• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易患性的關(guān)系研究

    2015-02-21 08:44:11楊曉紅
    中國全科醫(yī)學(xué) 2015年14期
    關(guān)鍵詞:補(bǔ)體維吾爾族等位基因

    彭 玲,鄔 超,楊曉紅

    ?

    補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易患性的關(guān)系研究

    彭 玲,鄔 超,楊曉紅

    目的 探討補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺(PBL)易患性的關(guān)系。方法 選取2012年1月—2013年12月在喀什、和田地區(qū)飼養(yǎng)鴿子年限≥1年并在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸科病房和門診確診的維吾爾族PBL患者為病例組(n=32),選擇飼養(yǎng)鴿子年限≥1年的維吾爾族未患PBL者為陰性對(duì)照組(n=30),選擇同期未飼養(yǎng)鴿子且本院體檢健康的維吾爾族人群為正常對(duì)照組(n=30)。抽取受試者外周血抗凝,提取白細(xì)胞DNA,采用MassARRAY Assay Design實(shí)時(shí)PCR 法進(jìn)行C5基因14個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)檢測(cè),對(duì)存在等位基因的SNP位點(diǎn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果 C5基因rs17611、rs17612、rs17216529存在基因多態(tài)性,其中rs17611、rs17216529位點(diǎn)存在GG、AA、GA 3種基因型,rs17612位點(diǎn)存在CC、AA、CA 3種基因型。3組C5基因rs17611、rs17216529、rs17612基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 補(bǔ)體C5 基因多態(tài)性可能不影響維吾爾族PBL的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

    養(yǎng)鳥者肺;肺泡炎,外源性變應(yīng)性;補(bǔ)體C5;多態(tài)性,單核苷酸;疾病遺傳易感性;維吾爾族

    彭玲,鄔超,楊曉紅.補(bǔ)體C5基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易患性的關(guān)系研究[J].中國全科醫(yī)學(xué),2015,18(14):1667-1671.[www.chinagp.net]

    Peng L,Wu C,Yang XH.Relationship between C5 gene polymorphism and susceptibility to pigeon breeder′s lung in Uygur people[J].Chinese General Practice,2015,18(14):1667-1671.

    過敏性肺炎(HP)又名外源性過敏性肺泡炎,是一組易感宿主反復(fù)吸入環(huán)境中的細(xì)小懸浮有機(jī)物抗原誘發(fā)的以細(xì)胞免疫和體液免疫為主要反應(yīng)介導(dǎo)的肉芽腫性炎性肺疾病[1]。飼鴿者肺(PBL)為HP的常見類型,是易感個(gè)體反復(fù)暴露于抗原后促發(fā)免疫反應(yīng)導(dǎo)致的炎性肺泡炎。據(jù)報(bào)道,暴露人群中只有0.5%~7.5%會(huì)發(fā)展成為PBL[2]。前期研究發(fā)現(xiàn),PBL的發(fā)病與Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞的失衡密切相關(guān)[3],敏感個(gè)體暴露于抗原后,Th1細(xì)胞因子分泌的促炎因子與Th2細(xì)胞因子分泌的抗炎因子的分布可能影響PBL的易患性[4]。補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體重要的免疫防御系統(tǒng),C5是補(bǔ)體系統(tǒng)中關(guān)鍵片段,是Th1/Th2失衡中的重要調(diào)節(jié)分子,其水平變化可能影響疾病的發(fā)生發(fā)展。C5基因多態(tài)性被證實(shí)與多種Th1/Th2失衡性疾病的易患性相關(guān)[5-7]。PBL是一種典型的Th1/Th2失衡性疾病,晚期發(fā)展成為不可逆性的肺纖維化,C5基因多態(tài)性與PBL發(fā)病的易患性尚未見報(bào)道。本研究探討了C5基因多態(tài)性與維吾爾族PBL發(fā)病的關(guān)系,以期從分子水平闡釋PBL的發(fā)病機(jī)制。

    1 對(duì)象與方法

    1.2 選擇位點(diǎn) C5基因位于9號(hào)染色體上,本研究對(duì)C5基因的14個(gè)單核苷酸的多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)(rs17611、rs17612、rs17216529、rs2230212、rs201100938、rs2230215、rs144332635、rs41311883、rs141560628、rs118181017、rs41311887、rs35791896、rs148353209、rs188716286)進(jìn)行檢測(cè)。

    1.3 檢測(cè)方法

    1.3.1 試劑 人全血基因組DNA試劑盒購自德國Greiner公司;多重PCR及延伸引物由Sequenom公司提供的MassARRAY Assay Design 軟件設(shè)計(jì),北京博奧生物有限合成。

    1.3.2 DNA提取和保存 受試者均在清晨空腹抽取2份靜脈血各4 ml,以3.2%枸櫞酸鈉抗凝。按照全血基因組DNA試劑盒說明書快速提取DNA(見圖1),-80 ℃深低溫保存。

    圖1 全血基因組DNA提取圖

    1.3.3 SNP檢測(cè) 采用SequenomMassARRAY Assay Design軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì),多重PCR技術(shù)對(duì)所選位點(diǎn)的基因序列進(jìn)行擴(kuò)增(反應(yīng)條件:94 ℃ 4 min;94 ℃ 20 s,56 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,循環(huán)45次;72 ℃ 3 min;4 ℃保持)。將PCR反應(yīng)板放置于PCR儀上,啟動(dòng)PCR反應(yīng),將擴(kuò)增產(chǎn)物保存在-20 ℃?zhèn)溆?。將上述擴(kuò)增產(chǎn)物中加入蝦堿性磷酸酶(SAP)純化并加入雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP),通過單堿基延伸引物(見表1)序列實(shí)現(xiàn)SNP位點(diǎn)的擴(kuò)增,操作步驟按Sequenom公司的操作指南進(jìn)行。延伸完畢后,產(chǎn)物通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜基因分型技術(shù)進(jìn)行SNP分型。

    2 結(jié)果

    2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) C5基因rs17611、rs17612、rs17216529共3個(gè)位點(diǎn)存在基因多態(tài)性。3組間C5基因的3個(gè)SNP位點(diǎn)基因型分布經(jīng)χ2檢驗(yàn),符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(χ2=1.428、0.001、4.861,P>0.05),表明研究群體具有代表性。

    2.2 基因分型的檢測(cè) rs17611、rs17216529位點(diǎn)在新疆維吾爾族人群中存在GG、GA、AA 3種基因型,rs17612位點(diǎn)存在CC、CA、AA 3種基因型。

    表1 PCR引物及單堿基延伸引物序列

    2.3 C5基因rs17611位點(diǎn)基因型及等位基因分布 各組C5基因rs17611位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表2)。

    表2 各組C5基因rs17611位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

    Table 2 Comparison of genetypes and allele frequency of C5 rs17611 among the 3 groups

    組別例數(shù)基因型GG AG AA等位基因G A正常對(duì)照組301010103030陰性對(duì)照組3091473228病例組3251892836χ2值4.4451.180P值0.3490.554

    2.4 C5基因rs17612位點(diǎn)基因型及等位基因分布 各組C5基因rs17612位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表3)。

    2.5 C5基因rs17216529位點(diǎn)基因型及等位基因分布 各組C5基因rs17216529位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表4)。

    表3 各組C5基因rs17612位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

    Table 3 Comparison of genetypes and allele frequency of C5 rs17612 among the 3 groups

    組別例數(shù)基因型GG AG AA等位基因G A正常對(duì)照組300228258陰性對(duì)照組300327357病例組320032064χ2值3.1443.056P值0.2080.217

    表4 各組C5基因rs17216529位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

    Table 4 Comparison of genetypes and allele frequency of C5 rs17216529 among the 3 groups

    組別例數(shù)基因型GG AG AA等位基因G A正常對(duì)照組30201005010陰性對(duì)照組3021 9 051 9 病例組32221005410χ2值0.0790.064P值0.9610.968

    3 討論

    機(jī)體Th1/Th2失衡參與多種變態(tài)反應(yīng)性疾病、自身免疫性系統(tǒng)疾病和移植排斥反應(yīng)等疾病的發(fā)生。PBL是一種復(fù)雜的多因子疾病,Th1/Th2失衡所分泌的相關(guān)免疫學(xué)因子促進(jìn)其發(fā)生發(fā)展,但只有少部分人暴露抗原后會(huì)發(fā)展為PBL。Th1/Th2失衡相關(guān)基因多態(tài)性與PBL關(guān)系的相關(guān)研究顯示,主要組織相容性復(fù)合體-Ⅱ(MHC-Ⅱ)、腫瘤壞死因子-β(TNF-β)、抗原提呈蛋白-1(TAP-1)、金屬蛋白酶組織抑制劑-3(TIMP-3)等基因SNP均被證實(shí)與PBL的遺傳易患性相關(guān)[8-10]。

    C5是補(bǔ)體系統(tǒng)的重要組成部分,其基因編碼的蛋白在Th1/Th2失衡性疾病的炎性免疫應(yīng)答中發(fā)揮了極其關(guān)鍵的作用。在PBL的發(fā)病機(jī)制中,鴿子糞便、羽毛等外源性抗原可直接激活補(bǔ)體旁路途徑和巨噬細(xì)胞,引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性損害,從而造成肺組織炎癥。早期研究發(fā)現(xiàn),在農(nóng)民肺的動(dòng)物模型及患者的活檢肺組織中均有補(bǔ)體沉著[1l]。C5基因是與炎癥發(fā)生發(fā)展有關(guān)的免疫相關(guān)基因[12],該基因的突變導(dǎo)致C5蛋白構(gòu)象的穩(wěn)定性降低,加速其降解,患者表現(xiàn)為嚴(yán)重復(fù)發(fā)性感染傾向。如前所述,C5基因多態(tài)性已明確證明與多種Th1/Th2失衡性疾病關(guān)聯(lián)[13],提示在Th1/Th2失衡性疾病中可能存在共同基因或者共同的細(xì)胞途徑。

    本研究發(fā)現(xiàn),C5基因rs17611、rs17612、rs17216529共3個(gè)位點(diǎn)存在變異。rs17611位點(diǎn)參與C5蛋白質(zhì)第802號(hào)氨基酸序列的編碼。多數(shù)情況下該位點(diǎn)的2個(gè)等位基因堿基均是G(即GG型),轉(zhuǎn)錄翻譯為纈氨酸;當(dāng)2個(gè)堿基都轉(zhuǎn)換為A時(shí)(即AA型),轉(zhuǎn)錄翻譯該位置時(shí)全部為異亮氨酸;當(dāng)其中一個(gè)堿基轉(zhuǎn)換為A時(shí)(即AG型),轉(zhuǎn)錄翻譯后該位置半數(shù)為異亮氨酸。國內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的突變?cè)黾恿艘倚透窝撞《靖腥菊甙l(fā)生肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)[14],可能與C5的結(jié)構(gòu)、功能和表達(dá)水平有關(guān)。也有報(bào)道表明rs17611位點(diǎn)突變?cè)黾游⒀芗膊“l(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[15]。本研究發(fā)現(xiàn),rs17611等位基因A和G及各基因型頻率3組間無明顯差異,提示其與PBL的易患性不相關(guān),不是PBL的風(fēng)險(xiǎn)因素。而關(guān)于rs17612、rs17216529在其他疾病中的研究報(bào)道較少,本研究發(fā)現(xiàn)rs17612在此次研究中存在等位基因A和C以及AA、CA兩種基因型,rs17216529存在等位基因A和G以及GG、GA兩種基因型,結(jié)果表明這兩個(gè)位點(diǎn)均未增加PBL的遺傳風(fēng)險(xiǎn)。這可能與C5基因高度保守有一定關(guān)系,考慮到本研究樣本量較小,因此有必要進(jìn)一步進(jìn)行大樣本的重復(fù)研究來驗(yàn)證。

    綜上所述,本研究納入的樣本量較少,在一定程度上可能影響研究結(jié)果,仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,在不同民族間進(jìn)行重復(fù)研究來證實(shí)和闡明PBL的遺傳發(fā)病機(jī)制。從遺傳學(xué)的角度講,尋找與疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基因,一般先從SNP數(shù)據(jù)庫入手,選擇等位頻率比較高的位點(diǎn)進(jìn)行SNP分型。該方法雖簡單易行,但是存在一定的盲目性,甚至可能得到陰性結(jié)果,存在一定的風(fēng)險(xiǎn)性。因此,有效地發(fā)掘與疾病關(guān)聯(lián)SNP仍是今后研究面臨的一大挑戰(zhàn)。

    [1]Robert J.Mason V.Courtney B,et al.Murray and Nadel′s textbook of respiratory medicine[M].5th ed.Amsterdam:Saunders Elsevier,2010:1587-1600.

    [2]Girard M,Lacasse Y,Cormier Y.Hypersensitivity pneumonitis[J].Allergy,2009,64(3):322-334.

    [3]胡娟,成建華.過敏性肺炎:飼鴿者肺的病因、臨床特征與發(fā)病機(jī)制[J].中國免疫學(xué)雜志,2004,20(10):723-726.

    [4]Gudmundsson G,Monick MM,Hunninghake GW.IL-12 modulates expression of hypersensitivity pneumonitis[J].J Immunol,1998,161(2)161:991.

    [5]Zhang X,Li W,Zhang X,et al.Association between polymorphism in TRAF1/C5 gene and risk of rheumatoid arthritis:a meta-analysis[J].Mol BiolRep,2014,41(1):317-324.

    [6]Nishimoto K,Kochi Y,Ikari K,et al.Association study of TRAF1-C5 polymorphisms with susceptibility to rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus in Japanese[J].Ann Rheum Dis,2010,69(2):368-373.

    [7]Hasegawa K,Tamari M,Shao C,et al.Variations in the C3,C3a receptor,and C5 genes affect susceptibility to bronchial asthma[J].Hum Genet,2004,115(4):295-301.

    [8]Aquino-Galvez A,Camarena A,Montano M,et al.Transporter associated with antigen processing(TAP)1 gene polymorphisms in patients with hypersensitivity pneumonitis[J].Exp Mol Pathol,2008,84(2):173-177.

    [9]Janssen R,Kruit A,Grutters JC,et al.TIMP-3 promoter gene polymorphisms in BFL[J].Thorax,2005,60(11):974.

    [10]Mohr LC.Hypersensitivity Pneumonitis[J].Curr Opin Pulm Med,2004,10(5):401-411.

    [11]Sch?llibaum M,Hess MW,Nicolet J,et al.Histopathological and immunohistological changes in the rabbit lung after experimental exposure to a purified enzyme of Micropolyspora faeni[J].Clin Exp Immunol,1977,28(3):535-541.

    [12]Plenge RM,Seielstad M,Padyukov L,et al.TRAFl-C5 as a risk locus for rheumatoid arthritis-a genomewide study[J].N Engl J Med,2007,357(12):1199-1209.

    [13]Jeong JC,Hwang YH,Kim H,et al.Association of complement 5 genetic polymorphism with renal allograft outcomes in Korea[J].Nephrol Dial Transplant,2011,26 (10):3378-3385.

    [14]Li CZ,Guo SL,Li QS,et al.Polymorphism of complement C5 gene and susceptibility to liver cirrhosis in patients with chronic hepatitis B[J].Journal of Clinical Hepatology,2011,14(6):427-429.(in Chinese) 李長政,郭水龍,李青山,等.補(bǔ)體C5 基因多態(tài)性與肝硬化發(fā)病的關(guān)系研究[J].實(shí)用肝臟病雜志,2011,14(6):427-429.

    [15]Greisenegger S,Zehetmayer S,Bauer P,et al.Polymorphisms in inflammatory genes and the risk of ischemic stroke and transient ischemic attack:results of a multilocus genotyping assay[J].Clin Chem,2009,55(1):134-138.

    (本文編輯:吳立波)

    Relationship Between C5 Gene Polymorphism and Susceptibility to Pigeon Breeder′s Lung in Uygur People

    PENGLing,WUChao,YANGXiao-hong.

    DepartmentofClinicalResearch,ShiheziUniversity,Shihezi832002,China

    Objective To evaluate the association between C5 gene polymorphism and susceptibility to pigeon breeder′s lung (PBL) in Uygur people.Methods We enrolled 32 Uygur patients who had bred pigeons for more than one year,came from KashiRegon and Hetian,and were diagnosed with PBL in the outpatient clinic and the Department of Pneumology,the People′s Hospital of Xinjiang from January 2012 to December 2013 as the case group.30 Uygur who had bred pigeons for more than one year and weren′t diagnosed with PBL,were enrolled as negative control group.Another 30 healthy Uygur people who hadn′t bred pigeons and received physical examination in the hospital in the same period were enrolled as the normal control group.Peripheral blood was sampled from the subjects,and leucocyte DNA was extracted from the samples.We conducted tests on 14 single nucleotide polymorphism (SNP) loci in C5 genes by real-time polymerase chain reaction (PCR) method of MassARRAY Assay Design.The three groups were compared in the SNP loci with allelic genes.Results Gene polymorphism was found in the loci of rs17611,rs17612 and rs17216529.Genotypes of GG,AA and GA were found in rs17611 and rs17216529;genotypes of CC,AA and CA were found in rs17612.No significant differences were found in rs17611,rs17216529 and rs17612 in genotype and allele frequency among three groups(P>0.05).Conclusion C5 gene polymorphisms may not have on influence on the susceptibility to PBL in Uygur people.

    Bird fancier′s lung;Alveolitis,extrinsic allergic;Complement C5;Polymorphism,single nucleotide;Genetic predisposition to disease;Uygur nationality

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260003)

    832002新疆石河子市,石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床系(彭玲);新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科(鄔超,楊曉紅)

    楊曉紅,新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科;E-mail:yxh6176@126.com

    R 563.19

    A

    10.3969/j.issn.1007-9572.2015.14.016

    2014-11-10;

    2015-03-03)

    猜你喜歡
    補(bǔ)體維吾爾族等位基因
    “補(bǔ)體法”在立體幾何解題中的妙用
    補(bǔ)體因子H與心血管疾病的研究進(jìn)展
    親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    抗dsDNA抗體、補(bǔ)體C3及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)于診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎損傷的臨床意義
    維吾爾族手藝人
    流感患兒血清免疫球蛋白及補(bǔ)體的檢測(cè)意義
    WHOHLA命名委員會(huì)命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認(rèn)
    DXS101基因座稀有等位基因的確認(rèn)1例
    Ad36感染對(duì)維吾爾族肥胖患者progranulin表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
    等位基因座D21S11稀有等位基因32.3的確認(rèn)
    亚洲精品中文字幕在线视频| 看免费av毛片| 色吧在线观看| 日韩大片免费观看网站| 在线观看三级黄色| 精品久久久久久电影网| 大片电影免费在线观看免费| 久久久久人妻精品一区果冻| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲综合精品二区| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美久久黑人一区二区| 极品人妻少妇av视频| 中国三级夫妇交换| 久久久精品94久久精品| 国产精品女同一区二区软件| 99久久综合免费| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲四区av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲av综合色区一区| 久久久国产欧美日韩av| 欧美97在线视频| 熟女av电影| 亚洲av电影在线进入| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 男女国产视频网站| 欧美成人午夜精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久免费观看电影| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品国产乱码久久久久久小说| 精品少妇久久久久久888优播| 婷婷色av中文字幕| videosex国产| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩中文字幕视频在线看片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 曰老女人黄片| 日韩电影二区| 人成视频在线观看免费观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 午夜91福利影院| 99久久人妻综合| 亚洲av电影在线进入| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 五月天丁香电影| 亚洲国产看品久久| 久久久久久久久久久久大奶| 久久影院123| av女优亚洲男人天堂| 丝瓜视频免费看黄片| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲国产av新网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 伦理电影大哥的女人| 中文天堂在线官网| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品免费大片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 考比视频在线观看| 亚洲,欧美精品.| 国产成人精品福利久久| 国产精品av久久久久免费| 1024香蕉在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美97在线视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 日韩av不卡免费在线播放| 精品久久久久久电影网| 久久综合国产亚洲精品| 不卡av一区二区三区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 中文字幕亚洲精品专区| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 大香蕉久久网| 国产成人精品无人区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 制服诱惑二区| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产精品三级大全| 午夜91福利影院| 青春草国产在线视频| 亚洲精品一区蜜桃| 国产午夜精品一二区理论片| 黑丝袜美女国产一区| 久久免费观看电影| 亚洲欧洲国产日韩| 在线观看三级黄色| 91精品伊人久久大香线蕉| 一级黄片播放器| 国产日韩欧美在线精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲国产欧美在线一区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产深夜福利视频在线观看| 美女大奶头黄色视频| 中文字幕最新亚洲高清| 麻豆乱淫一区二区| 老司机影院毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久久精品性色| 黄色怎么调成土黄色| 老司机在亚洲福利影院| 悠悠久久av| 丁香六月天网| 秋霞伦理黄片| 国产福利在线免费观看视频| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| av一本久久久久| 亚洲一区中文字幕在线| 黄色 视频免费看| 欧美在线黄色| 亚洲在久久综合| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产 一区精品| www.精华液| 国产1区2区3区精品| 欧美精品亚洲一区二区| 男女午夜视频在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费高清在线观看视频在线观看| xxx大片免费视频| 嫩草影院入口| 亚洲av综合色区一区| 另类亚洲欧美激情| 欧美xxⅹ黑人| 精品国产一区二区久久| 一级片'在线观看视频| 国产在线免费精品| 男女免费视频国产| 观看av在线不卡| svipshipincom国产片| 最近中文字幕高清免费大全6| 曰老女人黄片| 十八禁高潮呻吟视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲av成人精品一二三区| 日本av手机在线免费观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲精品一区蜜桃| 成人免费观看视频高清| 亚洲天堂av无毛| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲欧美激情在线| 九草在线视频观看| 成人三级做爰电影| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲欧洲日产国产| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产视频首页在线观看| videos熟女内射| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 欧美亚洲日本最大视频资源| 伦理电影大哥的女人| 777米奇影视久久| 国产亚洲一区二区精品| 51午夜福利影视在线观看| 多毛熟女@视频| 晚上一个人看的免费电影| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 免费av中文字幕在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 久久精品国产a三级三级三级| 国产福利在线免费观看视频| 国产99久久九九免费精品| 97在线人人人人妻| 亚洲精品,欧美精品| 午夜91福利影院| 久久久欧美国产精品| 午夜老司机福利片| 亚洲精品第二区| 亚洲精品美女久久av网站| 免费不卡黄色视频| 青春草国产在线视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品一区在线观看国产| 丝袜喷水一区| 成人国产麻豆网| 黄色视频在线播放观看不卡| 最近中文字幕2019免费版| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 韩国av在线不卡| 丝袜美腿诱惑在线| 黄色怎么调成土黄色| 国产日韩欧美在线精品| 国产麻豆69| 免费日韩欧美在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品亚洲成国产av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜av观看不卡| 婷婷色综合www| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产麻豆69| 久久久久精品性色| 国产熟女欧美一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 午夜免费观看性视频| 少妇人妻 视频| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美激情极品国产一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 波多野结衣av一区二区av| 这个男人来自地球电影免费观看 | 视频在线观看一区二区三区| 色播在线永久视频| 午夜福利,免费看| 精品久久蜜臀av无| 久久久久久久国产电影| 日韩人妻精品一区2区三区| av在线播放精品| 精品人妻在线不人妻| 免费在线观看黄色视频的| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 国产一区二区在线观看av| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久久久国产电影| 亚洲天堂av无毛| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在线看a的网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 制服丝袜香蕉在线| 美国免费a级毛片| 欧美激情 高清一区二区三区| 操美女的视频在线观看| 飞空精品影院首页| 婷婷色麻豆天堂久久| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 制服人妻中文乱码| 欧美av亚洲av综合av国产av | 午夜影院在线不卡| 成人国语在线视频| 999精品在线视频| av.在线天堂| 国精品久久久久久国模美| 热99久久久久精品小说推荐| 国产男人的电影天堂91| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品久久久久久电影网| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 少妇人妻精品综合一区二区| 中文天堂在线官网| 校园人妻丝袜中文字幕| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 99国产精品免费福利视频| 大话2 男鬼变身卡| 狂野欧美激情性xxxx| 日本欧美国产在线视频| kizo精华| 国产精品一国产av| av国产精品久久久久影院| 免费黄网站久久成人精品| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲av福利一区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲,一卡二卡三卡| 97在线人人人人妻| 在线看a的网站| av天堂久久9| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美xxⅹ黑人| 成人影院久久| 久久久久久人人人人人| 久久鲁丝午夜福利片| 免费av中文字幕在线| 久久国产精品男人的天堂亚洲| av福利片在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产黄频视频在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| videosex国产| 国产精品人妻久久久影院| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲免费av在线视频| 2018国产大陆天天弄谢| 一级a爱视频在线免费观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 老司机影院毛片| 精品一区二区免费观看| 超碰成人久久| 亚洲熟女精品中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 国产 精品1| 国产精品二区激情视频| 国产一区二区三区av在线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 人妻 亚洲 视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 天美传媒精品一区二区| 国产色婷婷99| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品国产区一区二| 精品酒店卫生间| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 成年动漫av网址| 国产极品天堂在线| 在线观看免费高清a一片| 国产又爽黄色视频| 交换朋友夫妻互换小说| 久久青草综合色| 日韩电影二区| 欧美中文综合在线视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产片特级美女逼逼视频| 天堂中文最新版在线下载| 99久久综合免费| 色94色欧美一区二区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲国产日韩一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲国产日韩一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 久久久久久久久久久免费av| 丰满少妇做爰视频| 黄频高清免费视频| 高清欧美精品videossex| 欧美激情高清一区二区三区 | 国产黄色免费在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 最新的欧美精品一区二区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 又大又爽又粗| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日韩大码丰满熟妇| 国产乱来视频区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产一区二区三区av在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成人手机av| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 亚洲av福利一区| 美女午夜性视频免费| 日韩大片免费观看网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久久国产一区二区| 国产淫语在线视频| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲在久久综合| av国产精品久久久久影院| 国产在线免费精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久久国产精品麻豆| 久久国产亚洲av麻豆专区| videosex国产| 亚洲欧美一区二区三区久久| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美人与性动交α欧美软件| 男女之事视频高清在线观看 | 超碰97精品在线观看| 日本色播在线视频| 国产在线一区二区三区精| av片东京热男人的天堂| videos熟女内射| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产一区二区激情短视频 | 欧美最新免费一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 在线观看免费午夜福利视频| 色视频在线一区二区三区| 丝袜喷水一区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久久久久久精品精品| 精品酒店卫生间| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费黄色在线免费观看| 久久久久精品人妻al黑| 日本一区二区免费在线视频| 五月天丁香电影| 啦啦啦 在线观看视频| 成人三级做爰电影| 黄色 视频免费看| 51午夜福利影视在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产xxxxx性猛交| 哪个播放器可以免费观看大片| 在线 av 中文字幕| 五月开心婷婷网| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲第一av免费看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久人人爽人人片av| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品人妻在线不人妻| 久久久久精品久久久久真实原创| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲欧洲日产国产| 国产探花极品一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美xxⅹ黑人| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 亚洲国产看品久久| 亚洲精品自拍成人| xxxhd国产人妻xxx| 一个人免费看片子| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美成人午夜精品| 男女下面插进去视频免费观看| 国产av国产精品国产| 亚洲精品一二三| 精品午夜福利在线看| 免费黄网站久久成人精品| 国产熟女午夜一区二区三区| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | av在线观看视频网站免费| 不卡av一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 九色亚洲精品在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| av国产久精品久网站免费入址| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线观看人妻少妇| 超色免费av| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美黑人精品巨大| 日韩制服骚丝袜av| 美女视频免费永久观看网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲人成77777在线视频| 人人澡人人妻人| 久久天堂一区二区三区四区| 狂野欧美激情性xxxx| 国产爽快片一区二区三区| 日本午夜av视频| 亚洲av综合色区一区| 黄片无遮挡物在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 美女福利国产在线| 久久鲁丝午夜福利片| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲 欧美一区二区三区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 色婷婷久久久亚洲欧美| 1024视频免费在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲第一av免费看| 天堂8中文在线网| 久久国产精品大桥未久av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩一本色道免费dvd| 欧美日韩亚洲高清精品| 777米奇影视久久| 亚洲男人天堂网一区| 午夜福利视频精品| 久久久久久久久久久久大奶| 纯流量卡能插随身wifi吗| 在线观看三级黄色| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲欧美清纯卡通| 久久99精品国语久久久| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲欧洲日产国产| 女性生殖器流出的白浆| 国产 精品1| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 在线观看国产h片| 波野结衣二区三区在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品国产一区二区久久| 赤兔流量卡办理| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产男人的电影天堂91| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 日本av免费视频播放| 一个人免费看片子| 观看美女的网站| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品在线美女| av片东京热男人的天堂| 人妻 亚洲 视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 老鸭窝网址在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产麻豆69| 男女无遮挡免费网站观看| 一区二区三区四区激情视频| 男女下面插进去视频免费观看| 激情视频va一区二区三区| 国产一区二区在线观看av| 亚洲人成网站在线观看播放| 热re99久久国产66热| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 欧美变态另类bdsm刘玥| 色播在线永久视频| a级毛片在线看网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 狂野欧美激情性xxxx| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 又黄又粗又硬又大视频| 超色免费av| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲国产精品一区三区| 男女之事视频高清在线观看 | 在线观看一区二区三区激情| 亚洲精品久久午夜乱码| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲成人国产一区在线观看 | 久久久国产一区二区| 午夜影院在线不卡| 大片电影免费在线观看免费| 国产乱人偷精品视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品中文字幕在线视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 性色av一级| 日韩精品有码人妻一区| 伊人久久国产一区二区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产日韩欧美在线精品| www.精华液| 国产av一区二区精品久久| 国产成人av激情在线播放| 亚洲男人天堂网一区| 看免费av毛片| 午夜福利免费观看在线| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲欧美一区二区三区黑人| a级毛片黄视频| 电影成人av| 狂野欧美激情性bbbbbb| 日本av免费视频播放| 自线自在国产av| 国产精品人妻久久久影院| 考比视频在线观看| av天堂久久9| av有码第一页| 欧美人与性动交α欧美软件| 高清黄色对白视频在线免费看| a 毛片基地| 少妇精品久久久久久久| 久久精品久久精品一区二区三区| a级毛片在线看网站| 精品亚洲成国产av| av国产精品久久久久影院| 色精品久久人妻99蜜桃| 韩国精品一区二区三区| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 色视频在线一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 999久久久国产精品视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老司机影院毛片| 999精品在线视频| 久久久国产一区二区| 欧美最新免费一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产av码专区亚洲av| 中文字幕亚洲精品专区| av天堂久久9| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 岛国毛片在线播放| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲成国产人片在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 久久久久精品性色|