四季感冒片中3味藥材超臨界CO2復(fù)方萃取物揮發(fā)性成分分析

喬越，于蓮，焦淑清（佳木斯大學(xué)藥學(xué)院/黑龍江省生物藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江佳木斯154007）

四季感冒片由桔梗、紫蘇葉、陳皮、荊芥等9味藥材組成，具清熱解表功能，該制劑的解表功能與處方中的紫蘇葉、陳皮、荊芥3味藥材含有的揮發(fā)性成分密切相關(guān)。在現(xiàn)行生產(chǎn)工藝以及文獻(xiàn)[1-2]報(bào)道的四季感冒片制備工藝中，是將紫蘇葉、陳皮、荊芥用水蒸氣蒸餾法（Water Steam Distillation，簡(jiǎn)稱SD）提取揮發(fā)油至盡，然后將其用乙醇溶解后噴入壓片前的顆粒上。SD溫度高、時(shí)間長(zhǎng)，致使揮發(fā)油的得率極低且有些成分被熱解破壞，從而影響制劑的療效。超臨界CO2萃取（Supercritical CO2Fluid Extraction，SFE-CO2）工藝以其提取溫度低、提取率高等優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于多種中藥揮發(fā)油的提取，其對(duì)單味藥材和復(fù)方藥材的提取均有報(bào)道[3-5]。有文獻(xiàn)報(bào)道[6-9]，應(yīng)用SFE-CO2分別單味提取紫蘇葉、陳皮、荊芥的揮發(fā)性成分，但采用該技術(shù)對(duì)3味藥材的復(fù)方萃取的研究未見(jiàn)報(bào)道。本文采用SFE-CO2技術(shù)對(duì)四季感冒片中紫蘇葉、陳皮、荊芥進(jìn)行了復(fù)方提取研究，用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)分析了復(fù)方萃取物的揮發(fā)性成分，旨在探討SFE-CO2技術(shù)在提取四季感冒片中揮發(fā)性成分的可行性及其所得復(fù)方提取物與SD法提得的揮發(fā)油的成分差異。

1 材料

1.1 儀器

HA221-50-06型超臨界萃取裝置（南通華安超臨界萃取有限公司）；6890-5973N型GC-MS聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；RE-SZA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試劑

乙醚、無(wú)水硫酸鈉等為國(guó)產(chǎn)分析純；CO2購(gòu)于佳木斯市金鼎氣體有限責(zé)任公司（浩良河化肥廠，純度≥99.5%食品級(jí)）。

1.3 藥材

紫蘇葉（產(chǎn)地安徽，亳州市芍香藥業(yè)有限公司）；陳皮（產(chǎn)地四川，安國(guó)市永春藥材行）；荊芥（產(chǎn)地河北，金天慈濟(jì)大藥房），以上藥材均經(jīng)佳木斯大學(xué)藥學(xué)院宗希明高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為真品。

2 方法與結(jié)果

2.1 萃取方法

SFE-CO2法操作流程如下：CO2氣瓶→冷卻系統(tǒng)→高壓泵→萃取釜→分離釜Ⅰ→分離釜Ⅱ→循環(huán)。

將紫蘇葉、陳皮、荊芥粉碎，按四季感冒片方中3味藥材比例 0.46∶0.31∶0.23，分別稱取紫蘇葉 69.0 g、陳皮 46.5 g、荊芥34.5 g，共150 g，投入1 L萃取釜中，在萃取溫度35℃，萃取壓力25 MPa，萃取時(shí)間2 h，分離器Ⅰ壓力12 MPa下進(jìn)行萃取，分別從分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ出口收集萃取物，萃取率為2.21%。萃取率（%）＝萃取物質(zhì)量/藥材質(zhì)量×100%。同時(shí)，進(jìn)行了SD法復(fù)方提取3味藥材中揮發(fā)油的對(duì)比試驗(yàn)，萃取率為1.035%。

2.2 復(fù)方萃取物中揮發(fā)油的精制

用少量乙醚多次溶解SFE-CO2復(fù)方萃取物，溶解液轉(zhuǎn)移至離心管中，以半徑為5 cm、2 500 r/min離心30 min。取上清液轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，減壓蒸餾，除去乙醚，得精制總揮發(fā)油，密封，置冰箱保存，備用。

對(duì)SD復(fù)方提取的揮發(fā)油進(jìn)行無(wú)水硫酸鈉干燥、乙醚萃取、減壓除去乙醚等處理，最后得精制總揮發(fā)油，同上貯存。

2.3 復(fù)方萃取物中揮發(fā)油的GC-MS分析

（1）GC條件。色譜柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；汽化室溫度：320℃；柱溫：初始溫度60℃，以10℃/min升至250 ℃，停留20 min。（2）MS條件：電子EI源；能量：70 eV；離子源溫度：280℃；掃描范圍（m/z）：30～500。分別取精制的SFE-CO2復(fù)方萃取物和SD復(fù)方提取的揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS檢測(cè)。利用NIST05a.L Database檢索，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比對(duì)、人工解析確認(rèn)提取物的揮發(fā)性成分，按面積歸一化法確定各成分的相對(duì)含量。

采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)得到的SFE-CO2復(fù)方萃取物和SD復(fù)方提取物的總離子流圖，詳見(jiàn)圖1、圖2；兩種萃取物中化學(xué)成分分析結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

圖1 SFE-CO2復(fù)方萃取物的TIC圖Fig 1 TIC chromatogram of SFE-CO2 compound extraction

圖2 SD復(fù)方萃取物的TIC圖Fig 2 TIC chromatogram of SD compound extraction

表1 SFE-CO2復(fù)方萃取物中化學(xué)成分分析結(jié)果Tab 1 Results of chemical composition analysis of SFE-CO2 compound extraction

3 討論

與SD復(fù)方提取法相比，SFE-CO2復(fù)方萃取法萃取率（2.21%）高于SD復(fù)方提取法（1.035%），其揮發(fā)性成分提取率有了很大地提高。SD法復(fù)方提取的揮發(fā)油為淡黃色液體，具有流動(dòng)性、香氣。但是SFE-CO2復(fù)方萃取物為黃色油膏狀，有較濃的香味且香氣全面。GC-MS分析結(jié)果表明，SFE-CO2復(fù)方萃取物共分離出21個(gè)峰，鑒定出16種化合物，占其揮發(fā)性成分總相對(duì)含量94.25%，其中以甜橙黃酮含量最高（36.56%），其次為亞油酸（19.52%）和2-乙醛基呋喃（8.60%）。SD復(fù)方提取物共分離出51個(gè)化合物，鑒定出32種化合物，占揮發(fā)性成分總相對(duì)含量90.10%，其中以D-檸檬烯含量最高（62.40%），其次為側(cè)柏酮（15.49%）。二者相同成分有5個(gè)，即D-檸檬烯、萜品烯、薄荷酮、胡薄荷酮和石竹烯。分子量＜160的成分在SD萃取物鑒定出的成分中占65.63%，而在SFE-CO2萃取物鑒定出的成分中只占29.41%。可見(jiàn)，SD法導(dǎo)致了部分成分熱分解為小分子，而SFE-CO2由于操作溫度接近室溫而相對(duì)多的保全了天然成分。

表2 SD復(fù)方萃取物中化學(xué)成分分析結(jié)果Tab 2 Results of chemical composition analysis of SD compound extraction

綜上所述，SFE-CO2用于四季感冒片中3味藥材復(fù)方萃取是可行的，但與SD法相比，其提取物的成分存在較大差異，值得進(jìn)一步研究。

（致謝：感謝黑龍江大學(xué)分析測(cè)試中心協(xié)助完成GC-MS分析檢測(cè)工作）

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