小兒薄荷酚洗劑的薄層色譜及HPLC鑒別研究

范永春，孫 晶，曾白林，何丹丹

(1.江蘇省中醫(yī)藥研究院，南京 210028； 2江蘇海智生物醫(yī)藥有限公司，南京 210061)

1.樟腦

1-3.樣品 4-5.薄荷腦對(duì)照品 6.陰性對(duì)照

1-3.樣品 4.陰性對(duì)照 5.苯酚對(duì)照品

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小兒薄荷酚洗劑的薄層色譜及HPLC鑒別研究

范永春1，孫 晶2，曾白林1，何丹丹1

(1.江蘇省中醫(yī)藥研究院，南京 210028； 2江蘇海智生物醫(yī)藥有限公司，南京 210061)

目的：建立小兒薄荷酚洗劑的薄層色譜及HPLC鑒別方法，為制定其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：采用薄層色譜法鑒別制劑中薄荷腦、苯酚，采用HPLC鑒別制劑中樟腦。結(jié)果：薄荷腦、苯酚的薄層色譜具有鑒別特征，斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾，樟腦的HPLC圖譜分離度好，陰性無(wú)干擾。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)單，具有良好的重現(xiàn)性和專屬性，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

小兒薄荷酚洗劑，薄層色譜鑒別，HPLC鑒別，質(zhì)量控制

小兒薄荷酚洗劑是本院自制的醫(yī)院制劑，由樟腦、薄荷腦和苯酚組成，具有清涼止癢作用，臨床上用于小兒痱子及汗疹。原制劑標(biāo)準(zhǔn)中僅有簡(jiǎn)單的理化鑒別，且重現(xiàn)性不是太好，為了更好地控制該制劑質(zhì)量，筆者采用薄層色譜和HPLC法對(duì)其中的薄荷腦、苯酚和樟腦進(jìn)行定性鑒別?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

202-O型電熱恒溫干燥箱(上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠)；BS 124S萬(wàn)分之一電子分析天平(Sartorius,德國(guó))；waters高效液相色譜儀(Waters2996型PDA檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司)；玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠)。硅膠G(薄層層析用，青島海洋化工有限公司)；薄荷腦對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)110728-200508)、苯酚對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)100509-201203)、樟腦對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)110747-201409)，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；小兒薄荷酚洗劑(江蘇省中醫(yī)藥研究院制劑室生產(chǎn)，批號(hào)14029)；薄層色譜所用試劑均為分析純，HPLC所用試劑均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 樟腦的鑒別[1]

2.1.1 液相色譜條件 儀器：waters2996型高效液相色譜儀，PDA檢測(cè)器，色譜柱：waters symmetry C18(150 mm×3.9 mm，5 μm),甲醇-水(70∶30)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為288 nm，流速：1 ml/min，柱溫：30 ℃。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品1 ml，加入10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照液的制備 取未加樟腦的陰性制劑，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.4 對(duì)照品溶液的制備 取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含0.6 mg的溶液， 作為對(duì)照品溶液。

2.1.5 HPLC法鑒別 照高效液相色譜法[《中國(guó)藥典》2010年版(二部)附錄ⅤD]試驗(yàn)，分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl，注入液相色譜儀。供試品呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

1.樟腦

圖1 對(duì)照品(A)

供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC色譜圖

2.2 薄荷腦鑒別[2-3]

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品40 ml，放入500 ml圓底燒瓶中，加水100 ml，連接揮發(fā)油提取器，自提取器上端加水至刻度，再加入石油醚(60～90 ℃)4 ml，連接冷凝管回流40 min，放冷，取揮發(fā)油提取器中石油醚上清液，作為供試品溶液。

2.2.2 陰性對(duì)照液的制備 取未加薄荷腦的陰性制劑40 ml，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取薄荷腦對(duì)照品適量，精密稱定，加石油醚制成每1 ml約含8.0 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.4 薄層色譜 照薄層色譜法[《中國(guó)藥典》2010年版(二部)附錄ⅤB]試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯(9∶2)為展開(kāi)劑，預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，取出并晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液顯色，90 ℃加熱到斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

1-3.樣品 4-5.薄荷腦對(duì)照品 6.陰性對(duì)照

圖2 薄荷腦的薄層色譜圖譜

2.3 苯酚的鑒別[4]

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品30 ml，置分液漏斗中，加石油醚(60～90 ℃)30 ml，振搖提取，取下層水液作為供試品溶液。

2.3.2 陰性對(duì)照液的制備 取未加苯酚的陰性制劑30 ml，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 取苯酚對(duì)照品適量，精密稱定，加三氯甲烷制成每1 ml約含12.0 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.4 薄層色譜 照薄層色譜法[《中國(guó)藥典》2010年版(二部)附錄ⅤB]試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μl，對(duì)照品溶液5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(17∶3)為展開(kāi)劑，預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，取出并晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛40%硫酸乙醇溶液顯色，90 ℃加熱到斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的紅色斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

1-3.樣品 4.陰性對(duì)照 5.苯酚對(duì)照品

圖3 苯酚的薄層色譜圖

3 討論

樟腦的鑒別中，以苯-乙酸乙酯(9∶2)為展開(kāi)劑展開(kāi)，用5%香草醛硫酸溶液顯色，則樟腦斑點(diǎn)未能看到，用10%磷鉬酸乙醇溶液顯色，樟腦斑點(diǎn)呈微弱的淺黃色，幾乎看不到，沒(méi)有看到文獻(xiàn)中報(bào)道的藍(lán)色及其他顏色的斑點(diǎn)。而氣相色譜法鑒別較為復(fù)雜[5]，故改用高效液相色譜法，方法簡(jiǎn)便可靠，有利于樟腦的定性鑒別。

薄荷腦的鑒別中，先后以苯-乙酸乙酯(9∶2)和正己烷-乙酸乙酯(85∶15)為展開(kāi)劑，苯酚和薄荷腦分離度較差，后改用不同比例和不同試劑的展開(kāi)劑，均未得到理想的分離效果。筆者改變提取方法，利用薄荷腦較易揮發(fā)，而苯酚沸點(diǎn)(182 ℃)較高的特性，采用揮發(fā)油提取器提取薄荷腦，取揮發(fā)油提取器中石油醚上清液作為供試液，從而使其得到分離。若用圓底燒瓶中的水液進(jìn)行苯酚的薄層色譜鑒別，仍有部分的薄荷腦產(chǎn)生干擾。在進(jìn)行加熱顯色時(shí)，加熱時(shí)間較長(zhǎng)(7～10 min)才會(huì)出現(xiàn)薄荷腦的斑點(diǎn)。

對(duì)于苯酚的鑒別，利用苯酚在水中溶解，在石油醚中幾乎不溶解，而薄荷腦在石油醚中溶解，在水中不溶解的性質(zhì)，以石油醚加以萃取，取下層水液作為供試液加以分離。

1 宗永輝，余佳.高效液相色譜法測(cè)定硫樟腦涂劑中樟腦含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(15)：1316-1317

2 張錦. 復(fù)方滴鼻液中薄荷腦與樟腦的鑒別[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006,26(5)：635

3 余昶，蔣仁發(fā)，黃文進(jìn).復(fù)方軟膏中薄荷腦和樟腦鑒別方法的改進(jìn)[J].海峽藥學(xué)，2007,19(3):55-56

4 陳祥勝，張長(zhǎng)濱. 祛瘀止痛酊的薄層定性鑒別[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005,7(3)：30-31

5 管中玉，趙吉平.跌傷靈貼膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2011,33(4)：74

2015-06-23

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1006-5687(2015)05-0020-02