• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易患性的關(guān)系研究

    2015-02-21 08:44:11楊曉紅
    中國全科醫(yī)學(xué) 2015年14期
    關(guān)鍵詞:補(bǔ)體維吾爾族等位基因

    彭 玲,鄔 超,楊曉紅

    ?

    補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易患性的關(guān)系研究

    彭 玲,鄔 超,楊曉紅

    目的 探討補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺(PBL)易患性的關(guān)系。方法 選取2012年1月—2013年12月在喀什、和田地區(qū)飼養(yǎng)鴿子年限≥1年并在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸科病房和門診確診的維吾爾族PBL患者為病例組(n=32),選擇飼養(yǎng)鴿子年限≥1年的維吾爾族未患PBL者為陰性對(duì)照組(n=30),選擇同期未飼養(yǎng)鴿子且本院體檢健康的維吾爾族人群為正常對(duì)照組(n=30)。抽取受試者外周血抗凝,提取白細(xì)胞DNA,采用MassARRAY Assay Design實(shí)時(shí)PCR 法進(jìn)行C5基因14個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)檢測(cè),對(duì)存在等位基因的SNP位點(diǎn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果 C5基因rs17611、rs17612、rs17216529存在基因多態(tài)性,其中rs17611、rs17216529位點(diǎn)存在GG、AA、GA 3種基因型,rs17612位點(diǎn)存在CC、AA、CA 3種基因型。3組C5基因rs17611、rs17216529、rs17612基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 補(bǔ)體C5 基因多態(tài)性可能不影響維吾爾族PBL的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

    養(yǎng)鳥者肺;肺泡炎,外源性變應(yīng)性;補(bǔ)體C5;多態(tài)性,單核苷酸;疾病遺傳易感性;維吾爾族

    彭玲,鄔超,楊曉紅.補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易患性的關(guān)系研究[J].中國全科醫(yī)學(xué),2015,18(14):1667-1671.[www.chinagp.net]

    Peng L,Wu C,Yang XH.Relationship between C5 gene polymorphism and susceptibility to pigeon breeder′s lung in Uygur people[J].Chinese General Practice,2015,18(14):1667-1671.

    過敏性肺炎(HP)又名外源性過敏性肺泡炎,是一組易感宿主反復(fù)吸入環(huán)境中的細(xì)小懸浮有機(jī)物抗原誘發(fā)的以細(xì)胞免疫和體液免疫為主要反應(yīng)介導(dǎo)的肉芽腫性炎性肺疾病[1]。飼鴿者肺(PBL)為HP的常見類型,是易感個(gè)體反復(fù)暴露于抗原后促發(fā)免疫反應(yīng)導(dǎo)致的炎性肺泡炎。據(jù)報(bào)道,暴露人群中只有0.5%~7.5%會(huì)發(fā)展成為PBL[2]。前期研究發(fā)現(xiàn),PBL的發(fā)病與Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞的失衡密切相關(guān)[3],敏感個(gè)體暴露于抗原后,Th1細(xì)胞因子分泌的促炎因子與Th2細(xì)胞因子分泌的抗炎因子的分布可能影響PBL的易患性[4]。補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體重要的免疫防御系統(tǒng),C5是補(bǔ)體系統(tǒng)中關(guān)鍵片段,是Th1/Th2失衡中的重要調(diào)節(jié)分子,其水平變化可能影響疾病的發(fā)生發(fā)展。C5基因多態(tài)性被證實(shí)與多種Th1/Th2失衡性疾病的易患性相關(guān)[5-7]。PBL是一種典型的Th1/Th2失衡性疾病,晚期發(fā)展成為不可逆性的肺纖維化,C5基因多態(tài)性與PBL發(fā)病的易患性尚未見報(bào)道。本研究探討了C5基因多態(tài)性與維吾爾族PBL發(fā)病的關(guān)系,以期從分子水平闡釋PBL的發(fā)病機(jī)制。

    1 對(duì)象與方法

    1.2 選擇位點(diǎn) C5基因位于9號(hào)染色體上,本研究對(duì)C5基因的14個(gè)單核苷酸的多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)(rs17611、rs17612、rs17216529、rs2230212、rs201100938、rs2230215、rs144332635、rs41311883、rs141560628、rs118181017、rs41311887、rs35791896、rs148353209、rs188716286)進(jìn)行檢測(cè)。

    1.3 檢測(cè)方法

    1.3.1 試劑 人全血基因組DNA試劑盒購自德國Greiner公司;多重PCR及延伸引物由Sequenom公司提供的MassARRAY Assay Design 軟件設(shè)計(jì),北京博奧生物有限合成。

    1.3.2 DNA提取和保存 受試者均在清晨空腹抽取2份靜脈血各4 ml,以3.2%枸櫞酸鈉抗凝。按照全血基因組DNA試劑盒說明書快速提取DNA(見圖1),-80 ℃深低溫保存。

    圖1 全血基因組DNA提取圖

    1.3.3 SNP檢測(cè) 采用SequenomMassARRAY Assay Design軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì),多重PCR技術(shù)對(duì)所選位點(diǎn)的基因序列進(jìn)行擴(kuò)增(反應(yīng)條件:94 ℃ 4 min;94 ℃ 20 s,56 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,循環(huán)45次;72 ℃ 3 min;4 ℃保持)。將PCR反應(yīng)板放置于PCR儀上,啟動(dòng)PCR反應(yīng),將擴(kuò)增產(chǎn)物保存在-20 ℃?zhèn)溆?。將上述擴(kuò)增產(chǎn)物中加入蝦堿性磷酸酶(SAP)純化并加入雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP),通過單堿基延伸引物(見表1)序列實(shí)現(xiàn)SNP位點(diǎn)的擴(kuò)增,操作步驟按Sequenom公司的操作指南進(jìn)行。延伸完畢后,產(chǎn)物通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜基因分型技術(shù)進(jìn)行SNP分型。

    2 結(jié)果

    2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) C5基因rs17611、rs17612、rs17216529共3個(gè)位點(diǎn)存在基因多態(tài)性。3組間C5基因的3個(gè)SNP位點(diǎn)基因型分布經(jīng)χ2檢驗(yàn),符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(χ2=1.428、0.001、4.861,P>0.05),表明研究群體具有代表性。

    2.2 基因分型的檢測(cè) rs17611、rs17216529位點(diǎn)在新疆維吾爾族人群中存在GG、GA、AA 3種基因型,rs17612位點(diǎn)存在CC、CA、AA 3種基因型。

    表1 PCR引物及單堿基延伸引物序列

    2.3 C5基因rs17611位點(diǎn)基因型及等位基因分布 各組C5基因rs17611位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表2)。

    表2 各組C5基因rs17611位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

    Table 2 Comparison of genetypes and allele frequency of C5 rs17611 among the 3 groups

    組別例數(shù)基因型GG AG AA等位基因G A正常對(duì)照組301010103030陰性對(duì)照組3091473228病例組3251892836χ2值4.4451.180P值0.3490.554

    2.4 C5基因rs17612位點(diǎn)基因型及等位基因分布 各組C5基因rs17612位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表3)。

    2.5 C5基因rs17216529位點(diǎn)基因型及等位基因分布 各組C5基因rs17216529位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表4)。

    表3 各組C5基因rs17612位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

    Table 3 Comparison of genetypes and allele frequency of C5 rs17612 among the 3 groups

    組別例數(shù)基因型GG AG AA等位基因G A正常對(duì)照組300228258陰性對(duì)照組300327357病例組320032064χ2值3.1443.056P值0.2080.217

    表4 各組C5基因rs17216529位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

    Table 4 Comparison of genetypes and allele frequency of C5 rs17216529 among the 3 groups

    組別例數(shù)基因型GG AG AA等位基因G A正常對(duì)照組30201005010陰性對(duì)照組3021 9 051 9 病例組32221005410χ2值0.0790.064P值0.9610.968

    3 討論

    機(jī)體Th1/Th2失衡參與多種變態(tài)反應(yīng)性疾病、自身免疫性系統(tǒng)疾病和移植排斥反應(yīng)等疾病的發(fā)生。PBL是一種復(fù)雜的多因子疾病,Th1/Th2失衡所分泌的相關(guān)免疫學(xué)因子促進(jìn)其發(fā)生發(fā)展,但只有少部分人暴露抗原后會(huì)發(fā)展為PBL。Th1/Th2失衡相關(guān)基因多態(tài)性與PBL關(guān)系的相關(guān)研究顯示,主要組織相容性復(fù)合體-Ⅱ(MHC-Ⅱ)、腫瘤壞死因子-β(TNF-β)、抗原提呈蛋白-1(TAP-1)、金屬蛋白酶組織抑制劑-3(TIMP-3)等基因SNP均被證實(shí)與PBL的遺傳易患性相關(guān)[8-10]。

    C5是補(bǔ)體系統(tǒng)的重要組成部分,其基因編碼的蛋白在Th1/Th2失衡性疾病的炎性免疫應(yīng)答中發(fā)揮了極其關(guān)鍵的作用。在PBL的發(fā)病機(jī)制中,鴿子糞便、羽毛等外源性抗原可直接激活補(bǔ)體旁路途徑和巨噬細(xì)胞,引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性損害,從而造成肺組織炎癥。早期研究發(fā)現(xiàn),在農(nóng)民肺的動(dòng)物模型及患者的活檢肺組織中均有補(bǔ)體沉著[1l]。C5基因是與炎癥發(fā)生發(fā)展有關(guān)的免疫相關(guān)基因[12],該基因的突變導(dǎo)致C5蛋白構(gòu)象的穩(wěn)定性降低,加速其降解,患者表現(xiàn)為嚴(yán)重復(fù)發(fā)性感染傾向。如前所述,C5基因多態(tài)性已明確證明與多種Th1/Th2失衡性疾病關(guān)聯(lián)[13],提示在Th1/Th2失衡性疾病中可能存在共同基因或者共同的細(xì)胞途徑。

    本研究發(fā)現(xiàn),C5基因rs17611、rs17612、rs17216529共3個(gè)位點(diǎn)存在變異。rs17611位點(diǎn)參與C5蛋白質(zhì)第802號(hào)氨基酸序列的編碼。多數(shù)情況下該位點(diǎn)的2個(gè)等位基因堿基均是G(即GG型),轉(zhuǎn)錄翻譯為纈氨酸;當(dāng)2個(gè)堿基都轉(zhuǎn)換為A時(shí)(即AA型),轉(zhuǎn)錄翻譯該位置時(shí)全部為異亮氨酸;當(dāng)其中一個(gè)堿基轉(zhuǎn)換為A時(shí)(即AG型),轉(zhuǎn)錄翻譯后該位置半數(shù)為異亮氨酸。國內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的突變?cè)黾恿艘倚透窝撞《靖腥菊甙l(fā)生肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)[14],可能與C5的結(jié)構(gòu)、功能和表達(dá)水平有關(guān)。也有報(bào)道表明rs17611位點(diǎn)突變?cè)黾游⒀芗膊“l(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[15]。本研究發(fā)現(xiàn),rs17611等位基因A和G及各基因型頻率3組間無明顯差異,提示其與PBL的易患性不相關(guān),不是PBL的風(fēng)險(xiǎn)因素。而關(guān)于rs17612、rs17216529在其他疾病中的研究報(bào)道較少,本研究發(fā)現(xiàn)rs17612在此次研究中存在等位基因A和C以及AA、CA兩種基因型,rs17216529存在等位基因A和G以及GG、GA兩種基因型,結(jié)果表明這兩個(gè)位點(diǎn)均未增加PBL的遺傳風(fēng)險(xiǎn)。這可能與C5基因高度保守有一定關(guān)系,考慮到本研究樣本量較小,因此有必要進(jìn)一步進(jìn)行大樣本的重復(fù)研究來驗(yàn)證。

    綜上所述,本研究納入的樣本量較少,在一定程度上可能影響研究結(jié)果,仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,在不同民族間進(jìn)行重復(fù)研究來證實(shí)和闡明PBL的遺傳發(fā)病機(jī)制。從遺傳學(xué)的角度講,尋找與疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基因,一般先從SNP數(shù)據(jù)庫入手,選擇等位頻率比較高的位點(diǎn)進(jìn)行SNP分型。該方法雖簡單易行,但是存在一定的盲目性,甚至可能得到陰性結(jié)果,存在一定的風(fēng)險(xiǎn)性。因此,有效地發(fā)掘與疾病關(guān)聯(lián)SNP仍是今后研究面臨的一大挑戰(zhàn)。

    [1]Robert J.Mason V.Courtney B,et al.Murray and Nadel′s textbook of respiratory medicine[M].5th ed.Amsterdam:Saunders Elsevier,2010:1587-1600.

    [2]Girard M,Lacasse Y,Cormier Y.Hypersensitivity pneumonitis[J].Allergy,2009,64(3):322-334.

    [3]胡娟,成建華.過敏性肺炎:飼鴿者肺的病因、臨床特征與發(fā)病機(jī)制[J].中國免疫學(xué)雜志,2004,20(10):723-726.

    [4]Gudmundsson G,Monick MM,Hunninghake GW.IL-12 modulates expression of hypersensitivity pneumonitis[J].J Immunol,1998,161(2)161:991.

    [5]Zhang X,Li W,Zhang X,et al.Association between polymorphism in TRAF1/C5 gene and risk of rheumatoid arthritis:a meta-analysis[J].Mol BiolRep,2014,41(1):317-324.

    [6]Nishimoto K,Kochi Y,Ikari K,et al.Association study of TRAF1-C5 polymorphisms with susceptibility to rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus in Japanese[J].Ann Rheum Dis,2010,69(2):368-373.

    [7]Hasegawa K,Tamari M,Shao C,et al.Variations in the C3,C3a receptor,and C5 genes affect susceptibility to bronchial asthma[J].Hum Genet,2004,115(4):295-301.

    [8]Aquino-Galvez A,Camarena A,Montano M,et al.Transporter associated with antigen processing(TAP)1 gene polymorphisms in patients with hypersensitivity pneumonitis[J].Exp Mol Pathol,2008,84(2):173-177.

    [9]Janssen R,Kruit A,Grutters JC,et al.TIMP-3 promoter gene polymorphisms in BFL[J].Thorax,2005,60(11):974.

    [10]Mohr LC.Hypersensitivity Pneumonitis[J].Curr Opin Pulm Med,2004,10(5):401-411.

    [11]Sch?llibaum M,Hess MW,Nicolet J,et al.Histopathological and immunohistological changes in the rabbit lung after experimental exposure to a purified enzyme of Micropolyspora faeni[J].Clin Exp Immunol,1977,28(3):535-541.

    [12]Plenge RM,Seielstad M,Padyukov L,et al.TRAFl-C5 as a risk locus for rheumatoid arthritis-a genomewide study[J].N Engl J Med,2007,357(12):1199-1209.

    [13]Jeong JC,Hwang YH,Kim H,et al.Association of complement 5 genetic polymorphism with renal allograft outcomes in Korea[J].Nephrol Dial Transplant,2011,26 (10):3378-3385.

    [14]Li CZ,Guo SL,Li QS,et al.Polymorphism of complement C5 gene and susceptibility to liver cirrhosis in patients with chronic hepatitis B[J].Journal of Clinical Hepatology,2011,14(6):427-429.(in Chinese) 李長政,郭水龍,李青山,等.補(bǔ)體C5 基因多態(tài)性與肝硬化發(fā)病的關(guān)系研究[J].實(shí)用肝臟病雜志,2011,14(6):427-429.

    [15]Greisenegger S,Zehetmayer S,Bauer P,et al.Polymorphisms in inflammatory genes and the risk of ischemic stroke and transient ischemic attack:results of a multilocus genotyping assay[J].Clin Chem,2009,55(1):134-138.

    (本文編輯:吳立波)

    Relationship Between C5 Gene Polymorphism and Susceptibility to Pigeon Breeder′s Lung in Uygur People

    PENGLing,WUChao,YANGXiao-hong.

    DepartmentofClinicalResearch,ShiheziUniversity,Shihezi832002,China

    Objective To evaluate the association between C5 gene polymorphism and susceptibility to pigeon breeder′s lung (PBL) in Uygur people.Methods We enrolled 32 Uygur patients who had bred pigeons for more than one year,came from KashiRegon and Hetian,and were diagnosed with PBL in the outpatient clinic and the Department of Pneumology,the People′s Hospital of Xinjiang from January 2012 to December 2013 as the case group.30 Uygur who had bred pigeons for more than one year and weren′t diagnosed with PBL,were enrolled as negative control group.Another 30 healthy Uygur people who hadn′t bred pigeons and received physical examination in the hospital in the same period were enrolled as the normal control group.Peripheral blood was sampled from the subjects,and leucocyte DNA was extracted from the samples.We conducted tests on 14 single nucleotide polymorphism (SNP) loci in C5 genes by real-time polymerase chain reaction (PCR) method of MassARRAY Assay Design.The three groups were compared in the SNP loci with allelic genes.Results Gene polymorphism was found in the loci of rs17611,rs17612 and rs17216529.Genotypes of GG,AA and GA were found in rs17611 and rs17216529;genotypes of CC,AA and CA were found in rs17612.No significant differences were found in rs17611,rs17216529 and rs17612 in genotype and allele frequency among three groups(P>0.05).Conclusion C5 gene polymorphisms may not have on influence on the susceptibility to PBL in Uygur people.

    Bird fancier′s lung;Alveolitis,extrinsic allergic;Complement C5;Polymorphism,single nucleotide;Genetic predisposition to disease;Uygur nationality

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260003)

    832002新疆石河子市,石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床系(彭玲);新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科(鄔超,楊曉紅)

    楊曉紅,新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科;E-mail:yxh6176@126.com

    R 563.19

    A

    10.3969/j.issn.1007-9572.2015.14.016

    2014-11-10;

    2015-03-03)

    猜你喜歡
    補(bǔ)體維吾爾族等位基因
    “補(bǔ)體法”在立體幾何解題中的妙用
    補(bǔ)體因子H與心血管疾病的研究進(jìn)展
    親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    抗dsDNA抗體、補(bǔ)體C3及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)于診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎損傷的臨床意義
    維吾爾族手藝人
    流感患兒血清免疫球蛋白及補(bǔ)體的檢測(cè)意義
    WHOHLA命名委員會(huì)命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認(rèn)
    DXS101基因座稀有等位基因的確認(rèn)1例
    Ad36感染對(duì)維吾爾族肥胖患者progranulin表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
    等位基因座D21S11稀有等位基因32.3的確認(rèn)
    av线在线观看网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩av免费高清视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 少妇的丰满在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 香蕉国产在线看| 国产日韩欧美视频二区| 日韩av免费高清视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 热re99久久精品国产66热6| 日韩中字成人| av在线老鸭窝| 午夜久久久在线观看| 国产淫语在线视频| 丝袜脚勾引网站| 国产男女内射视频| 国产精品av久久久久免费| 日韩一区二区三区影片| 各种免费的搞黄视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产日韩欧美视频二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 永久免费av网站大全| 伊人久久国产一区二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 中国三级夫妇交换| 国产在线免费精品| 三上悠亚av全集在线观看| 搡老乐熟女国产| 国产成人精品无人区| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲综合色惰| 十八禁网站网址无遮挡| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美日韩视频精品一区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲国产av新网站| 午夜福利在线免费观看网站| www.自偷自拍.com| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产在线免费精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 青青草视频在线视频观看| 国产麻豆69| 成人免费观看视频高清| 99久久人妻综合| 国产免费视频播放在线视频| 最新中文字幕久久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产男女内射视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 青青草视频在线视频观看| 欧美精品一区二区大全| 精品一品国产午夜福利视频| 日韩免费高清中文字幕av| av片东京热男人的天堂| 亚洲人成网站在线观看播放| 青青草视频在线视频观看| 丰满乱子伦码专区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美精品av麻豆av| a级毛片在线看网站| 日韩视频在线欧美| 国产综合精华液| 日本午夜av视频| 久久久国产精品麻豆| 亚洲综合精品二区| 亚洲欧洲日产国产| 边亲边吃奶的免费视频| 午夜福利乱码中文字幕| 下体分泌物呈黄色| 99久久人妻综合| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人精品无人区| 亚洲欧美色中文字幕在线| av女优亚洲男人天堂| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 91在线精品国自产拍蜜月| 日本色播在线视频| 国产精品av久久久久免费| 老女人水多毛片| 国产 精品1| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 美女国产视频在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本黄色日本黄色录像| 免费看av在线观看网站| 热re99久久国产66热| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 在线天堂最新版资源| 18禁国产床啪视频网站| 老熟女久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 少妇人妻久久综合中文| 免费观看a级毛片全部| 国产男女超爽视频在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久久久久大尺度免费视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 中文欧美无线码| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 一边摸一边做爽爽视频免费| 精品第一国产精品| 女人精品久久久久毛片| 国产 一区精品| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲成色77777| 亚洲国产欧美在线一区| 1024香蕉在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 在线天堂最新版资源| 国产成人欧美| xxxhd国产人妻xxx| 欧美少妇被猛烈插入视频| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人精品福利久久| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美精品亚洲一区二区| 免费观看无遮挡的男女| 日韩制服骚丝袜av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美成人精品欧美一级黄| 我的亚洲天堂| 欧美激情 高清一区二区三区| 老司机影院成人| 91久久精品国产一区二区三区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美另类一区| 久久99蜜桃精品久久| 国产精品.久久久| 免费少妇av软件| 久热久热在线精品观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久久精品94久久精品| 人成视频在线观看免费观看| 欧美日本中文国产一区发布| 少妇的逼水好多| 在线观看一区二区三区激情| 99热全是精品| 亚洲 欧美一区二区三区| av网站在线播放免费| 天天影视国产精品| 一区二区三区乱码不卡18| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇人妻久久综合中文| av在线观看视频网站免费| 色94色欧美一区二区| videos熟女内射| 少妇熟女欧美另类| 久久 成人 亚洲| 97在线视频观看| 久久久久久伊人网av| 超色免费av| 亚洲精品aⅴ在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲在久久综合| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日韩一区二区三区影片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品三级大全| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品av久久久久免费| 亚洲三级黄色毛片| www.自偷自拍.com| 国产精品99久久99久久久不卡 | 婷婷色麻豆天堂久久| 捣出白浆h1v1| 亚洲三级黄色毛片| 欧美成人午夜免费资源| 国产精品99久久99久久久不卡 | 看非洲黑人一级黄片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日本91视频免费播放| 飞空精品影院首页| 晚上一个人看的免费电影| 人妻系列 视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产男女内射视频| av片东京热男人的天堂| 久久久久久伊人网av| 国产极品天堂在线| 满18在线观看网站| 国产精品.久久久| 丁香六月天网| 少妇熟女欧美另类| a 毛片基地| 日韩欧美精品免费久久| 久久午夜福利片| 午夜久久久在线观看| 亚洲综合色惰| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产淫语在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 免费高清在线观看日韩| 九草在线视频观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 日日撸夜夜添| 国产97色在线日韩免费| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲经典国产精华液单| 国产免费现黄频在线看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 岛国毛片在线播放| 欧美激情高清一区二区三区 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久久久久人妻| 高清在线视频一区二区三区| 自线自在国产av| 九九爱精品视频在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲av综合色区一区| 国产一级毛片在线| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精品一区蜜桃| 国产野战对白在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久狼人影院| 人妻 亚洲 视频| 国产一区二区三区av在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 美女高潮到喷水免费观看| 国产免费现黄频在线看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费观看a级毛片全部| 五月伊人婷婷丁香| av福利片在线| 成人国语在线视频| 国产精品欧美亚洲77777| 夫妻午夜视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美另类一区| 国产成人a∨麻豆精品| 精品少妇久久久久久888优播| xxxhd国产人妻xxx| 日韩欧美精品免费久久| 国产免费视频播放在线视频| 久久青草综合色| 777米奇影视久久| 成人国语在线视频| 青草久久国产| 欧美日韩视频精品一区| 香蕉国产在线看| 国产精品一国产av| 国产一区二区三区av在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲精品自拍成人| 亚洲av中文av极速乱| 日本av免费视频播放| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 国产伦理片在线播放av一区| 人妻一区二区av| 久久精品国产亚洲av涩爱| 秋霞伦理黄片| 国产色婷婷99| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲国产精品999| 国产精品不卡视频一区二区| 黄色一级大片看看| 寂寞人妻少妇视频99o| 永久网站在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| av免费在线看不卡| 亚洲av.av天堂| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| www.精华液| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品免费视频内射| 婷婷成人精品国产| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日韩电影二区| 久久精品人人爽人人爽视色| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久这里只有精品19| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美中文综合在线视频| 午夜日韩欧美国产| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久精品国产亚洲av天美| 久久久精品免费免费高清| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 成人毛片60女人毛片免费| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费在线观看黄色视频的| 在线观看三级黄色| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美日本中文国产一区发布| 午夜av观看不卡| 中文天堂在线官网| 久久久久国产一级毛片高清牌| av福利片在线| 国产 一区精品| 精品久久蜜臀av无| 美女福利国产在线| 欧美 日韩 精品 国产| 精品国产一区二区三区四区第35| 色网站视频免费| 性少妇av在线| av在线播放精品| 999精品在线视频| 尾随美女入室| 最新的欧美精品一区二区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 嫩草影院入口| 丝袜在线中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩制服骚丝袜av| 9色porny在线观看| 最近手机中文字幕大全| av在线app专区| 女性生殖器流出的白浆| 不卡视频在线观看欧美| 日韩一本色道免费dvd| 一本色道久久久久久精品综合| 精品少妇内射三级| 婷婷成人精品国产| 18禁国产床啪视频网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 2018国产大陆天天弄谢| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日日啪夜夜爽| 欧美激情极品国产一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美精品国产亚洲| 丝袜美足系列| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产不卡av网站在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 一级,二级,三级黄色视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品女同一区二区软件| 在线 av 中文字幕| 免费黄频网站在线观看国产| 国产免费现黄频在线看| 国产精品一国产av| 亚洲内射少妇av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品不卡视频一区二区| 国产成人精品福利久久| freevideosex欧美| 色哟哟·www| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 晚上一个人看的免费电影| 91精品三级在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 精品一区在线观看国产| 欧美日韩av久久| 美女中出高潮动态图| 国产熟女欧美一区二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 在线观看免费日韩欧美大片| 久久久国产一区二区| av女优亚洲男人天堂| 久久久a久久爽久久v久久| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产av国产精品国产| 国产一级毛片在线| 亚洲中文av在线| 91国产中文字幕| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲人成网站在线观看播放| 18在线观看网站| 在线观看国产h片| 黄色视频在线播放观看不卡| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 69精品国产乱码久久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产日韩欧美亚洲二区| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲内射少妇av| 少妇熟女欧美另类| 尾随美女入室| 制服诱惑二区| 咕卡用的链子| 精品国产一区二区三区四区第35| 男女下面插进去视频免费观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 老司机亚洲免费影院| 国产成人午夜福利电影在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 蜜桃国产av成人99| 国产在线视频一区二区| 女人精品久久久久毛片| 久久久久精品性色| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品无大码| 精品少妇久久久久久888优播| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 男女免费视频国产| 中文字幕最新亚洲高清| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧洲日产国产| 中文字幕制服av| av.在线天堂| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| a 毛片基地| 亚洲第一青青草原| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 色网站视频免费| 国产成人精品婷婷| 性色av一级| 国产精品二区激情视频| 国产成人91sexporn| 少妇 在线观看| 大香蕉久久网| 少妇的丰满在线观看| 亚洲三区欧美一区| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品国产色婷婷电影| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日韩av在线免费看完整版不卡| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久国产精品大桥未久av| 国产人伦9x9x在线观看 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产男女内射视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 99国产综合亚洲精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美人与善性xxx| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品久久久av美女十八| 国产 一区精品| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 天美传媒精品一区二区| 男女午夜视频在线观看| av在线观看视频网站免费| 性色avwww在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 日本色播在线视频| 亚洲精品国产av成人精品| 蜜桃在线观看..| 精品一区二区免费观看| 少妇熟女欧美另类| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲美女搞黄在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 色婷婷久久久亚洲欧美| 女性生殖器流出的白浆| 久久热在线av| 亚洲第一av免费看| 观看av在线不卡| 国产精品免费视频内射| 久久人妻熟女aⅴ| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一区福利在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 免费看av在线观看网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 99九九在线精品视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 777米奇影视久久| 18禁动态无遮挡网站| 久久99一区二区三区| av卡一久久| 久久久欧美国产精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 蜜桃国产av成人99| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品久久久精品久久久| 黄色配什么色好看| 中国国产av一级| 国产乱人偷精品视频| 99香蕉大伊视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久精品国产综合久久久| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| videos熟女内射| 人人妻人人澡人人看| 国产成人欧美| 这个男人来自地球电影免费观看 | 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美精品国产亚洲| 国产乱人偷精品视频| 日本色播在线视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 男女免费视频国产| 一级毛片我不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| av国产精品久久久久影院| 亚洲国产看品久久| 亚洲av男天堂| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品,欧美精品| a级毛片黄视频| 日本免费在线观看一区| 99九九在线精品视频| 在线天堂中文资源库| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 男人添女人高潮全过程视频| 日本vs欧美在线观看视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 只有这里有精品99| av女优亚洲男人天堂| 亚洲,欧美精品.| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美日韩综合久久久久久| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 乱人伦中国视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美亚洲日本最大视频资源| 只有这里有精品99| 秋霞在线观看毛片| a级毛片在线看网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜91福利影院| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久久久久久精品精品| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美少妇被猛烈插入视频| h视频一区二区三区| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| av免费在线看不卡| 老女人水多毛片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av线在线观看网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品久久久久久久久免| 五月伊人婷婷丁香| 欧美 日韩 精品 国产| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久精品久久久久久久性| 免费高清在线观看视频在线观看| 一级黄片播放器| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久精品夜色国产| 亚洲精品视频女| 一级黄片播放器| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久亚洲精品成人影院| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文天堂在线官网| 国产黄色视频一区二区在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕亚洲精品专区| 26uuu在线亚洲综合色| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久精品国产a三级三级三级| 性少妇av在线| 91成人精品电影| 成人国语在线视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| a级片在线免费高清观看视频| 两个人看的免费小视频| 91精品三级在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产成人a∨麻豆精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲欧美精品自产自拍| 老司机影院成人| 日韩一本色道免费dvd| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 一区二区三区精品91| 久热久热在线精品观看|