天然抗腫瘤活性成分靶向篩選和分離方法研究進(jìn)展*

*基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81260690)；江西省教育廳科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(GJJ13618、GJJ10553)。

**第一作者：馮會，女，碩士研究生。研究方向：中藥活性成分分析，E-mail:fenghui08@163.com。

天然抗腫瘤活性成分靶向篩選和分離方法研究進(jìn)展*

*基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81260690)；江西省教育廳科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(GJJ13618、GJJ10553)。

**第一作者：馮會，女，碩士研究生。研究方向：中藥活性成分分析，E-mail:fenghui08@163.com。

★馮會*任小丹尹小英*(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院南昌 330004)

摘要：天然產(chǎn)物抗腫瘤活性成分具有高效低毒和結(jié)構(gòu)多樣性。靶向篩選和分離能夠提高活性化合物的分離效率，降低實(shí)驗(yàn)成本，縮短實(shí)驗(yàn)周期，并且減少大量使用有機(jī)試劑造成的環(huán)境污染。本文概述了近年來天然產(chǎn)物抗腫瘤活性成分的靶向篩選和分離的方法，包括以微管蛋白、端粒DNA的G-四聯(lián)體、基質(zhì)金屬蛋白酶、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶點(diǎn)的活性成分篩選分離方法，以及利用脂筏色譜技術(shù)和計(jì)算機(jī)虛擬篩選技術(shù)等靶向篩選分離方法。

關(guān)鍵詞：天然產(chǎn)物；抗腫瘤活性成分；靶向分離；篩選

腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的重大疾病，尋找高效低毒的藥物是治療腫瘤的關(guān)鍵。目前臨床治療腫瘤化學(xué)藥物的最大問題是耐藥性，缺乏理想的抗腫瘤藥物[1]。天然產(chǎn)物是抗腫瘤活性成分的重要來源，如紫杉醇、喜樹堿、長春新堿等[2]?，F(xiàn)有的篩選天然抗腫瘤活性成分的方法主要有體內(nèi)篩選法、體外篩選法、靶點(diǎn)篩選法等[3]。前兩種為傳統(tǒng)的天然抗腫瘤活性成分的研究方法，該方法首先通過先對天然產(chǎn)物提取物進(jìn)行化合物分離，然后對化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，最后進(jìn)行體內(nèi)外藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，這種方法的效率較低、消耗試劑人力較大，最終分離得到的單體往往活性低，甚至無活性?？鼓[瘤活性成分的靶向分離，是利用某種生物親和靶點(diǎn)或靶向篩選模型來篩選中藥的活性群，進(jìn)而有目的的進(jìn)行化學(xué)成分的分離，分離效率大大提高，體內(nèi)外活性評價(jià)數(shù)據(jù)之間的一致性增大，是近年來研究天然產(chǎn)物抗腫瘤活性成分的熱點(diǎn)方向[4]，但相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較為少見。本文綜述了近年來新的抗腫瘤活性成分的靶向篩選和分離的方法，以期為抗腫瘤活性成分的分離提供參考。

1以微管為靶標(biāo)的抗腫瘤活性成分篩選分離

微管是真核細(xì)胞骨架的重要組成部分，參與許多細(xì)胞功能，包括維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、鞭毛和纖毛的運(yùn)動、染色體運(yùn)動和細(xì)胞分裂等[5]。微管的聚合和解聚是細(xì)胞有絲分裂過程中的重要環(huán)節(jié)，任何干擾這一環(huán)節(jié)的藥物都有可能干擾腫瘤細(xì)胞的增值。根據(jù)作用機(jī)制的不同可以分為作用于微管的藥物包括抑制微管解聚的藥物(如紫杉醇)和抑制微管聚合的藥物(如秋水仙堿、長春堿)，根據(jù)與微管蛋白結(jié)合位點(diǎn)的不同，分為秋水仙堿結(jié)合位點(diǎn)、長春堿結(jié)合位點(diǎn)和紫杉醇結(jié)合位點(diǎn)[6]。以微管為靶點(diǎn)的藥物在腫瘤治療中有許多成功的臨床應(yīng)用[7]，因此，微管可以作為篩選抗腫瘤活性成分的重要靶標(biāo)。

孫婉等[8]采用細(xì)胞培養(yǎng)與免疫熒光技術(shù)，以常規(guī)的免疫組化(玻片)方法為基礎(chǔ)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，建立了以微管蛋白為靶點(diǎn)的高通量藥物篩選模型。以抗腫瘤藥物紫杉醇和秋水仙堿為陽性對照，觀察待測未知化合物和對照藥物作用于人肝癌HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞的免疫熒光強(qiáng)度的變化，通過熒光強(qiáng)度的變化間接反映藥物對細(xì)胞微管蛋白聚合/解聚作用的影響，結(jié)果表明基于人腫瘤細(xì)胞的以微管蛋白為靶點(diǎn)的高通量篩選方法可用于抗腫瘤化合物的篩選。孫翠榮等[9]開發(fā)了以微管為靶標(biāo)、平衡透析篩選活性成分、以LC/MS為檢測方法的綜合方法進(jìn)行分離篩選。根據(jù)抗腫瘤活性成分與微管的相互作用來篩選潛在的抗腫瘤藥物，微管-配體復(fù)合物在透析器中快速透析后形成。結(jié)果表明，秋水仙堿、紫杉醇在μM以下濃度對微管有抑制作用，非活性的化合物則無抑制可迅速識別。

2以端粒DNA的G-四聯(lián)體為靶點(diǎn)的抗腫瘤活性成分篩選分離

端粒酶在85%～90%以上的腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，而正常組織(生殖細(xì)胞、造血細(xì)胞等，干細(xì)胞除外)中均顯陰性，表明端粒酶與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化及持續(xù)分裂增殖可能具有密切關(guān)系[10]。G-四聯(lián)體(見圖1)是一種端粒DNA末端單鏈懸掛在溶液中形成的特殊的核酸二級結(jié)構(gòu)，廣泛存在于人類基因組DNA以及RNA中，如DNA的端粒序列、基因的啟動子序列、RNA的5端非翻譯區(qū)(5UTR)序列等，它在抑制端粒酶活性，從而使腫瘤細(xì)胞端?？s短直至細(xì)胞停止增殖過程中發(fā)揮重要作用。Zahler等[11]研究表明G-四聯(lián)體在體外能抑制端粒酶的活性，因而能穩(wěn)定G四聯(lián)體的小分子藥物(G-四聯(lián)體配體)就能干擾端粒酶參與的端粒復(fù)制。G-四聯(lián)體配體通過穩(wěn)定端粒DNA保持G-四鏈結(jié)構(gòu)，能夠達(dá)到抗腫瘤的作用。因此G-四聯(lián)體已漸成為腫瘤治療和抗腫瘤藥物設(shè)計(jì)開發(fā)的一個(gè)引人注目的重要靶點(diǎn)[12-13]。

圖1　G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)(M為金屬陽離子)

2.1G-四聯(lián)體識別與NMR檢測結(jié)合周秋菊等[14-15]通過把G-四聯(lián)體識別和NMR檢測結(jié)合起來，成功的從兩種天然藥物黃柏和黃連的提取物中鑒定出G-四聯(lián)體配體黃連素及巴馬汀。具體步驟分為三步：第一，通過核磁共振一維氫譜檢測判斷G-四聯(lián)體配體在提取物中是否存在；第二，通過核磁共振梯度場擴(kuò)散序譜技術(shù)(DOSY)檢測配體的特征峰；第三，通過核磁共振二維譜譜，如HSQC、HMBC確定其結(jié)構(gòu)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是在植物提取物體系中引入生物靶點(diǎn)，利用生物靶點(diǎn)對其配體的特異性識別作用而獲取核磁共振圖譜信息，從而獲得被生物靶點(diǎn)識別的化合物的準(zhǔn)確結(jié)構(gòu)。該方法把核磁共振圖譜學(xué)的結(jié)構(gòu)鑒定和抗腫瘤活性成分的篩選結(jié)合起來，使在天然植物提取物中實(shí)現(xiàn)活性成分快速篩選和鑒定一體化成為可能，為快速篩選天然植物提取物和潛在活性化合物提供了思路。

2.2G-四聯(lián)體與膜透析法結(jié)合透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。Shang Qian等[16]首次把膜透析法、G-四聯(lián)體靶向吸附和NMR檢測結(jié)合，對川黃柏提取物的抗腫瘤活性成分進(jìn)行了靶向篩選和分離，從中確認(rèn)黃連素化合物具有抗腫瘤活性。具體方法為將天然產(chǎn)物川黃柏提取物與G-四聯(lián)體混合，形成G-四聯(lián)體-配體復(fù)合物，由于復(fù)合物的分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他化合物，通過膜透析法，小分子能夠通過透析袋而大分子不能，從而將大分子(即G-四聯(lián)體-配體復(fù)合物)分離出來，最后通過高濃度的Tb3+離子與G四聯(lián)體的負(fù)離子PO4-結(jié)合[17-18]，從而使配體化合物游離出來。膜透析法直接分離得到化合物單體并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，克服了由于樣品濃度過小或者由于配體和G-四聯(lián)體的光學(xué)信號重疊而產(chǎn)生的干擾等局限性，對天然藥物中抗腫瘤活性成分的靶向分離提供了新思路。

2.3G-四聯(lián)體與色譜法結(jié)合Ge Bai等[19]將高效液相色譜法用于傳統(tǒng)中藥刺楸(THUNB)三葉木通粗提物中G-四聯(lián)體配體的快速篩選：通過比較G-四聯(lián)體DNA加入前后粗提物樣品的色譜峰形和吸收強(qiáng)度的不同，發(fā)現(xiàn)3個(gè)與G-四聯(lián)體具有較強(qiáng)結(jié)合能力的配體，然后利用高速逆流色譜法(HSCCC)進(jìn)行分離純化并結(jié)合MS和NMR進(jìn)行鑒定，確定了2，4-二羥基苯甲酸(I)，綠原酸(Ⅱ)，咖啡酸(Ⅲ)三種配體化合物。這為從天然植物提取物的快速篩選G-四聯(lián)體配體提供了一個(gè)非常有前途的方法。

2.4G-四聯(lián)體結(jié)合無標(biāo)記熒光法篩選氯高鐵血紅素(亞鐵血紅素的氧化形式，在一些病理狀態(tài)由血紅蛋白釋放出)通過促進(jìn)氧自由基的形成引起不良的毒性導(dǎo)致器官、組織和細(xì)胞損傷，對脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA的氧化起到催化作用[20-21]，程小紅等[22]通過實(shí)驗(yàn)證明了G-四聯(lián)體-氯高鐵血紅素復(fù)合物的過氧化物酶活性，分子內(nèi)并行的G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)有利于氯高鐵血紅素的最終疊加，因此具有較高的過氧化物酶活性。G-四聯(lián)體DNA-氯高鐵血紅素復(fù)合物能有效地催化的對羥基苯乙酸(HPA)和H2O2的氧化反應(yīng)。HPA是一種非熒光底物，但HPA與H2O2的氧化產(chǎn)物是一種強(qiáng)熒光化合物(激發(fā)/發(fā)射波長最大值313/405nm)，因此，G-四聯(lián)體DNA氯高鐵血紅素復(fù)合物能誘導(dǎo)與HPA-H2O2體系產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光發(fā)射。

Lihui Fu等[23]采用無標(biāo)記熒光法，基于G四聯(lián)體配體從G-四聯(lián)體DNA核酶中置換出氯高鐵血紅素，導(dǎo)致G-四聯(lián)體DNA核酶對HPA和H2O2之間的熒光顯影反應(yīng)的催化能力降低。當(dāng)強(qiáng)作用的G-四聯(lián)體的配位體加入到G-四聯(lián)體氯高鐵血紅素復(fù)合物系統(tǒng)中，配體可取代氯高鐵血紅素與G-四聯(lián)體DNA核酶結(jié)合(見圖2)。因此，可以根據(jù)HPA-H2O2體系的熒光強(qiáng)度是否下降來判斷配位體與G-四聯(lián)體的結(jié)合能力。該方法不需要對DNA進(jìn)行任何化學(xué)修飾，且熒光法具有高度選擇性，實(shí)驗(yàn)只需較低濃度的DNA和配體化合物，克服了CD法中對標(biāo)記的DNA和G-四聯(lián)體配體較高濃度的要求，以及MS和NMR法對昂貴設(shè)備的要求，提供了一種篩選G-四聯(lián)體配體的簡單、廉價(jià)、靈敏的方法。

2.5G-四聯(lián)體結(jié)合表面等離子共振成像篩選表面等離子體共振成像(SPRI)是分析生物分子間的相互作用的一種無標(biāo)記技術(shù)，可實(shí)時(shí)采集綁定的動力學(xué)參數(shù)。該技術(shù)的獨(dú)特優(yōu)勢是樣品免標(biāo)記，且能夠原位實(shí)時(shí)監(jiān)測分子間相互作用的動態(tài)過程[24]。它能夠提供多達(dá)1 000個(gè)獨(dú)立的生物分子的相互作用單次運(yùn)行測試，因此可以用一個(gè)單一的運(yùn)行來測試大量的交互作用，為迅速識別對一個(gè)給定的生物實(shí)體最合適的化合物提供了可能性。到現(xiàn)在為止，這種技術(shù)已成功用于相關(guān)的相對大的分子(蛋白質(zhì)、抗體、DNA)，用于小分子的相關(guān)研究較少。Pillet F.[25]使用表面等離子共振成像技術(shù)，很容易的辨別了G-四聯(lián)體配體與G-四聯(lián)體的結(jié)合。證明了SPRI技術(shù)也可以用于小分子藥物靶向作用的篩選，比如G-聯(lián)體配體的篩選。

圖2　無標(biāo)記熒光法篩選G-四聯(lián)體配體示意圖

3以基質(zhì)金屬蛋白酶為靶點(diǎn)分離抗腫瘤活性成分

基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinases-2,MMP-2)是一種明膠酶，由腫瘤細(xì)胞或由腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)宿主細(xì)胞以無活性的酶原形式分泌，能降解基底膜膠原、纖連蛋白及彈性蛋白，溶解明膠[26]。MMPs主要負(fù)責(zé)細(xì)胞外基質(zhì)的水解,能降解其組成中的大部分。由于MMPs的過量表達(dá)與多種疾病密切相關(guān),如腫瘤、骨關(guān)節(jié)炎和心臟病等，尤其是在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中MMPs起著關(guān)鍵性的作用。劉星辰等[27]根據(jù)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的活性位點(diǎn)附近三維空間結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)合成了4種雙騰酸類化合物，采用酶促反應(yīng)動力學(xué)方法分別測試了雙騰酸化合物及阿倫磷酸鈉(A lendmnate)對MMPs的抑制效果，并對其抑制效果進(jìn)行了對比，利用分子對接方法以及熒光滴定光譜研究了雙騰酸化合物與MMPs的分子識別和作用機(jī)理，從分子學(xué)角度闡述了雙膦酸化合物與基質(zhì)金屬蛋白酶的作用機(jī)制。

4以DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶點(diǎn)分離抗腫瘤活性成分

DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(DNATopo)是調(diào)節(jié)核酸空間結(jié)構(gòu)動態(tài)變化、控制核酸生理功能的關(guān)鍵酶，廣泛存在于生物體內(nèi)。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶有I、II、III三種結(jié)構(gòu)類型，目前研究較多的是拓?fù)洚悩?gòu)酶II，其直接參與基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，其表達(dá)量與細(xì)胞功能狀態(tài)呈正比，可作為腫瘤細(xì)胞是否增殖的標(biāo)志[28]。王長虹等[29]研究了去氫駱駝蓬堿、駱駝蓬堿、駱駝蓬總堿及哈爾滿堿對DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ活性的抑制作用，采用瓊脂糖凝膠電泳法檢測提取物及藥物對DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的抑制作用，提出了三種可能的作用機(jī)制。

5脂筏色譜技術(shù)在抗腫瘤活性成分靶向分離的應(yīng)用

脂筏((Lipid raft, LR)是質(zhì)膜上富含膽固醇和鞘磷脂的微結(jié)構(gòu)域，參與膜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)和脂類運(yùn)輸、病原體入侵機(jī)體等一系列細(xì)胞過程。蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(Tyrosine kinase, TrkA)參與脂筏中細(xì)胞信號傳導(dǎo)過程，在細(xì)胞的生長、分化和死亡等過程中起重要作用，超過50%的原癌基因及癌基因產(chǎn)物具有TrkA活性，其異常表達(dá)會導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，因此，TrkA是抗腫瘤藥物研究的重要靶點(diǎn)[30]。脂筏色譜(lipid Raft stationary phase chromatography)是以富含酪氨酸激酶的脂筏-硅膠為固定相，以乙酸銨為流動相建立的色譜柱，能夠特異性的保留以酪氨酸激酶為靶點(diǎn)的成分，非活性成分無保留[31]。該色譜系統(tǒng)與傳統(tǒng)的正反相色譜系統(tǒng)不同，具有色譜分離與活性識別的雙重特性，因此可以以TrkA為靶標(biāo)進(jìn)行抗腫瘤活性成分篩選。易成學(xué)[32]運(yùn)用新型酪氨酸激酶受體抑制劑的高通量篩選模型脂筏色譜，首次從金針菇中篩選出具有抗腫瘤活性甾醇和脂肪酸提取物，利用高效液相色譜法(HPLC)分離制備甾醇物中的含量較高的兩個(gè)主要成分，并鑒定它們的化合物結(jié)構(gòu)。童珊珊[33]用對酪氨酸激酶具有特異性抑制活性的藥物來他替尼作為模型化合物來考察影響脂筏色譜效果的的操作參數(shù)，其中脂筏色譜柱填料粒徑、柱溫、流速對色譜行為的影響起主要作用。為了評價(jià)該系統(tǒng)的適用范圍，用該系統(tǒng)的最優(yōu)條件來分離篩選合歡皮的有效部位，其活性成分用MTT(四甲基偶氮唑)法確證，結(jié)果表明脂筏色譜這種新技術(shù)能夠滿足對潛在的抗腫瘤活性成分的初步篩選要求。

6計(jì)算機(jī)虛擬篩選抗腫瘤活性成分

藥物虛擬篩選是采用化學(xué)信息學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)及分子模擬等方法，借助計(jì)算機(jī)技術(shù)和相應(yīng)軟件通過分子相似性搜索等評價(jià)藥物與靶蛋白的相互作用，從而預(yù)測分子的作用靶標(biāo)[34]。王軍磊[35]采用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的分子對接技術(shù)，選取11味具有抗腫瘤活性成分的中藥，建立了抗腫瘤小分子化合物庫。選取6個(gè)抗腫瘤相關(guān)靶標(biāo)蛋白，對小分子化合物進(jìn)行虛擬篩選，發(fā)現(xiàn)可以與4個(gè)及以上靶點(diǎn)有結(jié)合活性的化合物有15個(gè)，其中有6個(gè)來源于牛蒡子中的木脂素類化合物。吳向偉[36]運(yùn)用計(jì)算藥理學(xué)方法重點(diǎn)對龍蛇羊泉湯中所含的187個(gè)化合物進(jìn)行了化學(xué)空間分析，對一些特征描述符的分布進(jìn)行了闡釋，同時(shí)采用主成分分析方法將多維化學(xué)空間映射到二維空間以得到更直觀的圖像，結(jié)果表明龍蛇羊泉湯中大部分成分具有較好的類藥性質(zhì)。采用分子對接方法研究了187個(gè)化合物與12個(gè)腫瘤疾病相關(guān)的公認(rèn)靶標(biāo)的相互作用，顯示出了龍蛇羊泉湯中化合物在抗腫瘤方面多通路、潛在的協(xié)同作用的藥理學(xué)性質(zhì)，說明虛擬篩選具有輔助篩選先導(dǎo)化合物的能力[37]。

7結(jié)語

對天然產(chǎn)物抗腫瘤活性成分進(jìn)行靶向篩選和分離，是現(xiàn)代研究天然產(chǎn)物中抗腫瘤活性成分的趨勢。運(yùn)用生物學(xué)靶點(diǎn)篩選抗腫瘤活性成分可以增大體內(nèi)外活性評價(jià)數(shù)據(jù)之間的一致性，利用脂筏色譜技術(shù)能夠特異性的篩選具有抗腫瘤活性的有效成分群，提高分離效率；計(jì)算機(jī)虛擬篩選抗腫瘤活性成分彌補(bǔ)了動物藥理實(shí)驗(yàn)方法的缺陷，減少了人力和物力的投入。靶向篩選和分離在中藥研究領(lǐng)域建立了全新的理念和先進(jìn)的研究手段，將成為中藥研究發(fā)展的一種新趨勢，使中藥現(xiàn)代化真正進(jìn)入一個(gè)寬廣的良性發(fā)展的軌道。

參考文獻(xiàn)

[1]歐陽洪貴,李玉艷.美國 FDA近10年抗腫瘤藥物[J].中國新藥雜志,2012,21(24):2 885-2 894.

[2]羅艷萍,修連喜.天然抗腫瘤藥物的研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥,2011,24(3):377-379.

[3]郭婷.天然抗腫瘤藥物篩選方法的研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)世界,2014,(9):99.

[4]肖楠.小花棘豆未知化學(xué)成分預(yù)測及靶向分離方法研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué),2009:122.

[5]楊銘.結(jié)構(gòu)生物學(xué)與藥學(xué)研究[M].北京:科技出版社.2003:60-68.

[6]席菁樂.新型微管蛋白抑制劑的研發(fā)和抗腫瘤機(jī)制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué),2013:144.

[7]李耀武.基于微管蛋白小分子抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)與合成研究[D].第二軍醫(yī)大學(xué),2008:124.

[8]孫婉,李敏,魏少蔭,等.以微管蛋白為靶的高通量藥物篩選方法的建立與應(yīng)用[J].中國新藥雜志,2006,15(21):1 828-1 831.

[9]Sun C, Fu J, He S, et al. An integrative approach for the isolation, screening and analysis of antitumor agents by liquid chromatography combined with mass spectrometry[J]. Analytica chimica acta, 2009, 655(1): 86-91.

[10]Whitehead J P, Lippard S J. Proteins that bind to and mediate the biological activity of platinum anticancer drug-DNA adducts[J].Metal ions in biological systems, 1996, 32: 687.

[11]Han H, Hurley L H. G-quadruplex DNA: a potential target for anti-cancer drug design[J]. Trends in pharmacological sciences, 2000, 21(4): 136-142.

[12]諶鏨,修明賀,李素芳,等.G-四聯(lián)體的生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J].生理科學(xué)進(jìn)展,2010,41(5):329-334.

[13]胡曉文.端粒G-四聯(lián)體——腫瘤治療的新靶點(diǎn)[J].國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊,2004,S1:98-100.

[14]Zhou Q, Li L, Xiang J, et al. Screening Potential Antitumor Agents from Natural Plant Extracts by G‐Quadruplex Recognition and NMR Methods[J]. Angewandte Chemie, 2008, 120(30): 5 672-5 674.

[15]Zhou Q, Li L, Xiang J, et al. Fast screening and structural elucidation of G-quadruplex ligands from a mixture via G-quadruplex recognition and NMR methods[J]. Biochimie, 2009, 91(2): 304-308.

[16]Shang Q, Xiang J F, Zhang X F, et al. Fishing potential antitumor agents from natural plant extracts pool by dialysis and G-quadruplex recognition[J].Talanta, 2011, 85(1): 820-823.

[17]Galezowska E, Gluszynska A, Juskowiak B. Luminescence study of G-quadruplex formation in the presence of Tb3+ ion[J]. Journal of inorganic biochemistry, 2007, 101(4): 678-685.

[18]Kumar S, Bandyopadhyay U. Free heme toxicity and its detoxification systems in human[J].Toxicology letters, 2005, 157(3): 175-188.

[19]Bai G, Cao X, Zhang H, et al. Direct screening of G-quadruplex ligands from Kalopanax septemlobus (Thunb.) Koidz extract by high performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A, 2011, 1 218(37): 6 433-6 438.

[20]Regan R F, Kumar N, Gao F, et al. Ferritin induction protects cortical astrocytes from heme-mediated oxidative injury[J]. Neuroscience, 2002, 113(4): 985-994.

[21]Chen‐Roetling J, Benvenisti‐Zarom L, Regan R F. Cultured astrocytes from heme oxygenase‐1 knockout mice are more vulnerable to heme‐mediated oxidative injury[J]. Journal of neuroscience research, 2005, 82(6): 802-810.

[22]Cheng X, Liu X, Bing T, et al. General Peroxidase Activity of G-Quadruplex Hemin Complexes and Its Application in Ligand Screening[J].Biochemistry, 2009, 48(33): 7 817-7 823.

[23]Fu L, Li B, Zhang Y. Label-free fluorescence method for screening G-quadruplex ligands[J]. Analytical biochemistry, 2012, 421(1): 198-202.

[24]申剛義,陳義,張軼鳴,等.表面等離子體共振成像[J].化學(xué)進(jìn)展,2010,22(8):1 648-1 655.

[25]Pillet F,Romera C, Trévisiol E, et al. Surface plasmon resonance imaging (SPRi) as an alternative technique for rapid and quantitative screening of small molecules, useful in drug discovery[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2011, 157(1): 304-309.

[26]金嘯,汪廷樂,王麗,等.基質(zhì)金屬蛋白酶在涎腺良惡性多形性腺瘤中的表達(dá)[J].口腔頜面,2013,23(5):352-356.

[27]劉星辰,李洪偉,王燁,等.雙膦酸化合物對基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制效應(yīng)及機(jī)理[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào),2010(1):88-93.

[28]馬海玲,劉蕾,馬艷榮.DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα與乳腺癌的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(17):62-63.

[29]王長虹,程雪梅,劉忠淵,等.駱駝蓬種子提取物及其β咔保啉生物堿對DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ活性的抑制作用[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2008,24(5):422-425.

[30]Pike L J. Growth factor receptors, lipid rafts and caveolae: an evolving story[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research, 2005, 1 746(3): 260-273.

[31]童珊珊.中藥活性成分在線色譜篩選新模型研究[D].江蘇大學(xué),2012:144.

[32]易承學(xué).金針菇抗腫瘤活性成分篩選及其納米制劑研究[D].江蘇大學(xué),2012:124.

[33]Tong S, Sun C, Cao X, et al. Development and thermodynamic evaluation of novel lipid raft stationary phase chromatography for screening potential antitumor agents[J].Biomedical Chromatography, 2014.(10):155.

[34]付文衛(wèi),張華,劉平.計(jì)算機(jī)藥理學(xué)的主要方法及其在中醫(yī)方藥治療慢性肝病研究中的應(yīng)用[J].臨床肝膽病雜志,2014,30(4):289-294.

[35]王軍磊.抗腫瘤中藥活性成分多靶點(diǎn)的計(jì)算機(jī)虛擬篩選[D].中國海洋大學(xué),2011:143.

[36]吳向偉.龍蛇羊泉湯抗癌活性成分的虛擬篩選研究[D].鄭州大學(xué),2011:114.

[37]陳少軍,陳宏降,郭章華.丹參中抗血栓活性成分的虛擬篩選[J].中藥藥理與臨床,2013,29(6):103-106.

Progress in Researches for Targeting Screening and Separating Natural Anti-tumor Activity Ingredients

FENG Hui, REN Xiao-dan, YIN Xiao-ying

CollegeofPharmacyJiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,china.

Abstract:Anti-tumor ingredients have the characteristics of efficient activity, low toxicity and structural diversity from natural product. Targeted screening and separating the antitumor activity of natural products can improve the separation efficiency, reduce costs, shorten the test cycle, and reduce the amount of organic reagents which has caused environmental pollution. This article reviewed methods of targeted screening and separation anti-tumor activity of natural products in recent years, including using microtubules, G- quadruplex DNA, and matrix metalloproteinases, DNA topoisomerase as targets for screening and separating, and using lipid rafts chromatographic separation technology and computer virtual screening techniques for targeting isolation.

Key words:Natural products；Anti-tumor active ingredients；Target isolation；Screening

收稿日期：(2014-12-09)編輯：秦小瓏

中圖分類號：R284

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

通信作者：***尹小英，女，博士，教授。研究方向：中藥活性成分分析。Tel：(0791)87118917，E-mail:ncyxoy@163.com。