雌孕激素在人上皮性卵巢癌裸鼠模型中的實驗研究分析

王　藝　陳金石　魏晚霞　李隆玉

?

·基礎(chǔ)研究·

雌孕激素在人上皮性卵巢癌裸鼠模型中的實驗研究分析

王藝陳金石魏晚霞李隆玉

【摘要】目的分析雌孕激素在人上皮性卵巢癌裸鼠模型中的實驗研究。方法建立上皮性卵巢癌裸鼠模型30只,裸鼠隨機分為三組：雌激素組(A 組)10只、雌孕激素聯(lián)合組(B 組)10只、對照組(C組)10只；分別肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液0.06 ml、苯甲酸雌二醇注射液0.06 ml聯(lián)合黃體酮注射液0.06 ml、滅菌油劑0.06 ml，每3天給藥及測量和記錄裸鼠體重、腫瘤體積等指標(biāo)，給藥3周后取血檢測血清腫瘤標(biāo)記物Ca125。結(jié)果3組腫瘤重量、體積比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；3組裸鼠體重比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；3組肝、脾、網(wǎng)膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；3組血清腫瘤標(biāo)記物Ca125值比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論雌激素可促進(jìn)裸鼠腫瘤組織的生長，雌孕激素聯(lián)合不增強裸鼠腫瘤組織的生長，且均不改變血清腫瘤標(biāo)記物Ca125水平。

【關(guān)鍵詞】人上皮性卵巢癌；雌激素；孕激素；Ca125

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:633～635)

上皮性卵巢癌死亡率居婦科腫瘤首位,此類患者日趨年輕且治療后的圍絕經(jīng)期癥狀嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量。激素替代治療能明顯改善圍絕經(jīng)期綜合征，但存在的問題是使用激素是否會增加卵巢癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的風(fēng)險尚不明確。本文建立人上皮性卵巢癌裸鼠模型,通過對人上皮性卵巢癌裸鼠模型使用激素與未使用激素的比較，明確雌孕激素的干預(yù)是否會導(dǎo)致人上皮性卵巢癌裸鼠模型病情進(jìn)展、病灶轉(zhuǎn)移，為卵巢癌患者激素治療的可行性及安全性評價提供可靠依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物BALB/Cnu-nu 小鼠,SPF 級,由國家噬齒類種子中心中國藥品生物制品檢驗所實驗動物中心提供,合格證號:SCXK(京) 2005-004。實驗動物飼養(yǎng)在江西省藥物研究所IVC 籠具內(nèi),使用許可證SYXK(贛) 2008-0005。雌性,鼠齡8～10 周齡,體重18～22 g,SPF 級。飼料由江西省飼料生產(chǎn)基地提供,飼料、飲水、墊料均經(jīng)高壓蒸汽滅菌121 ℃,20 min,取出墊料再放入電熱鼓風(fēng)干燥箱干燥后使用。水和飼料自由飲食。按江西省實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)的方案進(jìn)行實驗。

1.1.2實驗藥物與試劑苯甲酸雌二醇注射液、黃體酮注射液購自天津市顴洋生物制品科技有限責(zé)任公司(美國 Santa Cruz公司產(chǎn)品)；血Ca125檢測試劑盒購自武漢市伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1實驗動物模型的構(gòu)建將人卵巢癌實體瘤皮下移植裸鼠成功的實體瘤剪碎后，通過裸小鼠背部將瘤塊置于裸小鼠卵巢上。實現(xiàn)實體瘤原位移植裸鼠模型的建立。重復(fù)上述手術(shù),進(jìn)行實體瘤傳代。得到穩(wěn)定的人卵巢癌實體瘤原位移植裸鼠模型。取8～10周齡裸鼠30只，進(jìn)行接種，速眠新合劑按0.5 mg/kg劑量腹腔注射麻醉，將已穩(wěn)定傳代的人卵巢癌實體瘤原位移植裸鼠處死、剝離皮下腫瘤，選擇生長良好、無壞死、呈淡黃色、魚肉狀瘤組織，剪成1～2 mm大小組織塊，消毒已麻醉裸鼠右肩胛部皮膚，剪一長約5 mm小口，由破口處在皮下分離出一小腔隙，用眼科鑷將腫瘤組織塊送入腔隙內(nèi)，縫合，再次消毒，放回IVC 籠具內(nèi)。接種腫瘤后的裸鼠一周后分組給藥。

1.2.2血清CA125 的檢測方法裸鼠采用摘眼球法取血，血清 CA125 采用ELISA測定方法。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。3組裸鼠體重、腫瘤重量、腫瘤體積、血清 CA125值比較采用方差分析；肝、脾、淋巴結(jié)、網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移采用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

2結(jié)果

2.1裸鼠移植瘤生長、轉(zhuǎn)移的影響

將30只裸鼠隨機分為雌激素組(A 組)、雌孕激素聯(lián)合組(B 組)及對照組(C組)。接種腫瘤后的裸鼠一周后分組給藥共21天，比較3組裸鼠體重、腫瘤重量、腫瘤體積和腫瘤轉(zhuǎn)移狀況。3組裸鼠體重比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；腫瘤重量A組與B、C組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，而B組與C組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；腫瘤體積A組與B、C組間有差異(P<0.05)，而B、C組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；3組肝、脾、網(wǎng)膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),見表1～2。

2.2血清 CA125檢測結(jié)果

3組血清 CA125表達(dá)水平比較無顯著性差異P=0.36，見表3。

表1　3組裸鼠體重、腫瘤重量、腫瘤體積比較

A、 B、C三組裸鼠體重比較，P=0.292；腫瘤重量比較，P=0.0001；腫瘤體積比較，P=0.0001。

表2　3組肝、脾、淋巴結(jié)、網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移情況比較/例

注：實驗過程中A組有1只裸鼠死亡，B組有2只裸鼠死亡。

表3　3組用藥前后血清 CA125值的比較

A、 B、C三組用藥前后血清 CA125表達(dá)水平比較無顯著性差異，P>0.05。

3討論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中死亡率最高的腫瘤，其中上皮性卵巢癌是最常見的卵巢惡性腫瘤，約占90%，平均5年生存率為30%～40%[1-2]。上皮性卵巢癌患者除了忍受各種治療所帶來的痛苦外，還要經(jīng)歷接受治療后因雌激素降低所引起的圍絕經(jīng)期不適，如潮熱多汗、煩躁失眠等。如何提高此類患者治療后的生存質(zhì)量問題日益受到重視。激素替代治療(HRT) 應(yīng)運而生，對這些患者實施HRT，可以緩解其生理和心理不適，提高其生活質(zhì)量。但存在的問題是使用激素是否會增加卵巢癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的風(fēng)險尚不明確，其安全性問題一直受到關(guān)注。且多數(shù)婦科惡性腫瘤，如子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等的發(fā)生發(fā)展與雌激素密切相關(guān)，因此，HRT[3-8]是否會增加腫瘤的復(fù)發(fā)和患者的病死率，一直是婦科腫瘤醫(yī)生顧慮和擔(dān)心的問題。

雌激素致腫瘤作用的確切機制目前尚不清楚，揭示雌激素介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生途徑，有助于從根本上解決雌激素的潛在致癌作用。本實驗對上皮性卵巢癌裸鼠模型,分別給予苯甲酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液聯(lián)合黃體酮注射液與注射用滅菌油劑，治療21 天，發(fā)現(xiàn)苯甲酸雌二醇注射液組與對照組相比，注射苯甲酸雌二醇注射液組裸鼠模型腫瘤重量更重、腫瘤體積更大，腫瘤重量、腫瘤體積在兩組間有顯著性差異，而苯甲酸雌二醇注射液聯(lián)合黃體酮注射液組與對照組相比無顯著性差異。研究表明使用雌激素組促進(jìn)上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植腫瘤的生長，而雌孕激素聯(lián)合組不增加裸鼠皮下移植腫瘤的生長。同時研究還發(fā)現(xiàn)3組肝、脾、網(wǎng)膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無統(tǒng)計學(xué)差異，表明組織轉(zhuǎn)移與單用雌激素及雌孕激素聯(lián)合應(yīng)用無相關(guān)性。

我們在實驗中采用放射免疫測定方法，檢測裸鼠模型血清CA125值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3組用藥前后血清 CA125值的比較無統(tǒng)計學(xué)差異，說明雌孕激素的干預(yù)對裸鼠模型血清CA125[9-10]的表達(dá)無影響。

此為動物實驗，人和動物有物種差別，藥物在鼠體內(nèi)的代謝和人可能存在一定差異，但移植瘤是人上皮性卵巢癌，其結(jié)果接近人體情況[11]，本研究從腫瘤大體變化和分子生物學(xué)水平兩個層次，為雌孕激素在卵巢癌患者中應(yīng)用提供了研究基礎(chǔ)。但需進(jìn)行大樣本前瞻性臨床研究才能最后證實雌孕激素聯(lián)合應(yīng)用在卵巢癌患者中的安全性。

參考文獻(xiàn)

[1]Permuth-WeyJ,Sellers TA.Epidemiology of ovarian cancer〔J〕.Methods Mol Biol,2009,472:413-437.

[2]曹澤毅,主編.婦科常見腫瘤診治指南〔M〕.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:72.

[3]Li L,Pan Z,Gao K,et al.Impact of post-operative hormone replacement therapy on life quality and prognosis in patients with ovarian malignancy 〔J〕.Oncol Lett,2012,3(1):244-249.

[4]Tsilidis KK,Allen NE,Key TJ,et al.Menopausal hormone therapy and risk of ovarian cancer in the European prospective investigation into cancer and nutrition 〔J〕.Cancer Causes Control,2011,22(8):1075-1084.

[5]Morch LS,Lokkegaard E,Andreasen AH,et al.Hormone therapy and ovarian cancer〔J〕.JAMA,2009,302:298-305.

[6]Zhou B,Sun Q,Cong R,et al.Hormone replacement therapy and ovarian cancer risk:a meta-analysis〔J〕.Gynecol Oncol,2008,108(3):641-651.

[7]傅榮，韓克.激素替代治療與卵巢癌關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2010，26(2)：146-148.

[8]李麗，瑪依努爾·尼亞孜，鮑彥平，等.圍絕經(jīng)婦女激素替代治療與婦科腫瘤關(guān)系的回顧分析〔J〕.中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2010，26(11)：849-852.

[9]Vignot S，Brochet C，Debord C，et al.Potential value of C-

A125 kinetic monitoring in the initial management of advanced epithelial ovarian cancer 〔J〕.Ann Biol Clin，2011，69 (5):597-604.

[10]Fleming ND，Cass I，Walsh CS，et al.CA125 surveillance i-

ncreasesoptimal resectability at secondary cytoreductive surgery for recurrent epithelial ovarian cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2011，121 (2):249-252.

[11]褚芳,何國平,李啟富，等.人卵巢癌裸鼠移植實體瘤模型的建立〔J〕.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008,18(8)：33-37.

(編輯：吳小紅)

Analysis of Estrogen and Progesterone in Human Epithelial Ovarian Cancer

in Nude Mice Model

WANGYi,CHENJinshi,WEIWanxia,etal.JiangxiMaternalandChildHealthHospital,Nanchang，330006

【Abstract】ObjectiveTo study the estrogen and progesterone in human epithelial ovarian cancer xenograft in nude mice.Methods30 nude mice model of epithelial ovarian cancer were randomly divided into 3 groups,the estrogen group (group A) 10 rats,estrogen and progesterone combination group (group B) 10 rats，the control group (group C) 10 rats;3 groups received intramuscular injection of estradiol benzoate 0.06 ml,0.06 ml estradiol benzoate injection combined with progesterone injection 0.06ml,sterilization oil 0.06ml,respectively,administered every 3 days,and weight of nude mice,tumor volume and other indicators,blood serum tumor marker Ca125 after 3 weeks were measured and recorded.ResultsThere were statistical differences among the 3 groups in tumor weight and volume(P<0.05);There were no statistical differences among the 3 group s in nude body weight(P>0.05);There were no statistical differences among the 3 groups in liver,spleen,omentum,and lymph node metastasis(P>0.05);There were no statistical differences among the 3 groups in serum tumor marker Ca125 (P>0.05).ConclusionEstrogen can promote the growth of tumors in nude mice,estrogen and progesterone combined group does not increase tumor growth in nude mice,and does not change expression of serum tumor marker Ca125 level.

【Key words】Human epithelial ovarian cancer;Estrogen；Progesterone;Ca125

(收稿日期2014-09-09修回日期 2014-12-05)

中圖分類號：R737.31

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)05-0633-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.001

通訊作者：李隆玉

基金項目：江西省自然科學(xué)基金(編號：20114BAB205013)
作者單位:330006 江西省婦幼保健院