E-鈣黏附蛋白、骨橋蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

周　行, 張文先, 羅　瓊, 甘　平

(四川省廣元市中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科, 四川 廣元, 628000)

E-鈣黏附蛋白、骨橋蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

周行, 張文先, 羅瓊, 甘平

(四川省廣元市中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科, 四川 廣元, 628000)

摘要:目的探討E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)、骨橋蛋白(OPN)在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組化SP法檢測(cè)78例宮頸鱗癌、30例正常宮頸組織中E-cadherin、OPN的表達(dá)，評(píng)價(jià)二者與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果正常宮頸組織、宮頸鱗癌中E-cadherin的陽性表達(dá)呈明顯下降(P<0.05), E-cadherin陽性表達(dá)率與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。正常宮頸組織、宮頸鱗癌中OPN的陽性表達(dá)呈顯著上升(P<0.05), OPN陽性表達(dá)率與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。E-cadherin表達(dá)陰性、OPN表達(dá)陽性的患者的總生存率顯著低于E-cadherin表達(dá)陽性、OPN表達(dá)陰性的患者(P<0.05)。多因素分析表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、E-cadherin和OPN的表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)(P<0.05)。E-cadherin、OPN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.321,P<0.01)。結(jié)論E-cadherin表達(dá)降低或缺失和OPN高度表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞:宮頸鱗癌; E-cadherin; 骨橋蛋白; 免疫組化; 預(yù)后

宮頸癌發(fā)病率近年來呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害女性生命健康，其發(fā)生是多種致癌因素長(zhǎng)期協(xié)調(diào)作用的結(jié)果。研究[1-2]表明，E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)、骨橋蛋白(OPN)在惡性腫瘤中的異常表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及差的預(yù)后有關(guān)。本研究采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)宮頸鱗癌組織中E-cadherin、OPN的表達(dá)，探討其與宮頸鱗癌的臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1資料與方法

1.1　一般資料

選取2003年1月—2011年1月四川廣元市中心醫(yī)院手術(shù)切除或活檢的子宮頸鱗癌78例，患者年齡30～74歲，中位年齡為49.5歲。根據(jù)FIGO分期: Ⅰ期14例，Ⅱ期29例，Ⅲ期20例，Ⅳ期15例；組織分級(jí)為G1～G245例, G333例?；颊咝g(shù)前均未行化療、放療。選擇同期的正常宮頸組織30例作為對(duì)照。

1.2　試劑與方法

鼠抗人上皮性鈣黏附蛋白單克隆抗體(即用型)、鼠抗人骨橋蛋白單克隆抗體(即用型)、免疫組化SP試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。以已確定的陽性標(biāo)本切片為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3　結(jié)果判斷

E-cadherin陽性染色定位于細(xì)胞膜，呈連續(xù)的細(xì)胞膜染色; OPN陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色。高倍鏡下(×400)每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)。陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)<10%為陰性(-), ≥10%為陽性(+)。見圖1、2。

圖1 E-cadherin陽性棕黃色顆粒表達(dá)于宮頸癌的細(xì)胞膜 SP 400倍

圖2 OPN陽性棕黃色顆粒表達(dá)于宮頸癌的細(xì)胞質(zhì) SP 400倍

2結(jié)果

2.1　E-cadherin、OPN在不同宮頸組織中的表達(dá)

E-cadherin在正常宮頸組織、宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)呈下降趨勢(shì)，分別為100%、48.7%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。OPN在正常宮頸組織、宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)呈顯著上升趨勢(shì)，分別為13.3%、83.3%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2　E-cadherin、OPN在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

E-cadherin、OPN在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系見表1。

表1　E-cadherin、OPN在宮頸鱗癌組織中的

2.3　子宮頸鱗癌組織中E-cadherin、OPN表達(dá)的相關(guān)性

采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析, E-cadherin、OPN在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.321,P<0.01)。見表2。

表2　子宮頸鱗癌中E-cadherin、OPN表達(dá)的相關(guān)性

2.4　子宮頸鱗癌組織中E-cadherin、OPN表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier生存分析顯示, E-cadherin表達(dá)陽性患者平均生存時(shí)間為66.82個(gè)月，E-cadherin表達(dá)陰性患者為40.92個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。OPN表達(dá)陽性患者平均生存時(shí)間為49.86個(gè)月，OPN表達(dá)陰性患者為為71.53個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

選取宮頸鱗癌患者臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸肌層浸潤(rùn)深度、E-cadherin、OPN進(jìn)行COX回歸模型分析，結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、E-cadherin、OPN與預(yù)后有關(guān)(P=0.013, 0.017, 0.031)。

3討論

研究[3-4]表明，在結(jié)腸直腸癌中, E-cadherin表達(dá)下降與腫瘤失分化、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)。據(jù)報(bào)道，85%浸潤(rùn)性乳腺癌中, E-cadherin表達(dá)是完全缺失的，其通過細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移而促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展[5]。一項(xiàng)體外實(shí)驗(yàn)[6]中, E-cadherin過度表達(dá)抑制乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，證實(shí)了E-cadherin腫瘤抑制蛋白的作用。E-cadherin在宮頸癌中的作用還未被廣泛研究。本研究中, E-cadherin在正常宮頸組織、宮頸鱗癌中的表達(dá)呈顯著下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 提示細(xì)胞間黏附作用被干擾與宮頸鱗癌的形成和進(jìn)展有著密切關(guān)系。在對(duì)E-cadherin表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理特征之間的關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn), E-cadherin表達(dá)與臨床分期、組織分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示E-cadherin表達(dá)的改變涉及宮頸鱗癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過程。Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)，E-cadherin表達(dá)陽性患者平均生存時(shí)間(66.82個(gè)月)顯著高于E-cadherin表達(dá)陰性者(40.92個(gè)月)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。COX多因素分析顯示, E-cadherin是影響宮頸鱗癌預(yù)后的因素之一。

OPN是分泌型磷酸化糖蛋白，含有甘氨酸-精氨酸-天冬氨酸序列，在正常組織中OPN常是缺乏或低水平表達(dá)，然而在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)OPN過度表達(dá)，包括乳腺癌[7]、肺癌[8]、結(jié)腸直腸癌[9]、胃癌[10]、卵巢癌等[11]。OPN同細(xì)胞表面αvβ整合素和CD44受體相互作用，促使細(xì)胞行為發(fā)生改變，介導(dǎo)細(xì)胞黏附、遷移、浸潤(rùn)以及誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成、促進(jìn)惡性腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。一項(xiàng)研究[12]分析了OPN在85例胃癌中免疫組化表達(dá)，結(jié)果顯示OPN免疫活性水平與浸潤(rùn)深度、脈管浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期有關(guān)，浸潤(rùn)了淋巴結(jié)的胃癌細(xì)胞顯示出強(qiáng)的免疫活性、低的凋亡指數(shù)和高的增殖指數(shù)。本研究分析了OPN在不同宮頸組織中的表達(dá)，與正常宮頸組織相比, OPN在宮頸鱗癌中有更高的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本文也探討了OPN表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系，結(jié)果顯示隨著臨床分期的增高, OPN表達(dá)上升，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 且與宮頸肌層浸潤(rùn)深度無關(guān)(P>0.05)。OPN表達(dá)顯著地與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05), 表明OPN的過度表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。一些研究[13-15]表明, OPN在腫瘤中的過度表達(dá)與不同腫瘤差的預(yù)后有關(guān)，包括肺癌、卵巢癌、乳腺癌等。Rudland PS等[15]研究了333例可行手術(shù)的Ⅰ～Ⅱ期原發(fā)性乳腺癌患者的OPN的預(yù)后意義，隨訪14～20年后發(fā)現(xiàn), OPN陰性患者的生存率為94%, OPN陽性患者的生存率為26%。以上結(jié)果表明，與轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白OPN的表達(dá)與預(yù)后密切相關(guān)。有關(guān)OPN在宮頸鱗癌中的預(yù)后作用研究較少，本研究Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn), OPN陽性患者的生存時(shí)間(49.86個(gè)月)顯著低于OPN陰性者(71.53個(gè)月)(P<0.05); COX多因素分析顯示, OPN是預(yù)后因素之一，與不利的生存前景有關(guān)。

本研究探討了E-cadherin、OPN在宮頸鱗癌中的異常表達(dá)，對(duì)二者的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，二者在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.321,P<0.01)。E-cadherin、OPN通過不同機(jī)制參與并促進(jìn)了宮頸鱗癌的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，與不良預(yù)后密切相關(guān)。

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Expressions of E-cadherin and osteopontin in cervical

squamous cancer and their correlations with prognosis

ZHOU Xing, ZHANG Wenxian, LUO Qiong, GAN Ping

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,GuangyuanCentralHospital,Guangyuan,Sichuan, 628000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the expressions of E-cadherin and osteopontin (OPN) in cervical squamous cancers and their correlations with prognosis. MethodsThe expressions of E-cadherin and OPN were detected by immunohistochemistry (SP technique) in 78 cases of squamous cervical carcinoma tissues and 30 cases of normal cervical tissues. The relationships between the expressions of E-cadherin, OPN and clinical pathological features, prognosis were evaluated. ResultsThe positive expressions of E-cadherin decreased significantly in normal cervical tissues and cervical squamous cancer (P<0.05), and positive expression rate of E-cadherin was correlated with clinical stage, histological differentiation and lymph nodes metastasis (P<0.05). The positive expressions of OPN increased significantly in normal cervical tissues and cervical squamous cancer (P<0.05), and positive expression rate of OPN was correlated with histological differentiation and lymph nodes metastasis (P<0.05). The total survival rate of patients with negative expression of E-cadherin and positive expression of OPN was significantly lower than that of patients with positive expression of E-cadherin and negative expression of OPN (P<0.05). Multivariate analysis revealed lymphnodes metastasis and expressions of E-cadherin and OPN were correlated with the poor prognosis (P<0.05). E-cadherin expression was negatively correlated with OPN (r=-0.321,P<0.05). ConclusionThe low or loss expression of E-cadherin and high expression of OPN are correlated with carcinogenesis, development and metastasis of cervical squamous cancer.

KEYWORDS:cervical squamous cancer; E-cadherin; osteopontin; immunohistochemistry; prognosis

收稿日期:2014-12-13

中圖分類號(hào):R 737.33

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2015)09-087-04

DOI:10.7619/jcmp.201509025