TCF-4、MMP-7和Survivin在結(jié)直腸癌中的表達研究

黃慧云

作者單位:710077 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

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TCF-4、MMP-7和Survivin在結(jié)直腸癌中的表達研究

黃慧云

作者單位:710077 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

【摘要】目的比較TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達情況，分析三者與結(jié)直腸癌病理特征的相關(guān)性。方法選取68例結(jié)直腸癌手術(shù)切除石蠟包埋標本的結(jié)直腸癌組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為結(jié)直腸癌組，隨機選取50例結(jié)直腸癌兩端均為陰性切緣組織的正常粘膜組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為正常粘膜組，比較TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達情況以及TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織中的表達與其病理特征的相關(guān)性。結(jié)果TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達率均顯著高于正常黏膜組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；結(jié)直腸癌中TCF-4、Survivin蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、浸潤深度、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)；MMP-7蛋白表達在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期顯著相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論TCF-4、MMP-7和Survivin與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展有緊密聯(lián)系，三者可能參與了結(jié)直腸癌的惡性生長過程。

【關(guān)鍵詞】TCF-4；MMP-7；Survivin；直腸癌；病理特征

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:665～668)

結(jié)直腸癌屬于消化系常見惡性腫瘤，發(fā)病機制復(fù)雜。目前，分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌的發(fā)生與癌基因和抑癌基因改變、細胞凋亡機能受限、信號傳導(dǎo)通路異常以及端粒酶活化等有緊密聯(lián)系[1]。TCF-4、MMP-7和Survivin均為Wnt信號通路重要的調(diào)控分子，在結(jié)直腸癌的發(fā)生和病情進展中有重要的調(diào)節(jié)作用[2-3]?，F(xiàn)對TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達情況進行比較，分析三者與結(jié)直腸癌病理特征之間的相關(guān)性，為早期診斷和靶向治療提供參考，報告如下。

1材料與方法

1.1一般資料

選取2013年4月至2014年4月我院收治的68例結(jié)直腸癌患者作為研究對象。其中男性患者41例，女性患者27例，患者年齡為27～80歲。所有患者均行根治性切除術(shù)，排除術(shù)前接受放療、化療或免疫治療者以及有遺傳性結(jié)直腸腫瘤和其它惡性腫瘤病史者。所有切除標本均經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實且存在無瘤切緣，按照常規(guī)操作使用10%中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，選取68例標本的結(jié)直腸癌組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為結(jié)直腸癌組，隨機選取50例結(jié)直腸癌兩端均為陰性切緣組織的正常粘膜組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為正常粘膜組。所有患者均簽署知情同意書。

1.2方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)(Elivision)檢測正常黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白的表達情況，分析三者與結(jié)直腸癌患者病理特征之間的關(guān)系。使用已知相應(yīng)蛋白陽性的標本作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。兔抗人TCF-4單克隆抗體、鼠抗人MMP-7單克隆抗體、兔抗人Survivin單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3觀察指標

染色結(jié)果陽性反應(yīng)判斷標準：TCF-4陽性物質(zhì)定位于細胞核，呈黃色或棕黃色顆粒；MMP-7陽性物質(zhì)主要定位于細胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色；Survivin陽性物質(zhì)主要定位于細胞核，呈黃色或棕黃色顆粒[4]。

于高倍鏡(×400)下隨機選擇10個視野進行陽性細胞計數(shù)，計算陽性細胞所占視野內(nèi)細胞總數(shù)的比例，取平均值作為結(jié)果進行評分，0分：<10%；1分：10%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。觀察切片視野內(nèi)細胞著色強度并進行評分，0分：不著色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。陽性細胞所占視野內(nèi)細胞總數(shù)的比例評分×細胞著色強度評分=總評分。TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白陽性表達判斷標準：陽性：總評分≥2分；陰性：總評分0～1分[5]。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 19.0軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以百分率表示，差異性比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在正常黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中的表達情況比較

TCF-4蛋白定位于細胞核，呈黃色或棕黃色顆粒，MMP-7蛋白主要定位于細胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色，Survivin蛋白主要定位于細胞核，呈黃色或棕黃色顆粒。TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達率均顯著高于正常黏膜組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1　TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在正常黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中的表達情況比較(例，%)

2.2TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達與其臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)直腸癌中TCF-4、Survivin蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期存在顯著相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、浸潤深度、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)；MMP-7蛋白的表達與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期存在顯著相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移上均無相關(guān)性(P>0.05)(表2)。

3討論

結(jié)直腸癌屬于臨床常見惡性腫瘤，其癌變機制涉及遺傳、環(huán)境、社會等多方面因素[6]。目前，隨著國內(nèi)居民生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高趨勢。大量臨床研究表明，結(jié)直腸癌的發(fā)生與癌基因和抑癌基因改變、細胞凋亡機能受限、多條信號傳導(dǎo)通路異常以及端粒酶活化等有緊密聯(lián)系[7]。因此，從分子水平研究結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展機制，對結(jié)直腸癌癌的早期診斷和治療的具有重要意義。

表2　TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達與其臨床病理特征的關(guān)系/例

臨床研究表明，Wnt/β-catenin/TCF信號通路(一下均簡稱Wnt信號通路)在生物的細胞分化、形態(tài)發(fā)生、結(jié)構(gòu)形成和腫瘤演進等方面起著重要作用，TCF-4、MMP-7和Survivin均為Wnt信號通路重要的調(diào)控分子[8]，本研究主要對三者在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達情況及其與結(jié)直腸癌病理特征之間的相關(guān)性進行研究。

TCF-4是Wnt信號通路的核內(nèi)非常關(guān)鍵的信號因子，是細胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子開關(guān)，在Wnt通路異常激活時，細胞質(zhì)中的β-catenin躲避復(fù)合體的攻擊進入細胞核，并與TCF-4發(fā)生特異性結(jié)合，啟動下游基因的表達，對細胞惡性轉(zhuǎn)化有重要作用[9]。Xie等[10]的研究表明，TCF-4 mRNA是43株結(jié)腸癌細胞系中共同表達的mRNA，且在結(jié)直腸癌中表達水平最高，提示TCF-4mRNA與結(jié)腸癌的發(fā)生有緊密聯(lián)系且在結(jié)腸癌發(fā)展過程中有促進的作用。本研究中，TCF-4蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達率均顯著高于正常黏膜組織，與上述研究報道相符，提示TCF-4參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究中結(jié)直腸癌TCF-4蛋白的表達在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期上存在顯著差異。Bishnupuri等[11]的采用免疫組化法研究非小細胞肺癌中β-carenin和TCF-4蛋白的表達，也發(fā)現(xiàn)TCF-4蛋白的高表達與NSCLC的分化密切相關(guān)。提示TCF-4的表達與結(jié)直腸癌惡性生物學(xué)行為有密切關(guān)系。

MMP-7和Survivin是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子TCF-4的下游靶基因，三者相互作用，協(xié)同參與了多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程[12]。其中MMP-7屬于MMPs家族的成員，在人癌組織中呈過度表達水平[13]。臨床研究表明，MMP-7與多種癌癥(包括胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌等)的侵襲和轉(zhuǎn)移均有緊密聯(lián)系[14]。本研究中MMP-7蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達率均顯著高于正常黏膜組織，MMP-7蛋白的表達在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期上存在顯著差異，提示MMP-7與結(jié)直腸癌的進展密切相關(guān)。Survivin則是目前發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子，與細胞生長周期密切相關(guān)，可參與細胞周期有絲分裂的調(diào)控，最終抑制細胞凋亡[15]。本研究中Survivin蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達率顯著高于正常黏膜組織，Survivin蛋白的表達在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期上存在顯著差異，提示Survivin參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展以及惡性生長過程，與聶祝青等[16]的研究報道相符。

綜上所述，TCF-4、MMP-7和Survivin與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展有緊密聯(lián)系，三者可能參與了結(jié)直腸癌的惡性生長過程，可作為結(jié)直腸癌的早期診斷、靶向治療以及預(yù)后判斷的參考指標。

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(編輯：吳小紅)

The Expression of TCF-4,MMP-7 and Survivin in Colorectal Cancer

HUANGHuiyun.TheFirstAffiliatedHospitalofXi'anMedicalUniversity,Xi'an,710077

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of TCF-4,MMP-7 and survivin in colorectal cancer tissues and normal mucosa tissues,and its correlation with pathological features.MethodsColorectal cancer tissues 4 μm in 68 cases of patients with colorectal cancer were researched as the colorectal cancer group,serial section of 50 cases(from the colorectal cancer group) with 2 negative colorectal cancer margin of normal mucosa tissues 4 μm were number were the normal mucosa group.The expressions of TCF-4,MMP-7 and survivin in colorectal cancer tissues and normal mucosa tissues were compared,and the relationship between the expression of TCF-4,MMP-7,survivin and pathological features of colorectal cancer were analyzed.ResultsThe positive expression rates of TCF-4,MMP-7,survivin in colorectal cancer group were higher than those of the normal mucosa group(P<0.05);The expression of TCF-4,Survivin in in colorectal cancer tissues were related with lymph node metastasis and Dukes clinical stage (P<0.05);The expression of TCF-4,Survivin in in colorectal cancer tissues were not related with sex,age,tumor location,tumor size,pathological patterns,depth of invasion,differentiation,distant metastasis(P>0.05);The expression of MMP-7 was related with depth of invasion,lymph node metastasis,Dukes clinical stages(P<0.05);The expression of MMP-7 was not related with sex,age,tumor location,tumor size,pathological patterns,differentiation,distant metastasis (P>0.05).ConclusionThe expression of TCF-4,MMP-7,Survivin are related with development of colorectal cancer,and they are involved in the malignant growth of colorectal cancer.

【Key words】TCF-4;MMP-7;Survivin;Colorectal cancer;Pathological feature

(收稿日期2014-09-15修回日期 2015-04-07)

中圖分類號：R735.3+5

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)05-0665-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.011