新的、特異的DN早期診斷標(biāo)志物，以便進(jìn)行早期干預(yù)治療。研究［2］表明，血清中血管生成素-1（angiopoietin-1，Ang-1）、血管生成素-2（angiopoietin-2，Ang-2）及其受體Tie2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelia growth factor，VEGF）在DN進(jìn)展中調(diào)節(jié)血管新生方面起重要作用，但聯(lián)合檢測(cè)4者及評(píng)估其在防治DN中的潛在作用尚無(wú)明確報(bào)道。該研究通過(guò)測(cè)定血清中Ang-1、Ang-2、Tie2及VEGF在DN患者不同階段的水平變化規(guī)律，探討平衡的比率對(duì)DN病情評(píng)估的重要性，從而為早期DN的防治提供新思路。

1 材料與方法

1．1 病例資料 選取2013年8月～2014年3月在廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院住院的2型糖尿病患者60例和來(lái)我院體檢中心體檢的健康成年者22例。受試者均符合2010年ADA糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡33～79（56.94±11.14）歲，病程1～15年。根據(jù)UAER分為3組：正常白蛋白尿患者20例作為DM1組：UAER＜20 μg／min，男11例，女9例，年齡39～73（54.35±8.85）歲；微量白蛋白尿患者22例作為DM2組：UAER為20～200 μg／min，男12例，女10例，年齡44～79（62.45±9.54）歲；大量白蛋白尿患者18例作為DM3組：UAER＞200 μg／min，男10例，女8例，年齡38～78（63.00±12.06）歲；健康對(duì)照者22例作為NC組：男11例，女11例，年齡33～62（57.80±7.31）歲。受試者排除標(biāo)準(zhǔn)：1型糖尿病，高血糖高滲狀態(tài)，乳酸性酸中毒，高血壓，心、肝、腎功能不全者，感染性疾病，惡性腫瘤，自身免疫性疾病，極度衰弱者及近期使用影響腎功能的藥物等。實(shí)驗(yàn)得到倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，所有受試者簽署知情同意書。

1．2 方法

1．2．1 血清收集 受試者均隔夜禁食8～12 h，于清晨空腹采取肘靜脈血約5 ml，離心（2 000 r／min，10 min）后分離血清，取1 ml血清至1.5 mlEP管中，

置于－70℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．2 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 血清中Ang-1、Ang-2、Tie2 及VEGF水平均采用ELISA法測(cè)定（試劑盒購(gòu)自武漢華美生物工程有限公司）。按說(shuō)明書操作，測(cè)吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中Ang-1、Ang-2、Tie2 及VEGF濃度?？崭寡牵╢asting plasma glucose，F(xiàn)PG）、肌酐（creatinine，Cr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triacylglycerol，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）均采用自動(dòng)血生化分析儀檢測(cè)。糖化血紅蛋白（glycated hemoglobin，HbA1C）采用離子交換高效液相色譜法測(cè)定，24 h尿微量白蛋白定量采用比濁法測(cè)定。體重指數(shù)（body mass index，BMI）＝體重／身高2。UAER＝24 h尿微量白蛋白濃度×24 h尿量／（24×60）。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17．0軟件進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩變量間關(guān)系采用Pearson直線相關(guān)分析，影響UAER的多因素分析采用多元線性逐步回歸分析。

2 結(jié)果

2．1 DM1組、DM2組、DM3組及NC組觀察指標(biāo)比較 所有觀察指標(biāo)經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布。4組受試者BMI、HbA1C、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Tie2水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4組受試者BUN、Cr、血清尿酸（serum uric acid，sUA）、UAER、Ang-2、 VEGF水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中，DM1組血清VEGF、Ang-2、UAER的水平高于NC組，DM2組、DM3組進(jìn)一步升高，4組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。DM1組血清Ang-1水平高于NC組（P＜0.05），DM2組、DM3組逐漸下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Tie2受體水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1　各組觀察指標(biāo)比較（±s）

表1　各組觀察指標(biāo)比較（±s）

與NC組比較：*P＜0．05；與DM1組比較：△P＜0．05；與DM2組比較：＃P＜0．05

項(xiàng)目　NC組（n＝22）　DM1組（n＝20）　DM2組（n＝22）　DM3組（n＝18）　F值　P值BMI（kg／m2）　24．65±2．80　24．25±3．40　24．57±2．98　23．70±2．32　1．198　0．316 BUN（mmol／L）　4．87±1．24　5．38±1．71*　6．36±2．00*△　8．68±4．30*△?！?．230　　＜0．001 Cr（μmol／L）　69．74±18．06　73．00±19．06*　77．73±20．11*△　137．28±69．12*△?！?3．880　　＜0．001 sUA（μmol／L）　308．45±89．83　300．35±64．62*　310．55±77．86*△　388．05±88．05*△?！?．831　0．004 HbA1C（%）　4．36±1．78　9．16±2．79　9．98±2．04　8．98±1．86　1．150　0．324 UAER（μg／min）　　－　8．88±5．54*　98．37±48．28*△　517．22±313．47*△＃62．020　?。?．001 TC（mmol／L）　5．17±1．06　5．12±1．18　5．00±0．87　5．37±0．98　0．463　0．709 TG（mmol／L）　1．89±1．07　2．40±0．92　2．47±2．25　3．02±1．34　2．007　0．120 HDL-C（mmol／L）　1．43±0．52　1．18±0．32　1．28±0．32　1．11±0．216　3．160　0．130 LDL-C（mmol／L）　3．44±0．86　3．39±0．80　3．20±0．70　3．57±0．88　0．758　0．521 Ang-1（ng／L）　16．88±14．74　22．90±16．76*　20．46±15．21　10．56±5．65　2．640　0．060 Ang-2（ng／L）　2．03±1．56　2．77±2．17*　2．99±1．80*△　3．35±2．60*△＃　1．245　?。?．001 Tie2（ng／L）　1．49±0．89　1．59±1．13　6．92±1．08　2．04±0．85　2．830　0．094 VEGF（ng／L）　31．08±24．32　66．36±31．22*　73．56±53．71*△　89．08±69．67*△＃7．066　0．020

2．2 各指標(biāo)間的相關(guān)性分析 UAER與Cr、sUA、Ang-2、VEGF呈正相關(guān)性（r＝0.587、0.361、0.470、0.404，P＜0.01），與BUN呈正相關(guān)性，但相關(guān)性較弱（r＝0.280，P＜0.05），與Ang-1呈負(fù)相關(guān)性（r＝－0.310，P＜0.05）。Ang-2與Cr、VEGF、Tie2呈正相關(guān)性（r＝0.478、0.450、0.725，P＜0.01）。Ang-1 與Tie2呈正相關(guān)性（r＝0.571，P＜0.01），與Ang-2、VEGF呈負(fù)相關(guān)性（r＝－0.497、－0.396，P＜0.01，P＜0.05）。

2．3 UAER與相關(guān)指標(biāo)的多元線性逐步回歸分析

為排除外混雜因素影響，以UAER為應(yīng)變量，BMI、BUN、Cr、HbA1C、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF為自變量，行多元線性逐步回歸分析顯示Cr、Ang-1、Ang-2、VEGF進(jìn)入回歸方程，是影響UAER的獨(dú)立相關(guān)因子。見(jiàn)表2。

3 討論

DN作為糖尿病微血管并發(fā)癥之一，突出特點(diǎn)為血管通透性和血管生成增加，Ang-1、Ang-2、Tie2 及VEGF在DN的血管新生和重塑方面發(fā)揮重要作用［3－4］。

在DN中，VEGF隨著蛋白尿的程度及血管內(nèi)皮功能的失常而增加［5］。Cha et al［5］研究顯示VEGF 在DN早期上調(diào)，可作為疾病初期病情進(jìn)展的標(biāo)志，后期VEGF表達(dá)下降。本研究對(duì)不同階段DN患者血清中VEGF水平進(jìn)行比較，表明VEGF隨蛋白尿程度增加而升高；其中DM1組高于NC組，DM3組雖有下降趨勢(shì)，但仍高于DM2和DM1組，與相關(guān)文獻(xiàn)［4，6］報(bào)道一致。這種隨DN進(jìn)展逐漸增高的趨勢(shì)，可能與糖代謝紊亂所致血管內(nèi)皮損傷后機(jī)體自我修復(fù)相關(guān)［7］。提示局部VEGF水平升高或降低均可導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生。既往有研究［4］顯示DN患者血清中VEGF及Ang-2水平與HbA1c相關(guān)，隨UAER增加而升高，本研究表明HbA1c在DM3組中是降低的，可能與患者長(zhǎng)期使用控制血糖藥物有關(guān)。相關(guān)分析顯示DN患者UAER與VEGF呈顯著正相關(guān)性，多元線性逐步回歸分析顯示VEGF升高與UAER變化一致，為影響DN的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。提示血清中VEGF可能成為DN的預(yù)測(cè)因素和潛在危險(xiǎn)因子。

表2　UAER水平與相關(guān)指標(biāo)的多元線性逐步回歸分析

Ang-1、Ang-2參與了DN血管生成和重塑過(guò)程，Tie-2為其共同受體［2］。研究［8］表明Ang-1在第4、8周糖尿病大鼠腎組織中表達(dá)顯著上調(diào)，從第12周開(kāi)始下降，第24周顯著下降，表明Ang-1水平在高血糖情況下有所消耗。Rizkalla et al［9］發(fā)現(xiàn)在糖尿病大鼠早期階段，Ang-1、Tie2水平上調(diào)，隨病情進(jìn)展，表達(dá)逐漸下調(diào)。本研究表明DM1組血清Ang-1、Tie2水平高于NC組，DM2組、DM3組逐漸下降，且UAER與血清Ang-1呈負(fù)相關(guān)性，多元線性逐步回歸分析顯示Ang-1與DN病情進(jìn)展相關(guān)。研究［10］表明Ang-1可減少蛋白尿，降低腎小球系膜的擴(kuò)張、基底膜厚度，抑制炎癥因子在腎臟中的表達(dá)。推測(cè)Ang-1具有保護(hù)DN微血管內(nèi)皮細(xì)胞，延緩和逆轉(zhuǎn)DN微血管病變作用。

研究［11］顯示在早期腎小球疾病中Ang-2水平增加。Kümpers et al［12］在腎血管內(nèi)皮損傷的患者中發(fā)現(xiàn)Ang-2水平比健康者高6倍，在病情有所緩解的情況下Ang-2水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)Ang-2可能來(lái)源于損傷的腎血管內(nèi)皮。本研究結(jié)果示DM1組血清Ang-2的水平高于NC組，DM2組、DM3組進(jìn)一步升高，隨著蛋白尿程度增加而升高；UAER 與Ang-2呈顯著正相關(guān)性，多元線性逐步回歸分析顯示Ang-2升高與Tie2、UAER變化一致，為影響DN的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一；與研究［2］結(jié)果一致。Ang-2參與了DN的形成發(fā)展，可作為DN早期診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)，持續(xù)表達(dá)預(yù)示著腎臟病變存在進(jìn)行性發(fā)展的潛在危險(xiǎn)［4］。

本研究表明血清中Ang-1、Ang2、Tie2與VEGF 4者相互作用，共同參與了DN的發(fā)生發(fā)展。多元線性回歸分析表明血清中VEGF、Ang-2和Ang-1與UAER密切相關(guān)，是DN病情進(jìn)展的獨(dú)立相關(guān)因子，可在一定程度上反應(yīng)DN的嚴(yán)重程度，影響DN的進(jìn)程。DM3組血清Ang-1、Tie2水平下降，而Ang-2、VEGF水平升高，提示Ang／Tie2、VEGF比值在DN患者中表達(dá)失衡。相關(guān)研究［13］表明上調(diào)VEGF與Ang-2可增加血管通透性，促不穩(wěn)定血管出芽，Ang-1可拮抗此現(xiàn)象使血管成熟、維持血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。推測(cè)降低DN患者Ang-2與VEGF水平，將減少不良血管生成，使血管滲透脆性降低，提升Ang-1促使血管成熟穩(wěn)定，由此平衡血清Ang／Tie2、VEGF的表達(dá)水平，使其在DN中發(fā)揮最大程度的保護(hù)腎臟作用。

綜上所述，血清Ang／Tie2、VEGF在DN發(fā)病機(jī)制及病情評(píng)估中發(fā)揮重要作用，平衡它們之間的關(guān)系，可作為未來(lái)的治療方法。

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Application value of serum Ang／Tie2，VEGF in the assessment of diabetic nephropathy

Huo Yajie1，Wen Yujie2，Liu Taowen2，et al
（1Graduate College，Guilin Medical University，Guilin 541001；2Dept of Endocrinology，Nanxishan Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guilin 541002）

AbstractObjective To observe the regular levels change of serum angiopoietin-1（Ang-1），angiopoietin-2（Ang-2）and receptor Tie2 as well as vascular endothelia growth factor（VEGF）in the progerssion of diabetic nephropathy（DN），and investigate the importance of ratio of balance among them in DN．Methods Sixty Chinese patients with type 2 diabetes were enrolled．According to their UAER diabetic patients were divided into three groups randomly：20 patients with normoalbuminuric diabetic（DM1 group），22 with microalbuminuric diabetic（DM2 group）and 18 proteinuric diabetic（DM3 group）．A total of 22 health contros were selected（NC group）．Serum Ang-1，Ang-2，Tie2，VEGF levels were detected by ELISA．At the same time，related biochemical indicators were tested．Results ①The level of serum Ang-2，VEGF increased in DM1 compared with NC，and serum Ang-2，VEGF levels in DM2 and DM3 were much higher．There was statistical difference among four groups（P＜0．05）．②The level of serum Ang-1 increased in DM1 compared with NC，but serum Ang-1 levels in DM2 and DM3 were much lower．③There was no statistical significance in difference among the four groups．There was no statistical significance in differences of Tie2．④UAER had positive correlation with serum Ang-2，VEGF（r＝0.470，0.404，P＜0.01）．UAER had negative correlation with serum Ang-1（r＝－0.310，P＜0.05）．Ang-2 had positive correlation with serum VEGF，Tie2（r＝0.450，0.725，P＜0.01）．Ang-1 had positive correlation with serum Tie2（r＝0.571，P＜0.01）．Ang-1 had negative correlation with serum Ang-2，VEGF（r＝－0.497，－0.396，P＜0.01，P＜0.05）．⑤Line to UAER level as the dependent variable，multiple stepwise regression analysis showed that：Ang-1，Ang-2，VEGF，creatinine entered regression equation．They were independent correlation factors for UAER．Conclusion Serum Ang-1，Ang-2，Tie2 and VEGF levels are closely related with DN．They may participate in the development of DN and affect the process of DN．Detection of serum Ang／Tie2 and VEGF levels can be used as a reference index for the condition of DN．

Key wordsdiabetic nephropathy；angiopoietin；VEGF；Tie2；urinary albumin excretion rate

作者簡(jiǎn)介：霍亞杰，女，碩士研究生；溫玉潔，女，教授，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：wenyujie888＠qq．com

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)：2011GXNSFA018238）作者單位：1桂林醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院，桂林 541001

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000－1492（2015）04－0508－04

中圖分類號(hào)R 587．2