不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血及蛻膜組織中Th17細(xì)胞相關(guān)效應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)及意義

陳　靜, 李慕軍, 黃千貽, 蔡君英, 萬(wàn)江帆

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 廣西生殖醫(yī)學(xué)研究中心, 廣西 南寧, 530021)

不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血及蛻膜組織中Th17細(xì)胞相關(guān)效應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)及意義

陳靜, 李慕軍, 黃千貽, 蔡君英, 萬(wàn)江帆

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 廣西生殖醫(yī)學(xué)研究中心, 廣西 南寧, 530021)

摘要:目的探討不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(URSA)患者外周血及蛻膜組織中Th17細(xì)胞相關(guān)效應(yīng)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表達(dá)及意義。方法20例URSA患者，設(shè)為URSA組; 20例同期正常早孕要求行人工流產(chǎn)手術(shù)孕婦，設(shè)為NP組。2組受試者均采集靜脈血5 mL及自行排出或人工流產(chǎn)術(shù)刮取的蛻膜組織，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清及蛻膜組織中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平。結(jié)果URSA組患者血清及蛻膜組織中IL-6、IL-17、IL-23水平顯著高于NP組(P<0.01), TGF-β水平顯著低于NP組(P<0.01) 。結(jié)論Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β可能參與了URSA患者母胎免疫, IL-23有望成為URSA新的治療靶標(biāo)。

關(guān)鍵詞:不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn); Th17細(xì)胞; 白細(xì)胞介素-23; 母胎免疫; 蛻膜組織

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(RSA)是指妊娠20周以前，與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生的2次或2次以上的自然流產(chǎn)[1]。排除染色體異常、解剖結(jié)構(gòu)異常、內(nèi)分泌紊亂、感染、凝血功能異常、自身免疫異常等病因，仍有50%RSA患者病因未明，稱不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(URSA)[2-3]。隨著相關(guān)研究的不斷深入，越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為免疫學(xué)異常是URSA的重要病因。Th17細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的不同于Th1、Th2及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)的具有獨(dú)立功能的效應(yīng)性T細(xì)胞亞群[4]。本研究通過(guò)檢測(cè)URSA患者外周血及蛻膜組織中Th17細(xì)胞相關(guān)效應(yīng)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表達(dá)，探討Th17細(xì)胞相關(guān)效應(yīng)因子對(duì)URSA患者母胎免疫的影響，及其在URSA發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中可能的生物學(xué)意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

選取2014年6月—2015年1月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的URSA患者20例，設(shè)為URSA組。年齡(30.56±5.41)歲；月經(jīng)周期(30.05±3.68) d, 妊娠時(shí)間(57.67±8.46) d?！安幻髟颉睒?biāo)準(zhǔn): ① 骨盆檢查及B超檢查排除生殖道解剖畸形; ② 宮頸黏液培養(yǎng)排除支原體、衣原體等感染; ③ 夫妻雙方及流產(chǎn)胎兒染色體檢查排除遺傳問(wèn)題; ④ 排除黃體功能不足、多囊卵巢綜合征、高泌乳素血癥、高雄激素血癥、糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)綜合征、甲狀腺功能低下綜合征等內(nèi)分泌疾病; ⑤ 以部分活化凝血酶時(shí)間(APTT)作為檢測(cè)狼瘡抗凝物質(zhì)的篩查實(shí)驗(yàn)，排除APTT異?；颊? ⑥ 檢測(cè)抗心脂抗體、抗核抗體正常排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病; ⑦ 根據(jù)世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)所有RSA患者男伴精液均在正常范圍。選取本院就診正常早孕要求行人工流產(chǎn)手術(shù)的孕婦20例，設(shè)為NP組。年齡(29.76±5.32)歲；月經(jīng)周期(30.01±2.58) d, 妊娠時(shí)間(56.37±7.91) d。以往無(wú)自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，無(wú)生殖道感染以及自身免疫病史。孕期無(wú)腹痛和陰道出血，B超提示胚胎發(fā)育正常，可見原始心管搏動(dòng)。2組年齡等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2　方法

URSA組患者門診B超動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)未見原始胎心搏動(dòng)或胎心搏動(dòng)停止，即刻住院，予干燥無(wú)添加真空采血管采集靜脈血5 mL, 并于24 h內(nèi)服藥自行排出胚胎或行人工流產(chǎn)術(shù)。NP組孕婦于人流前予干燥無(wú)添加真空采血管采集靜脈血5 mL。4 ℃下，以1 000 g離心15 min, 取血清分裝，于-80 ℃凍存待測(cè)。自行排出或人工流產(chǎn)術(shù)刮取的蛻膜組織，經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗去除血液及壞死組織，取500 mg組織，加入1 mL PBS，組織研磨器研磨后，反復(fù)凍融2次破壞細(xì)胞壁, 4 ℃下，以5 000 g離心5 min, 取上清液分裝，于-80 ℃凍存待測(cè)。血清及組織勻漿液分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平，試劑盒均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，操作嚴(yán)格參照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3　觀察指標(biāo)

觀察2組受試者血清及蛻膜組織中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平。

2結(jié)果

2.1　2組血清中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平比較

URSA組患者血清中IL-6、IL-17、IL-23水平顯著高于NP組(P<0.01), TGF-β水平顯著低于NP組(P<0.01)。見表1。

2.2　2組蛻膜組織中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平比較

URSA組患者血清中IL-6、IL-17、IL-23水平顯著高于NP組(P<0.01), TGF-β水平顯著低于NP組(P<0.01)。見表2。

組別IL-6TGF-βIL-17IL-23URSA組(n=20)39.32±8.2911.09±2.9342.62±6.2525.27±6.25NP組(n=20)15.32±5.17**19.27±4.08**22.26±4.48**12.64±2.63**

與URSA組比較，**P<0.01。

組別IL-6TGF-βIL-17IL-23URSA組(n=20)38.03±5.8910.99±3.1548.76±5.1631.73±4.66NP組(n=20)20.78±4.36**19.79±4.46**20.47±2.87**13.87±2.90**

與URSA組比較，**P<0.01。

3討論

成功妊娠是同種異體移植及免疫學(xué)原理的唯一例外，母體對(duì)攜帶父系抗原的胚胎的免疫耐受，有賴于獨(dú)特的母-胎界面免疫微環(huán)境的平衡。平衡一旦失調(diào)就可能引起免疫調(diào)節(jié)異常，導(dǎo)致RSA發(fā)生[5]。研究[6-7]發(fā)現(xiàn)RSA與器官移植排斥反應(yīng)有著相類似的發(fā)病機(jī)制，推測(cè)URSA很大程度上與免疫耐受失衡相關(guān)。T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子之間的平衡紊亂對(duì)URSA發(fā)病的影響越來(lái)越引起人們關(guān)注。2005年P(guān)ark H首次在小鼠身上發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞，因其特異性產(chǎn)生IL-17而命名[8]。Th17細(xì)胞參與炎性反應(yīng)、自身免疫性疾病、腫瘤和移植排斥等的發(fā)生和發(fā)展，因此檢測(cè)USRA患者Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子尤為重要。

IL-17是Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子，具有促炎癥作用，能夠誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子、趨化因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的活化與聚集，引起組織細(xì)胞浸潤(rùn)和組織破壞等[9]。IL-23是由P19和P40亞單位以共價(jià)二硫鍵結(jié)合組成的異二聚體分子，其與IL-12共用一個(gè)亞基單位，主要由樹突狀細(xì)胞分泌。IL-23與Th17細(xì)胞有著密切的聯(lián)系，一方面IL-23能刺激CD4+T細(xì)胞增殖，促使Th17細(xì)胞分化[10]; 另一方面IL-23能誘導(dǎo)記憶T細(xì)胞分泌IL-17[11]。免疫調(diào)節(jié)因子TGF-β和多效性促炎因子IL-6是誘導(dǎo)幼稚CD4+T淋巴細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵的細(xì)胞因子[12], TGF-β和IL-6共存時(shí)，能夠誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞大量增殖分化為Th17細(xì)胞；而當(dāng)IL-6單獨(dú)作用時(shí), CD4+T細(xì)胞增殖分化為Treg細(xì)胞，具有免疫抑制及免疫逃逸作用[13-14]。本研究結(jié)果顯示, URSA組患者外周血和蛻膜組織中IL-17、IL-23、IL-6水平明顯高于NP組, TGF-β顯著低于NP組。提示URSA組中高濃度的IL-6、IL-23, 低濃度的TGF-β, 能夠誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟Th17細(xì)胞，大量分泌IL-17, 血清及局部蛻膜組織中IL-17水平增高，炎癥反應(yīng)加劇，破壞了胚胎組織細(xì)胞的增殖、分化及胎盤血管的形成。

綜上所述, IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23可能直接參與了URSA患者的母胎免疫，但這些細(xì)胞因子在URSA中的具體發(fā)病機(jī)制及與其他細(xì)胞因子的相互作用有待進(jìn)一步研究探討。另有研究[15]表明, TGF-β和IL-6誘導(dǎo)產(chǎn)生的Th17細(xì)胞清除病原體的能力非常弱，只有進(jìn)一步在IL-23的影響下才能發(fā)育為高致病性的Th17細(xì)胞。IL-23在URSA的發(fā)病機(jī)制中可能處于關(guān)鍵地位，并有望成為免疫治療URSA的新靶點(diǎn)。

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Expression of certain cytokines by Th17 cells in

peripheral blood and decidual tissues of patients

with unexplained recurrent spontaneous abortion

CHEN Jing, LI Mujun, HUANG Qianyi, CAI Junying, WAN Jiangfan

(GuangxiReproductiveMedicineResearchCenter,TheFirstAffiliatedHospitalof

GuangxiMedicalUniversity,Nanning,Guangxi, 530021)

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expression of certain cytokines by Th17 cells [including interleukin-6 (IL-6), transforming growth factor-β (TGF-β), IL-17 and IL-23] in peripheral blood and decidual tissues of patients with unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA). MethodsTwenty URSA patients (URSA group) and 20 early pregnancy women with induced abortion (NP group) were included. The expressions of IL-6, TGF-β, IL-17 and IL-23 in peripheral blood and decidual tissues in both groups were detected by ELISA. Resultsthe expression level of IL-6、IL-17 and IL-23 in peripheral blood and decidual tissues in URSA group were significantly higher than those in NP group (P<0.01). Compared with NP group, URSA Group had lower level of TGF-β in both peripheral blood and decidual tissues (P<0.01). Conclusion L-6, IL-17, IL-23 and TGF-β may participate in maternal-fetal immune, and IL-23 is a potential therapeutic target for URSA.

KEYWORDS:unexplained recurrent spontaneous abortion; Th17; IL-23; maternal-fetal immune; decidual tissues

通信作者:李慕軍, E-mail: limujun12@126.com

收稿日期:2015-02-20

中圖分類號(hào):R 714.21

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2015)09-091-03

DOI:10.7619/jcmp.201509026