缺血缺氧性腦病新生兒免疫功能的變化及臨床意義分析

杜立樹，平龍玉，張曼俐

(綿陽市中醫(yī)醫(yī)院， 四川 綿陽621000)

缺血缺氧性腦病新生兒免疫功能的變化及臨床意義分析

杜立樹，平龍玉*，張曼俐

(綿陽市中醫(yī)醫(yī)院， 四川 綿陽621000)

(ChinJLabDiagn,2015,19:0395)

新生兒缺血缺氧性腦病(Hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)發(fā)病機制復(fù)雜，病因主要為宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息，為造成新生兒死亡及神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的重要病種，近年研究發(fā)現(xiàn)：免疫損傷在HIE的病理生理過程中作用較為關(guān)鍵[1]，免疫因素導(dǎo)致的腦缺血再灌注損傷在臨床的治療中逐漸被人們所重視，本研究回顧性分析98例HIE患兒細胞免疫及體液免疫功能狀態(tài)，旨在研究新生兒HIE免疫功能的變化情況及其影響因素，探討HIE免疫損傷機制，為HIE的治療提供新的研究資料。

1對象與方法

1.1研究對象

98例HIE患兒均來源于我院2011年1月-2014年1月兒科住院患兒，均符合HIE診斷標準，新生兒HIE的診斷及分級標準參考《新生兒缺氧缺血性腦病診斷標準》[2]，其中男59例，女39例，足月產(chǎn)，胎齡37-42周，平均38.69±1.67周，體重2.51-4.62 kg，平均3.36±0.46 kg，輕度26例、中度39例、重度33例；另選擇同期正常新生兒54例設(shè)為對照組，其中男31例，女23例，胎齡37-42周，平均38.34±1.62周，體重2.53-4.33 kg，平均3.46±0.55 kg，兩組在性別構(gòu)成、胎齡、體重上均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。研究對象的選擇注意排除早產(chǎn)兒、母親分娩時無嚴重感染，無免疫抑制劑及增強劑使用史。

1.2方法

所有研究對象在出生時取臍血3 ml，分別裝入2支真空采血管，1管采用EDTA-K2抗凝，1管采用肝素抗凝，混勻備用。用流式細胞儀檢測EDTA-k2抗凝血T細胞亞群(CD3細胞、CD4細胞、CD8細胞以及CD4/CD8比值)，流式細胞儀為FACS Calibur，試劑購自Becton Dickinson公司(美國)，肝素抗凝血檢側(cè)免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)，采用免疫比濁法，用美國貝克曼公司DXC-800全自動生化分析儀進行檢測，試劑為浙江伊利康生物有限公司提供。細胞因子白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子(TNF-a)采用肝素抗凝血酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測，試劑由深圳晶美生物有限公司提供，酶標儀為ST-360 (上?？迫A)。比較對照組、輕度、中度及重度HIE各組新生兒細胞免疫及體液免疫的差異。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

研究數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析處理，多組均值比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK法，以P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組T淋巴細胞亞群檢測情況比較

四組T淋巴細胞亞群經(jīng)方差分析，CD8細胞無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，CD3、CD4細胞及CD4/CD8均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，組間兩兩比較經(jīng)SNK法分析，CD4/CD8任意兩組均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，隨HIE嚴重程度加深而降低；CD3、CD4細胞HIE輕度組與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，HIE中、重度組與其他各組比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，在HIE組CD3、CD4細胞均隨HIE嚴重程度加深而降低。

表1　各組T細胞亞群檢測情況比較

注：與對照組比較*P<0.05，與輕度組比較#P<0.05，與中度組比較▲P<0.05

2.2各組免疫球蛋白檢測情況比較

四組免疫球蛋白經(jīng)方差分析，IgG、IgA無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，IgM均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，組間兩兩比較經(jīng)SNK法分析，IgM任意兩組均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，IgM均隨HIE嚴重程度加深而降低。

表2　各組免疫球蛋白檢測情況比較

注：與對照組比較*P<0.05，與輕度組比較#P<0.05，與中度組比較▲P<0.05

2.3各組細胞因子檢測情況比較

四組細胞因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-a經(jīng)方差分析均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，組間兩兩比較經(jīng)SNK法分析，IL-2、IL-8任意兩組均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；IL-6、HIE重度組與其他各組均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，HIE中度組與對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；TNF-α、HIE輕度組與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，HIE中、重度組與其他各組比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

表3　各組細胞因子檢測情況比較

注：與對照組比較*P<0.05，與輕度組比較#P<0.05，與中度組比較▲P<0.05

3討論

HIE在我國發(fā)病率將近0.2%-0.4%[3]，為圍生期常見疾病，患兒因缺血缺氧引起神經(jīng)細胞水腫、壞死導(dǎo)致腦損傷，在中重度患兒中多發(fā)生永久性神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，致死致殘率一直居高不下，嚴重危害了患兒的生命健康。HIE腦損傷與免疫系統(tǒng)的關(guān)系近年逐漸引起臨床研究人員的關(guān)注，神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)均為機體的調(diào)節(jié)體系，HIE在應(yīng)激狀態(tài)下，兩系統(tǒng)交互作用進一步加重腦損傷病情，有學(xué)者認為HIE腦損傷為多重因素，多種機制交互作用而發(fā)生的“瀑布式”病理變化，包括神經(jīng)細胞能量代謝障礙、微血管損傷、再灌注損傷等，其中免疫系統(tǒng)發(fā)揮較為關(guān)鍵的作用[4]，多種免疫細胞因子在HIE早期為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵介質(zhì)，而激活的免疫細胞釋放的細胞毒性物質(zhì)諸如：一氧化氮、興奮性氨基酸、氧自由基等則與神經(jīng)細胞的損傷有關(guān)[5]。

本組研究對HIE細胞免疫及體液免疫進行的研究，數(shù)據(jù)顯示：相對于正常新生兒，HIE患兒臍血CD3、CD4細胞及CD4/CD8比值均出現(xiàn)下降，且隨HIE嚴重程度的加深下降的程度更為顯著，缺氧導(dǎo)致新生兒多種神經(jīng)內(nèi)分泌肽類激素分泌減少，HIE患兒機體細胞免疫呈現(xiàn)抑制狀態(tài)[6]，同時再灌注損傷所誘發(fā)的淋巴細胞凋亡機制異常啟動，加速淋巴細胞凋亡[7]，臨床表現(xiàn)為CD3、CD4細胞均出現(xiàn)下降，其中尤以CD4下降更為顯著。提示HIE患兒細胞免疫功能低下，與對照組比較 HIE患兒免疫球蛋白比IgM呈現(xiàn)低水平，IgG與IgA則無統(tǒng)計學(xué)差異，細胞因子IL2、IL-6出現(xiàn)降低，IL-8、TNF-a出現(xiàn)上升，與HIE的病情嚴重程度均有一定的關(guān)聯(lián)性，T淋巴細胞既為免疫效應(yīng)細胞，同時對體液免疫也有重要的調(diào)節(jié)作用[8]，IL-2主要由Th1輔助細胞分泌，IL-6主要由Th2細胞分泌，CD4細胞主要包括Th1及Th2細胞，CD4細胞的下降導(dǎo)致IL-2、IL-6細胞因子的分泌減少[9]，同時IgM的生成需要IL-2的參與[10]，IL-2的下降導(dǎo)致HIE患兒IgM出現(xiàn)降低，實驗數(shù)據(jù)符合預(yù)期，IL-8為趨化因子，對中性粒細胞具有強烈的趨化及活化作用，參與機體的炎性反應(yīng)，活化的中性粒細胞釋放炎性介質(zhì)，導(dǎo)致血腦屏障及血管內(nèi)皮細胞通透性增加，TNF-a具有神經(jīng)毒性作用[11]，同時也可刺激IL-8、自由基的合成釋放，各種因子交互作用導(dǎo)致遲發(fā)性神經(jīng)元細胞凋亡，臨床研究顯示[12]：在HIE早期患兒使用抗TNF-a抗體可減輕患兒腦損傷程度。我們的數(shù)據(jù)顯示IL-8、THF-a升高與HIE嚴重程度關(guān)系密切。

綜上所述，HIE患兒機體多存在免疫功能紊亂，其紊亂程度與疾病嚴重程度關(guān)系密切，HIE的免疫學(xué)發(fā)病機制尚處于研究當中，一些免疫學(xué)的治療方法或許可成為HIE治療的新的嘗試。

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摘要：目的研究新生兒缺血缺氧性腦病(HIE)免疫功能的變化情況，探討HIE免疫損傷機制，為HIE的治療提供新的研究資料。方法98例HIE患兒設(shè)為HIE組，其中輕度26例、中度39例、重度33例，選擇同期54例正常新生兒為對照組，比較各組研究對象細胞免疫、體液免疫差異。結(jié)果HIE患兒CD3、CD4細胞及CD4/CD8出現(xiàn)下降，均隨HIE嚴重程度加深而降低；IgM、IL-2、IL-6出現(xiàn)下降，均隨HIE嚴重程度加深而降低，IL-8、TNF-a出現(xiàn)升高，均隨HIE嚴重程度加深而降低。結(jié)論HIE患兒機體多存在免疫功能紊亂，其紊亂程度與疾病嚴重程度關(guān)系密切。

關(guān)鍵詞：新生兒；缺血缺氧性腦病；細胞免疫；體液免疫

Analysis of the changes of immune function in neonates with hypoxic ischemic encephalopathy and its clinical significanceDULi-shu,PINGLong-yu,ZHANGMan-li.(ChineseMedicineHospitalinMianyangProvinceSichuan,Mianyang621000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE) the changes of immune function,to explore the mechanism of HIE immune injury,provide the new data for the treatment of HIE.Methods98 cases of HIE group HIE,including 26 mild cases,39 moderate cases,33 severe cases,select the same period in 54 cases of normal newborns as control group,compare each research object of cellular immunity,humoral immunity difference.ResultsHIE in children with CD3,CD4 cells and CD4/CD8 decreased with the severity of HIE,decreased IgM,deepen;IL-2,IL-6 decreased with the severity of HIE,decreased IL-8,deepen,TNF-a increased with the severity of HIE,deepen and reduce.ConclusionHIE patients many of the body's immune function disorder exists,the relationship between the degree of disorder and severity of disease are closely.

Key words:neonatal;hypoxic ischemic encephalopathy;cellular immunity;humoral immunity

收稿日期：(2014-03-27)

作者簡介：杜立樹(1960-)，男，漢族，四川射洪縣人，副主任檢驗師，大學(xué)本科，主要從事糖尿病診斷及腎臟疾病的實驗室診斷與研究。

文獻標識碼：A

中圖分類號：R722.1

文章編號：1007-4287(2015)03-0395-04

通訊作者*