不同產(chǎn)地不同采收時間楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量的比較*

不同產(chǎn)地不同采收時間楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量的比較*

★鐘瑞建1*吳安明2周國平1鄢慶偉1付輝政1*何陽虎2

(1.江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院/江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心南昌 330029；2.江西天施康中藥股份有限公司江西 鷹潭 335000)

摘要：目的：比較不同產(chǎn)地、不同采收期楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量。方法：采收相同產(chǎn)地下不同采收期和相同采收期下不同產(chǎn)地的楓香樹葉，稱重、曬干，并用HPLC 法測定異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量。結(jié)果：24批楓香樹葉,同一采收期中江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的楓香樹葉異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的總含量均較高；同一產(chǎn)地的8個采收期中,以5,6,7月份采收的楓香樹葉異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的總含量較高,12月份采收的異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的總含量最低。結(jié)論：不同產(chǎn)地、不同采收期楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量存在明顯差異,應(yīng)注意生長環(huán)境和采收季節(jié)對楓香樹葉藥材質(zhì)量的影響。

關(guān)鍵詞：楓香樹葉；異槲皮苷；山奈酚-3-O-蕓香糖苷；HPLC 法

楓香樹葉為金縷梅科楓香屬植物楓香LiquidambarformosanaHance的葉，性平，味辛苦，具有祛風(fēng)除濕、行氣止痛、解毒之功效。民間用于治療急性胃腸炎、痢疾、產(chǎn)后風(fēng)等疾病，其根、樹皮、樹脂、葉均可入藥[1-2]。 楓香樹葉的主要成分有黃酮和酚酸等類化合物以及微量元素等[3-6]。楓香樹葉原標(biāo)準(zhǔn)收載于1996 年版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，該標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下僅有性狀和顯微鑒別項(xiàng)[1]。作者以楓香樹葉主要成分異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷為指標(biāo)成分對楓香樹葉進(jìn)行了定性和定量研究[7]，提高后的標(biāo)準(zhǔn)已收入2014版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》[8]。在1996 年版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定楓香樹葉夏季采收，但目前市場需求巨大，難以滿足實(shí)際生產(chǎn)需求，且未見不同產(chǎn)地不同采收期楓香樹葉中成分含量差異的報道。本實(shí)驗(yàn)選擇異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷2個指標(biāo)成分，對江西余江、江西鷹潭、江西弋陽3個主要產(chǎn)地不同采收時間的楓香樹葉中的異槲皮苷及山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量進(jìn)行了測定，以期明確其成分含量差異及變化，為擴(kuò)大楓香樹葉藥源及合理采收提供理論依據(jù)。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料 楓香樹葉藥材共24批，為2014年5月至12月，采摘于江西余江、江西鷹潭、江西上饒三個產(chǎn)地，江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院袁貴平主任中藥師鑒定為金縷梅科植物楓香樹LiquidambarformosanaHance 的葉。標(biāo)本存于江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院。

1.2 儀器 202-OAB型電熱恒溫干燥箱(天津泰斯特儀器有限公司)、DHG-9101-39A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)、HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)、AB265-S 萬分之一分析天(Switzerland)、ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)、電子顯微鏡、Agilent1100高效液相、Agilent1200高效液相(美國Agilent)、MHXS-4-10 型高溫電爐儀(上海南陽儀器有限公司)。

1.3 試劑 乙腈為色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水，其他試劑均為分析純，對照品異槲皮苷(批號：131227)，山奈酚-3-O-蕓香糖苷(批號：140120)，均為從上海融禾醫(yī)藥科技有限公司購買。

2 方法與結(jié)果

2.1 異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量測定

2.1.1色譜條件色譜柱：YMC-Pack ODS-A ( 150 mm × 4.6 mm，5 μm) ；流動相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(13∶87)；檢測波長：351 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 mL /min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2對照品溶液的制備精密稱取異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷的對照品適量，置50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得含異槲皮苷0.011mg/mL和山柰酚-3-O-蕓香糖苷0.020 mg/mL 的混合對照品溶液。

2.1.3供試品溶液的制備取楓香樹葉粉末( 過4 號篩)約1. 0 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，搖勻，稱定重量，回流提取1.5 h，取出放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL 于蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)?0 mL水使溶解，先用石油醚提取3次，每次20 mL，棄去石油醚液，再用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙庵?0mL 量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。

2.2 異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取“2.1.2”項(xiàng)下混合對照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，以對照品溶液濃度X( μg/mL) 為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷濃度分別在5.485 ～ 54.452 μg/mL和4.561～45.613 μg/mL范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程分別為：Y= 19.751X- 14.152 ，r= 0. 9999；Y= 19.831X- 3.877 ,r= 0.9999。

2.3 樣品測定 取不同產(chǎn)地、不同采收期的楓香樹葉，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，根據(jù)峰面積計(jì)算樣品中異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷的含量。結(jié)果見表1-3。

從表 1可知，2014年5-11月，江西余江楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量，隨著時間的推移，基本平穩(wěn)，表明夏、秋季江西余江楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量基本穩(wěn)定。2014 年 12 月，江西余江楓香樹的落葉(02)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量較低，也比樹上葉子(01)含量低很多，結(jié)合該批次藥材采收前的天氣情況，應(yīng)是淋了雨所致。表明楓香樹葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量可能與淋雨水有較大關(guān)系。

表1　江西余江不同采收期楓香樹葉異槲皮苷

注：YJ14120802批次藥材在2014年11月 20日觀察時，葉子正由黃變紅，已經(jīng)開始集中掉落，2014年12月 8日采收時觀察，葉子已經(jīng)全部掉落。17天期間，江西余江2014年12月3日天氣為小雨-陣雨，下了陣雨。

表2　江西鷹潭不同采收期楓香樹葉異槲皮苷

注：YT14120702批次藥材在2014年11月10日觀察時，葉子正由黃變紅，已經(jīng)開始掉落，2014年12月7日采收時觀察，葉子已經(jīng)部分掉落。27天期間，江西鷹潭2014年12月3日天氣為陰-雨，下了小雨。

從表2可知，2014年5一11月，江西鷹潭楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷含量基本平穩(wěn)，但山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量隨著時間的推移，略有下降趨勢，表明夏、秋季江西鷹潭楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷含量基本穩(wěn)定，而山奈酚-3-O-蕓香糖苷在葉子較嫩時含量較高，隨后基本平穩(wěn)。2014年12月，江西鷹潭楓香樹的落葉(02)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量較低，也比樹上葉子(01)含量低很多，結(jié)合該批次藥材采收前的天氣情況，應(yīng)是淋了雨所致。表明楓香樹葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量可能與淋雨水有較大關(guān)系。

表3　江西上饒不同采收期楓香樹葉異槲皮苷

注：YY14120502批次藥材在2014年11月18日觀察時，葉子正由黃變紅，已經(jīng)開始掉落，2014年12月5日采收時觀察，葉子已經(jīng)部分掉落。17天期間，江西鷹潭2014年12月3日天氣為陰-雨，下了小雨。

從表3可知，2014年5一11月，江西弋陽楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量基本平穩(wěn)，表明夏、秋季江西弋陽楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量基本穩(wěn)定。2014 年 12 月，江西弋陽楓香樹的落葉(02)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量較低，也比樹上葉子(01)含量低很多，結(jié)合該批次藥材采收前的天氣情況，應(yīng)是淋了雨所致。表明楓香樹葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量可能與淋雨水有較大關(guān)系。

3 結(jié)論和討論

2014 年 5一11 月，江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的楓香樹的樹上葉子中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量總和均較高，高于2014版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中楓香樹葉含量測定項(xiàng)下的規(guī)定。表明江西余江、江西鷹潭、江西弋陽地區(qū)楓香樹的樹上葉子藥材質(zhì)量較好，異槲皮苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷含量均能滿足楓香樹葉含量測定項(xiàng)下的規(guī)定。

2014 年 5一11 月，江西余江、江西鷹潭、江西弋陽楓香樹的樹上葉子中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量隨時間推移，含量基本穩(wěn)定，表明江西余江、江西鷹潭、江西弋陽的楓香樹的樹上葉子中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量隨著時間的推移，較穩(wěn)定，這為增加楓香樹葉秋季采收來源提供了數(shù)據(jù)支持。

2014 年 12 月，江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的楓香樹的落葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量均較低，表明鷹江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的地上落葉需要及時采收，以免被雨淋，導(dǎo)致含量不合格。

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收稿日期：(2015-05-07)編輯：曾文雪

中圖分類號：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

通信作者:付輝政，博士，助理研究員。研究方向：中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Tel:0791-86217386，E-mail:fhzfhz620@sohu.com。

基金項(xiàng)目:第一作者: 鐘瑞建(1963—)，主任藥師。研究方向：中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Tel:0791-88158786，E-mail: zhongrj@jxfda.gov.cn。