異補(bǔ)骨脂素抑制MRP2、MRP3所致的HepG2細(xì)胞內(nèi)膽汁酸蓄積和毒性

周 昆，畢亞男，史 紅

（天津中醫(yī)藥大學(xué)1．中醫(yī)藥研究院、2．方劑學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

異補(bǔ)骨脂素抑制MRP2、MRP3所致的HepG2細(xì)胞內(nèi)膽汁酸蓄積和毒性

周 昆1，2，畢亞男1，史 紅1，2

（天津中醫(yī)藥大學(xué)1．中醫(yī)藥研究院、2．方劑學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

中國(guó)圖書分類號(hào)：R284．1；R322．47；R329．24；R575

摘要：目的 觀察異補(bǔ)骨脂素體外對(duì)HepG2細(xì)胞毒性和細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度的影響，并考察其對(duì)膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。方法 不同濃度異補(bǔ)骨脂素在HepG2細(xì)胞作用24 h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活，并檢查細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度。常規(guī)TRIzol法提取RNA，real time PCR檢測(cè)細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)體BSEP、MRP2、MRP3、OATP2、NTCP、OSTα，合成酶CYP7A1、CYP27A1和受體FXR、PXR的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果

HepG2細(xì)胞存活率隨著異補(bǔ)骨脂素濃度升高而劑量依賴性的降低，異補(bǔ)骨脂素作用24 h的IC50為118．1 μmol·L－1。100、400 μmol·L－1異補(bǔ)骨脂素可使細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度明顯升高。異補(bǔ)骨脂素在25 μmol·L－1時(shí)就可使MRP2、MRP3、CYP7A1明顯降低，當(dāng)濃度增大到100 μmol·L－1時(shí)，OATP2、OSTα、CYP27A1、FXR、PXR也明顯升高，但BSEP、NTCP差異無顯著性。結(jié)論 異補(bǔ)骨脂素可引起HepG2細(xì)胞內(nèi)膽汁酸升高和細(xì)胞毒性，其機(jī)制可能與抑制MRP2、MRP3有關(guān)。

關(guān)鍵詞：異補(bǔ)骨脂素；膽汁酸；細(xì)胞毒性；膽汁酸合成；膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)；HepG2細(xì)胞；MRP2；MRP3

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015－7－22 10：42 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150727．0901．020．html

異補(bǔ)骨脂素是一種呋喃香豆素類成分，存在于補(bǔ)骨脂等多種藥材中，2010藥典中將異補(bǔ)骨脂素及其同分異構(gòu)體補(bǔ)骨脂素作為藥材補(bǔ)骨脂（Psoralea corylifolia L．）的質(zhì)量控制成分。補(bǔ)骨脂可用于治療更年期綜合征、骨質(zhì)疏松等，其中異補(bǔ)骨脂素有雌激素樣作用［1］，可選擇性作用于雌激素受體α［2］，可以促進(jìn)成骨細(xì)胞分化成熟［3］，有利于骨質(zhì)疏松的治療，是補(bǔ)骨脂中一種有效成分。近年來發(fā)現(xiàn)臨床中補(bǔ)骨脂及其相關(guān)制劑可能導(dǎo)致肝損害，并有膽汁淤積的表現(xiàn)［4－5］，而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂苷為主要成分的補(bǔ)骨脂水提物有明顯肝毒性［6］，更有研究表明異補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂素對(duì)小鼠肝功能有一定影響［7］，這提示補(bǔ)骨脂導(dǎo)致的膽汁淤積性肝損害現(xiàn)象可能與異補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂素有關(guān)。更進(jìn)一步推測(cè)就是異補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂素干擾了膽汁酸的正常合成轉(zhuǎn)運(yùn)，從而導(dǎo)致膽汁淤積的發(fā)生。通常認(rèn)為膽汁酸是膽固醇在肝細(xì)胞內(nèi)經(jīng)由CYP7A1（7-α羥化酶，cytochrome P450，fam-ily 7，subfamily A，polypeptide 1）、CYP27A1（甾醇27-羥化酶，cytochrome P450，family27，subfamily A，polypeptide 1）等酶合成［8］，而BSEP（膽鹽輸出泵，也稱為ABCB11，ATP-binding cassette，sub-family B，member 11）、MRP2（多藥耐藥相關(guān)蛋白2，也稱為ABCC2，ATP-binding cassette，sub-family C，member 2）、MRP3（多藥耐藥相關(guān)蛋白3，也稱為ABCC3，ATP-binding cassette，sub-family C，member 3）、OATP2（有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽2，也稱為OATP1B1，SLCO1B1，solute carrier organic anion transporter family，member 1B1）、OSTα（有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白α，也稱為SLC51A，solute carrier family 51，alpha subunit）、NTCP（鈉－?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白，也稱為SLC10A1，solute carrier family 10，member 1）是肝細(xì)胞膜上的與膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)體，這些酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體在膽汁酸的合成轉(zhuǎn)運(yùn)中起到重要的作用，并且肝細(xì)胞內(nèi)存在FXR（法尼醇X受體，farne-soid X receptor）、PXR（孕烷X受體，pregnane X re-ceptor）等受體可以調(diào)節(jié)相關(guān)酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體［9－10］。本研究考察了異補(bǔ)骨脂素作用24 h后HepG2細(xì)胞中相關(guān)酶、轉(zhuǎn)運(yùn)體等mRNA的變化，以了解異補(bǔ)骨脂素對(duì)于膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，為解釋異補(bǔ)骨脂素在膽汁酸淤積中的作用機(jī)制、以及更進(jìn)一步地闡明補(bǔ)骨脂毒性提供基礎(chǔ)。

1　材料

1．1受試藥 異補(bǔ)骨脂素購(gòu)自天津市月牙湖科技有限公司，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度大于95%。

1．2細(xì)胞 HepG2細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。

1．3試劑與儀器 DMEM培基和無血清Opti-MEM培基，胎牛血清（FBS）為Gibco產(chǎn)品；青霉素－鏈霉素雙抗、胰酶、DMSO、DEPC水為北京索萊寶產(chǎn)品；PBS為武漢博士德產(chǎn)品；TRIzol為Invitrogen產(chǎn)品；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit為Fermen-tas產(chǎn)品；Hot start fluo-PCR mix SYBR GreenⅠ（2×）為上海生工產(chǎn)品；BCA蛋白檢測(cè)試劑盒為Ther-mo產(chǎn)品；總膽汁酸（TBA）試劑盒為中生北控產(chǎn)品；其它化學(xué)試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

Hitachi 7020全自動(dòng)生化儀；PerkinElmer En-spire多功能讀板機(jī)；Thermo Stratos離心機(jī)；Bio-Rad CFX96型熒光定量PCR儀；Olympus BX51型倒置熒光顯微鏡及成像系統(tǒng)；上海世平SPH-103B恒溫振蕩器。

2　方法

2．1細(xì)胞培養(yǎng) HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%的FBS、1%雙抗的DMEM的培基中，置37℃、5%CO2的孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁24 h，每48 h換液1次，先用無菌PBS洗細(xì)胞3次，再加0．25%的胰酶消化。細(xì)胞懸液離心（1 000 r·min－1，4℃，10 min）后棄上清，加入含10%FBS的完全培養(yǎng)基，反復(fù)吹打細(xì)胞至單細(xì)胞懸液，進(jìn)行傳代和種板。

2．2細(xì)胞活力和細(xì)胞中膽汁酸檢測(cè) HepG2細(xì)胞按每孔1×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h貼壁后，分別給予用Opti-MEM培基稀釋的終濃度為6.25、25、100、400 μmol ·L－1的異補(bǔ)骨脂素，作用24 h后移除培養(yǎng)基，加10 μL MTT溶液（5 g·L－1）溫箱孵育4 h，移除上清，每孔加入100 μL的DMSO，振蕩10 min后在490 nm處測(cè)得吸光度值。計(jì)算細(xì)胞存活率（相對(duì)于對(duì)照組）。

HepG2細(xì)胞按每孔1×105個(gè)接種于24孔板中，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h貼壁后，分別給予用Opti-MEM培基稀釋的終濃度為6．25、25、100、400 μmol·L－1的異補(bǔ)骨脂素，作用24 h后移除培養(yǎng)基，加入PBS緩沖液100 μL，用細(xì)胞刮刀刮取細(xì)胞，細(xì)胞用超聲破碎細(xì)胞，BCA法檢測(cè)細(xì)胞破碎液的蛋白濃度，并在全自動(dòng)生化儀檢測(cè)TBA。

2．3Real time PCR檢測(cè) HepG2細(xì)胞按每孔5× 105個(gè)接種于6孔板，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后給予異補(bǔ)骨脂素（25、100 μmol·L－1，Opti-MEM培基稀釋）處理24 h。去除培養(yǎng)液，用PBS洗細(xì)胞3次。用TRIzol常規(guī)提取HepG2細(xì)胞中總RNA，－80℃保存。紫外分光光度法檢測(cè)RNA樣品的純度與濃度。按反轉(zhuǎn)錄試劑盒要求進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，real time PCR反應(yīng)體系20 μL，其中cDNA樣本1 μL，上、下游引物各0.5 μL，Hot start Fluo-PCR mix試劑10 μL，無RNA酶水8 μL。在94℃預(yù)變性4 min，每個(gè)循環(huán)94℃變性30 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。取2－△△CT值進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。引物序列見下表：

Tab 1 Primer sequence of real time PCR

3　結(jié)果

3．1對(duì)HepG2細(xì)胞增殖及細(xì)胞內(nèi)膽汁酸的影響異補(bǔ)骨脂素作用于HepG2細(xì)胞24 h，6.25 μmol· L－1異補(bǔ)骨脂素即對(duì)HepG2細(xì)胞增殖有一定抑制作用，細(xì)胞相對(duì)存活率為92.8%。在6.25～400 μmol ·L－1范圍內(nèi)隨著異補(bǔ)骨脂素的濃度升高、細(xì)胞存活率也明顯降低，而400 μmol·L－1異補(bǔ)骨脂素作用下細(xì)胞相對(duì)存活率僅為27.9%。異補(bǔ)骨脂素作用24 h的IC50為118.1 μmol·L－1（95%可信限107.1 ～130.2 μmol·L－1），見Fig 1A。對(duì)細(xì)胞破碎液的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，異補(bǔ)骨脂素作用24 h后，400.0 μmol· L－1的異補(bǔ)骨脂素處理組HepG2細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度升高約5倍，100.0 μmol·L－1處理組的細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度也明顯升高，見Fig 1B。

3．2對(duì)膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響異補(bǔ)骨脂素處理24 h后，HepG2細(xì)胞中BSEP、NTCP的mRNA雖然與空白相比均值有一定變化、但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；25 μmol·L－1異補(bǔ)骨脂素組，HepG2細(xì)胞中MRP2、MRP3、CYP7A1的mRNA轉(zhuǎn)錄均明顯降低，而100 μmol·L－1異補(bǔ)骨脂素組，除了MRP2、MRP3、CYP7A1的降低外，OATP2、OSTα、CYP27A1、FXR、PXR的mRNA轉(zhuǎn)錄明顯升高，見Fig 2，3。

Fig 1 Cell viability and bile acid concentration in HepG2 cells

4　討論

異補(bǔ)骨脂素在體外HepG2細(xì)胞中作用24 h的IC50為118.1 μmol·L－1，但其毒性作用的最小毒性劑量很小，按實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以擬合量效方程并計(jì)算IC5僅為3.8 μmol·L－1，提示異補(bǔ)骨脂素的安全劑量較低。

將細(xì)胞培養(yǎng)基中的藥物濃度近似為血液中的藥物濃度，可以借助于體內(nèi)代謝研究結(jié)果來先對(duì)體外研究結(jié)果進(jìn)行外推。大鼠代謝研究表明［11］，大鼠口服給予香豆素混合物（相當(dāng)于異補(bǔ)骨脂素4.39 mg ·kg－1），異補(bǔ)骨脂素在血液中峰濃度高達(dá)37.89 mg·L－1，口服的生物利用度高達(dá)70.35%。同時(shí)有研究［12］表明異補(bǔ)骨脂苷在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為異補(bǔ)骨脂素，那么實(shí)際使用補(bǔ)骨脂時(shí)血液中異補(bǔ)骨脂素的來源除了異補(bǔ)骨脂素外還包括異補(bǔ)骨脂苷，這個(gè)量可達(dá)補(bǔ)骨脂的1%以上，按2010版藥典中補(bǔ)骨脂每人每天10 g的使用上限，折合大鼠異補(bǔ)骨脂素用量9 mg·kg－1。參考文獻(xiàn)［11］研究中的結(jié)果，大鼠血液中峰濃度可達(dá)70 mg·L－1以上（超過400 μmol· L－1，異補(bǔ)骨脂素分子質(zhì)量186.16），即便是藥后24 h血液中異補(bǔ)骨脂素濃度也在2 mg·L－1以上（約10 μmol·L－1大于其在HepG2細(xì)胞的IC5）。很顯然，按上述推斷異補(bǔ)骨脂素在體內(nèi)也會(huì)導(dǎo)致相似的毒性，這也許可以一定程度地解釋補(bǔ)骨脂所導(dǎo)致的肝損害。

Fig 2 Bile acid transporter mRNA transcription

膽汁酸可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［13］，高濃度的膽汁酸可導(dǎo)致動(dòng)物肝損害［14－15］。Fig 4是異補(bǔ)骨脂素對(duì)膽汁酸調(diào)節(jié)相關(guān)基因影響的示意圖，F(xiàn)XR和PXR可以通過調(diào)節(jié)膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)來對(duì)抗膽汁酸的毒性，F(xiàn)XR和PXR的缺失會(huì)導(dǎo)致膽汁酸更容易蓄積而產(chǎn)生毒性作用［14］。理論上FXR的激活可以上調(diào)BSEP、OSTα／β、MRPs，下調(diào)NTCP以降低細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度，F(xiàn)XR還可下調(diào)CYP7A1以減少肝細(xì)胞內(nèi)膽汁酸合成［8－9］。實(shí)驗(yàn)中異補(bǔ)骨脂素100 μmol· L－1，細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度明顯升高，將會(huì)激活膽汁酸受體FXR、PXR，并使之上調(diào)，OSTα上調(diào)和CYP7A1下調(diào)是符合FXR預(yù)期作用的；而作為替代途徑的CYP27A1的上調(diào)可能是因?yàn)楦渭?xì)胞內(nèi)膽汁酸合成限速酶的CYP7A1被抑制的結(jié)果；通過文獻(xiàn)［15］發(fā)現(xiàn)，小鼠在膽酸的誘導(dǎo)下OATP2也是升高的，而且在膽酸的作用下小鼠的OATP2上調(diào)倍數(shù)明顯高于PXR－／－小鼠，盡管未用膽酸處理時(shí)野生型小鼠OATP2絕對(duì)水平低于PXR－／－小鼠肝臟中，但膽酸處理后OATP2水平反而高，提示實(shí)驗(yàn)中OATP2似乎更可能是PXR的調(diào)節(jié)作用。異補(bǔ)骨脂素在25 μmol·L－1時(shí)，細(xì)胞內(nèi)膽汁酸濃度已經(jīng)有所升高，但與對(duì)照之間的差異尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而此時(shí)MRP2、MRP3已經(jīng)明顯下調(diào)，故異補(bǔ)骨脂素對(duì)MRP2、MRP3的下調(diào)作用顯然早于膽汁酸的淤積，是異補(bǔ)骨脂素對(duì)膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)干預(yù)的早期作用點(diǎn)，而上調(diào)的OATP2 和CYP27A1也許對(duì)抗了上調(diào)的OSTα和下調(diào)的CYP7A1的作用，最終導(dǎo)致膽汁酸在細(xì)胞內(nèi)蓄積，細(xì)胞內(nèi)膽汁酸的檢測(cè)也證實(shí)細(xì)胞內(nèi)膽汁酸較正常升高了5倍、達(dá)到400 μmol·L－1。

Fig　3 Bile acid synthetase and receptor mRNA transcription

Fig 4 Effect of isopsoralen on bile acid synthesis and transport

當(dāng)然，體外HepG2細(xì)胞是人源腫瘤細(xì)胞，而文獻(xiàn)［11－12］中代謝研究是大鼠的數(shù)據(jù)，種屬不同可能導(dǎo)致推論有一定差異，最終異補(bǔ)骨脂素在體內(nèi)是否會(huì)同樣影響膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)還有待于研究確證。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 趙丕文，牛建昭，王繼峰，等．異補(bǔ)骨脂素的植物雌激素作用及其機(jī)制的探討［J］．中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2009，25（9）：1193－6．

［1］ Zhao P W，Niu J Z，Wang J F，et al．Research on the phytoestro-genic effect and its mechanism of isopsoralen in T47D cells［J］．Chin Pharmacol Bull，2009，25（9）：1193－6．

［2］ Xin D，Wang H，Yang J，et al．2010．Phytoestrogens from Psora-lea corylifolia reveal estrogen receptor-subtype selectivity［J］．Phytomedicine，2010，17（2）：126－31．

［3］ 翟遠(yuǎn)坤，潘亞磊，牛銀波，等．補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素對(duì)乳鼠顱骨成骨細(xì)胞分化成熟影響的比較研究［J］．中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（3）：355－61．

［3］ Zhai Y K，Pan Y L，Niu Y B，et al．Comparative studies on the differentiation and maturation of rat calvarial osteoblasts by psor-alen and isopsoralen in vitro［J］．Chin Pharmacol Bull，2012，28 （3）：355－61．

［4］ Nam S W，Baek J T，Lee D S，et al．A case of acute cholestatic hepatitis associated with the seeds of Psoralea corylifolia［J］．Clin Toxicol，2005，43（6）：589－91．

［5］ Cheung W I，Tse M L，Ngan T，et al．Liver injury associated with the use of Fructus Psoraleae（Bol-gol-zhee or Bu-gu-zhi）and its related proprietary medicine［J］．Clin Toxicol，2009，47（7）：683 －85．

［6］ 周 昆，代 志，柳占彪，等．補(bǔ)骨脂水提物引起的大鼠肝損害［J］．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，32（4）：221－4．

［6］ Zhou K，Dai Z，Liu Z B，et al．Aqueous extract of psoralea coryl- ifolia induced liver injury in rats［J］．J Tianjin Univ Tradit Chin Med，2013，32（4）：221－4．

［7］ Wang X，Lou Y J，Wang M X，et al．Furocoumarins affect hepat-ic cytochrome P450 and renal organic ion transporters in mice［J］．Toxicol Lett，2012，209（1）：67－77．

［8］ Chiang J Y．Bile acids regulation of synthesis［J］．J Lipid Res，2009，50（10）1955－66．

［9］ Fiorucci S，Distrutti E，Ricci P，et al．Targeting FXR in cholesta-sis：hype or hope［J］．Expert Opin Ther Targets，2014，18（12）：1449－59．

［10］Pauli-Magnus C，Meier P J．Hepatobiliary transporters and druginduced cholestasis［J］．Hepatology，2006，44（4）：778－87．

［11］Feng L，Wang L，Jia X H．Pharmacokinetics，tissue distribution and excretion of Coumarin components from Psoralea corylifolia L．in rats［J］．Arch Pharm Res，2010，33（2）：225－30．

［12］Wang Y F，Liu Y N，Xiong W，et al．A UPLC-MS／MS method for in vivo and in vitro pharmacokinetic studies of psoralenoside，isop-soralenoside，psoralen and isopsoralen from Psoralea corylifolia ex-tract［J］．J Ethnopharmacol，2014，151（1）：609－17．

［13］Palmeira C M，Rolo A P．Mitochondrially-mediated toxicity of bile acids［J］．Toxicology，2004，203（1－3）：1－15．

［14］Guo G L，Lambert G，Negishi M，et al．Complementary roles of farnesoid X receptor，pregnane X receptor，and constitutive andro-stane receptor in protection against bile acid toxicity［J］．J Biol Chem，2003，278（46）：45062－71．

［15］Teng S，Piquette-Miller M．Hepatoprotective role of PXR activation and MRP3 in cholic acid-induced cholestasis［J］．Br J Pharma-col，2007，151（3）：367－76．

Psoralen induced bile acid accumulation and cytotoxicity by inhibiting MRP2 and MRP3 in HepG2 cells

ZHOU Kun1，2，BI Ya-nan1，SHI Hong1，2
（1．Institute of Traditional Chinese Medicine，Tiangjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2．Ministry of Education Key Laboratory of Traditional Chinese Medical Formulae，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

Abstract：Aim To investigate the toxicity of isopsor-alen in HepG2 cells and its effects on bile acid，bile acid synthesis and transport．Methods Cell viability was evaluated by MTT assay and bile acid was deter-mined inside HepG2 cells，with exposure to various isopsoralen for 24h．The mRNA transcription of BSEP，MRP2，MRP3，NTCP，OATP2，OSTα，CYP7A1，CYP27A1，F(xiàn)XR and PXR were assessed by real-time PCR．Results The cell viability was decreased dose-dependently with isopsoralen in HepG2 cells，and IC50was 118．1 μmol·L－1exposure to isopsoralen for 24h．Bile acid inside cells significantly increased with 100 and 400 μmol·L－1isopsoralen．Isopsoralen caused the down-regulation of MRP2，MRP3，CYP7A1 mRNA at 25 μmol·L－1．Beside these，the up-regulation of OATP2，OSTα，CYP27A1，F(xiàn)XR，PXR with 100 μmol· L－1isopsoralen，but there was no significant change of BSEP and NTCP．Conclusion The results show that isopsoralen induces bile acid accumulation and cytotox-icity which may be associated with the down-regulation of MRP2，MRP3 in HepG2 cells．

Key words：isopsoralen；bile acid；cytotoxicity；bile acid synthesis；bile acid transport；HepG2 cell；MRP2；MRP3

作者簡(jiǎn)介：周 昆（1978－），男，碩士，助理研究員，研究方向：中藥毒性機(jī)制和減毒研究、藥物安全性評(píng)價(jià)，E-mail：z．k．ken ＠263．net

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No 81202991）；國(guó)家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目（No 2011ZX09201-201-21，No 2014ZX09304307-001-005）

收稿日期：2015－03－02，修回日期：2015－04－06

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001－1978（2015）08－1112－05

doi：10．3969／j．issn．1001－1978．2015．08．017