可吸收防粘連液對大鼠實驗性腹壁粘連的抑制作用*

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可吸收防粘連液對大鼠實驗性腹壁粘連的抑制作用*

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2015-03-19網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150319.1030.032.html

付凌云1,2, 劉小紅1,2, 文波1,2, 肖可3, 徐旖旎1, 沈祥春1,2**

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院 天然藥物資源優(yōu)效利用重點實驗室， 貴州 貴陽550004； 2.貴陽醫(yī)學(xué)院 中藥藥理教研室， 貴州 貴陽550004； 3.貴州金玖生物技術(shù)有限公司, 貴州 貴陽550005)

[摘要]目的： 觀察可吸收防粘連液對大鼠實驗性腹壁粘連的抑制作用。方法： 60只SD大鼠隨機分為生理鹽水組(A組)、醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠組(B組)、可吸收防粘連液組(C組)3組，每組20只，制作大鼠腹壁缺損/盲腸刮傷模型，在造模后第7和第14天處死大鼠，觀察粘連分級積分、解剖學(xué)、病理組織學(xué)改變。結(jié)果： 可吸收防粘連液顯著抑制大鼠實驗性腹壁粘連，降低粘連分級積分；減少炎細(xì)胞浸潤和炎性肉芽組織增生，漿膜層組織變性較輕。結(jié)論： 可吸收防粘連液在一定程度抑制術(shù)后粘連。

[關(guān)鍵詞]可吸收防粘連液； 大鼠, Sprague-Dawley； 模型,動物； 粘連； 腹壁； 病理學(xué)

腹部手術(shù)后約93%的患者發(fā)生腹腔粘連，可導(dǎo)致小腸梗阻、慢性腹痛、不孕不育等并發(fā)癥，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量【1-2】。改善術(shù)后粘連成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究的焦點之一。防術(shù)后粘連的藥物主要是通過減少炎癥反應(yīng)，建立相鄰創(chuàng)面的屏障來達(dá)到預(yù)防粘連的作用。可吸收防粘連液是從植物中分離制備的防止術(shù)后粘連的制劑，本研究通過復(fù)制大鼠腹壁粘連模型，觀察可吸收防粘連液防手術(shù)后粘連的療效，為臨床應(yīng)用提供方法和實驗基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1　實驗動物與分組

(Sprague-Dawley)SD大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，Ⅱ級實驗動物，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(黔)2012-001。按體質(zhì)量隨機均分為生理鹽水組(A組)、醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠(B組)、可吸收防粘連液組(C組)，每組20只大鼠。

1.2　藥品與試劑

可吸收防粘連液由貴州金玖生物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)日期20130701，批號2130701，4 ℃保存。醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠由上海昊海生物科技股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)日期20120811，批號120817，特性粘數(shù)≥1 600 cm3/g，儲存條件為避光密封25 ℃保存。水合氯醛由國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20090724。

1.3　模型復(fù)制及給藥

大鼠(手術(shù)前禁食12 h)腹腔內(nèi)注射水合氯醛300 mg/kg 麻醉，中下腹正中縱行切口，長4 cm，距切口約1 cm處銳性切除腹膜及大部分肌層，造成面積約2 cm×1 cm 的腹壁缺損，15 號手術(shù)刀片在盲腸對系膜側(cè)漿膜上單向輕刮60次，使盲腸漿膜下出現(xiàn)瘀斑，刮傷盲腸面積約2 cm×1 cm，將刮傷盲腸與腹壁缺損處兩者相對放置，使其相互接觸，按分組將不同藥物涂布于腹壁缺損及盲腸刮傷面。A組為1.5 mL生理鹽水，B組為1.5 mL醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠，根據(jù)臨床使用劑量C組按照大鼠體質(zhì)量1 mL/100 g用量給予可吸收防粘連液。分別于手術(shù)后第7 和第14天各組選取10只動物用水合氯醛麻醉處死，倒(U)型切口掀起腹壁，觀察腹膜粘連情況。

1.4　檢測指標(biāo)

參考文獻(xiàn)根據(jù)進(jìn)行粘連程度分級，完全無粘連為0級，計0分；內(nèi)臟間或內(nèi)臟與腹壁間1條粘連帶為Ⅰ級，計1分；內(nèi)臟間或臟與腹壁間2條粘連帶為Ⅱ級，計2分；多于2條粘連帶而內(nèi)臟未直接粘連至腹壁為Ⅲ級，計3分；內(nèi)臟直接粘連到腹壁，不管粘連帶多少為Ⅳ級，計4分。分別取3組處死大鼠的腹腔內(nèi)粘連部位組織(盲腸和腹膜粘連的組織處)，無粘連大鼠取受損腹壁及盲腸壁組織， 10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片后常規(guī)蘇木精-伊紅染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。 4

1.5　統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，樣本兩兩比較采用Wilcoxon秩和檢驗(Wilcoxon rank sum test)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　粘連程度分級

術(shù)后第7天A組粘連以III～I(xiàn)V級為主，B組粘連以0～I(xiàn)級為主，C組粘連以I～I(xiàn)I級為主，C、B兩組與A組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。手術(shù)后第14天A組粘連以III～I(xiàn)V級為主，B組粘連以0～I(xiàn)級為主，C組粘連以0～I(xiàn)級為主。C、B兩組與A組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1和圖1。

表1　各組大鼠術(shù)后第7天和第14天粘連程度分級

2.2　病理組織學(xué)檢查

病理組織學(xué)檢查結(jié)果示，術(shù)后第7天，A組肌層組織可見明顯變性、壞死，大量炎細(xì)胞浸潤，漿膜層組織可見重度變性、壞死，大量炎性肉芽組織增生、炎細(xì)胞浸潤及膿腫形成，可見少量纖維組織增生；術(shù)后第14天，A組可見肌層組織輕度變性、壞死，少量炎細(xì)胞浸潤，漿膜層組織中度變性、壞死，大量炎性肉芽組織增生及較多炎細(xì)胞浸潤，大量纖維組織增生并玻璃樣變性。B、C組與A組相比，可見肌層組織輕度變性，少量炎細(xì)胞浸潤；漿膜層組織輕度變性，少量炎性肉芽組織增生及少量炎細(xì)胞浸潤，少量纖維組織增生。從第7天~第14天，C組較A組黏膜層有明顯的脈管擴張，且A組黏膜下層水腫、炎細(xì)胞浸潤較其他三組明顯嚴(yán)重。提示 C組具有預(yù)防組織粘連的作用。見圖2。

A組箭頭所指處發(fā)生粘連，B、C組箭頭所指處未發(fā)生粘連圖1　手術(shù)第7和14 天時大鼠腹壁解剖學(xué)觀察Fig.1　Gross anatomy observation of rats' abdominal wall in the 7th and 14th day after operation

3討論

a、c、e為術(shù)后第7天時A、B、C組，b、d、f為術(shù)后第14天時A、B、C組圖2　大鼠術(shù)后腹壁粘連病理組織學(xué)檢查(HE，×100)Fig.2　Histological examination of abdominal adhesions of rats in the 7th and 14th day after operation

粘連是臨床腹盆腔手術(shù)后的常見并發(fā)癥。腹腔粘連是腹腔內(nèi)創(chuàng)傷、炎癥、感染、異物刺激等形成并相伴機體組織愈合的必然過程，是腹膜和臟器受到損傷之后，所發(fā)生的炎癥反應(yīng)[2,6]?？赡芘c細(xì)胞之間的作用有關(guān)[7-8]。本研究制作腹腔手術(shù)粘連大鼠模型，術(shù)后第7和第14天結(jié)果生理鹽水組動物腹壁100%發(fā)生粘連，提示生理鹽水沒有防術(shù)后粘連的作用，B、C組與A組相比均對術(shù)后防粘連起到了一定的抑制作用，臨床可通過提高手術(shù)技巧減少組織損傷、應(yīng)用生物屏障物質(zhì)等都可以防治腹壁粘連。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A組有明顯的粘連情況，盲腸與腹壁粘連嚴(yán)重，甚至與其他內(nèi)臟產(chǎn)生粘連； B、C組結(jié)果提示透明質(zhì)酸鈉凝膠和可吸收防粘連液在一定程度上均有助于粘連的改善。HE染色結(jié)果顯示，術(shù)后第14天與第7天生理鹽水組粘連組織炎癥反應(yīng)由強到弱，組織壞死，變性，炎細(xì)胞浸潤情況逐漸減弱，炎性肉芽組織增生逐漸減少、膿腫情況改善。在C組觀察到損傷粘連處與A組比較，炎細(xì)胞浸潤少，炎性肉芽組織增生少，壞死、變性減少?？梢酝茰yC組可能通過減少炎癥反應(yīng)，減少成纖維細(xì)胞增生來預(yù)防術(shù)后粘連的形成。提示可吸收防粘連液可以減少炎細(xì)胞滲出和損傷局部組織的炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步減少損傷局部組織在修復(fù)過程中的纖維肉芽組織的增生，抑制粘連纖維帶的形成，到達(dá)預(yù)防粘連的效果。

可吸收防粘連液含有從植物纖維中提取純化的纖維素多糖，分子中含有較多的親水基團，使可吸收防粘連液具有可溶性，通過分子變性技術(shù)使其具有降解功能，可被機體吸收[10-11]?？晌绽w維素多糖與凝血因子、纖維蛋白原能夠均勻的有機結(jié)合，具有止血作用[12]?？晌辗勒尺B液是具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新型的止血、防粘連系列產(chǎn)品，通過本實驗進(jìn)一步證明其具有止血和防粘連作用，它能有效控制組織之間產(chǎn)生滲出，在臨床最容易形成粘連的時間內(nèi)，阻止粘連的形成。具有良好的術(shù)后防粘連作用，是一種組織相容性良好的新型制劑。

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(2014-12-25收稿，2015-01-28修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 周凌

Inhibitory Effect of Absorbable Anti-adhesion Fluid on

Experimental Abdominal Adhesions in Rats

FU Lingyun1,2, LIU Xiaohong1,2, WEN Bo1,2, XIAO Ke3, XU Yini1, SHEN Xiangchun1,2

(1.KeyLaboratoryofOptimalUtilizationofNaturalMedicineResources,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,

China; 2.DepartmentofPharmacologyofTraditionalChineseMedicine,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,

Guizhou,China; 3.GuizhouJinjiuBiologicalTechnologyLimitedCompany,Guiyang550005,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the inhibitory effect of absorbable anti-adhesion fluid on experimental abdominal adhesion in rats. Methods: Sixty SD rats were randomly divided into 3 groups as following: normal saline group (group A), medical sodium hyaluronate gel group (group B), and absorbable anti-adhesion fluid group (group C). The abdominal wall defect and cecal abrasion model was establiehsed. After 7 d and 14 d of operation, the rats were sacrificed and the following indexes including adhesion classification, gross anatomy observation, and histopathologic examination were checked. Results: The adhesion classification was significant decreased in group C, there were significant differences compared to group A (P<0.05). Histopathological examination confirmed that absorbable anti-adhesion fluid could attenuate inflammatory cell infiltration, granulation tissue proliferation, and serosal tissue degeneration.Conclusions: Absorbable anti-adhesion fluid can inhibit adhesion after operation.

[Key words]absorbable anti-adhesion fluid; rat, Sprague-Dawley; model, animal; adhesions; abdominal wall; pathology

[中圖分類號]R285 ;R619.9

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1000-2707(2015)03-0237-04

通信作者**E-mail:shenxiangchun@126.com

[基金項目]*貴州省工業(yè)攻關(guān)計劃[黔科合GY字(2010)3063號]