p27和p21蛋白在早期喉癌及其切緣組織中的表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究

姚志源

作者單位:533000 廣西百色市人民醫(yī)院

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p27和p21蛋白在早期喉癌及其切緣組織中的表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究

姚志源

作者單位:533000 廣西百色市人民醫(yī)院

【摘要】目的探討p27和p21蛋白在早期喉癌及其切緣組織中的表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性。方法將手術(shù)治療的68例喉癌病例作為研究對象，對喉癌及其切緣組織中p27和p21蛋白的表達(dá)水平采用免疫組化檢測，分析其陽性表達(dá)率的差異性。收集患者臨床資料并進(jìn)行隨訪。結(jié)果p27在癌組織和切緣組織中的陽性表達(dá)率分別為41.18%和79.41%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。p21在癌組織和切緣組織中的陽性表達(dá)率分別為39.71%和22.06%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。p27和p21在喉癌組織的表達(dá)與分化程度及TNM分期無關(guān)(P>0.05)。隨訪2年，復(fù)發(fā)19例，復(fù)發(fā)率為27.94%。切緣組織中p27陽性表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率顯著低于陰性表達(dá)患者，p21陽性表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率顯著高于陰性表達(dá)患者(P<0.05)。結(jié)論p27和p21蛋白在喉癌組織和切緣組織中差異表達(dá)，聯(lián)合檢測早期喉癌及其手術(shù)切緣中p21和p27表達(dá)狀態(tài)，對喉癌預(yù)后判斷及治療方案選擇具有重要意義，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】喉鱗狀細(xì)胞癌；p27；p21；局部復(fù)發(fā)

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:662～664)

喉鱗狀細(xì)胞癌(簡稱喉癌)是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占全身惡性腫瘤的1%～5%，占頭頸部惡性腫瘤的3.3%～8.1%[1]。細(xì)胞增殖周期的失調(diào)被認(rèn)為在腫瘤的發(fā)生中具有重要作用，而細(xì)胞周期蛋白起著關(guān)鍵性作用。細(xì)胞周期蛋白主要通過調(diào)節(jié)激活的細(xì)胞周期素-細(xì)胞周期素依賴性激活酶復(fù)合體(cyclin-CDK復(fù)合體)的水平參與喉癌的發(fā)生發(fā)展[2-3]。p21和p27是細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶抑制因子(CDKIs)家族的重要成員，是細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控因子，在細(xì)胞周期調(diào)控中具有重要作用[4]。本文檢測早期喉癌患者中病灶組織及其切緣組織中p27和p21蛋白的表達(dá)水平，并分析其與局部復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1材料與方法

1.1一般資料

2002年1月-2014年1月于我院接受手術(shù)治療、臨床與病理資料齊全、術(shù)中留取了切緣標(biāo)本的68例喉癌病例，病理檢查結(jié)果均為早期鱗狀細(xì)胞癌。患者術(shù)前為接受放化療治療，其中男性54例，女性14例；年齡45～76歲，平均(56.7±13.8)歲；TNM分期均為T1期，其中T1a期43例，T1b期25例；高分化15例，中分化35例，低分化18例;聲門上型喉癌18例，聲門型37例，聲門下型13例?；颊呓邮蹸O2激光手術(shù)切除標(biāo)本，保留癌旁組織0.5 cm為手術(shù)切緣。

1.2方法

于術(shù)后2 h內(nèi)完成標(biāo)本取材，標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，梯度酒精脫水、石蠟包埋，備用。標(biāo)本4 μm連續(xù)切片6～7張，行常規(guī)病理檢查(HE，MASSON，PAS，PASM+MASSON)，采用高清晰度圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。采用Envision二步法進(jìn)行p27和p21蛋白表達(dá)定位及半定量分析。嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。標(biāo)本經(jīng)4 μm連續(xù)切片，置60 ℃烤箱60 min烤干。經(jīng)二甲苯脫蠟，酒精梯度水化至蒸餾水。3%過氧化氫室溫處理15 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，蒸餾水洗滌2 min，微波修復(fù)抗原10 min，滴加一抗：p27鼠抗人單克隆抗體和p21鼠抗人單克隆抗體，用PBS按1∶100稀釋，每張切片滴加稀釋的一抗50 μl，4 ℃孵育過夜。次日PBS沖洗切片3次，每次3～5 min。每張切片滴加二抗生物素化羊抗兔IgG 50 μl，在37 ℃恒溫箱孵育30 min。PBS沖洗切片3次，每次3～5 min。每張切片滴加DAB 50 μl顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，中性樹脂封片。陰性對照以PBS緩沖液代替一抗。

1.3結(jié)果判定

每張切片隨機(jī)抽取5個高倍鏡下視野，計算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。每個視野各計數(shù)100個細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)呈棕褐色或棕黃色為陽性細(xì)胞，根據(jù)染色程度與陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行判定，染色程度強(qiáng)、中、弱、陰性分別計為3、2、1、0分；陽性細(xì)胞數(shù)所占比例≥71%、31%～70%、6～30%、≤5%，分別計為3、2、1、0分；兩項得分之和≥4分為陽性[5]。

1.4隨訪

采用電話或門診隨訪的形式對68例患者每3個月隨訪一次，隨訪截止日期為2014年6月，對局部復(fù)發(fā)情況進(jìn)行記錄。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計分析所有資料采用SPSS 18.0進(jìn)行分析處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示并行t檢驗。

2結(jié)果

2.1p27和p21在喉癌組織和切緣組織中的表達(dá)

p27和p21在喉癌組織和切緣組織中的陽性表達(dá)率均具有顯著性差異(P<0.05)。見表1。

表1　p27和p21在喉癌組織和切緣組織中的陽性

2.2喉癌組織中p27和p21表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

p27和p21在喉癌組織表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表2。結(jié)果顯示，p27和p21在喉癌組織中的表達(dá)與分化程度及TNM分期無關(guān)(P>0.05)。

表2　p27和p21在喉癌組織表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3切緣組織中p27和p21表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的關(guān)系

隨訪2年，復(fù)發(fā)19例，復(fù)發(fā)率為27.94%。p27和p21在切緣組織中表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的關(guān)系見表3。結(jié)果顯示，切緣組織p27陽性表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率顯著低于陰性表達(dá)患者，p21陽性表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率顯著高于陰性表達(dá)患者(P<0.05)。

表3　p27和p21在切緣組織表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的關(guān)系

3討論

目前，手術(shù)是治療喉癌的主要措施，顯微鏡耦合CO2激光用于喉癌的治療取得了良好的效果，避免了患者手術(shù)行喉裂開的痛苦，顯著提高了患者的生活質(zhì)量，但復(fù)發(fā)仍不可避免，且手術(shù)切緣是否安全與復(fù)發(fā)明顯相關(guān)[6]。多數(shù)復(fù)發(fā)患者已失去手術(shù)機(jī)會，生存率低，預(yù)后差。

本組共納入68例早期喉癌患者，2年內(nèi)隨訪共19例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為27.94%，表明術(shù)后病理學(xué)檢查仍存在一定的局限性。腫瘤的異質(zhì)性導(dǎo)致病理表現(xiàn)相似的患者術(shù)后預(yù)后差異較大[7]。因此，探討腫瘤的生物學(xué)指標(biāo)，尋找在腫瘤組織中與正常組織中差異表達(dá)的分子標(biāo)記物，對臨床研究具有重要的指導(dǎo)意義。本文檢測喉癌組織及切緣組織中的p27和p21蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)p27在癌組織和切緣組織中的陽性表達(dá)率分別為41.18%和79.41%，其在喉癌組織呈低表達(dá)水平，具有顯著性差異(P<0.05)；發(fā)現(xiàn)p21在癌組織和切緣組織中的陽性表達(dá)率分別為39.71%和22.06%，其在喉癌組織呈高表達(dá)水平，具有顯著性差異(P<0.05)。劉宏俠等[2]報道稱p27蛋白在喉癌、癌旁組織及喉良性病變中陽性率分別為43.5%、84.7%和89.9%，而p21蛋白陽性率分別為38.8%、21.2%和3.8%，與本文結(jié)果一致。

p27基因是一種細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，屬于抑癌基因家族，其表達(dá)水平的降低會導(dǎo)致細(xì)胞周期失調(diào)，S期細(xì)胞增多，DNA 合成增強(qiáng)，細(xì)胞過度增生。研究證實，p27在多種癌癥中呈低表達(dá)水平，如胃癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌等[8]。p21基因?qū)儆贑IP家族，可以通過細(xì)胞周期調(diào)控作用間接參與細(xì)胞凋亡，同時可直接導(dǎo)致細(xì)胞異化或惡變和正性調(diào)節(jié)細(xì)胞依賴性激酶功能[4]。國內(nèi)外多項研究表明，p27蛋白表達(dá)的降低或缺失與不良預(yù)后密切相關(guān)，p21陽性表達(dá)與臨床淋巴結(jié)分期、復(fù)發(fā)及較差的預(yù)后相關(guān)[2,4,9]。本研究發(fā)現(xiàn)，p27和p21在喉癌組織中的表達(dá)與分化程度及TNM分期無關(guān)(P>0.05)。切緣組織中p27陽性表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率顯著低于陰性表達(dá)患者，p21陽性表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率顯著高于陰性表達(dá)患者(P<0.05)，提示p27與喉癌復(fù)發(fā)率呈負(fù)相關(guān)，p21與喉癌復(fù)發(fā)率呈顯著正相關(guān)。因此，p27和p21有望成為喉癌預(yù)后判斷及治療方案選擇的重要標(biāo)志物。

綜上所述，p27和p21蛋白在喉癌組織和切緣組織中差異表達(dá)，聯(lián)合檢測早期喉癌及其手術(shù)切緣中p21和p27表達(dá)狀態(tài)，對喉癌預(yù)后判斷及治療方案選擇具有重要的指導(dǎo)意義，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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(編輯：甘艷)

Correlation between Local Recurrence and p27,p21 Protein Expression in Laryngeal

Carcinoma and Its Surgical Margins

YAOZhiyuan.BaisePeople'sHospital,Baise,533000

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between local recurrence and p27,p21 protein expression in laryngeal carcinoma and its surgical margins.Methods68 cases of patients after operation were detected for p27,p21 protein expression in laryngeal carcinoma and its surgical margins using immunohistochemical method.Clinical data of all patients were collected and follow-up was made.Resultsp27 protein positive expression rate in laryngeal carcinoma and its surgical margins were 41.18% and 79.41%,respectively,presenting lower expression level in laryngeal carcinoma,there had significant difference (P<0.05).p21 protein positive expression rate in laryngeal carcinoma and its surgical margins were 39.71% and 22.06%,respectively,presenting higher expression level in laryngeal carcinoma,there had significant difference (P<0.05).p27,p21 protein expression and differentiation were not related with TNM stage(P>0.05).During 2-year follow-up,19 cases showed recurrence,account for 27.94%.Recurrence rate of patients with p27 positive expression was significantly lower than that of patients with p27 negative expression.Recurrence rate of patients with p21 positive expression was significantly higher than that of patients with p27 negative expression (P<0.05).Conclusionp27,p21 protein expression have significantly difference between laryngeal carcinoma and its surgical margins.Combined detection of p27,p21 protein is important in evaluating prognosis and treatment method and it is worthy of clinical application.

【Key words】Laryngeal squamous cell carcinoma;p27;p21;Local recurrence

(收稿日期2014-09-17修回日期 2015-03-25)

中圖分類號：R739.65

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)05-0662-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.010