家畜布氏桿菌病的血清學(xué)診斷方法

（寧夏同心縣農(nóng)牧和科學(xué)技術(shù)局 751300）

（寧夏同心縣農(nóng)牧和科學(xué)技術(shù)局 751300）

1 平板凝集反應(yīng)

操作步驟：最好用平板凝聚試驗箱。無此設(shè)備可用清潔玻璃板，劃成4 cm2方格。橫排5格，縱排可以數(shù)列，每排第一格寫血清號碼，用0.2 mL吸管將血清以0.08、0.04、0.02、0.01 mL分別依次加于每排4小方格內(nèi)，吸管須稍頃斜并接觸玻璃板，然后以抗原滴管垂直于每格血清上滴加1滴平板抗原，或用0.2 mL吸管每格加0.03 mL。用牙簽或金屬棒將血清抗原混合，均勻。一份血清用一根牙簽，以0.01、0.02、0.04的順序混合。

混合完畢后將玻板均勻加溫約30℃左右，5～8 min按下列標準記錄結(jié)果：#：出現(xiàn)大凝集片或小粒狀物，液體完全透明，即100%凝集。+++：有明顯凝集片和顆粒，液體幾乎完全透明，即75%凝集。++：有可見凝集片和顆粒，液體不甚透明，即50%凝集。+：僅僅可以看見顆粒，液體渾濁，即25%凝集?！阂后w均勻渾濁，無凝集現(xiàn)象。

平板凝集反應(yīng)血清量分別為0.08、0.04、0.02 和0.01 mL加入抗原后，其效價相當于試管凝集價的1：25、1：50、1：100和1：200。每批次平板凝集試驗須以陰、陽性血清作對照。

結(jié)果判定：判定標準與試管凝集反應(yīng)相同。結(jié)果通知單在血清凝集價的格內(nèi)分別換成為0.08（1：25）、0.04（1：50）、0.02（1：100）和0.01（1：200）。每批次平板凝集試驗須以陰、陽性作對照。

2 虎紅平板凝聚試驗

材料準備：目前在國內(nèi)只有中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物學(xué)研究所生產(chǎn)供應(yīng)布氏桿菌虎紅平板試驗抗原，可按說明書使用。陰、陽性對照同于試管凝集反應(yīng)的陰陽性血清。

操作步驟：被檢血清和布氏桿菌虎紅平板凝集抗原各0.3 mL滴于玻璃板的方格內(nèi)，每份血清各用1根火柴棒混合均勻。在室溫（20℃）4～10 min內(nèi)記錄反應(yīng)結(jié)果。同時以陽、陰性血清作對照。

結(jié)果判定：在陽性血清及陰性血清試驗結(jié)果正常的對照下。被檢血清出現(xiàn)任何程度的凝集反應(yīng)均判為陽性，完全不凝集的判為陰性，無可疑反應(yīng)。

3 全乳環(huán)狀反應(yīng)

材料準備：抗原由獸醫(yī)生物制品廠生產(chǎn)供應(yīng)。全乳環(huán)狀反應(yīng)抗原有2種，一種為蘇木紫染色抗原，呈藍色。另一種是四氮唑染色抗原，呈紅色。被檢乳汁須為新鮮全脂乳。凡腐敗、變酸和凍結(jié)的不適于本試驗用（夏季采集的乳汁應(yīng)于當天內(nèi)檢驗，如保存于2℃時，7天內(nèi)仍可使用）?；既榉垦准捌渌榉考膊〉娜橹?、初乳、脫脂乳及煮沸乳汁也不能作環(huán)狀反應(yīng)用。

操作步驟：取新鮮全乳1 mL加入小試管中，加入抗原1滴（約0.05 mL）充分振蕩混合。置37～38℃水浴中60 min。小心取出試管，避免振蕩，立即進行判定。

判定標準：判定時不論哪種抗原，均按乳脂的顏色和乳柱的顏色進行判定。

強陽性反應(yīng)（+++）乳柱上層的乳脂形成明顯紅色或藍色的環(huán)帶，乳柱呈白色，分界清楚。陽性反應(yīng)（++）：乳脂層的環(huán)帶雖呈紅色或藍色，但不顯著，乳柱微帶紅色或藍色。弱陽性反應(yīng)（+）：乳脂層環(huán)帶顏色較淺，但比乳柱顏色略深。疑似反應(yīng)（±）：乳脂層環(huán)帶不甚明顯，并與乳柱分界模糊，乳柱帶有紅色或藍色。陰性反應(yīng)（—）：乳柱上層無任何變化，乳柱呈均勻渾濁的紅色或藍色。

4 補體結(jié)合反應(yīng)

材料準備：溶血素、補體、綿羊紅細胞（2.5%）來源于一般補反試驗。抗原和陰、陽性血清，由獸醫(yī)生物藥品廠生產(chǎn)供應(yīng)，按說明書使用。試驗所用稀釋液用生理鹽水。

被檢血清以及陰、陽性血清在試驗時用生理鹽水1：10稀釋：羊、馬血清58～59℃，驢、騾血清63～64℃，牛、豬血清56～57℃，駱駝54℃。溶血素及補體效價的滴定，與一般補反試驗相同。溶血素使用2個工作量，補體使用1個工作量。布氏桿菌補反抗原滴定與鼻疽補反抗原滴定在術(shù)式上相同，而布氏桿菌補反抗原在實際應(yīng)用的稀釋度應(yīng)比滴定的效價濃度為25%。

被檢血清的正式試驗：正式試驗的各種成分即所準備的滅能被檢血清及對照陰陽性血清、生理鹽水、稍濃于1個工作量抗原，1個工作量的補體，2個工作量的溶血素及2.5%的紅細胞。每種成分加入量為0.5 mL，各反應(yīng)成分的總量為2.5 mL。每份被檢血清設(shè)置2個管，其中1支不加抗原作為對照。每批被檢血清試驗的對照管共7支，陽性血清2支，其中1支不加抗原，陰性血清2支，其中1支不加抗原；抗原對照管1支不加血清；溶血素對照管1支，不加血清，抗原及補體，補體對照管1支，只加補體及紅細胞。不足2.5 mL的對照管，均以生理鹽水補足2.5 mL。試驗中的2次加溫，均為37～38℃水浴20 min。

各試驗管加溫完畢后，取出立即進行第一次判定。要求不加抗原的陽性血清對照管，陰性血清對照管及抗體對照管呈完全溶血反應(yīng)。靜置12 h后作第二次判定，第二次判定時要求溶血素對照管，補體對照管呈完全不溶血反應(yīng)。此時即可對被檢血清進行判定。被檢血清不加抗原管應(yīng)是完全溶血，而加抗原管的判定記錄結(jié)果。

家畜布氏桿菌病的血清學(xué)診斷方法

馬曉梅，馬曉英，毛航平