• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中頻脈沖電流經(jīng)皮刺激肝區(qū)對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝細(xì)胞線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影響

    2015-03-02 05:27:52翟藝宗黃昌林常祺王久清張佳郭延嶺
    解放軍醫(yī)學(xué)雜志 2015年4期
    關(guān)鍵詞:肝區(qū)脈沖電流力竭

    翟藝宗,黃昌林,常祺,王久清,張佳,郭延嶺

    運(yùn)動(dòng)性疲勞是指因機(jī)體的生理過(guò)程不能維持在特定水平或機(jī)體不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度而導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)能力下降的現(xiàn)象[1]。肝臟作為人體最大的腺體,在物質(zhì)代謝、維持機(jī)體血糖恒定及供能方面有著重要作用。線粒體是真核細(xì)胞功能活動(dòng)的主要供能單位[2],可通過(guò)其內(nèi)膜呼吸鏈的氧化磷酸化反應(yīng)為機(jī)體生成80%以上的ATP[3],在維持肝臟細(xì)胞正常的能量代謝和功能方面具有重要作用。線粒體是適應(yīng)運(yùn)動(dòng)方式最為敏感的細(xì)胞器之一[4],Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶位于線粒體內(nèi)膜中[5],能維持線粒體膜電化學(xué)梯度[6],是線粒體功能、結(jié)構(gòu)變化的靈敏指標(biāo)。本研究采用游泳力竭大鼠模型,應(yīng)用分子生化技術(shù)探討脈沖電流經(jīng)皮刺激肝區(qū)對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影響,以進(jìn)一步探討脈沖電流經(jīng)皮刺激肝區(qū)緩解疲勞的相關(guān)機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康8周齡雄性W istar大鼠72只,體重204±15g,由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,飼養(yǎng)室溫度23±2℃,濕度41%±15%,自然光照,分籠飼養(yǎng),自由攝食及飲水。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前均未進(jìn)行過(guò)游泳運(yùn)動(dòng)。

    1.2 主要試劑及儀器 線粒體超微量Na+-K+-ATP酶及Ca2+-M g2+-ATP酶測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所);BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(北京索萊寶生物技術(shù)有限公司);鹽酸氯胺酮注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H35020148,福建古田藥業(yè)有限公司);LD5-2A離心機(jī)(北京雷勃爾離心機(jī)有限公司)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 動(dòng)物模型建立及分組 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為安靜對(duì)照組(A組)、疲勞對(duì)照組(B組)、疲勞前刺激組(C組)、疲勞后刺激組(D組),每組18只。按組別分籠飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前3d,每只大鼠每天學(xué)習(xí)游泳30m in,水溫32±1℃,水深70cm,隨后連續(xù)進(jìn)行5周實(shí)驗(yàn)。B、C、D組大鼠每周進(jìn)行游泳訓(xùn)練6d,休息1d,每日游泳2次,每次均達(dá)到力竭,當(dāng)

    大鼠浮在水面不運(yùn)動(dòng)時(shí)用木棒驅(qū)趕,維持其運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。力竭標(biāo)準(zhǔn)以大鼠下沉后10s不露出水面為準(zhǔn),記錄每只大鼠的游泳力竭時(shí)間。每組大鼠游泳后換水。B、D組大鼠在游泳后,C組大鼠在游泳前分別給予腹腔注射鹽酸氯胺酮注射液0.25g/kg麻醉。C組大鼠在游泳前、D組大鼠在游泳力竭后分別以頻率為1024Hz的脈沖電流刺激肝區(qū),電流強(qiáng)度均為10m A,間動(dòng)周期為1s,時(shí)間均為20m in,2次/d。1.3.2 取材、標(biāo)本制備及指標(biāo)檢測(cè) 各組大鼠分別在1、3、5周末分批斷頭處死,每組各時(shí)間點(diǎn)6只,處死前動(dòng)物禁食水過(guò)夜。大鼠處死后立即剖腹取肝臟組織1g,用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩8闻K標(biāo)本溶化后仍保持2~8℃的溫度,眼科剪剪碎后,加入9m l PBS液(pH 7.4),用超聲勻漿器將標(biāo)本充分勻漿,3000r/m in離心20m in,收集上清液,分裝后待檢測(cè),整個(gè)操作過(guò)程均在0~4℃下進(jìn)行。采用分光光度法[7]測(cè)定1、3、5周各組動(dòng)物的肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,應(yīng)用UV-2450紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)其吸光度(A)值,波長(zhǎng)636nm,其結(jié)果用μkat/g表示。采用Brad food蛋白定量法測(cè)定[8]進(jìn)行大鼠肝臟線粒體蛋白定量。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以±s表示,組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠游泳力竭時(shí)間的比較 第1周末3組大鼠游泳力竭時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第3、5周末D組大鼠游泳力竭時(shí)間均明顯長(zhǎng)于B組和C組(P<0.05),而B(niǎo)組與C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表1)。

    2.2 各組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的比較 第1周末4組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第3、5周末B組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明顯低于其余3組,且C組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明顯低于D組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表2)。

    表1 運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠游泳力竭時(shí)間(m in,±s,n=6)Tab. 1 The exhaustive sw imm ing tim e of exercise-induced fatigued rats (m in, ±s, n=6)

    表1 運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠游泳力竭時(shí)間(m in,±s,n=6)Tab. 1 The exhaustive sw imm ing tim e of exercise-induced fatigued rats (m in, ±s, n=6)

    (1)P<0.05 com pared with group B; (2)P<0.05 com pared with g roup C

    Group Training tim e (w eek)1 3 5 B 94.59±8.51 101.72±7.23 111.59±8.42 C 93.80±10.89 105.46±9.89 119.18±10.27 D 97.26±11.62 115.35±12.19(1)(2)132.39±9.44(1)(2)

    表2 各組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性比較(μkat/g,±s,n=6)Tab. 2 Com parison of the hepatic m itochond rial Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase activity in the rats (μkat/g, ±s,n=6)

    表2 各組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性比較(μkat/g,±s,n=6)Tab. 2 Com parison of the hepatic m itochond rial Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase activity in the rats (μkat/g, ±s,n=6)

    (1)P<0.05 com pared with g roup A; (2)P<0.05 com pared with g roup B; (3)P<0.05 com pared with g roup C

    Group Na+-K+-ATPase Ca2+-Mg2+-ATPase 1st w eek A 1.179±0.263 1.143±0.187 B 1.128±0.226 1.127±0.156 C 1.181±0.237 1.133±0.162 D 1.284±0.271 1.184±0.171 3rd w eek A 1.165±0.233 1.137±0.151 B 1.015±0.241(1) 1.017±0.161(1)C 1.251±0.219(2) 1.242±0.158(2)D 1.528±0.242(2)(3) 1.487±0.155(2)(3)5 th w eek A 1.183±0.257 0.148±0.164 B 0.915±0.227(1) 0.875±0.153(1)C 1.308±0.224(2) 1.327±0.160(2)D 1.631±0.257(2)(3) 1.592±0.151(2)(3)

    3 討 論

    線粒體是細(xì)胞有氧代謝的重要場(chǎng)所[9],氧化磷酸化是機(jī)體內(nèi)重要的能量來(lái)源,由線粒體內(nèi)膜的呼吸鏈完成。線粒體氧化磷酸化的關(guān)鍵是線粒體內(nèi)膜功能及通透屏障的完整性[10-11]。Ca2+在調(diào)控線粒體功能及ATP合成過(guò)程中起著重要作用[12],刺激氧化磷酸化是其最基本的功能之一。根據(jù)M ithell提出的化學(xué)滲透假說(shuō),呼吸鏈位于線粒體內(nèi)膜的外側(cè),當(dāng)H+在膜外側(cè)堆積時(shí),會(huì)導(dǎo)致膜內(nèi)外的跨膜電位差,這是線粒體氧化磷酸化過(guò)程中發(fā)生的根本態(tài)勢(shì)。此種化學(xué)電位差被膜上的ATP酶有效利用,可以從Pi+ADP合成ATP。同時(shí),化學(xué)電位差導(dǎo)致了線粒體Ca2+內(nèi)流,隨著Ca2+內(nèi)流增加,線粒體內(nèi)膜陽(yáng)離子凈增加,導(dǎo)致內(nèi)膜去極化,為了保持內(nèi)膜的去極化狀態(tài),線粒體通過(guò)生物氧化以加快H+外排。Ca2+內(nèi)流可破壞線粒體生物氧化的過(guò)程,使機(jī)體合成ATP的能力下降。

    目前有研究發(fā)現(xiàn),有氧運(yùn)動(dòng)可以提高線粒體Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性[4]。力竭運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致大鼠肝臟自由基產(chǎn)生增多,脂質(zhì)過(guò)氧化嚴(yán)重,肝臟MDA含量增加,酶的活性降低[13]。本研究結(jié)果表明,脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝區(qū)可以提高肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,而線粒體Na+-K+-ATP酶的活性增高可減少線粒體水鈉潴留,減輕線粒體腫脹,此外,Na+-K+-ATP酶除了可維持跨膜的電化學(xué)鈉、鉀離子梯度以外,還可降低線粒體內(nèi)游離鈣濃度,減輕線粒體鈣超載[14]。

    本課題組前期研究表明,脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝區(qū)能夠降低肝組織Bax的表達(dá),提高Bc l-2的表達(dá),維護(hù)肝組織的正常結(jié)構(gòu)[13]。采用頻率為1024Hz的脈沖電流刺激(電流強(qiáng)度10m A,間動(dòng)周期1s)可加速乳酸代謝,提高運(yùn)動(dòng)耐力,減輕運(yùn)動(dòng)性疲勞導(dǎo)致的肝損傷[15-17]。本研究結(jié)果顯示,第3周末、第5周末D組大鼠游泳力竭時(shí)間均明顯長(zhǎng)于B組和C組(P<0.05),而B(niǎo)組與C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝區(qū)可以提高其運(yùn)動(dòng)耐力及運(yùn)動(dòng)成績(jī)。A組、C組及D組大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性在第3、5周末均高于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝區(qū)可以提高其活性水平,增強(qiáng)線粒體氧化磷酸化,降低線粒體內(nèi)游離鈣濃度,從而緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞。

    綜上所述,運(yùn)動(dòng)性疲勞可以降低肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠肝區(qū)可以提高其活性水平,降低線粒體內(nèi)游離鈣濃度,并減少線粒體鈣超載,刺激氧化磷酸化,提高運(yùn)動(dòng)耐力及運(yùn)動(dòng)成績(jī),加速機(jī)體運(yùn)動(dòng)性疲勞的消除。此外,運(yùn)動(dòng)性疲勞的發(fā)生及消除是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,盡管目前的研究已經(jīng)取得了較大進(jìn)展,但對(duì)于肝臟線粒體與運(yùn)動(dòng)性疲勞之間的確切關(guān)系還需要進(jìn)一步深入探討。

    [1] Feng WQ, Xie MH. Exercise biochem istry research[M]. Beijing:Beijing Sport University Pub lishing House, 2007. [馮煒權(quán), 謝敏豪. 運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)研究進(jìn)展[M]. 北京: 北京體育大學(xué)出版社, 2007.]

    [2] Sun F, Zhou QJ, Sun J. Structure of m itochond rial respiratory m em brane p rotein com p lex[J]. Chin Bu ll Life Sci, 2008, 20(4):567-572. [孫飛, 周強(qiáng)軍, 孫吉. 線粒體呼吸鏈膜蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu)[J]. 生命科學(xué), 2008, 20(4): 567-572.]

    [3] Papa S. Mitochond rial oxidative phosphorylation changes in the lifespan: Mo lecu lar aspects and physiological im p lications[J].Bioch im Biophys Acta, 1996, 1276(2): 87-105.

    [4] Cao Y, Zhang M, Dong JL, et al. The influence of aerobic exercise to the rat skeletal m uscle's Na+-K+-ATP enzym e, Ca2+-Mg2+-ATP enzym e and the m itochond rial sw elling[J]. Chin J Tissue Eng Res, 2010, 14(37): 6973-6975. [曹穎, 張敏, 董嘉良, 等. 有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠骨骼肌線粒體Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶及線粒體腫脹的影響[J]. 中國(guó)組織工程研究及臨床康復(fù),2010, 14(37): 6973-6975.]

    [5] De Meis L, Arruda AP, da Costa RM. Iden tification of a Ca2+-ATPase in b row n ad ipose tissue m itochond ria: regu lation of therm o genesis by ATP and Ca2+[J]. J Bio l Chem, 2006,281(24): 16384-16390.

    [6] Venkatram an M, Konga D, Peram aiyan R, et al. Reduction of m itochond rial oxidative dam age and im p roved m itochond rial efficiency by adm inistration of crocetin against bebzo[a]p ryene induced experim ental anim als[J]. Biol Pham Bu ll, 2008, 31(9):1639-1645.

    [7] Vyatkina G, Bhatia V, Gerstner A, et al. Im paired m itochond rial resp irato ry chain and b ioenergetics du ring chagasic cardiom yopathy developm ent[J]. Biochim Biophys Acta, 2004,1689(2): 162-173.

    [8] Brad ford MM. A rapid and sensitive m ethod for the quab tition of m icrogram quantities of p rotein utilizing the p rincip le of p ro teindye bind ing[J]. Anal Biochem, 1976, 72: 248-254.

    [9] Ji YB, Li R, Ji CF. Sports fatigue and m itochond rial function[J].Asia Pac Trad it Med, 2008, 4(9): 8-11. [季宇彬, 李睿, 汲晨鋒.運(yùn)動(dòng)性疲勞與線粒體功能[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2008, 4(9):8-11.]

    [10] Chang B. Effect of exe rcise-induced free rad ica ls on m itochond rion free calcium and ATP synthesis activity in rats'kidney[J]. J Shanghai Univ Sport, 2006, 30(2): 74-76. [常波. 運(yùn)動(dòng)源性自由基對(duì)大鼠腎臟線粒體游離鈣和ATP合成能力的影響[J]. 上海體育學(xué)院學(xué)報(bào), 2006, 30(2): 74-76.]

    [11] Dai PY, Huang CL. In fluence of percu taneous stim u lation of hepatic region with m id-frequency pu lse cu rren t on the activity of serum GSH-PX, SOD, T-AOC and the con ten t of m alondialdehyde in exercise-induced fatigued so ldiers[J]. Med J Chin PLA, 2014, 39(3): 245-248. [代朋乙, 黃昌林. 中頻脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)性疲勞士兵肝區(qū)對(duì)血清GSH-PX、SOD、T-AOC活性及MDA含量的影響[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2014, 39(3): 245-248.]

    [12] Feissner RF, Skalska J, Gaum WE, et al. Crosstalk signaling betw een m itochond rail Ca2+and ROS[J]. Fron t Biosci(Landm ark Ed), 2009, 14: 1197-1218.

    [13] Huang CL, Zhu LG. An ti-fatigue effect of percu taneous stim u lation with different frequency pu lse current on hepatic region: an experim en tal study with rats[J]. Med J Chin PLA,2009, 34(6): 743-745. [黃昌林, 朱履剛. 脈沖電流經(jīng)皮刺激運(yùn)動(dòng)疲勞大鼠肝區(qū)對(duì)肝細(xì)胞Bcl-2、Bax表達(dá)及超微結(jié)構(gòu)的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 34(6): 743-745.]

    [14] Mo teg i K, Tanonaka, K, Tanaga Y, et al. Preservation of m itochond rial function m ay contribute to card iop rotective e ffects of Na+/Ca2+exchanger inh ib ito rs in ischaem ic/reperfused rat hearts[J]. Br J Pharm acol, 2007, 151(7): 963-978.

    [15] Dai PY, Huang CL. Im pact of m id-frequency pu lse cu rren t in different dia dynam ic cycles to hepatic region on restorability of exercise-induced fatigue in so ldiers[J]. Med J Chin PLA, 2012,37(1): 66-69. [代朋乙, 黃昌林. 不同間動(dòng)周期中頻脈沖電流經(jīng)皮刺激肝區(qū)對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞士兵的抗疲勞作用觀察[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 37(1): 66-69.]

    [16] Dai PY, Huang CL. Im pact of m id-frequency pu lse cu rren t in different diadynam ic cycles to hepatic region on restorability of exercise-induced fatigue in so ldiers[J]. Med J Chin PLA, 2012,37(1): 66-69. [代朋乙, 黃昌林. 不同間動(dòng)周期中頻脈沖電流經(jīng)皮刺激肝區(qū)對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞士兵的抗疲勞作用觀察[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 37(1): 66-69.]

    [17] Sun QJ, Liang B, M iao MY, et al. Card iop rotective effects of atorvastatin postconditioning on ischem ia-reperfusion in jury in isolated rat heart: the ro le of PI3K-Akt, m ito-KATP channel and m PTP[J]. Med J Chin PLA, 2010, 35(11): 1341-1344. [孫青菊,梁冰, 繆明永, 等. 肝再生早期線粒體差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)雜志, 2010, 35(11): 1341-1344.]

    猜你喜歡
    肝區(qū)脈沖電流力竭
    西歸粗多糖對(duì)游泳力竭小鼠的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:34
    肝區(qū)痛會(huì)是什么問(wèn)題
    益壽寶典(2018年16期)2018-01-27 14:47:51
    心多大才好
    歲月(2017年7期)2017-07-18 18:52:11
    富硒板黨對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響及機(jī)制
    脈沖電流密度對(duì)納米晶鎳鍍層結(jié)構(gòu)及性能的影響
    紋狀體A2AR和D2DR對(duì)大鼠力竭運(yùn)動(dòng)過(guò)程中蒼白球GABA和Glu釋放的調(diào)控研究
    低頻脈沖電流經(jīng)皮刺激足三里穴對(duì)高強(qiáng)度軍訓(xùn)士兵抗疲勞作用觀察
    一種新型的雙極性脈沖電流源
    肝區(qū)疼痛不一定是肝病
    中老年健康(2014年4期)2014-07-25 10:29:44
    網(wǎng)傳“霧霾清肺茶”靠譜嗎
    中老年健康(2014年4期)2014-07-25 10:29:44
    最近视频中文字幕2019在线8| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品1区2区在线观看.| 国产av在哪里看| www.999成人在线观看| 十八禁人妻一区二区| 亚洲人成网站在线播| 香蕉久久夜色| av天堂在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 男人的好看免费观看在线视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 99久久九九国产精品国产免费| 男女午夜视频在线观看| 极品教师在线免费播放| 99热6这里只有精品| 国产激情欧美一区二区| 国产一区二区激情短视频| 亚洲最大成人手机在线| 男女那种视频在线观看| 全区人妻精品视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久9热在线精品视频| xxx96com| 三级国产精品欧美在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 男人的好看免费观看在线视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| www日本在线高清视频| 午夜影院日韩av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 成年免费大片在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲真实伦在线观看| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产色婷婷99| 91久久精品电影网| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久性视频一级片| 国产激情偷乱视频一区二区| 男人舔奶头视频| 亚洲国产欧美人成| xxxwww97欧美| 岛国在线观看网站| 黄色女人牲交| 久久久久九九精品影院| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 日韩亚洲欧美综合| 中文字幕久久专区| 91字幕亚洲| 色综合站精品国产| 欧美3d第一页| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精华国产精华精| 亚洲男人的天堂狠狠| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲激情在线av| 一区二区三区免费毛片| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩免费av在线播放| 床上黄色一级片| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜视频国产福利| 国产精品影院久久| а√天堂www在线а√下载| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久久久久久久中文| 色哟哟哟哟哟哟| 波多野结衣高清作品| 最近在线观看免费完整版| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 一个人免费在线观看电影| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| www.色视频.com| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美中文综合在线视频| 亚洲精品在线美女| 色综合站精品国产| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 波野结衣二区三区在线 | 成年女人毛片免费观看观看9| 日本熟妇午夜| 99久久精品热视频| 久99久视频精品免费| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 天天躁日日操中文字幕| 亚洲国产精品久久男人天堂| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成年女人永久免费观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲电影在线观看av| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 久久香蕉精品热| 深夜精品福利| 51国产日韩欧美| 91九色精品人成在线观看| 色在线成人网| 久久精品91无色码中文字幕| 观看免费一级毛片| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 99久国产av精品| 网址你懂的国产日韩在线| 丰满的人妻完整版| 久9热在线精品视频| 看黄色毛片网站| 亚洲国产精品999在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 国产成人欧美在线观看| 麻豆成人av在线观看| 亚洲av免费在线观看| 一级作爱视频免费观看| 无限看片的www在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一区二区三区免费毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 国产不卡一卡二| 国模一区二区三区四区视频| 日日夜夜操网爽| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 精品人妻一区二区三区麻豆 | www.www免费av| 欧美一级a爱片免费观看看| 不卡一级毛片| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产午夜福利久久久久久| 国产一区二区在线av高清观看| bbb黄色大片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日本一二三区视频观看| 窝窝影院91人妻| 九九在线视频观看精品| 国产三级黄色录像| 人妻久久中文字幕网| 九九在线视频观看精品| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产在视频线在精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 黄片小视频在线播放| 可以在线观看的亚洲视频| 香蕉久久夜色| 岛国视频午夜一区免费看| 熟女人妻精品中文字幕| 色老头精品视频在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产精品国产高清国产av| 国产精品一及| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 宅男免费午夜| 国产精品亚洲av一区麻豆| 网址你懂的国产日韩在线| 波多野结衣高清作品| 两人在一起打扑克的视频| 国产乱人伦免费视频| 国产av不卡久久| 首页视频小说图片口味搜索| 人妻夜夜爽99麻豆av| 免费观看人在逋| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91久久精品电影网| 母亲3免费完整高清在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| av天堂在线播放| 日本 欧美在线| 成人一区二区视频在线观看| 一区福利在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 全区人妻精品视频| 岛国在线免费视频观看| 看片在线看免费视频| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美成狂野欧美在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲美女视频黄频| 99久久精品国产亚洲精品| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品日韩av在线免费观看| 色av中文字幕| 亚洲精品亚洲一区二区| 午夜免费激情av| 亚洲成av人片在线播放无| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 精品久久久久久成人av| 免费av观看视频| 舔av片在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜福利在线观看吧| 九色国产91popny在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产精品影院久久| 丰满乱子伦码专区| 午夜精品在线福利| 18+在线观看网站| 国产一区在线观看成人免费| 久久久久九九精品影院| 国产色婷婷99| 久久欧美精品欧美久久欧美| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品久久电影中文字幕| 久久国产精品影院| 美女黄网站色视频| 国产麻豆成人av免费视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲美女视频黄频| 日本 欧美在线| 中文字幕久久专区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲熟妇熟女久久| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲一区二区三区不卡视频| 丰满的人妻完整版| 最后的刺客免费高清国语| 久久人妻av系列| 国产精品99久久99久久久不卡| 搡老岳熟女国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美成人免费av一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 一区福利在线观看| 国产精品 国内视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品不卡国产一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 青草久久国产| 淫妇啪啪啪对白视频| ponron亚洲| 淫秽高清视频在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 搞女人的毛片| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲人与动物交配视频| 不卡一级毛片| 国产成人影院久久av| 欧美日韩国产亚洲二区| 综合色av麻豆| 99久久精品一区二区三区| 日本 av在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 极品教师在线免费播放| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产成人福利小说| 国内精品久久久久精免费| 少妇丰满av| 无人区码免费观看不卡| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日本 欧美在线| 欧美+日韩+精品| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 真实男女啪啪啪动态图| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久国产成人精品二区| 午夜福利高清视频| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美最新免费一区二区三区 | 日本一二三区视频观看| 亚洲专区国产一区二区| 69av精品久久久久久| 午夜日韩欧美国产| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲男人的天堂狠狠| 午夜影院日韩av| 熟女人妻精品中文字幕| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 超碰av人人做人人爽久久 | 97超视频在线观看视频| 级片在线观看| 一进一出好大好爽视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 色在线成人网| 欧美黄色淫秽网站| 日韩人妻高清精品专区| 熟女人妻精品中文字幕| 国内精品美女久久久久久| av视频在线观看入口| 99国产极品粉嫩在线观看| 禁无遮挡网站| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲精华国产精华精| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲最大成人手机在线| 成年女人看的毛片在线观看| 日本 欧美在线| 天天一区二区日本电影三级| 51午夜福利影视在线观看| 成人精品一区二区免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 在线看三级毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 一进一出抽搐动态| 国产一区二区三区视频了| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美日韩国产亚洲二区| 日韩欧美免费精品| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 午夜免费观看网址| 国产高清videossex| avwww免费| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲精华国产精华精| 免费看光身美女| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 天天添夜夜摸| 在线观看舔阴道视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲在线观看片| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久人人精品亚洲av| 免费在线观看成人毛片| 午夜影院日韩av| 国产日本99.免费观看| 嫩草影视91久久| 熟女人妻精品中文字幕| 久久欧美精品欧美久久欧美| 两人在一起打扑克的视频| 国产爱豆传媒在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美一级毛片孕妇| 国产单亲对白刺激| 熟女电影av网| 免费看美女性在线毛片视频| www.熟女人妻精品国产| 精品人妻偷拍中文字幕| 夜夜爽天天搞| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产av不卡久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产av在哪里看| 一级作爱视频免费观看| 精品福利观看| 舔av片在线| 日本在线视频免费播放| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲五月天丁香| www日本在线高清视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 成人18禁在线播放| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 亚洲欧美日韩高清专用| 91九色精品人成在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国内精品久久久久久久电影| 国产精品亚洲一级av第二区| 99国产综合亚洲精品| 两个人看的免费小视频| 日韩欧美精品v在线| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 99国产综合亚洲精品| 两个人看的免费小视频| 美女免费视频网站| 一级作爱视频免费观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日本在线视频免费播放| 男女午夜视频在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 婷婷亚洲欧美| 欧美日韩乱码在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 最近在线观看免费完整版| 久久久久久人人人人人| 99热6这里只有精品| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美3d第一页| 久久亚洲精品不卡| 国产综合懂色| 国产成人福利小说| 搡老熟女国产l中国老女人| 制服丝袜大香蕉在线| 757午夜福利合集在线观看| 丝袜美腿在线中文| 全区人妻精品视频| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美3d第一页| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 级片在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜日韩欧美国产| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲国产精品合色在线| 国产成人影院久久av| 日本黄大片高清| 女警被强在线播放| 亚洲欧美日韩无卡精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 黄片小视频在线播放| 看免费av毛片| 国产成人福利小说| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产成人欧美在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久精品大字幕| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 中文资源天堂在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品久久久久久久电影 | 国产真实伦视频高清在线观看 | 欧美3d第一页| 黄色女人牲交| 国产精品电影一区二区三区| 免费大片18禁| av天堂中文字幕网| 在线观看日韩欧美| 成人三级黄色视频| 国产av一区在线观看免费| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 91在线观看av| 欧美成人a在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲人与动物交配视频| av国产免费在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久精品91蜜桃| 成人性生交大片免费视频hd| 日本与韩国留学比较| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久久久久久久黄片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美黑人巨大hd| 老司机在亚洲福利影院| 欧美乱妇无乱码| 久久精品人妻少妇| 中出人妻视频一区二区| 色吧在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 91在线精品国自产拍蜜月 | 午夜激情欧美在线| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品亚洲一区二区| 中出人妻视频一区二区| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲中文日韩欧美视频| 91久久精品国产一区二区成人 | 免费搜索国产男女视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产av一区在线观看免费| 床上黄色一级片| 国产精品亚洲美女久久久| 久久精品91无色码中文字幕| 精品电影一区二区在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 丰满的人妻完整版| 午夜视频国产福利| 色播亚洲综合网| 国内精品美女久久久久久| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久亚洲精品不卡| 丁香六月欧美| 欧美在线一区亚洲| 久久久久久人人人人人| 亚洲av不卡在线观看| 黄片小视频在线播放| 人人妻人人看人人澡| 色播亚洲综合网| av在线蜜桃| 国产成人欧美在线观看| 99热只有精品国产| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲不卡免费看| 国产一区二区在线av高清观看| 99国产精品一区二区三区| 美女cb高潮喷水在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 亚洲国产精品合色在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 搡老岳熟女国产| 国产成人av激情在线播放| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美不卡视频在线免费观看| 麻豆国产av国片精品| 美女大奶头视频| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品99久久99久久久不卡| 99精品久久久久人妻精品| 欧美在线黄色| 国产精品一区二区免费欧美| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩欧美在线二视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成年版毛片免费区| 51国产日韩欧美| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产激情偷乱视频一区二区| 天天躁日日操中文字幕| 此物有八面人人有两片| www.熟女人妻精品国产| 久久久精品欧美日韩精品| 久久国产精品影院| 国产日本99.免费观看| 欧美午夜高清在线| 亚洲午夜理论影院| 一边摸一边抽搐一进一小说| 最好的美女福利视频网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 性色av乱码一区二区三区2| 国产一区二区三区视频了| 国产v大片淫在线免费观看| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲欧美日韩东京热| 麻豆国产av国片精品| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 99久久精品一区二区三区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲精品亚洲一区二区| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品女同一区二区软件 | 国产精品1区2区在线观看.| 午夜激情福利司机影院| 久久精品国产清高在天天线| 成人永久免费在线观看视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 成人三级黄色视频| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品 国内视频| 国产精品影院久久| 男女那种视频在线观看| 日本免费a在线| 两个人的视频大全免费| 内地一区二区视频在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产91精品成人一区二区三区| 成人永久免费在线观看视频| 好男人在线观看高清免费视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲中文日韩欧美视频| 高清毛片免费观看视频网站| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 精品不卡国产一区二区三区| 美女高潮的动态| 老汉色av国产亚洲站长工具| 成人国产综合亚洲| 国内精品久久久久久久电影| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 99国产精品一区二区三区| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产主播在线观看一区二区| 韩国av一区二区三区四区| tocl精华| 午夜a级毛片| 91在线观看av| 日韩亚洲欧美综合| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产亚洲精品一区二区www| 欧美色视频一区免费| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产伦在线观看视频一区| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成+人综合+亚洲专区| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产免费av片在线观看野外av| 国产亚洲精品一区二区www| 国产淫片久久久久久久久 | 久久久久久久午夜电影| 一级黄色大片毛片| 中出人妻视频一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产成人av激情在线播放| 久久亚洲真实| 亚洲自拍偷在线| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一本久久中文字幕| www日本黄色视频网| 欧美高清成人免费视频www| 1024手机看黄色片|