百花花楸活性成分季節(jié)變化研究

柴軍紅，宛春雷，郝經(jīng)緯，孫雪芳

(牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江牡丹江157011)

百花花楸活性成分季節(jié)變化研究

柴軍紅，宛春雷，郝經(jīng)緯，孫雪芳

(牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江牡丹江157011)

研究百花花楸活性成分季節(jié)變化，以期為百花花楸活性成分藥用價(jià)值開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。以百花花楸不同季節(jié)枝、葉、果為原料，采用化學(xué)系統(tǒng)鑒別法及紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)總黃酮、總多糖、總萜進(jìn)行定量。百花花楸不同部位化學(xué)成分有一定區(qū)別，主要在皂苷、蒽醌、及甾醇類；隨季節(jié)總黃酮、總多糖及總萜有一定變化，一般來(lái)說(shuō)7、8、9月為最佳采摘季節(jié)。百花花楸活性成分季節(jié)變化較為明顯，且常見(jiàn)活性成分含量較高，尤其果實(shí)和葉，有一定食用及藥用價(jià)值。

百花花楸；活性成分；季節(jié)變化

花楸(Sorbuspohuashanensis)為薔薇科(Roseceae)花楸屬植物，常用于治療肺結(jié)核、哮喘、咳嗽、胃痛等癥?；ㄩ比~中富含三萜類、甾醇類、黃酮類、胡蘿卜烴類、二聯(lián)苯類和木脂素類、生氰苷類、有機(jī)酸類、花楸酸及其苷類化合物[1-4]，除以上各種化合物外，花楸屬植物中還含有烷(醇)類，間苯三酚，D-山梨酸，氨基酸和維生素C[5-7]等成分。其中黃酮類、萜類、多糖是主要活性物質(zhì)。藥理作用上表現(xiàn)為有強(qiáng)抗氧化、抗癌、抗輻射和止咳平喘等[6-10]作用，因而引起國(guó)內(nèi)外的研究和關(guān)注，但是無(wú)論作為食用或藥用，對(duì)其采摘季節(jié)研究較少，尤其是其活性成分隨季節(jié)變化研究就更少了，為此本文從花楸樹(shù)不同季節(jié)入手，對(duì)花楸的葉，莖，果利用系統(tǒng)鑒別法及紫外分光光度法[11-12]進(jìn)行了定性、定量研究，以期為花楸開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。本文以牡丹江產(chǎn)花楸(經(jīng)牡丹江師范學(xué)院曲秀春教授鑒定為百花花楸Sorbuspohuashanensis(Hance) Hedl，標(biāo)本現(xiàn)存于牡丹江師范學(xué)院-生命學(xué)院標(biāo)本室)為原料，在不同季節(jié)采摘花楸的葉，莖，果，陰干，粉碎作為實(shí)驗(yàn)材料。以黃酮類、萜類、多糖為主要定量指標(biāo)，采用系統(tǒng)鑒別法進(jìn)行成分鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

苯酚(AR)、濃硫酸(AR)、葡萄糖(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)、工業(yè)酒精(98%)、活性碳、Savage試劑，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品>99%(貴州迪大生物技術(shù)公司)，甲醇(AR)三氯甲烷(AR)，鹽酸(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)，熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品>98%(中國(guó)生物制劑公司，HPLC級(jí))，硫酸銅(AR)，香草醛(AR，遼寧世星藥化)，高氯酸(AR)，硼酸溶液(AR)，三氯化鐵(AR)，氨水(AR)，明膠，醋酸鎂(AR)， 茚三酮(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)，酒石酸鉀鈉(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)，溴酚藍(lán)(AR)，硅鎢酸(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)，碘(AR，遼寧世星藥化)，碘化鉀，鞣酸(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)，醋酐(AR，沈陽(yáng)試劑三廠)，三氯醋酸(AR，遼寧世星藥化)等，以上未標(biāo)出試劑為天津大茂化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

HH-6恒溫水浴鍋(金壇市友聯(lián)儀器研究所)，F(xiàn)Z102植物粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器公司)，UV-2010紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日立)，PHS-25型PH計(jì)(上海雷磁)，BS214D電子天平(德國(guó)賽多利斯)，RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮)，SL-2010N超聲波萃取裝置(南京順流)等。

1.3 方法(系統(tǒng)化學(xué)檢測(cè)方法)

中草藥所含化學(xué)成分均為多類的混合物，分析時(shí)常?；ハ喔蓴_，不易得到正確結(jié)果。因此需根據(jù)中草藥所含各種化學(xué)成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質(zhì)，再用各類成分的鑒別反應(yīng)加以鑒別。本文主要采用一些經(jīng)典的化學(xué)鑒別法[2]，如：氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)的鑒別采用：雙縮脲反應(yīng)，茚三酮法；糖、多糖的檢測(cè)采用：Molish紫環(huán)反應(yīng)，F(xiàn)ehling反應(yīng)等。預(yù)試溶液的制備如下：

水提取液的制備：分別稱取不同時(shí)期花楸不同部位的干粉5g，加入100mL蒸餾水，80℃下水浴提取1h，過(guò)濾，用于測(cè)定氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)、單糖、多糖、皂苷、酚類、鞣質(zhì)等成分。

乙醇提取液的制備：分別稱取不同時(shí)期花楸不同部位的干粉5g，加入100mL 75%乙醇，85℃下水浴回流提取2h，過(guò)濾，用于測(cè)定類黃酮、蒽醌、香豆素、萜類、內(nèi)酯、甾體化合物等成分。

乙醚提取液的制備：分別稱取不同時(shí)期花楸不同部位的干粉5g，加入50mL乙醚，超聲波處理20min,濾液加活性炭脫色，濃縮，用于測(cè)定內(nèi)脂、油脂和揮發(fā)油等成分。

以上所得濾液，分別進(jìn)行鑒別不同時(shí)期花楸不同部位是否含有氨基酸、蛋白質(zhì)、糖類、酚類、有機(jī)酸、黃酮類、生物堿、強(qiáng)心苷、揮發(fā)油、蒽醌、萜類(皂苷)、植物甾醇等，其結(jié)果見(jiàn)表1。

1.4 活性成分測(cè)定方法

1.4.1 總黃酮測(cè)定方法。本文采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法[13]。樣品含量測(cè)定,以70%乙醇作為提取劑，超聲波處理30min,溫度70℃，功率200W，提取液回收乙醇，濃縮至原體積1/10，取50%乙醇定容至100mL容量瓶中，移取1mL母液于25mL比色管依據(jù)前法測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)圖1。

1.4.2 多糖測(cè)定方法。本文采用硫酸-苯酚法[14]測(cè)定多糖含量。樣品含量測(cè)定以30%乙醇作為提取劑，超聲波處理30min,溫度80℃，功率100W，提取液，濃縮至原體積1/10，加入乙醇沉淀過(guò)夜，離心，Savage試劑除蛋白，溶解并定容至100mL容量瓶中，移取2mL母液于25mL比色管依據(jù)前法測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)圖2。

1.4.3 萜類測(cè)定方法。此外花楸富含萜類化合物，所以將萜類化合物作為主要成分之一，本文采用5%香草醛-冰乙酸和高氯酸為顯色法[15]。樣品含量測(cè)定以氯仿為提取劑，回流提取2h，濃縮至原體積1/10，取氯仿定容至100mL容量瓶中，移取1mL母液于25mL比色管依據(jù)香草醛-冰乙酸和高氯酸法測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)圖2。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)化學(xué)檢測(cè)方法結(jié)果

本文主要針對(duì)7、8月份所采摘的枝、葉、果進(jìn)行以上實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果表明，花楸樹(shù)的不同部位其活性成分有一定區(qū)別，主要是皂苷及蒽醌類化合物，枝含有皂苷，有可能是萜類皂苷，葉中有可能含有，果實(shí)中不含有；此外枝中含有蒽醌類，有可能是大黃素類，枝、葉則不含有；8月的果實(shí)中有甾醇反應(yīng)，估計(jì)為谷甾醇。其中黃酮、有機(jī)酸、生物堿、多糖、萜等為大家共有成分。為了進(jìn)一步研究成分季節(jié)變化，選取相對(duì)含量較大黃酮、多糖、萜主要成分進(jìn)行進(jìn)一步討論。

表1 化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試結(jié)果

注：“+”代表該部位含有相應(yīng)的化學(xué)成分；“-”代表該部位不含有相應(yīng)的化學(xué)成分。

2.2 活性成分標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)1.4.1方法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁對(duì)照品在0.11～0.67mg/mL，線性關(guān)系良好。其回歸方程為Y=0.573x+0.0168,R2=0.9992。

2.2.2 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)1.4.2方法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，葡萄糖在2.336～23.356μg/mL，線性關(guān)系良好。其回歸方程為Y=0.0175x+0.0176 ,R2=0.9993。

2.2.3 萜類標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)1.4.3 方法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，熊果酸對(duì)照品在10～60μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。其回歸方程為Y=0.0338x+0.0271，R2=0.9994。

2.3 活性成分測(cè)定結(jié)果

2.3.1 總黃酮季節(jié)變化

圖1 總黃酮季節(jié)變化結(jié)果

2.3.2 多糖季節(jié)變化

圖2 多糖季節(jié)變化結(jié)果

2.3.3 總萜季節(jié)變化

圖3 總萜季節(jié)變化結(jié)果

2.4 分析

本文通過(guò)系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)及定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：花楸不同部位成分存在一定差異，且隨著季節(jié)明顯呈現(xiàn)一定規(guī)律性差異，這可能與東北地區(qū)氣候有明顯關(guān)系。牡丹江地區(qū)每年3～4份基本植物才開(kāi)始發(fā)芽，10月份后生長(zhǎng)將會(huì)變得緩慢，晝夜溫差大，很大程度上影響植物的次生代謝。

本文僅僅做了初步研究，發(fā)現(xiàn)本地百花花楸果實(shí)、葉與枝的活性具有一定的區(qū)別，且隨著季節(jié)變化，呈現(xiàn)不同程度的變化。筆者認(rèn)為這可能與植物種屬有密切關(guān)系，如：多糖、黃酮一般來(lái)說(shuō)主要集中在果實(shí)或葉中，尤其薔薇科[16]，加上地域氣候特點(diǎn)，在7、8、9月易出現(xiàn)高溫天氣，這尤其利于黃酮積累，其他成分由于有溫差大所以有利用多糖、萜、有機(jī)酸轉(zhuǎn)化積累。

3 結(jié)論

百花花楸活性成分季節(jié)變化較為明顯，且常見(jiàn)活性成分含量較高，尤其果實(shí)和葉，存在將其開(kāi)發(fā)成保健品或藥用材料潛質(zhì)。百花花楸作為園林用樹(shù)，廣泛分布在東北很多地區(qū)，資源豐富，且活性成分明確，有好的開(kāi)發(fā)潛力。

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Study on Active Component ofSorbuspohuashanensisin Different Seasons

Chai Junhong1, Wan Chunlei，Hao Jingwei, Sun Xuefang

(School of Life Science and Technology，Mudanjiang normal university, Mudanjiang，Heilingjiang 157011)

Study on active component ofSorbuspohuashanensisin different seasons. it is expected to be promoted to active ingredients ofSorbuspohuashanensisto provide theoretical basis.branch、leaves and fruit ofSorbuspohuashanensiswas used as raw material, Using the preliminary test of chemical constituents, Determination of total flavonoids, polysaccharides, total terpene by UV-Vis.There is certain difference in active component in Various Organs ofSorbuspohuashanensis. such as saponins,anthraquinone and sterol. There is certain change of content of total flavonoids, polysaccharides, total terpene in different seasons, Optimally picking in July, Aug and Sept. active component ofSorbuspohuashanensishave obvious seasonal variation, the content active component is higher, In particular, fruit and leaves, there are certain edible and medicinal value.

Sorbuspohuashanensis；Active component；The seasonal change

2014-11-06

牡丹江師范學(xué)院青年學(xué)術(shù)骨干資助計(jì)劃項(xiàng)目(G201211)；牡丹江師范學(xué)院制藥工程人才培養(yǎng)項(xiàng)目(2013JCZX0063；牡丹江師范學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(MSY12XCbx075)

柴軍紅：(1982-)，男，碩士，講師，主要研究方向：天然產(chǎn)物的分離及應(yīng)用研究，E-mail:swxcjh@126.com。

TQ460.1 S567.9

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.02.002