NMP22聯(lián)合FISH技術在血尿患者膀胱癌篩查中的應用

江長琴 梁朝朝 施浩強 張翼飛 郝宗耀 周駿

膀胱癌是泌尿系最常見的惡性腫瘤，目前膀胱癌的診斷主要以膀胱鏡和尿脫落細胞學檢查為主。本研究主要探討核基質蛋白22（nuclear matrix protein 22，NMP22）聯(lián)合熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）技術檢測在血尿患者膀胱癌篩查中的應用價值。

對象與方法

一、病例資料

收集2008年1～10月間在我科住院有不同程度血尿的疑似膀胱癌患者100例，男78例，女22例；年齡22～86歲，平均60.5歲。全部病例均在手術前行FISH檢測、NMP22檢測、尿液脫落細胞學檢查、膀胱鏡檢查、B超或CT平掃及增強掃描。因本研究是針對血尿患者膀胱癌的篩查，故經(jīng)膀胱鏡檢和病理活檢證實的膀胱癌患者，包括尿路上皮癌、腺癌及低度惡性潛能的尿路上皮乳頭狀腫瘤（具有惡性的潛能）共69例歸為實驗組，其他非膀胱癌患者31例歸為對照組。

二、FISH方法學

留取患者晨尿200ml用于FISH檢測。按照FISH操作方法進行制片、預處理、變性與雜交、洗滌，最后在熒光顯微鏡下觀察熒光信號，計數(shù)、攝圖并分析結果。

三、尿脫落細胞學檢查

以LBP尿細胞學（巴氏染色）和傳統(tǒng)尿細胞學（HE染色）聯(lián)合檢查定論，其中一項檢查結果陽性即為尿脫落細胞學檢查陽性，兩項檢查結果均陰性為尿脫落細胞學檢查陰性。采用4級分級法分析結果，Ⅰ級：上皮細胞無異常；Ⅱ級：異形細胞；Ⅲ級：可疑癌細胞；Ⅳ級：查見癌細胞。統(tǒng)計分析時將Ⅰ級和Ⅱ級定為陰性，Ⅲ級和Ⅳ級定為陽性。

四、NMP22檢測

收集患者新鮮尿液50ml，立即置于-80℃保存待測。按照ELISA試劑盒說明書操作，以目前較公認的Soloway等［1］提出的NMP22含量大于10U／ml為陽性判斷標準。

五、統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，對計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

100例血尿患者中，經(jīng)病理證實78例為膀胱腫瘤，2例膀胱腫瘤可疑，20例為非膀胱腫瘤。具體病理分類（按WHO2004分級）為膀胱尿路上皮癌47例、低度惡性潛能的尿路上皮乳頭狀腫瘤20例、內(nèi)翻性乳頭狀瘤7例、尿路上皮乳頭狀瘤2例、膀胱腺癌2例、膀胱腫瘤可疑2例、非瘤炎性病變12例、良性前列腺增生癥4例、前列腺癌1例、腺性膀胱炎2例、腎癌1例。實驗組包括膀胱尿路上皮癌、低度惡性潛能的尿路上皮乳頭狀腫瘤和膀胱腺癌共69例；對照組為非膀胱癌患者31例。

FISH方法檢測膀胱癌的敏感性和特異性分別為75.4%和83.9%；NMP22檢測膀胱癌的敏感性和特異性分別為72.5%和74.2%；尿脫落細胞學檢查的敏感性和特異性分別為31.9%和100%；FISH方法聯(lián)合NMP22檢測的敏感性和特異性分別為88.4%和87.1%；聯(lián)合檢測的敏感性明顯優(yōu)于任何一項單一檢查（P＜0.05），特異性明顯高于單獨NMP22檢測（P＜0.05）。

討 論

盡管膀胱鏡檢查和尿細胞學檢查目前仍是膀胱癌早期診斷的“金標準”，但由于膀胱鏡檢查具有創(chuàng)傷性，尿細胞學檢查的敏感性較低，國內(nèi)外學者正在探索新的腫瘤標志物用于膀胱癌的早期診斷。

FISH技術主要用于染色體數(shù)目和結構畸變的研究。分子細胞遺傳學已發(fā)現(xiàn)多種染色體位點在膀胱癌中表達異常。FISH技術應用 GLP16／CSP17、CSP3／CSP7探針組檢測這一遺傳學改變。我課題組多年來一直將這項技術應用于膀胱癌檢測，本研究發(fā)現(xiàn)FISH在血尿患者膀胱癌檢測中的敏感性和特異性分別為75.4%和83.9%，其敏感性明顯高于尿脫落細胞學檢測，與國內(nèi)相關報道一致［2］。

NMP22為核有絲分裂復合體蛋白的重要成分，與核骨架的組成、DNA復制、RNA合成、激素吸附及基因表達有關。正常人尿液中NMP22的含量極低，而膀胱腫瘤患者中，因瘤體組織壞死、脫落，可引起尿液中NMP22含量增高。本研究NMP22檢測的敏感性為72.5%，特異性為74.2%。NMP22在膀胱癌診斷中的敏感性明顯高于尿脫落細胞學檢測。

尿脫落細胞檢查可作為血尿患者的初步篩選手段，對細胞異型性明顯的原位癌及浸潤癌的癌細胞有很高的檢出率。其特異性高，但敏感性低，尤其對低分級腫瘤的敏感性更低。研究報道其在膀胱癌篩查中也有一定的假陽性率［3］。本研究尿脫落細胞學檢查的敏感性和特異性分別為31.9%和100%。其較低的敏感性也要求臨床有更高價值的檢測手段的發(fā)現(xiàn)。

本研究NMP22聯(lián)合FISH檢查的敏感性和特異性分別為88.4%和87.1%。聯(lián)合檢測的敏感性明顯優(yōu)于任何一項單一檢查（P＜0.05），特異性明顯高于單獨NMP22檢測（P＜0.05）。由此可見，NMP22聯(lián)合FISH檢查在血尿患者膀胱癌篩查應用中具有一定的臨床應用價值。由于本組標本量有限，我們對各臨床分期及病理分級的膀胱癌患者中檢測敏感性和特異性未做分類比較，下一步我們將增加標本量進一步完善。

［1］ Soloway MS，Briggman V，Carpinito GA，et al.Use of a new tumor marker，urinary NMP22，in the detection of occult or rapidly recurring transitional cell carcinoma of the urinary tract following surgical treatment［J］.J Urol，1996，156（2Pt 1）：363-367.

［2］ 羅彬，李正明，李剛，等.熒光原位雜交在膀胱尿路上皮癌診斷中的應用［J］.現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志，2012，4（3）：144-147.

［3］ Matsumoto K，Ikeda M，Hirayama T，et al.Clinical value of dividing false positive urine cytology findings into three categories：atypical，indeterminate，andsuspicious of malignancy［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2014，15（5）：2251-2255.